慢性ITP時脾臟的形態(tài)學(xué)及免疫組化研究

1、慢性ITP時脾臟的形態(tài)學(xué)及免疫組化研究【摘要】目的研究ITP時脾臟的病理形態(tài)及免疫組化特點。方法應(yīng)用光鏡觀察36例ITP脾臟的形態(tài)特征；用免疫組化S-P法檢測D3、D4、D8、D20、D41、D43、D45R、D68、P53和PNA在ITP脾臟組織中的表達情況。結(jié)果本組男女之比為0.19:1，男性平均年齡24.5歲，女性平均年齡32.6歲。脾臟呈輕度腫大。主要組織學(xué)改變是白髓濾泡反響性增生，生發(fā)中心擴大，濾泡周邊帶增寬，中央動脈壁增厚、纖維化，微血管增生。D8+細胞多于D4+T淋巴細胞；含血小板抗原的D41+和D43+淋巴細胞主要分布于生發(fā)中心；PNA+淋巴細胞在紅、白髓中均呈彌漫而密集分布；

2、D68+組織細胞數(shù)量較正常增多，T、B淋巴細胞和組織細胞呈增殖現(xiàn)象。結(jié)論ITP脾D8+淋巴細胞明顯高于D4+淋巴細胞和T、B淋巴細胞及組織增生現(xiàn)象提示輔助T淋巴細胞亞群比例失調(diào)和功能異常。DEX治療ITP能有效緩解病情。【關(guān)鍵詞】特發(fā)性血小板減少癥；脾臟；病理學(xué)；免疫組織化學(xué)hrniidipathithrbytpenipurpura:apathlgiandiunhistheialstudyfthespleen【Abstrat】bjetiveTinvestigatethepathrphlgialandiunheialfeaturesfthespleeninidipathithrbytpenipu

3、rpura.ethdsLightirspyasusedtstudytherphlgiharateristisf36asesfthespleeninidipathithrbytpenipurpura.TheexpressinfD3,D4,D8,D20,D41,D43,D45RD68,P53andPNAprtEineredetetedinallasesithS-Piunhistheialethd.ResultsTheratifthealeithfealeis0.19:1.Theaverageagefthealesis24.5yearsld.Theaverageagefthefealesis32.6

4、yearsld.ThesplenegalyfthehrniITPisl-grade.Theainpathlgihangeisreativeflliularhyperplasiafthehitepulpandgerinalentralenlargingandbradenfthearginalzne.Thethikandfibrsisallsfiddlespleenarteries.TheD8+lyphytesD4+lyphytes.ThelyphyteshihexpressplatlateantigenD41andD43ainlydistributeintheenterftheflliulasa

5、rea.PNApsitivelyphyteslateddifusslyanddenselyinredpulpandhitepulp.TheinreasingnuberfellssuggeststheprliferatinfTandBellsandhistytes.nlusinInITPpatients,abnraldistributinfTlyphytesubsetsandhangesftheprliferatinfTandBlyphytesandhistytesayiplythedysfuntinfTh1/Th2.TreatentithDEXhasbenefiialeffetfITP.【Ke

6、yrds】idipathithrbytpenipurpura;spleen;pathlgy;iunhistheistry慢性特發(fā)性血小板減少癥ITP是常見出血性疾病之一，發(fā)病機理與免疫異常有關(guān)，血循環(huán)中存在抗血小板抗體使血小板破壞過多，同時還作用于骨髓巨核系細胞，影響其增殖、分化及成熟過程1。本研究用免疫組化方法對破壞血小板的重要器官與場所的脾臟檢測D系列單克隆抗體的表達，以期進步對本病的認識程度。1材料與方法11標本來源搜集我院1996年1月2022年6月間ITP患者行外科手術(shù)治療脾切除標本36例；另選10例因創(chuàng)傷性脾破裂而手術(shù)切除的正常脾標本作對照研究。12方法標本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包

7、埋，4厚連續(xù)切片，H.E染色，每張切片均再次經(jīng)2位副高以上醫(yī)師復(fù)檢結(jié)果一致為最終診斷。鼠抗人P53抗體、D系列抗體、PNA單克隆抗體和S-P試劑盒超敏購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)。每例標本分別標記上述抗體，DAB顯色，以PBS緩沖液0.01l/L,pH7.4代替第一抗體作陰性對照；分別用對P53高表達的肺癌組織和對D系列高表達的淋巴結(jié)作陽性對照。2結(jié)果21臨床資料共獲ITP脾36例，男6例，女30例，男女之比為0.19:1，男性平均年齡24.5歲2565歲；女性平均年齡32.6歲2650歲。所有病例均以全身皮膚彌漫散在瘀點或瘀斑或紫癜為首發(fā)病癥，育齡婦女那么長期月經(jīng)過多。實驗室檢查：血小板計數(shù)在3

8、080109/L之間，其中1例血小板只有12109/L。血紅蛋白和紅細胞計數(shù)大多減少，多呈小細胞低色素缺鐵性貧血；白細胞計數(shù)正常；出血時間大多延長，而凝血時間正常；骨髓像均見巨核細胞顯著增多，以顆粒性巨核細胞和裸核為主，產(chǎn)血小板巨核細胞少見。用酶聯(lián)免疫熒光法檢測血小板相關(guān)抗體：PAIgG增高33例，占91.6%；PAIg增高8例，占22%，且常伴較嚴重出血；T8細胞百分值增高，而T4細胞比值下降。本組臨床上均排除繼發(fā)性血小板減少，診斷ITP明確。本組均因內(nèi)科治療不滿意而行脾切除術(shù)，術(shù)后第5天平均應(yīng)用地塞米松40g/d左右，血小板上升維持在60150109/L。22形態(tài)學(xué)觀察221巨檢脾臟有不同

9、程度腫大，大小范圍為13168946；重量為115185g。外表光滑，包膜無增厚，切面脾小結(jié)明顯，無出血、壞死。222鏡檢主要表現(xiàn)為：1白髓濾泡反響性增生，生發(fā)中心擴大，濾泡邊緣帶增寬，其內(nèi)見漿細胞浸潤，經(jīng)激素治療后的病例濾泡呈退行性變化，數(shù)量減少，生發(fā)中心不明顯，濾泡周邊帶無增寬，細胞數(shù)量減少；2脾竇擴張、淤血，紅髓內(nèi)可見多少不等嗜中性粒細胞浸潤，局部聚集成片；3脾索內(nèi)可見吞噬紅細胞及血小板的巨噬細胞；4中央動脈管壁增厚、纖維化，多見年長者，并有PAS陽性物質(zhì)沉著；5約半數(shù)病例出現(xiàn)輕度髓樣化生；6微細血管密度增加；7紅髓中組織細胞增生，可見泡沫細胞形成。223免疫表型D3+和D45R+T淋巴

10、細胞分布彌漫而密集；D20+B細胞主要分布于濾泡套區(qū)和邊緣區(qū)及生發(fā)中心內(nèi)；D8+T淋巴細胞明顯多于D4+T淋巴細胞圖1；D68+組織細胞明顯多于正常對照組圖2；含血小板抗原D41+和D43+淋巴細胞主要分布于生發(fā)中心；P53+淋巴細胞分布彌漫且多呈弱陽性；PNA+淋巴細胞在紅、白髓均呈彌漫分布。3討論ITP是一種由自身抗體引起的血小板破壞過多的自身免疫性疾病2。主要在脾臟產(chǎn)生抗血小板抗體，屬IgG型3；脾又是破壞血小板的重要場所。切除脾可去掉產(chǎn)生抗體的器官和破壞血小板的場所，使外周血中的血小板上升。我們認為，對內(nèi)科治療無效的慢性型患者應(yīng)盡早脾切除以進步療效。而對ITP的兒童一定要慎重，因為兒童

11、有自愈的可能，要嚴格掌握手術(shù)指征。本組脾切除后，臨床療效滿意和確切，多數(shù)病例獲得持續(xù)緩解。ITP是由脾產(chǎn)生的大量IgG引起的4?？贵w包被的血小板由于被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細胞快速去除而壽命短暫，特別是脾和肝。包被較重的血小板由肝吞噬細胞去除；而包被較輕的血小板那么通過肝再經(jīng)脾而被去除5；因此，脾臟是破壞血小板的重要器官和場所?？梢娖⑶谐苡行ё钄嘌“宓钠茐摹１窘M病例脾切除后48h血小板明顯上升，經(jīng)2年隨訪，不需激素長期維持，血小板根本保持在正常范圍。近年研究說明，自身免疫性疾病的發(fā)生與機體免疫內(nèi)環(huán)境平衡紊亂有關(guān)，而輔助T細胞Th與抑制T細胞Ts亞群間的平衡是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)。研究結(jié)果顯

12、示6，ITP患者外周血D8+細胞百分率顯著增高，D3+、D4+細胞明顯減少，D4+/D8+下降。Th與Ts亞群比例失調(diào)，Th與Ts之和明顯超過總T細胞，說明外周血中存在D4+、D8+雙標記細胞，真正的D8+細胞減少。相關(guān)分析結(jié)果，D4+/D8+與IL-2呈顯著正相關(guān)，血小板計數(shù)與D8+細胞百分率呈顯著負相關(guān)，并發(fā)現(xiàn)ITP患者T細胞亞群比例失調(diào)是IL-2活性降低的始動因素。提醒細胞免疫功能異常與ITP的開展、轉(zhuǎn)歸有顯著關(guān)系。細胞毒性T細胞在ITP中的作用很早就被學(xué)者重視，ybran和Fudenbery7認為局部ITP患者檢測不到自身抗體有可能因為存在多種致病機制。Handin8也認為血小板自身抗

13、體復(fù)合物一旦在體內(nèi)激活淋巴細胞，這些激活的淋巴細胞就可對血小板產(chǎn)生細胞毒性破壞作用。這就可以局部解釋為何在經(jīng)脾切除和激素治療后有的患者始終存在持續(xù)的血小板破壞。而rit等8研究也提示細胞介導(dǎo)的血小板破壞可能是細胞毒性T細胞直接作用于血小板的結(jié)果。最近lssn等9發(fā)現(xiàn)細胞毒性T細胞的血小板破壞作用可能是慢性ITP患者發(fā)病中的一個重要機制，在此研究中，利用DNA芯片技術(shù)掃描活動期、緩解期ITP患者以及正常人的D3+細胞，發(fā)現(xiàn)許多細胞毒性基因Apa/Fas、粒酶A、粒酶B和穿孔素和Th1反響相關(guān)基因IFN-2、受體等在ITP患者中的表達明顯高于正常對照組。認為細胞毒性細胞和自然殺傷NK細胞通過誘導(dǎo)細

14、胞凋亡而扮演了破壞血小板的重要角色9。本組研究顯示脾組織中D4+、D8+細胞和D68+樹突狀細胞均有不同程度增生，而D8+細胞明顯多于D4+淋巴細胞，與外周血淋巴細胞相關(guān)研究2相似，提示T細胞亞群與免疫遞呈細胞的平衡紊亂是ITP細胞免疫功能異常導(dǎo)致血小板破壞的重要因素。本文圖片略【參考文獻】1inesDB,BlannehetteVA.Iunethrbytpenipurpura.NEngJed，2002,346:995-1008.2范磊，阮長耿.特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病機制.蘇州醫(yī)藥,2022，324：357-359.3Hayes，JabsP，dL，etal.Spleeniinpathlgyi

15、niunethrbytpenia.JlinPathl,1985,38:985-988.4JiangDY，LiY.iunhistheialstudyfthespleeninhrniiunethrbytpenipurpuraithspeialreferenethyperplastifllilesandfayarphages.ArhPathlLabed,1995,1999,533-537.5arrakP，KapplerJ，KtzinBL，etal.Autiunedisease:hyandhereurs.Natureed,2001，7:899-905.6ilsnBS，DelrithTL，Janus-likerlefregulalatryinNKTellinautiunediseaseandtuuriunity.NatRevIun