MDCK細(xì)胞流感疫苗的安全性分析

1、MDCK細(xì)胞流感疫苗的安全性分析MDCK細(xì)胞流感疫苗的安全性分析2目錄Solvay 公司的背景和流感疫苗Solvay公司開發(fā)MDCK 流感疫苗的計(jì)劃MDCK細(xì)胞疫苗的安全性結(jié)論4目錄Solvay 公司的背景和流感疫苗3Solvay Pharmaceuticals簡(jiǎn)介Solvay 藥業(yè)是 Solvay Group的一部分名列全球前40家的大藥廠有12,800 員工2004 年銷售額為: 28 億美元研究和開發(fā)的主要地點(diǎn)Marietta, GA法國:Dijon and Paris德國:Hanover荷蘭:Weesp, 5Solvay Pharmaceuticals簡(jiǎn)介Solva4Solvay Ph

2、armaceuticals 和 Influenza疫苗雞胚流感疫苗本公司是歐洲第一家生產(chǎn)流感疫苗的廠家 (1950) 55年來生產(chǎn)從位間斷總生產(chǎn)量 2.5億劑量全球第四大流感疫苗供應(yīng)廠家;超過 50 個(gè)國家6Solvay Pharmaceuticals 和 Infl5Solvay Pharmaceuticals 和 Influenza疫苗Solvay公司生產(chǎn)的雞胚疫苗供應(yīng)國家分布在全球荷蘭Weesp流感疫苗生產(chǎn)設(shè)施美國總部Marietta, GA7Solvay Pharmaceuticals 和 Infl6Why a cell-based vaccine project?雞胚疫苗是開放性生產(chǎn)系

3、統(tǒng),易于污染由于會(huì)發(fā)生禽病,雞胚可能不會(huì)保證供應(yīng)8Why a cell-based vaccine proj7為何使用MDCK細(xì)胞?對(duì)流感病毒的敏感譜廣;在流感的研究和檢測(cè)中有扎實(shí)的經(jīng)驗(yàn)病毒產(chǎn)量高在經(jīng)濟(jì)上合算病毒純度高9為何使用MDCK細(xì)胞?對(duì)流感病毒的敏感譜廣;8Solvay Pharmaceuticals公司的 MDCK 細(xì)胞流感疫苗計(jì)劃已經(jīng)有10 年以上的經(jīng)驗(yàn) 微載體,無血清進(jìn)行了臨床前和臨床開發(fā)計(jì)劃獲得荷蘭的許可商業(yè)性生產(chǎn)規(guī)模設(shè)施將獲得商業(yè)性生產(chǎn)許可,接著是全球許可,包括美國10Solvay Pharmaceuticals公司的 MD9Solvay Pharmaceuticals公司生

4、產(chǎn) MDCK疫苗的設(shè)施 荷蘭Solvay Pharmaceuticals公司( Weesp城) 11Solvay Pharmaceuticals公司生產(chǎn) 10細(xì)胞系的潛在性風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了定性和定量的檢定在下游生產(chǎn)過程中(DSP) 量化減少了這些風(fēng)險(xiǎn)保留在接種者疫苗成份中MDCK細(xì)胞的殘留物的潛在風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了定量CBERs Defined-Risks ApproachLewis AM Jr, Krause P, Peden K. Dev Biol. 2001, vol 106, pp 513-535MDCK 細(xì)胞的安全性評(píng)估12細(xì)胞系的潛在性風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了定性和定量的檢定MDCK 細(xì)胞的11細(xì)胞系的檢定生

5、產(chǎn)的下有過程終產(chǎn)品的安全性MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)估13細(xì)胞系的檢定MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)估12MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)估細(xì)胞系的特征傳代歷史可能的外來因子,包括病原體致癌性14MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)估細(xì)胞系的特征131a. 細(xì)胞系的特征 歷史未污染牛海綿狀(組織)腦病樣的病原(Bovine Spongiform Encephalopathy-like agents)1958:從狗腎分離1964: 存放在美國ATCC1991: 在 ATCC制備日常儲(chǔ)備 1992: 制備主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫151a. 細(xì)胞系的特征 歷史1958:從狗腎分離196141a. 細(xì)胞系特征- 傳代歷史傳代用于疫苗生產(chǎn) 0

6、: 從狗腎分離49: 儲(chǔ)存在美國ATCC52: 制備成 ATCC 工作日常儲(chǔ)備庫存97: 制備延長(zhǎng)的細(xì)胞庫56: 制備成主細(xì)胞系庫57: 制備成工作細(xì)胞庫傳代用于安全性評(píng)估161a. 細(xì)胞系特征- 傳代歷史傳代用于疫苗生產(chǎn) 0: 從151b. 細(xì)胞系特征 外源因子Adventitious agents支原體無細(xì)菌和真菌在試管內(nèi)在檢測(cè)細(xì)胞系中共培養(yǎng)在機(jī)體水平檢測(cè)不同的種類電鏡檢查反轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)在Solvay公司的MDCK 細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)有外源性微生物171b. 細(xì)胞系特征 外源因子Adventitious16特異性檢測(cè)自然感染的狗病毒特異性檢測(cè)對(duì)MDCK細(xì)胞敏感的病毒1b. 細(xì)胞系特征 外源因子在

7、Solvay公司的 MDCK細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)有外來的病毒感染18特異性檢測(cè)自然感染的狗病毒1b. 細(xì)胞系特征 外源因171c. 細(xì)胞系特征 致癌性表型特征在動(dòng)物模型上腫瘤形成 疫苗成品檢測(cè)完整細(xì)胞 細(xì)胞成份殘余細(xì)胞DNA 在疫苗接種者中似無同種異體移植物排斥191c. 細(xì)胞系特征 致癌性表型特征在動(dòng)物模型上腫瘤形成18完整細(xì)胞潛在的致瘤性 在成熟免疫缺損的4 周裸鼠中研究6個(gè)月細(xì)胞溶離液的潛在的致瘤性 在成熟和新生的裸小鼠,新生的大鼠和新生的地鼠中觀察6個(gè)月DNA潛在的致癌性 在成熟和新生的裸小鼠,新生的大鼠和新生的地鼠中觀察6個(gè)月1c. 細(xì)胞系特征 致瘤性20完整細(xì)胞潛在的致瘤性 1c. 細(xì)胞系

8、特征 致瘤性19完整細(xì)胞: 在4周裸鼠研究6個(gè)月 完全消退-0/26101 MDCK, p98sacsac10925/26陽性對(duì)照 (107 HeLa)230223/26107 MDCK, p56 (ATCC)4272830/30107 MDCK, p9856218/26105 MDCK, p98-0/26103 MDCK, p98 -0/26陰性對(duì)照6 mos40 days瘤狀物大小 (mm2)發(fā)病率1c. 細(xì)胞系特征 致瘤性21完整細(xì)胞: 在4周裸鼠研究6個(gè)月 完全消退-0/2620完整細(xì)胞: 在4周裸鼠6個(gè)月的研究 注射部位瘤狀物在注射部位腫瘤(MDCK 腺癌)脾臟腫瘤(hystiocy

9、tic tumor)肺部腫瘤(腺瘤)陰性對(duì)照0/26-101 MDCK, p980/26-1*-103 MDCK, p98 0/26-105 MDCK, p9818/266-107 MDCK, p9830/3016-1107 MDCK, p56 (ATCC)23/26-11c. 細(xì)胞系特征 致瘤性* Non-MDCK22完整細(xì)胞: 在4周裸鼠6個(gè)月的研究 注射部位瘤狀物在注射21107 個(gè)細(xì)胞溶離液: 6個(gè)月致癌性研究試驗(yàn)組數(shù)量在注射部位瘤狀物其它組織腫瘤4w + 0-4d 裸鼠細(xì)胞溶離液6800陰性對(duì)照50000-7d 地鼠細(xì)胞溶離液9800陰性對(duì)照54000-7d 大鼠細(xì)胞溶離液9100陰

10、性對(duì)照58001c.細(xì)胞系特征 致瘤性23107 個(gè)細(xì)胞溶離液: 6個(gè)月致癌性研究試驗(yàn)組數(shù)量在注射220.1mg MDCK-DNA: 6個(gè)月致癌性研究結(jié)果實(shí)驗(yàn)組數(shù)量在注射部位的瘤狀物其它組織腫瘤4w + 0-4d 裸鼠0.1mg DNA4802陰性對(duì)照48000-7d 地鼠0.1mg DNA6400陰性對(duì)照48000-7d 大白鼠0.1mg DNA6900陰性對(duì)照39001c.細(xì)胞系特征 致瘤性240.1mg MDCK-DNA: 6個(gè)月致癌性研究結(jié)果實(shí)驗(yàn)23DNA研究腫瘤的特征組織病理1只鼠: 肝臟的組織細(xì)胞瘤1只鼠: 胸腔淋巴瘤在免疫缺損裸鼠沒有未意料到的自發(fā)性腫瘤1c.細(xì)胞系特征 致瘤性2

11、5DNA研究腫瘤的特征1c.細(xì)胞系特征 致瘤性24追蹤研究MDCK 細(xì)胞DNA在裸鼠較大量的研究大白鼠胚胎和新生的安全性研究1c.細(xì)胞系特征 致瘤性26追蹤研究MDCK 細(xì)胞DNA1c.細(xì)胞系特征 致瘤性25劑量在105時(shí)在免疫缺損動(dòng)物有中等程度的致瘤性大部分的瘤狀體 部分消退, 劑量在105時(shí)有5/25, 107 時(shí)有4/28 完全消退傳代數(shù)增加和/或適應(yīng)于無血清培養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)致瘤性增加在98代時(shí)符合 MDCK 細(xì)胞的文獻(xiàn)記載1c.細(xì)胞系特征 致瘤性總結(jié)27劑量在105時(shí)在免疫缺損動(dòng)物有中等程度的致瘤性1c.細(xì)26在免疫功能正常的動(dòng)物未觀察到有致瘤性107 MDCK 細(xì)胞溶離液無致瘤性0.1 m

12、g MDCK-DNA 不認(rèn)為是有致癌性; 證實(shí)試驗(yàn)已經(jīng)啟動(dòng)進(jìn)行1c.細(xì)胞系特征 致瘤性總結(jié)28在免疫功能正常的動(dòng)物未觀察到有致瘤性1c.細(xì)胞系特征 27MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)1.細(xì)胞系特征下游工程 (DSP)消除完整細(xì)胞消除細(xì)胞 DNA29MDCK 細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)1.細(xì)胞系特征28MDCK疫苗生產(chǎn)流程30MDCK疫苗生產(chǎn)流程292a. DSP 消除完整細(xì)胞312a. DSP 消除完整細(xì)胞302a. DSP 消除完整細(xì)胞完整細(xì)胞 10 log 清除系數(shù)中試規(guī)模 生產(chǎn)規(guī)模均質(zhì)化-正在確認(rèn)離心3.6去污劑處理3.6超離3.60.22 過濾 x33.6總計(jì) 21.4322a. DSP 消除完整細(xì)胞完

13、整細(xì)胞 中試規(guī)模 生312b. DSP 消除DNABenzonaseBenzonase332b. DSP 消除DNABenzonaseBen322b. DSP 消除 DNA 規(guī)格: 10 納克/劑量DNA 含量content 清除系數(shù)中試規(guī)模生產(chǎn)規(guī)模DNA 消化 151證實(shí)試驗(yàn)正在進(jìn)行 (包括含量和大小)DNA 消化288去污劑處理/超離168全部清除760,000342b. DSP 消除 DNA 規(guī)格: 60, 對(duì)流感合并癥的高危人群, 遺傳過敏者和對(duì)雞胚過敏者主要目標(biāo): 比現(xiàn)有的雞胚同類疫苗的免疫原性和安全性相當(dāng).39MDCK細(xì)胞疫苗 臨床研究14 隨機(jī)雙盲研究 38MDCK細(xì)胞疫苗 臨床

14、研究局部和系統(tǒng)的抗原反應(yīng)性與雞胚疫苗相當(dāng)副反應(yīng)較小和小于注射的活疫苗未發(fā)現(xiàn)意外的安全性問題免疫原性不降低 MDCK細(xì)胞疫苗的免疫原性和安全性與雞胚疫苗相當(dāng)40MDCK細(xì)胞疫苗 臨床研究局部和系統(tǒng)的抗原反應(yīng)性與雞胚39參加者Iris de Bruijn, Ph.D.Global Clinical Director, Influenza VaccinesEd Geuns, Pharm.D.Director, Regulatory AffairsMichael Hare, B.S.Manager, Regulatory AffairsAlex Kersten, D.V.M.Senior Scientist,Pre-Clinical DevelopmentJeroen Medema, MSc.Senior Scientist, VaccinesPeter Finn, MRCVS., FRCPath.ConsultantMichael Williams, B.S.Vice President, Viral ProductsThe Biologics Consulting GroupRuth Wolff, Ph.D.D