液相色譜精品課件

1、關(guān)于液相色譜第一張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月在農(nóng)藥制劑分析中，高效液相色譜法發(fā)展很快，除了氨基甲酸酯類農(nóng)藥外，熱穩(wěn)定性差的和分析前需要進(jìn)行衍生化處理，才能使用氣相色譜法的農(nóng)藥，都可使用此法。與農(nóng)藥殘留分析不同，使用高效液相色譜法分析農(nóng)藥制劑的特點(diǎn)是樣本處理比較簡(jiǎn)便，液體樣本通常稀釋后即可進(jìn)樣，固體農(nóng)藥制劑則需用適當(dāng)?shù)娜軇┨崛。^濾后即可進(jìn)樣。第二張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月如果需要凈化和濃縮，可以使用塑料20.5cm指形層析柱來凈化和提取農(nóng)藥。在我國(guó)已商品化的指形層析柱有硅膠和弗羅里硅土柱，用來分離和提取溶于石油醚類溶劑中的稍帶極性的農(nóng)藥，還有C18小柱，可以分離、

2、提取水和甲醇中的農(nóng)藥。第三張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月農(nóng)藥常量分析和殘留分析的區(qū)別的:殘留分析要求靈敏度高和能檢出其類似結(jié)構(gòu)的有毒代謝物，但準(zhǔn)確度要求不高;常量分析時(shí)樣品中有效成分含量較高，對(duì)方法的靈敏度要求不高，但方法的準(zhǔn)確度和精密度必須達(dá)到要求，而且要求樣本負(fù)載量在較大范圍內(nèi)都有響應(yīng)。第四張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月因此在用液相色譜法測(cè)定農(nóng)藥時(shí)，必須具有以下最基本的設(shè)備：一個(gè)帶有梯度洗脫的泵系統(tǒng)、可變波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器、柱加熱器和定量進(jìn)樣環(huán)裝置?？蛇B續(xù)改變波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器是很有用的，如帶有停留掃描裝置可以選擇最大吸收波長(zhǎng)，測(cè)定時(shí)可根據(jù)需要選擇合適的色譜柱和流動(dòng)相以

3、達(dá)到最好分離。第五張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(一)分離類型的選擇在進(jìn)行液相色譜分析前。首先要仔細(xì)研究農(nóng)藥的特性及該項(xiàng)分離分析的目的，以選擇最合適的方法、任何一種分離類型都不是萬(wàn)能的，它們各適用于一定的分離對(duì)象，可根據(jù)農(nóng)藥的分子量、極性、溶解度、分子結(jié)構(gòu)、解離情況等特性。選擇分離類型，參見圖514。第六張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月農(nóng)藥的分子量一般小于2000，在選擇高效液相色譜的分離類型時(shí)，首先要了解農(nóng)藥的溶解度，將它們分為溶于水的和不溶于水而溶于有機(jī)溶劑兩類。第八張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月不溶于水、溶于

4、有機(jī)溶劑的非極性農(nóng)藥，可以使用液固吸附色譜，菊酯類農(nóng)藥如溴氰菊酯、氯氰菊酯都可使用液固吸附色譜，尤其是對(duì)各異構(gòu)體的分離，如氯氰菊酯的測(cè)定是使用5m的硅膠柱，以0.5 vv乙酸乙酯異辛烷作為移動(dòng)相，柱溫50，以苯甲酸甲酯為內(nèi)標(biāo)，各異構(gòu)體和內(nèi)標(biāo)均得到很好地分離，在注溫為50土20時(shí)，其出峰時(shí)間見圖515。第九張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月此外如辛硫磷、氯辛硫磷均可使用液固吸附色譜，前者以(96十4) vv正己烷十四氫呋喃為流動(dòng)相，后者以(95十5) vv正己烷十乙酸乙酯為流動(dòng)相，在5m的硅膠柱上可使有效成分與雜質(zhì)分離，在早期對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫

5、磷、克百威、異丙威等農(nóng)藥都可使用液固吸附色譜分離和分析。第十一張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 從圖515可見，不溶于水的、極性或非極性農(nóng)藥均可使用反相液液色譜法，由于液固 吸附色譜重復(fù)性差，要使用價(jià)格較貴的正己烷和異辛烷等有機(jī)溶劑?，F(xiàn)在普通選用反相鍵合相色譜，事實(shí)證明許多農(nóng)藥都可使用C18反相鍵合相色譜，這類色譜分離時(shí)使用乙腈或甲醇和水為流動(dòng)相，我國(guó)都使用甲醇，價(jià)格低廉易得；第十二張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月近年CIPAC推薦的方法如樂果、磷胺、久效磷滅害威、殘殺威、克百威以及三氯殺螨醇等都是使用反相鍵合相色譜，如在三氯殺螨醇原藥分析中，使用C8 (Zorbax) 6

6、m 2504.6(id)mm不銹鋼柱，以甲醇水乙酸75250.2(vv)為流動(dòng)相，紫外吸收波長(zhǎng)為254nm，柱溫30時(shí)，o，p與p，p三氯殺螨醇可以分開，DDT各異構(gòu)體和代謝物亦可分開，見圖516。第十三張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月又如我國(guó)辛硫磷乳油的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 955788)是采用反相鍵合相色譜，柱填充物為全多孔型硅膠硅烷化鍵合相(C18)樣品用甲醇溶解，使用定量進(jìn)樣閥將樣品溶液注入色譜系統(tǒng)，用254nm紫外檢測(cè)器檢測(cè)，采用外標(biāo)法計(jì)算辛硫磷含量。第十四張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 以液體作流動(dòng)相，液體或固體作固定

7、相的分離分析技術(shù)稱為液相色譜法。最早的液相色譜法是用菊根粉的吸附柱來分離植物的提取物，用石油醚淋洗，植物提取物中的成分以不同速度向下移動(dòng)，分離成許多顏色帶排列在柱上，這些黃色、綠色的色柱稱為色層譜。后來，不僅用于有色物質(zhì)，也可用于分離無色物質(zhì)，這種借助于移動(dòng)速度不同而達(dá)到分離和鑒定的技術(shù)隨著生產(chǎn)和研究的需要不斷地發(fā)展。第十六張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月經(jīng)典的柱色譜法是用碳酸鈣或氯化鋁等吸附劑填充于玻璃柱管內(nèi)，吸附劑粒徑大于l00m，柱的裝填不緊密，不均勻，分離效率不高，每根柱只能使用1次；流動(dòng)相由柱管上端依靠重力向下流過柱子，分離速度慢；各組分依次被淋洗下來，收集分離后的組分，再

8、進(jìn)行測(cè)定，效率很低，分析速度很慢。第十七張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月40年代出現(xiàn)了薄層色譜法，操作方便，分析速度加快，但重復(fù)性差，難以進(jìn)行定量測(cè)定。直到60年代初吉丁斯(J.C.Giddings)將氣相色譜理論修正后用于液相色譜，為其現(xiàn)代化奠定了理論基礎(chǔ)。以后在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動(dòng)化；這種色譜技術(shù)稱為高效液相色譜法。和經(jīng)典柱色譜法相比，具有以下特點(diǎn)：第十八張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 1高壓 流動(dòng)相經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了使流動(dòng)相能迅速地通過色譜柱，必須施加高壓。一般可達(dá)150一300 kgc

9、m2。 2高速 使用無脈動(dòng)的高壓泵、流動(dòng)相的流速一船為110 m1min，使樣本的分離速度從過去幾小時(shí)或幾天，提高到幾分鐘或幾十分鐘。 3高效 使用顆粒均勻的新型細(xì)粒固定相，提高了分離效率，一般注效可達(dá)50000塔板m以上，有時(shí)一根柱子可同時(shí)分離100種以上的組分。 4高靈敏度 應(yīng)用各種高靈敏度的檢測(cè)器，可測(cè)定微量組分。使用紫外檢測(cè)器，最小檢測(cè)量可達(dá)l109g。 5高度自動(dòng)化 利用微處理機(jī)控制色譜操作條件和處理色譜數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)了高度自動(dòng)化。第十九張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 6流出組分容易收集 高效液相色譜法和氣相色譜法都是重要的分離分析方法，它們?cè)谠S多方面是相同和相似的，但也存在

10、著差異。它們的應(yīng)用領(lǐng)域不同。在已知的化合物中，只有20可用氣相色譜測(cè)定，而液相色譜法可檢測(cè)的對(duì)象占有機(jī)物總數(shù)的80一85；氣相色譜法局限于易揮發(fā)和熱穩(wěn)定農(nóng)藥的分離和分析；高效液相色譜可分離和分折不揮發(fā)的，熱穩(wěn)定性差的以及離子型的農(nóng)藥，而且樣本前處理簡(jiǎn)便。第二十張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月70年代至80年代初期、農(nóng)藥分析大多采用氣相色譜法，因?yàn)闅庀嗌V法對(duì)樣本分離快、靈敏和方便，且大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室已完善地配備了氣相色譜儀和操作人員。第二十一張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月目前液相色譜技術(shù)迅速發(fā)展，它不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定的限制，絕大多數(shù)農(nóng)藥都可以使用液相色譜法進(jìn)行定量分析，而

11、且液相色譜技術(shù)在分析中的主要障礙檢測(cè)器的靈敏度，在農(nóng)藥常量分析中是不重要的，因?yàn)檗r(nóng)藥制劑中有效成分含量通常是百分之幾。多數(shù)農(nóng)藥分子結(jié)構(gòu)中有吸收紫外光的基因，對(duì)那些難于用氣相色譜測(cè)定的農(nóng)藥，可以簡(jiǎn)便地使用帶有紫外檢測(cè)器的液相色譜法。測(cè)定樣本時(shí)，使用定量的進(jìn)樣環(huán)和自動(dòng)進(jìn)樣器，其精密度可以達(dá)到使用內(nèi)標(biāo)的氣相色譜法。第二十二張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月國(guó)際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)(CIPAC)出版發(fā)行的CIPAC農(nóng)藥分析手冊(cè)共有I、IA、IB、IC和D五卷。1985年出版的IC卷和氣相色譜法約26個(gè)，液相色譜法約有20個(gè)；1988年出版的D卷中36個(gè)農(nóng)藥原藥和制劑的有效成分含量分析方法中，氣相

12、色譜法有16個(gè)，液相色譜法有17個(gè)；1989年5月CIPAC第33屆年會(huì)上討論通過10個(gè)農(nóng)藥分析方法，其中就有樂果、磷胺、久效磷、保棉磷、碘苯腈和大隆等6個(gè)農(nóng)藥采用液相色譜法。第二十三張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月從以上統(tǒng)計(jì)數(shù)字看：日前液相色譜法在農(nóng)藥分析中已和氣相色譜法的數(shù)量相當(dāng)，通常使用一種方法測(cè)定后，可以用另一種方法來簽定，兩種方法在常量分析中可以具有相同的準(zhǔn)確度和精密度。隨著液相色譜技術(shù)的發(fā)展和普及，更多的農(nóng)藥將會(huì)使用液相色譜法進(jìn)行分析。第二十四張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月此外，高效液相色譜法和氣相色譜法使用的流動(dòng)相不同，亦存在以下差別： (1)氣相色譜法的分

13、離是基于混合組分在固定液中的溶解度不同，使用的流動(dòng)相通常是惰性氣體，由檢測(cè)器的類型來決定，不論使用氫氣、氦氣或氮?dú)?，其作用只是運(yùn)載樣本組分通過色譜柱后進(jìn)入檢測(cè)器，而對(duì)色譜分離的影響一般很小，即僅有固定相對(duì)樣本分子中各組分的選擇性，因此氣相色譜主要是通過改變固定相和改變柱溫來改善分離效果。第二十五張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月而液相色譜的流動(dòng)相為液體，它對(duì)樣本具有一定溶解性能，除了運(yùn)載樣本組分通過色譜柱和進(jìn)入檢測(cè)器外，還參與色譜分離過程；在液相色譜中除通過改變固定相改善分離效果外，通常用改變流動(dòng)相組成來改善分離，流動(dòng)相組成可以靈活改變，使用的流動(dòng)相不同可得到完全不同的分離。第二十六張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(2)液相色譜的柱溫受流動(dòng)相沸點(diǎn)的限制，通常在室溫或略高于室溫的條件下測(cè)定，分離時(shí)溫度較低是它的優(yōu)點(diǎn)，能保留農(nóng)藥的原來分子。根據(jù)這一原理的制備色譜，可用于制備農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品。(3)農(nóng)藥分子在液體中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)數(shù)量級(jí)，所以在高效液相色譜中必須特別注意柱外效應(yīng)對(duì)分離的不良影響。 第二十七張，PPT共二十九頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(4)液體的粘度比氣體的粘度大