臨床醫(yī)學檢驗考試輔導《微生物檢驗》厭氧性細菌及檢驗講義

1、厭氧性細菌及檢驗考點概念及分類分布與臨床意義 分離與鑒定常見厭氧性細菌【內(nèi)容講解】 概念：一大群專性厭氧，必須在無氧環(huán)境中才能生長的細菌。分類：二、厭氧菌感染（一）厭氧菌在正常人體的分布及感染類型厭氧菌在正常人體的分布正常人的腸道、口腔、陰道等處均有大量的厭氧菌寄居。厭氧菌與需氧菌和兼性厭氧菌共同組成人體的正常菌群，其中絕大多數(shù)為無芽胞厭氧菌。其中腸道中的厭氧菌數(shù)量是大腸埃希菌的100010000 倍。表 5-22-2 重要的厭氧菌種類及其在正常人體內(nèi)的分布厭氧菌皮膚上呼吸道口腔腸道尿道陰道一、芽胞菌革蘭陽性桿菌梭狀芽胞桿菌屬00二、無芽胞菌（一）革蘭陽性桿菌乳桿菌屬00雙歧桿菌屬000優(yōu)桿菌

2、屬0丙酸桿菌屬？放線菌屬000（二）革蘭陰性桿菌類桿菌屬0梭桿菌屬0普雷沃菌屬0紫單胞菌屬0（三）革蘭陽性球菌消化球菌屬消化鏈球菌屬（四）革蘭陰性球菌韋榮菌屬0外源性感染梭狀芽胞桿菌屬引起的感染，其細菌及芽胞來源于土壤、糞便和其他外界環(huán)境。內(nèi)源性感染傳播。（二）臨床意義厭氧菌感染的危險因素組織缺氧或氧化還原電勢降低。機體免疫功能下降。某些手術(shù)及創(chuàng)傷。長期應用某些抗菌藥物。深部需氧菌感染。厭氧菌感染的臨床及細胞學指征特征。發(fā)生在口腔、腸道、鼻咽腔、陰道等處的感染，易發(fā)生厭氧感染。深部外傷如槍傷后，以及動物咬傷后的繼發(fā)感染，均可能是厭氧菌感染。硫黃樣顆粒，為放線菌感染。菌，均可能為厭氧菌感染。長期

3、應用氨基糖苷類抗生素無效的病例，可能是厭氧菌感染。胃腸道手術(shù)后發(fā)生的感染。三、厭氧菌標本的采集與送檢注意： 應盡量避免接觸空氣。1.采集表 5-22-2 不同部位標本采集法標本來源收集方法封閉性膿腫針管抽取婦女生殖道后穹窿穿刺抽取下呼吸道分泌物肺穿刺術(shù)胸腔胸腔穿刺術(shù)竇道、子宮腔深部創(chuàng)傷用靜脈注射的塑料導管穿入感染部位抽組織無菌外科切開尿道膀胱穿刺術(shù)20302h如不能及時接種，可將標本置室溫保存。針筒運送；無菌小瓶運送；棉拭子運送；厭氧罐或厭氧袋運送。四、厭氧菌的分離與鑒定（一）直接鏡檢根據(jù)形態(tài)和染色性，結(jié)合標本性狀與氣味，初步對標本中可能有的細菌作出估計。表 5-22-3 厭氧菌直接鏡檢初步鑒

4、別菌名革蘭染色形態(tài)及其他特征脆弱類桿菌G-b兩端鈍圓，著色深，中間色淺且不均勻，且有氣泡，長短不一產(chǎn)黑素普雷沃菌G-b多形性，長短不一，有濃染和空泡，無鞭毛和芽胞。標本有惡臭，琥珀味，紫外線照射發(fā)紅色熒光具核梭桿菌G-b菌體細長，兩頭尖，紫色顆粒菌體長軸成雙排列，標本有丁酸味壞死梭桿菌G-b高度多形性，長短不一，菌體中部膨脹呈圓球形韋榮球菌G-c極小的革蘭陰性球菌消化鏈球菌G+c革蘭陽性呈鏈狀的小球菌乳酸桿菌G+b細長，有時多形性，呈單、雙、短鏈或柵狀排列痤瘡丙酸桿菌G+b排列特殊呈X、Y、V 或柵狀，標本有丙酸氣味雙歧桿菌G+b多形性，有分支呈Y、V 形成棒狀，標本有醋酸氣味放線菌G+b分支

5、呈棒狀、X、Y、V 或柵狀，膿汁中得黃色顆粒，有琥珀酸味破傷風桿菌G+b細長、梭形或鼓槌形，有芽胞，有周鞭毛產(chǎn)氣莢膜梭菌G+b粗大桿菌，呈單或雙排列，有芽胞，有莢膜艱難梭菌G+b粗長桿菌，有芽胞，有鞭毛，近來發(fā)現(xiàn)有莢膜（二）分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個階段，初代培養(yǎng)的一般原則是：先將標本涂片染色直接鏡檢，指導培養(yǎng)基的選擇；盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基；12盡量保證培養(yǎng)基新鮮；要考慮到微需氧菌存在的可能。選用適當?shù)呐囵B(yǎng)基接種培養(yǎng)基的使用，應注意下列各點：盡量使用新鮮培養(yǎng)基，24h 內(nèi)用完；應使用預還原培養(yǎng)基，預還原 2448h 更好； 可采用預還原滅菌法制作的培養(yǎng)基；液體培

6、養(yǎng)基應煮沸 10min，以驅(qū)除溶解氧，并迅速冷卻，立即接種； 培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應營養(yǎng)豐富，并加有還原劑與生長刺激因子。培養(yǎng)基的選擇：初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基。非選擇培養(yǎng)基：本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制，幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。 常使用心腦浸液瓊脂（BHI）、布氏瓊脂（BR）、胰豆胨肝粉瓊脂（GAM）、胰胨酵母瓊脂（EG）、CDC 厭氧血瓊脂等。選擇培養(yǎng)基：為有目的選擇常見厭氧菌株，以便盡快確定厭氧的種類。選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基KVLB 血平板七葉苷膽汁平板（BBE）FS 培養(yǎng)基（梭桿菌選擇培養(yǎng)基）細菌產(chǎn)黑素類桿菌早期產(chǎn)生黑色素脆弱類桿菌梭桿菌ES 培養(yǎng)基（優(yōu)桿菌選擇培養(yǎng)基）

7、 BS 培養(yǎng)基（雙歧桿菌選擇培養(yǎng)基卵黃（EYA）及兔血平板CCFA 培養(yǎng)基（艱難梭菌選擇培養(yǎng)基） VS 培養(yǎng)基優(yōu) 桿 菌 艱難梭菌韋榮球菌35%10%C0環(huán)境中培養(yǎng)。2厭氧培養(yǎng)法厭氧手套箱培養(yǎng)法（迄今厭氧菌培養(yǎng)的最佳儀器之一焦性沒食子酸法；生物耗氧法；高層瓊脂培養(yǎng)法。美藍和刃天青。無氧時均呈白色，有氧時美藍呈藍色，刃天青呈粉紅色。分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因：培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢；標本在空氣中放置太久或接種的操作時間過長；未用新鮮配制的培養(yǎng)基；未用選擇培養(yǎng)基；培養(yǎng)基未加必要的補充物質(zhì)；初代培養(yǎng)應用了硫乙醇酸鈉作為唯一厭氧菌培養(yǎng)基；無合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣；催化劑失活；培養(yǎng)時間不足；厭氧菌

8、的鑒定材料有問題。（三）鑒定試驗形態(tài)與染色：可為厭氧菌的鑒定提供參考依據(jù)。菌落性狀：不同的厭氧菌其菌落形態(tài)和性質(zhì)不同?？股孛舾行澡b定試驗：卡那霉素可用于梭桿菌屬與類桿菌屬的區(qū)分，甲硝唑用于厭氧菌與非厭氧菌的區(qū)分。脂肪酸酶試驗、蛋白溶解試驗、明膠液化試驗、膽汁肉湯生長試驗以及硫化氫試驗等?？煽康姆椒āＮ?、常見厭氧菌（一）破傷風桿菌生物學性狀形態(tài)與染色：G+，細長，有周鞭毛，無莢膜。芽胞在菌體頂端，呈圓形，使整個細菌體呈鼓槌狀。培養(yǎng)特性：專性厭氧菌，在普通培養(yǎng)基上不易生長。血平板：扁平、灰白色、半透明、邊緣不齊的菌落。對蛋白質(zhì)有微弱的消化作用?？乖瓨?gòu)造：本菌有菌體抗原和鞭毛抗原?；顢?shù)十年。微生物

9、學檢查破傷風的臨床表現(xiàn)典型，根據(jù)臨床癥狀即可作出診斷，所以一般不做細菌學檢查。特殊需要時，可從病灶處取標本涂片，革蘭染色鏡檢。需要培養(yǎng)時，將標本接種皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)。也可進行動物試驗。臨床意義引起人類破傷風，對人的致病因素主要是它產(chǎn)生的外毒素。毒素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有特殊的親和力。軀干及四肢肌肉持續(xù)強直性痙攣導致的角弓反張，呼吸困難，終因窒息死亡。治療原則正確處理創(chuàng)口，包括清刨、擴創(chuàng)等，防止厭氧微環(huán)境?？梢员M早注射破傷風抗毒素，也可同時給予類毒素。在注射抗毒素前應做皮試。采用四環(huán)素、紅霉素等進行抗感染治療。（二）產(chǎn)氣莢膜梭菌生物學性狀形態(tài)與染色：革蘭陽性粗大桿菌，芽胞呈橢圓型，次極端。在機體內(nèi)可形成

10、明顯的莢膜。培養(yǎng)特性：厭氧但不十分嚴格。最適溫度為45。血平板：雙層溶血環(huán)。皰肉培養(yǎng)基：產(chǎn)生大量氣體。牛乳培養(yǎng)基：分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，同時產(chǎn)生大量氣體，出現(xiàn)“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。生化反應：本菌代謝活躍，可分解多種糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，能液化明膠。分型：根據(jù)其產(chǎn)生的毒素，大體可將產(chǎn)氣莢膜梭菌分成5 個型別、B、E）的主要為A微生物學檢查：在創(chuàng)口深部取材涂片，革蘭染色鏡檢，這是極有價值的快速診斷方法。片鏡檢，利用生化反應進行鑒定。臨床意義致病物質(zhì)：外毒素及多種侵襲酶類，外毒素以 毒素為主，本質(zhì)為卵磷脂酶；還可產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶、DNA 酶等。某些 A 型菌株產(chǎn)生的腸毒素，可引起食物中毒，病人表現(xiàn)為腹痛、

11、腹瀉，治療原則：對感染局部應及時處理，包括擴創(chuàng)，沖洗，切除壞死組織?？股?。（三）肉毒梭菌生物學性狀：G+，短粗桿菌，芽胞呈橢圓型，粗于菌體，位于次極端，使細菌呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀。嚴格厭氧，可在普通瓊脂平板和血平板上生長。根據(jù)所產(chǎn)生毒素的抗原性不同，肉毒梭菌可分為8 個型，引起人類疾病的以A、B 型最為常見。肉毒梭菌芽胞體抵抗力很強。肉毒毒素對酸的抵抗力比較強，但不耐熱，煮沸1 分鐘即可被破壞。肉毒毒素的毒性是已知最劇烈的毒素。微生物學檢查分離培養(yǎng)與鑒定：懷疑為嬰兒肉毒病的糞便中檢出本菌，并證實其是否產(chǎn)生毒素，診斷意義較大。毒素檢測：可取培養(yǎng)濾液或懸液上清注射小鼠腹腔，觀察動物出現(xiàn)的中毒證狀。

12、臨床意義：主要可引起食物中毒，屬單純性毒性中毒，并非細菌感染。胃腸癥狀很少見，主要表現(xiàn)為某些部位的肌肉麻痹，重者可死于呼吸困難與衰竭。治療原則：盡早診斷，迅速注射A、B、E 三型多價抗毒素，同時進行對癥治療。（四）艱難梭菌1.生物學性狀 G+2.微生物檢驗性檢測來進行診斷。CCFA 平板上形成黃色，粗糙型的菌落。脂酶，卵磷脂酶陰性。在紫外線照射下呈黃綠色熒光。臨床意義產(chǎn)生A、B 兩種毒素，毒素A 為腸毒素，可使腸壁出現(xiàn)炎癥，細胞浸潤，腸壁通透性增加，出血及壞死。毒素B 為細胞毒素，損害細胞骨架，致細胞固縮壞死，直接損傷腸壁細胞，因而導致腹瀉及假膜形成。本菌感染與大量使用抗生素有關(guān)。進行抗感染治

13、療。六、無芽胞厭氧菌（一）主要種類1.G-厭氧桿菌有 8 個屬，類桿菌屬中的脆弱類桿菌最為重要，形態(tài)呈多形性，有莢膜，生長迅速。3G+557 天。73丙酸桿菌屬：小桿菌，無鞭毛，能在普通培養(yǎng)基上生長，需要25見。雙歧桿菌：呈多形性，有分枝，無動力，嚴格厭氧，耐酸。齒雙歧桿菌與齲齒和牙周炎有關(guān)。鈍真桿菌。（二）微生物檢驗要從感染灶深部采取標本，立即送檢。直接涂片鏡檢觀察細菌形態(tài)、染色及菌量。分離培養(yǎng)與鑒定 為基礎的血平板。證實為專性厭氧菌后，再經(jīng)生化反應進行鑒定。（三）臨床意義均為內(nèi)源性感染，所致疾病有：敗血癥 主要由脆弱類桿菌引起，其次為G+厭氧球菌。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 主要由G-厭氧桿菌引起，

14、常見腦膿腫。口腔與牙齒感染 主要由消化鏈球菌、產(chǎn)黑素類桿菌等引起。呼吸道感染 主要由普雷沃菌屬、壞死梭桿菌、核梭桿菌、消化鏈球菌和脆弱類桿菌引起。腹部和會陰部感染 主要由脆弱類桿菌引起。女性生殖道感染 主要由消化鏈球菌屬、普雷沃菌屬和卟啉單胞菌等引起。無芽胞厭氧菌尚可引起皮膚和軟組織感染、心內(nèi)膜炎等。（四）治療原則正確處理感染灶，包括清洗傷口，去除壞死組織和異物、引流等。合理使用抗生素進行抗感染治療。七、厭氧球菌在臨床標本中檢出的厭氧菌約有14 為厭氧球菌。其中與臨床有關(guān)的有革蘭陽性黑色消化球菌和消化鏈球菌屬及革蘭陰性的韋榮球菌屬。（一）黑色消化球菌臨床意義人體各部組織和器官的感染（肺部、腹腔

15、、胸膜、口腔、顱內(nèi)、陰道、盆腔、皮膚和軟組織等）他細菌混合感染，也可從闌尾炎、膀胱炎、腹膜炎以及產(chǎn)后敗血癥的血中分離出來。（二）消化鏈球菌屬臨床意義在伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊1986 年第 2 卷中把消化鏈球菌屬分成厭氧消化鏈球菌、不解糖消化鏈球菌、吲哚消化鏈球菌、大消化鏈球菌、微小消化鏈球菌等共9 個菌種。本菌在臨床標本中以厭氧消化鏈球菌最常見。產(chǎn)生消化鏈球菌則很少見。消化鏈球菌可引起人體各部組織和器官的感染，又以混合感染多見。（三）韋榮球菌屬臨床意義腸道感染。八、厭氧環(huán)境的指示化學法 亞甲藍指示劑或刃天青指示劑。微生物法 專性需氧菌?！纠}】哪些標本不符合厭氧菌檢驗要求A、血B、咽拭子C、深部

16、膿腫穿刺液D、牙周膿腫穿刺液E、膀胱穿刺液答疑編號 502389170101【正確答案】B【例題】分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因可能是A、厭氧裝置的催化劑失活B、標本在空氣中放置過久C、培養(yǎng)基不是新鮮配置D、培養(yǎng)基成分不合適E、以上均是答疑編號 502389170102【正確答案】E【例題】下列細菌除哪種外，均能產(chǎn)生腸毒素A、白喉棒狀桿菌B、霍亂弧菌C、大腸埃希菌D、產(chǎn)氣莢膜梭菌E、金黃色葡萄球菌答疑編號 502389170103【正確答案】A【例題】洶涌發(fā)酵現(xiàn)象可鑒定、艱難梭菌、肉毒梭菌D、產(chǎn)氣莢膜梭菌E、破傷風梭菌答疑編號 502389170104【正確答案】D【例題】破傷風的緊急預防應注射、破

17、傷風類毒素、破傷風抗毒素E、丙種球蛋白答疑編號 502389170105【正確答案】D【例題】在人體腸道正常菌群中占絕對優(yōu)勢的有、雙歧桿菌、大腸桿菌、變形桿菌E、無芽胞厭氧菌答疑編號 502389170106【正確答案】E【例題】引起牙周膿腫常見的病原菌、大腸埃希菌、消化鏈球菌E、甲型溶血性鏈球菌答疑編號 502389170107【正確答案】D【例題】肉毒梭菌引起的食物中毒是以A、消化系統(tǒng)癥狀為主B、呼吸系統(tǒng)癥狀為主C、泌尿系統(tǒng)癥狀為主D、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為主E、循環(huán)系統(tǒng)癥狀為主答疑編號 502389170108【正確答案】D【例題】無芽胞厭氧菌可致疾病有A、敗血癥B、盆腔炎C、腹部膿腫D、牙周膿腫E、心內(nèi)膜炎答疑編號 502389170109【正確答案】ABCDE【例題】女性，44 歲，因肛裂引起直腸與會陰部瘺管，取瘺管膿性分泌物直接涂片檢查為革蘭陰性桿菌，但未分離出病原菌應做進一步的細菌學檢查是A、標本用厭氧方法培養(yǎng)B、標本用普通方法培養(yǎng)C、標本用高滲培養(yǎng)基培養(yǎng)D、標本在 5%10%二氧化碳中培養(yǎng)E、標本用SS 瓊脂平板培養(yǎng)答疑編號 502389170110【正確答