免疫學防治與診斷課件

1、2022/9/24第四節(jié) 免疫學應(yīng)用應(yīng)用免疫學理論闡明疾病的發(fā)病機制和發(fā)展規(guī)律應(yīng)用免疫學原理和技術(shù)診斷和防治疾病重點：常見免疫學防治方法和常見的免疫學檢測技術(shù)。2022/9/24免疫學防治免疫預(yù)防：利用各種生物或非生物制劑來建立機體的免疫應(yīng)答，以達到預(yù)防疾病的目的。用免疫學原理，防病、治病所 采取的措施 免疫治療：應(yīng)用免疫學原理，針對疾病的發(fā)生機制，增強機體的免疫功能，以達到治療目的所采取的措施。2022/9/24特異性免疫類型自然免疫人工免疫自然主動免疫：自然感染自然被動免疫： IgG通過胎盤、初乳SIgA人工自動免疫：接種疫苗、類毒素人工被動免疫：動物免疫血清、胎盤球蛋白等2022/9/2

2、4（一）免疫學預(yù)防1.人工免疫的概念和種類 通過人工的方法使機體獲得免疫力，包括人工自動免疫、人工被動免疫。 （1）人工自動免疫：是指給機體接種疫苗、類毒素等抗原物質(zhì),刺激機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，以獲得免疫力的方法，也稱預(yù)防接種。主要用于傳染病的特異性預(yù)防。（2）人工被動免疫：是給人體輸入抗體等制劑，使機體獲得特異性免疫力。臨床多用于治療和緊急預(yù)防。 2022/9/24人工自動免疫與人工被動免疫的比較比較類別人工自動免疫人工被動免疫輸入物質(zhì)抗原（疫苗、類毒素）抗體、活化的淋巴細胞、細胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫力出現(xiàn)時間慢（23周）快（注射即生效）免疫力維持時間較長，數(shù)月數(shù)年較短，23周用

3、途多用于預(yù)防多用于治療或緊急預(yù)防，調(diào)節(jié)機體免疫功能，治療腫瘤2022/9/24（1）死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。如傷寒、乙型腦炎、霍亂、狂犬病疫苗等。（2）減毒活疫苗是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。2.人工自動免疫常用生物制劑（3）類毒素：外毒素 類毒素0.3-0.4%甲醛2022/9/24種類死疫苗活疫苗制劑特點滅活，毒強株活，弱毒或無毒株接種途徑多采取皮下注射多模擬自然感染途徑、少數(shù)經(jīng)皮下注射制品類型可多種疫苗混合使用一般單獨使用接種量及次數(shù)量大，2-3次（7-10天）用量小，

4、1次保存及有效期易保存，穩(wěn)定，有效期1年不易保存，穩(wěn)定性差，4數(shù)周免疫效果較差，維持數(shù)月-2年較好，維持3-5年甚至更長時間副作用較大,但無毒力回復(fù)突變較小,但有毒力回復(fù)突變滅活疫苗與減毒疫苗比較2022/9/243.人工被動免疫生物制品抗毒素：外/類毒素馬Ab人丙種球蛋白：血漿和胎盤丙種球蛋白細胞因子單抗/基因工程抗體人工被動免疫注意事項注意防止超敏反應(yīng)早期和足量不濫用丙球 被動免疫不能激活免疫系統(tǒng)，故不能產(chǎn)生記憶反應(yīng)，其保護作用是短暫的。溫馨提示2022/9/244 新型疫苗 1）亞單位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 3）基因工程疫苗

5、編碼免疫原基因載體體內(nèi) 酵母菌、大腸桿菌（體外培養(yǎng)） 如：重組抗原疫苗、重組載體疫苗、DNA疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗2022/9/245.計劃免疫 我國兒童計劃免疫程序 年齡疫苗年齡疫苗出生時BCG，乙肝疫苗（第1針）6個月乙肝疫苗（第3針）1個月乙肝疫苗（第2針）8個月麻疹疫苗（初種）2個月三價脊灰疫苗（初服）1.5歲三價脊灰疫苗（加服），百白破（加強）3個月三價脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第1針）4歲三價脊灰疫苗（加服），麻疹疫苗（復(fù)種）4個月三價脊灰疫苗（復(fù)服），百白破（第2針）7歲BCG（復(fù)種），麻疹疫苗（復(fù)種），百白破（加強）5個月百白破（第3針）12歲BCG（農(nóng)村）2022/9/24人工

6、自動免疫的注意事項接種對象：免疫功能低下、與病原體接觸機會多、易感者。 接種劑量、次數(shù)和間隔時間：死疫苗：23次，間隔710天?；钜呙缃臃N一次。類毒素接種2次，間隔需46周。 接種途徑：死疫苗：皮下；活疫苗：皮內(nèi)注射、皮上劃痕和自然途徑接種，脊髓灰質(zhì)炎疫苗以口服為佳，流感、腮腺炎疫苗以霧化吸入為好。 接種后反應(yīng)：常于接種后24小時發(fā)生，表現(xiàn)為局部紅腫、疼痛、淋巴結(jié)腫大。 禁忌癥：高熱、嚴重心血管疾病、急性傳染病、惡性腫瘤、甲亢、活動性肺結(jié)核、糖尿病和免疫缺陷病等患者，均不宜接種疫苗。 2022/9/24（二）免 疫 治 療概念：指針對機體低下或亢進的免疫狀態(tài)，人為地增強或抑制機體的免疫功能達到

7、治療疾病的治療方法。1.抗體免疫治療：單克隆抗體、多克隆抗體、基因工程抗體3.藥物治療免疫增強療法、免疫抑制療法2.細胞免疫治療造血干細胞、過繼免疫、腫瘤細胞疫苗2022/9/24（二）免 疫 治 療2022/9/24二、 免疫學診斷目的：用于多種免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷 病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移 植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評估、發(fā) 病機制探討、以及對抗原性物質(zhì)或免疫細胞的 定性、定量，對細胞因子、粘附分子及細胞受 體的檢測等。方法：檢測抗原和抗體的體外實驗 免疫細胞的測定 （一）體外免疫學檢測 1.體液免疫檢測 抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)外均可發(fā)生特異性結(jié)合，體外可出

8、現(xiàn)凝集、沉淀等反應(yīng)現(xiàn)象。據(jù)此可利用已知的抗原（抗體）檢測未知的抗體（抗原），抗原抗體結(jié)合反應(yīng)也稱為血清學反應(yīng)。具有特異性、可逆性、可見性、比例性等特點。 常見的血清學反應(yīng)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)及免疫標記技術(shù)等。凝集反應(yīng)定義：顆粒性抗原+抗體凝集現(xiàn)象 （顆粒性抗原：細菌、細胞等）沉淀反應(yīng)定義：可溶性抗原+抗體沉淀現(xiàn)象（可溶性抗原：血清蛋白質(zhì)、細胞裂解液或組織浸液等）大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。單向瓊脂擴散試驗是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散?？乖跀U散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗

9、原含量成正比相關(guān)。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)雙向瓊脂擴散試驗 是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性 、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測。對流免疫電泳是先將待側(cè)血清標本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。 定義：

10、是用酶、熒光素、放射性核素等標記物標記抗原或抗體的試驗技術(shù)。通過檢測標記物來反映抗原抗體反應(yīng)情況，間接測出待檢抗原或抗體的含量。本法特異性強，敏感性高。主要的免疫標記物類別 標記物 用途熒光素 FITC、RB200、TRITC 免疫組化 鑭系元素螯合物 免疫分析測定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析測定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫組化 免疫分析測定化學發(fā)光物 Luminol、lucigenin 免疫分析測定金屬顆粒 膠體金、鐵蛋白 免疫組化 免疫分析測定 是用酶（常用的有辣根過氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP) 標記的抗體進行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反

11、應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA) ：是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法等。測定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：測定組織中或細胞表面的抗原。酶免疫技術(shù)概念：用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC) 與抗體連接成熒光抗體，再與待測標本的抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對標本中的抗原作鑒定和定位。有直接、間接及補體結(jié)合熒光法。直接熒光法：將熒光素直接標記抗體作標本染色。該法的優(yōu)點是特異性強，但其缺點是每檢測一

12、種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。熒光免疫技術(shù)間接熒光法：用一抗與標本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標記的二抗染色。該法的優(yōu)點是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標記的二抗可用于多種抗原的檢測，但非特異性熒光亦會增加。補體結(jié)合熒光免疫法：此法是在間接法的第一步抗原抗體反應(yīng)時加入補體，使之與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標記的抗C3抗體進行示蹤。(RIA)是用放射性核素標記抗原進行的免疫學檢測技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測的敏感性達pg水平。常用于標記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長激素、藥物等微量物質(zhì)的測定。放射免疫技術(shù) Ag* Ab Ag 標記抗

13、原 特異性抗體 待測抗原( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab 和游離Ag*從標準曲線上讀知含量測定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性 放射免疫測定法(RIA)示意圖是以硝酸纖維薄膜為載體吸附抗原，用膠體金標記代替酶標抗體的免疫標記技術(shù)。斑點金免疫層析實驗（一步金法）：HCG免疫膠體金技術(shù) 2. 細胞免疫檢測免疫細胞數(shù)量檢測免疫細胞的功能檢測淋巴細胞類型和數(shù)量的測定 （1）E花環(huán)試驗：E花環(huán)試驗可用于檢測T細胞數(shù)目。EA花環(huán)試驗可用于檢測B細胞數(shù)目。 （2）熒光免疫法：常采用間接免疫熒光法。 （3）流式細胞術(shù)：用流式細胞儀（FCM)?；ōh(huán)試驗示意圖免疫細胞功能的測

14、定-T細胞功能測定體內(nèi)法 ： 用生物抗原或化學抗原作皮內(nèi)試驗。 OT-PPD皮試 SD-SK皮試 體外法 ： T細胞增殖試驗（淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗）形態(tài)學檢查 3H-TdR摻入法淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（形態(tài)學示意圖）原理：人T細胞表面有PHA或ConA受體，T細胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進行分裂的淋巴細胞，以此測定T細胞的功能。 PHA刺激4872小時培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖靶細胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖（二）體內(nèi)免疫學檢測 1.體液免疫檢測（1）型超敏反應(yīng)皮膚試驗：變應(yīng)原：青霉素免疫血清植物花粉浸液方法：皮內(nèi)注射或劃痕，20min觀察結(jié)果結(jié)果：局部紅斑、丘疹1cm或無紅腫但局部有氧感，或全身不適者為陽性，有相應(yīng)的IgE存在。（2）中和反應(yīng)皮膚試驗：臨床常用的有檢測對白喉及猩紅熱有無免疫力的錫克及狄克實驗。 毒素抗毒素中和實驗微量外毒素 前臂屈側(cè)皮內(nèi)陽性：局部紅腫。表示受試者對此種外毒素無免疫力。陰性：無反應(yīng)。表明體內(nèi)