生物制藥十五章第一節(jié)(詳細分析“疫苗”共44張)課件

1、生物制藥十五章第一節(jié)第1頁，共44頁。生物制藥十五章第一節(jié)第1頁，共44頁。生物制品與生物技術(shù)藥物制造工藝第一節(jié)：概述第二節(jié)：疫苗和菌苗第三節(jié)：主要菌苗和疫苗的制造方法第四節(jié)：重組治療蛋白類藥物第五節(jié)：基因治療與基因藥物第2頁，共44頁。生物制品與生物技術(shù)藥物制造工藝第一節(jié)：概述第2頁，共44頁。第一節(jié)：生物制品概述1 、概念和發(fā)展歷史2 、分類3、生物制品質(zhì)量要求第3頁，共44頁。第一節(jié)：生物制品概述1 、概念和發(fā)展歷史第3頁，共44頁。1 概念和發(fā)展歷史Def: 以微生物、細胞、動物或人源組織和體液等為原料，利用傳統(tǒng)技術(shù)或用現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷。包括: 各種疫苗

2、、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑等。第4頁，共44頁。1 概念和發(fā)展歷史Def: 以微生物、細胞、動物或人源組織第5頁，共44頁。第5頁，共44頁。1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展第6頁，共44頁。1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展第6頁，共44頁。12世紀，開始使用人痘接種法預(yù)防天花。1796年，琴納從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于8歲男孩的手臂上，獲得對天花免疫力。第7頁，共44頁。12世紀，開始使用人痘接種法預(yù)防天花。1796年，琴納從患1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認“接種疫苗確實是一種行之有效的免疫方法”。1870年，法國科學(xué)家巴

3、斯德發(fā)明了第一個細菌減毒活疫苗雞霍亂疫苗。巴斯德將此歸納為對動物接種什么細菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。因此人們把巴斯德稱為疫苗之父。1980年 世界衛(wèi)生組織宣布全球消滅了天花。第8頁，共44頁。1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認問題1、生物制品的種類有哪些？每一個種類包含哪些生物制品？2、生物制品的質(zhì)量要求是什么？3、生物制品標準品的要求有哪些？4、標準品的分類？第9頁，共44頁。問題1、生物制品的種類有哪些？每一個種類包含哪些生物制品？第2 生物制品的分類1. 預(yù)防類：細菌類疫苗(菌苗）、病毒類疫苗、類毒素和聯(lián)合疫苗。2.治療

4、類： 抗毒素及免疫血清 細胞因子 重組DNA產(chǎn)品血液制品：第10頁，共44頁。2 生物制品的分類1. 預(yù)防類：第10頁，共44頁。3. 診斷類： 體外診斷制品：由特定抗原、抗體或有關(guān)生物物質(zhì)制成的免疫診斷試劑或試劑盒，用于體外免疫診斷。 體內(nèi)診斷制品：由變態(tài)反應(yīng)原或有關(guān)抗原制成的免疫診斷試劑，用于皮內(nèi)接種，診斷個體對病原的易感性或免疫狀態(tài)。4、其他制品 第11頁，共44頁。3. 診斷類：第11頁，共44頁。3、生物制品質(zhì)量要求 生物制品檢定內(nèi)容：安全性：毒性試驗，防腐性試驗，熱原質(zhì)試驗，安全性試驗；有關(guān)安全性的特殊試驗；效力：濃度測定、活菌率或病毒滴定測定、動物保護率試驗、免疫抗體滴度測定，穩(wěn)

5、定性試驗（2）生物制品的質(zhì)量控制：安全性、有效性和可控性 （P469)第12頁，共44頁。3、生物制品質(zhì)量要求 生物制品檢定內(nèi)容：第12頁，共44頁4、生物制品的檢定標準(1)生物制品的標準品或參考品Def: 用于生物制品效價、活性或含量測定的或其特性鑒別、檢查的生物標準品或參考品。有世界衛(wèi)生組織或國家檢定機構(gòu)批準分發(fā)；有世界衛(wèi)生組織審定分發(fā)的，為國際標準；有國家檢定機構(gòu)批準分發(fā)的，則稱為國家標準。第13頁，共44頁。4、生物制品的檢定標準(1)生物制品的標準品或參考品第13頁（2）生物制品標準品的要求準確：單位數(shù)準確凍干：效價穩(wěn)定溶封：瓶簽、說明書和實驗數(shù)據(jù)第14頁，共44頁。（2）生物制品

6、標準品的要求準確：單位數(shù)準確第14頁，共44 標準品的分級國際生物標準：有世界衛(wèi)生組織根據(jù)國際協(xié)作研究的結(jié)果標明其國際單位。用于標定國家的或?qū)嶒炇业臉藴势坊騾⒖贾破穱H參考標準國際生物參考試劑：生物學(xué)診斷試劑、生物材料或用于鑒定微生物或診斷疾病的高度特異血清。（3）國際標準的檢定程序（P470）第15頁，共44頁。 標準品的分級國際生物標準：有世界衛(wèi)生組織根據(jù)國際協(xié)作研究第二節(jié)：疫苗和菌苗（一 ）傳統(tǒng)疫苗（二）新一代疫苗第16頁，共44頁。第二節(jié)：疫苗和菌苗（一 ）傳統(tǒng)疫苗第16頁，共44頁。一、疫苗分類（一 ）傳統(tǒng)病毒疫苗1、死疫苗（dead Vaccine）2、活疫苗（attenuated

7、 vaccine）3、亞單位疫苗（subunit vaccine）第17頁，共44頁。一、疫苗分類（一 ）傳統(tǒng)病毒疫苗第17頁，共44頁。1、死疫苗（dead Vaccine） 利用物理或化學(xué)方法殺死或滅活培養(yǎng)增殖的標準微生物制成的預(yù)防制劑。2、活疫苗（attenuated vaccine） 用人工定向變異或從自然界篩選出毒力高度減弱或基本無毒的微生物制成的預(yù)防制劑。第18頁，共44頁。1、死疫苗（dead Vaccine）第18頁，共44頁。類別死疫苗活疫苗制劑性狀殺死的病原微生物弱毒或無毒的病原微生物接種量、次數(shù)量大、次數(shù)多（2-3）量小、1次保存、有效期易保存，較穩(wěn)定不易保存，4 數(shù)周失

8、效免疫效果較差、不持久較好，維持1-5年或更長安全性會出現(xiàn)發(fā)熱、全身或局部反應(yīng)有時會感染致病兩種類型疫苗特征比較第19頁，共44頁。類別死疫苗活疫苗制劑性狀殺死的病原微生物弱毒或無毒的病原微生3、亞單位疫苗（subunit vaccine）利用病原體中有效的免疫原成分制成的疫苗，稱為亞單位疫苗 。第20頁，共44頁。3、亞單位疫苗（subunit vaccine）第20頁，共（二）新一代疫苗1、基因工程疫苗2、遺傳重組疫苗3、合成肽疫苗4、獨特型抗體疫苗第21頁，共44頁。（二）新一代疫苗第21頁，共44頁。1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccine)6、在培養(yǎng)過程中，

9、能產(chǎn)生大量典型毒素（類毒素）3、病毒性動物組織疫苗制造能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。產(chǎn)品副作用小、安全性好和效力高；利用微生物做載體，在微生物中表達保護性抗原基因，把微生物制成疫苗。安全性、有效性和可控性 （P469)抗原基因加以改造，使之發(fā)生點突變、缺失、甚至進行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達到增強其免疫原性，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗滅活菌苗通常根據(jù)細菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進行。安全性、有效性和可控性 （P469)是否會整合到染色體上引起癌變；向細胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的

10、溫度下作用一定的時間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活。不易保存，4 數(shù)周失效細胞毒液內(nèi)按比例加入保護劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。巴斯德將此歸納為對動物接種什么細菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。問題1、基因工程疫苗的種類有哪些？2、每一種疫苗優(yōu)、缺點是什么？第22頁，共44頁。1、基因工程疫苗 （gene engineered vacc1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccine) 利用DNA重組技術(shù)克隆并表達保護性抗原基因，用表達的抗原產(chǎn)物或重組體本身制成的疫苗。包括 基因工程亞單位疫苗、 基因工程載體疫

11、苗、 核酸疫苗、 基因缺失活疫苗蛋白工程疫苗等。 第23頁，共44頁。1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccDef:基因工程表達的蛋白抗原純化后制成的疫苗。優(yōu)點：產(chǎn)量高、純度高、安全性高；用于病原體難培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。缺點：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差。增強免疫原性：篩選完整的顆粒性結(jié)構(gòu)；加入有免疫佐劑 基因工程亞單位疫苗第24頁，共44頁。Def:基因工程表達的蛋白抗原純化后制成的疫苗。 基因工程基因工程載體疫苗(gene engineering vector vaccine)利用微生物做載體，在微生物中表達保護性抗原基因，把微生物制

12、成疫苗。優(yōu)點：1、活疫苗，抗原不需純化;2、不需多次免疫，載體本身可發(fā)揮免疫佐劑效果。缺點：載體為特定的微生物載體，曾感染過腺病毒或者接種卡介苗的人，對載體微生物已具有免疫力，再次接種后不易繁殖，會影響免疫效果。第25頁，共44頁?；蚬こ梯d體疫苗(gene engineering vect核酸疫苗（nucleic acid vaccine）：或稱基因疫苗用能夠表達抗原的基因制成疫苗。優(yōu)點： 易于制備、便于保存、可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價疫苗。缺點：是否會整合到染色體上引起癌變；能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。第26頁，共44頁。核酸疫苗（nucleic acid

13、 vaccine）：或稱基基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）：去除與毒力有關(guān)的基因獲得的缺失突變毒株制成的疫苗。（缺失毒素A單位的或其他毒力相關(guān)基因的霍亂活菌苗已上市）優(yōu)點：突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復(fù)；是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。第27頁，共44頁?；蛉笔Щ钜呙纾╣ene deleted live vacc蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine ）：抗原基因加以改造，使之發(fā)生點突變、缺失、甚至進行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達到增強其免疫原性，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗第28頁，共44頁。蛋白工程疫苗（p

14、rotein engineering vac2、遺傳重組疫苗 （genetic recombinant vaccine）：用遺傳重組方法獲得重組微生物制成的疫苗。第29頁，共44頁。2、遺傳重組疫苗 （genetic recombinant 安全性、有效性和可控性 （P469)濃度測定、活菌率或病毒滴定測定、動物保護率試驗、免疫抗體滴度測定，穩(wěn)定性試驗1、基因工程疫苗 （gene engineered vaccine)巴斯德將此歸納為對動物接種什么細菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。流程圖1菌苗制造工藝流程病毒接種培養(yǎng)有同步與異步。巴斯德將此歸納為對動物接種什

15、么細菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。向細胞毒液內(nèi)按規(guī)定加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活?？乖蚣右愿脑?，使之發(fā)生點突變、缺失、甚至進行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達到增強其免疫原性，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗(1)生物制品的標準品或參考品有世界衛(wèi)生組織審定分發(fā)的，為國際標準；國際生物標準：有世界衛(wèi)生組織根據(jù)國際協(xié)作研究的結(jié)果標明其國際單位。根據(jù)病毒種類、制備疫苗工藝流程選擇不同的細胞?？乖蚣右愿脑欤怪l(fā)生點突變、缺失、甚至進行不同基因或結(jié)構(gòu)域的人工組合，達到增強其免疫原性，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗

16、生物制品檢定內(nèi)容：3、合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)：用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機體產(chǎn)生免疫保護的多肽制成的疫苗。優(yōu)點： 純度和安全性高；副作用小；可長期在常溫下保存；缺點： 抗原性單一；免疫原性弱。 合成肽抗原聯(lián)合使用提高免疫原性。第30頁，共44頁。安全性、有效性和可控性 （P469)3、合成肽疫苗(Synt4、抗獨特型抗體疫苗 （antiidiotype vaccine）：用與特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2）做抗原制成的疫苗。目前此疫苗尚處于理論性研究階段。 第31頁，共44頁。4、抗獨特型抗體疫苗 （antiidiotype vacci一、滅活菌苗制

17、造二、活菌苗制造三、疫苗的制造疫苗制造的方法第32頁，共44頁。一、滅活菌苗制造疫苗制造的方法第32頁，共44頁。滅活菌苗通用制造程序 菌種的選擇 菌液培養(yǎng) 滅活 配苗 濃縮 菌種的選擇菌液培養(yǎng)滅活濃縮配苗滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。 一、滅活菌苗制造第33頁，共44頁。滅活菌苗通用制造程序 菌種的選擇 菌液培養(yǎng)基本流程菌液佐劑+乳 化分裝和保存原料配置滅活菌液滅活第34頁，共44頁?；玖鞒叹鹤魟?乳 化分裝和保存原料配置滅活菌液滅活 滅活菌苗通常根據(jù)細菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當(dāng)?shù)臏缁顥l件進行。表 幾種滅活菌苗的滅活方法 一、滅活菌苗制造菌種的選擇菌液培

18、養(yǎng)滅活濃縮配苗第35頁，共44頁。 滅活菌苗通常根據(jù)細菌的特性加入最有效的滅活劑，采取流程圖1菌苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基病原菌分離菌 種弱毒菌種配置、滅菌鑒定減毒檢驗配制滅菌檢驗配制滅菌原 料佐 劑死菌液配苗、乳化滅活菌苗培 養(yǎng)原液配 苗活菌苗保護劑菌 液分裝、凍干分 裝殺菌原 料活化種子檢定第36頁，共44頁。流程圖1菌苗制造工藝流程蛋白質(zhì)、肉浸液等原料培養(yǎng)基病原菌菌種的選擇 產(chǎn)品副作用小、安全性好和效力高；生物學(xué)特性穩(wěn)定1、特定的抗原性2、典型的形態(tài)、培養(yǎng)特性和生化特性，并可長期持保持3、易在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)4、菌種在培養(yǎng)過程中應(yīng)產(chǎn)生較小的毒性（死菌苗）。5、菌種在培養(yǎng)過程

19、中無毒性復(fù)原現(xiàn)象（活菌苗）6、在培養(yǎng)過程中，能產(chǎn)生大量典型毒素（類毒素）第37頁，共44頁。菌種的選擇 產(chǎn)品副作用小、安全性好和效力高；生物學(xué)特性穩(wěn)定3、病毒疫苗制造1、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造2、 細胞培養(yǎng)制造疫苗3、病毒性動物組織疫苗制造 第38頁，共44頁。3、病毒疫苗制造1、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造第38頁，共44頁細胞類型：原代細胞和傳代細胞兩類根據(jù)病毒種類、制備疫苗工藝流程選擇不同的細胞。（脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細胞；狂犬病弱毒細胞疫苗采取BHK21細胞增殖病毒等）。接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗細胞制備二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造第39頁，共44頁。細胞類型：原代細胞和傳代細胞兩類接毒與收獲種毒與毒種繼代配苗 病毒接種培養(yǎng)有同步與異步。 同步：在細胞分裝同時或不久接種毒種。異步：在細胞形成單層后接