水稻種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程

1、水稻種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程本規(guī)程適用于水稻種子繁育基地的產(chǎn)地檢疫。名詞解釋產(chǎn)地檢疫：系指水稻種子生產(chǎn)過程中的檢疫。包括選擇基地、選用無病良種、生長期間檢查、必要的室內(nèi)檢驗(yàn)等，直到簽發(fā)“產(chǎn)地檢疫合格證書”。檢疫對(duì)象：指國家法律規(guī)定禁止隨稻種、秧苗、植株殘?bào)w等人為傳播的危險(xiǎn)病蟲。檢疫對(duì)象水稻細(xì)菌性條斑病XanthomonasCampes(tFrainsgp)evDt.yeaO.lryzicol水稻白葉枯病XanthomonasCamp(eIsStHrIi)YsDAyMpeAv.Oryzae選擇基地從未發(fā)生或連續(xù)三年未發(fā)生檢疫對(duì)象，有一定隔離保護(hù)條件，灌溉水源無檢疫對(duì)象污染。基地用種要求基地用種應(yīng)在無檢疫

2、對(duì)象發(fā)生地區(qū)選種或經(jīng)檢疫部門檢驗(yàn)證明不帶檢疫對(duì)象的種子。播種前必須對(duì)種子進(jìn)行消毒處理(詳見附錄)。綜合治理措施栽培管理要求1田要選擇在灌水系統(tǒng)上游，距村莊較遠(yuǎn)的地勢高燥的地方。捆秧苗用稻草要沸水消毒，或用麥草、棕葉等代替。在秧田三葉期和移栽前天用藥劑防治次。5.1.灌4水排.灌1分家。淺.水2勤灌，嚴(yán)防串灌、深水淹灌、浸灌，及時(shí)曬田。施5肥基.肥1充分腐熟。防.止2偏施氮肥，氮、磷、鉀要合理配比，防止水稻貪青誘發(fā)病害。5.2病田處理對(duì)1發(fā)病田塊和發(fā)病中心插上標(biāo)記?；?學(xué)防治：田間一旦發(fā)現(xiàn)病中心，立即拔除或齊泥割除病株，噴藥控制，對(duì)周圍田塊也應(yīng)噴藥預(yù)防，特別是在暴風(fēng)雨及淹澇之后，要立即噴藥。5.

3、3病田稻種處理病1田生產(chǎn)的種子要單收、單存，嚴(yán)防與無病種子混雜。5.3.1輕.病1田（只有零星病葉）的種子必須經(jīng)消毒處理后嚴(yán)格控制在病區(qū)使用（種子消毒處理方法見.條2）。5.3.1其.它2病田種子一律改做糧食不準(zhǔn)作種用。5.4病稻草處理：病稻草作燃料燒掉，或作其他滅菌處理。不得用病稻草捆秧和禁止帶病肥料施入稻田。檢查、檢驗(yàn)方法田間檢查6.1.田1間檢查時(shí)間6.1.1秧.田1從四葉期開始，逐畦目測檢查，發(fā)現(xiàn)可疑病斑，拔出病苗，進(jìn)行鑒定。6.1.1本.田2期檢查三次：第一次在拔節(jié)期；第二次在孕穗至抽穗階段，多為病害流行時(shí)期，癥狀明顯，易于識(shí)別；第三次在齊穗后至葉片枯黃前，結(jié)合種子純度、質(zhì)量檢驗(yàn)同時(shí)

4、進(jìn)行。6.1.田2間檢查方法6.1.2檢.查1方法：種子田逐塊、逐帶檢查（包括隔離區(qū)）。癥狀診斷：田間癥狀識(shí)別（詳見附錄）。可疑癥狀，采集標(biāo)本帶回室內(nèi)鑒定。6.2室內(nèi)檢驗(yàn)方法細(xì)1菌溢檢查：切取病葉上病健交界處葉片組織約1毫米，放在載玻片的水滴中，加上蓋玻片，靜止后，用手持?jǐn)U大鏡或低倍顯微鏡稍暗視野下檢查，有云霧狀菌液自葉脈涌出。保濕檢查：取玻璃杯一只，內(nèi)盛清潔河沙約半寸深，加水濕潤，再切取病葉組織約6下端插入河沙中，上端外露，加蓋濕紗布，保濕以上，上端切口處有混濁液或淡黃色菌珠形成。染3色檢查：將病葉莖部剪去，插入盛有紅墨水（原液或加稀釋）的玻管或廣口瓶中，放在通風(fēng)而溫暖的地方，后，健部染成紅

5、色，病部因?qū)Ч軆?nèi)充滿細(xì)菌，影響紅墨水進(jìn)入，仍為綠色或黃色。分離培養(yǎng)檢驗(yàn)：對(duì)病組織進(jìn)行分離培養(yǎng)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)（詳見附錄）。帶菌種子檢驗(yàn)：用噬菌體方法或免疫熒光檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)種子帶菌情況（詳見附錄）。7簽發(fā)證書經(jīng)最后一次田間檢查后，未發(fā)現(xiàn)檢疫對(duì)象的水稻種子，由當(dāng)?shù)貦z疫部門簽發(fā)“產(chǎn)地檢疫合格證”（見附錄）。凡發(fā)生有檢疫對(duì)象的種子田生產(chǎn)的種子不發(fā)給“產(chǎn)地檢疫合格證”。種子部門憑“產(chǎn)地檢疫合格證”收購無病種子。附錄A水稻種子消毒處理方法（參考件）A1細(xì)菌性條斑病、白葉枯病。11熱水燙種：將稻種盛在籮筐內(nèi)，先放到45的溫水中預(yù)熱,立即移入保持5的熱水中浸泡10。將稻谷取出后立即用冷水沖洗冷卻再浸種催芽或曬干待播

6、。2佻“402”1000倍（或10%“401”500倍）+0肥鹽酸（化學(xué)純）浸種。（注：根據(jù)大田應(yīng)用結(jié)果，浸種時(shí)間比較安全。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，各地應(yīng)對(duì)不同品種作發(fā)芽試驗(yàn)后，方可應(yīng)用）。1氯霉素500浸種4（水溫252）。附錄B田間癥狀識(shí)別（補(bǔ)充件）B1水稻細(xì)菌性條斑病水稻細(xì)菌性條斑病在葉片上形成暗綠色或黃褐色的狹窄條斑。初發(fā)期為暗綠色水漬狀半透明小斑點(diǎn)，很快在葉脈之間伸展，形成寬約14m長約14的條斑，可擴(kuò)大到寬1、長10以上，轉(zhuǎn)為黃褐色。病斑上帶有成串的黃色珠狀細(xì)菌溢出，形小而量多。嚴(yán)重時(shí)，病斑增多而融聚一起，局部呈不規(guī)則的黃褐色至枯白斑塊，對(duì)光觀察，病斑部半透明，水浸狀。病部菌膠多，色深，不易脫

7、落。秧苗期即可見到典型癥狀。B2水稻白葉枯病典型白葉枯病癥狀典型白葉枯病癥狀主要發(fā)生在葉片及葉鞘部位，病菌自葉片的葉尖或葉緣入侵后先產(chǎn)生黃綠色、水漬狀條斑紋斑點(diǎn)，后沿葉緣一側(cè)或兩側(cè)，或葉片中脈繼續(xù)發(fā)展成為波紋狀黃色、黃綠色或灰綠色病斑；病、健組織界線明顯，病斑數(shù)天后轉(zhuǎn)灰白色，并向內(nèi)卷曲，遠(yuǎn)望一片枯槁色。在空氣濕度大或雨后的傍晚和清晨露點(diǎn)大時(shí)，病葉上的新鮮病斑上，有時(shí)甚至在未表現(xiàn)病斑的葉緣上吐出混濁狀的水珠或蜜黃色膠珠狀的細(xì)菌膿，干涸后硬結(jié)成粒，易脫落。在一些感病品種上，病斑可以從葉片向下擴(kuò)展至葉鞘，如黃白色轉(zhuǎn)為灰白色，葉鞘最終亦變呈干枯。雕萎型白葉枯病癥狀雕萎型白葉枯病癥狀主要發(fā)生于秧田及移植

8、前后，幼株感病后，在秧苗生育后期或本田移植后1至4周內(nèi)，能陸續(xù)表現(xiàn)癥狀。癥狀的產(chǎn)生主要是病原菌自葉面?zhèn)?、自然孔口、傷莖或斷根等部位入侵，在稻田內(nèi)沿維管束向其他器官部位轉(zhuǎn)移，分泌毒素破壞并堵塞輸導(dǎo)組織而引起秧田失水，整株雕萎。雕萎株發(fā)生前期，病菌的入侵點(diǎn)（葉尖水孔或傷口）上先出現(xiàn)水漬狀灰綠色急性型病斑，而后迅速沿主脈向下擴(kuò)展至葉鞘，感病葉片及葉鞘很快干枯，甚至死亡脫落，天后便出現(xiàn)雕萎株、心葉卷曲、形似暝害枯心,但只要把枯萎株拔起，剝開枯萎心葉，剖視病株假莖褐變部位，并用手?jǐn)D壓斷口，可見大量黃白色至黃色涕狀菌膿溢出，剝視病株葉鞘內(nèi)側(cè)，亦常見有大量菌膿溢出。病菌如從莖部或斷根以及自根點(diǎn)伸長的新根所

9、穿破的鞘部傷口入侵時(shí)，能迅速直接入侵心葉或假莖組織。雕萎出現(xiàn)早，莖部葉片或心葉都可因癥狀發(fā)展嚴(yán)重而先后卷曲；但有時(shí)往往在伸長的心葉上傷口處出現(xiàn)葉枯型病斑。雕萎癥狀與典型白葉枯癥狀可以相互轉(zhuǎn)化，單獨(dú)發(fā)生或同時(shí)并發(fā)。黃葉型癥狀黃葉型癥狀多見于成株上的心部新葉，得病后呈淡黃至青黃色；而其他下位葉片呈正常綠色。在黃葉型的病葉上，一般難以檢出細(xì)菌；但在感染的葉片下方的節(jié)間及假莖部則大量帶菌，在尚未足以破壞莖節(jié)的輸導(dǎo)組織時(shí)，仍能為幼葉供應(yīng)少量養(yǎng)分，致使葉片呈半死不活的淡黃色狀態(tài)。附錄C細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法（補(bǔ)充件）水稻白葉枯病細(xì)菌和條斑病菌的分離方法與一般植物病原細(xì)菌的分離方法相同，只是在培養(yǎng)基中以蔗糖代替葡萄

10、糖，分離后的培養(yǎng)皿先在5溫箱中存放一天以后轉(zhuǎn)入的溫箱中培養(yǎng)，而菌落的出現(xiàn)一般都要天以后。在細(xì)菌的生理生化反映方面，條斑病菌與白葉枯病菌基本相似，但有幾個(gè)顯著區(qū)別：（1）明膠液化：白葉枯病菌不能液化；條斑病菌能液化明膠。（2）牛乳培養(yǎng)：白葉枯病菌不能胨化，條斑病菌可以胨化。（3）阿拉伯糖發(fā)酵：白葉枯病菌不能利用，不產(chǎn)酸；條斑病菌可以利用而產(chǎn)酸（。4）白葉枯病菌對(duì)還原物質(zhì)敏感，在2葡萄糖的培養(yǎng)基上不能生長；條斑病菌對(duì)還原物質(zhì)不敏感，在2葡萄糖培養(yǎng)基上可以生長。（5）兩者的血清反應(yīng)和噬菌體反應(yīng)各不相同。附錄D帶菌種子的檢驗(yàn)法（補(bǔ)充件）D1噬菌體檢驗(yàn)法檢驗(yàn)時(shí)間：被檢驗(yàn)稻種在收獲后的三個(gè)月內(nèi)進(jìn)行。1樣品

11、的制備：多點(diǎn)取樣稻種，經(jīng)充分混合后隨機(jī)稱取10種子，脫下谷殼，磨碎后放入消毒過的燒杯或研缽中，加滅菌水0,浸泡并時(shí)常攪拌，半小時(shí)后吸取上層清液供測定用，也可用粗濾紙過濾除去組織殘余，取濾液測定。1指示菌液的制備：使用（江蘇）和1遼寧）兩個(gè)菌株作混合指示菌（各地在檢驗(yàn)本地種子材料時(shí)，也可用本地的菌種），要保證指示菌的純度，指示菌要使用新鮮培養(yǎng)的，尤以斜面培養(yǎng)的為好，一般以移植在斜面上生長天的菌為最好，超過10天以上的不宜使用。指示菌懸浮液濃度不宜過稀，以每毫升含菌量在億以上為好。在每管斜面菌種管中，加滅菌水，刮下菌苔，配制成細(xì)菌懸浮液，作測定用。1測定及計(jì)數(shù)：每個(gè)樣品，分別吸取上層溶液1、100

12、于三個(gè)滅菌培養(yǎng)皿中，各加1指示菌液和10溶化的固體培養(yǎng)基，搖勻凝成平板后，放在8的溫箱中，培養(yǎng)101后，記載各個(gè)培養(yǎng)皿中的噬菌斑數(shù)，然后再換算成每克種子內(nèi)的噬菌斑數(shù)。熒光抗體檢驗(yàn)法熒光抗體法檢驗(yàn)水稻白葉枯病種操作程序1熒光片的制備11稱取干稻種（最好收獲后一年以內(nèi)），脫殼備用。11將稻殼放在大試管內(nèi)，加生理鹽水101,以沒過稻殼為準(zhǔn)，用玻棒攪勻，放8溫箱孵育2h。11將稻殼水?dāng)嚢韬鬄V出棄殼，稻殼水放離心管內(nèi)，以1000離心，棄去沉淀物，留上清液。11將上清液放離心管內(nèi)，以000離心0,用吸管棄去上清液，留底部富集菌液0。11以富集菌液在載片上涂去，陰干并在酒精燈火焰上迅速過1次，使菌固定于載片。11用1：101白葉枯抗血清蓋滿載片上細(xì)菌涂片區(qū)，將載片水平放在7密閉水溶箱內(nèi)，保濕0o11取出上項(xiàng)載片，用磷酸緩沖液沖出多余的抗血清，然后陰干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。11在上項(xiàng)載片細(xì)菌涂片區(qū)加滴1：1羊抗兔熒光抗體，蓋滿涂片區(qū)，水平放出水溶箱0同前。11取出載片、用磷酸緩沖液沖洗熒光抗體，陰干或吹風(fēng)機(jī)吹干載片，備用。1熒光片的檢驗(yàn)（在暗室內(nèi)進(jìn)行）1在熒光片涂菌區(qū)滴一滴為的緩沖甘油（或無熒光鏡油）。1用熒光濕微鏡100*物鏡對(duì)準(zhǔn)載片涂菌區(qū)，小心地使鏡頭接觸到玻片。觀察目鏡，用細(xì)調(diào)螺旋使物鏡緩緩上移，待目鏡中較明亮?xí)r，注意觀察在暗景載片上有