瘧原蟲血片的制作與染色

1、主要內(nèi)容吉氏染色液的配制血膜的染色影響染色的因素病例標(biāo)本采集考試內(nèi)容考核評分表血片制作薄血膜:借推片將血液薄薄地涂在載玻片上，使每個血細(xì)胞平鋪。厚血膜:是把較多的血液涂成圓形，血膜中血細(xì)胞重疊，原蟲較為集中。采血時間間日瘧和三日瘧可在發(fā)作后任何時間采血，但在發(fā)作后6 8小時內(nèi)最佳；惡性瘧應(yīng)在發(fā)作開始后不久作血檢?；颊咴陂_始發(fā)作時血檢可能查不到瘧原蟲，應(yīng)在第二次發(fā)作時再作血檢,以免漏檢。取血部位 以耳垂較為合適，也可在手指末端采血，先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻動耳垂使其充血后再行消毒），待干后，以左手拇指和食指夾住被檢者手指尖稍下方或輕輕捻轉(zhuǎn)耳垂邊緣，右手持消毒刺針，迅速刺入取血部

2、位12毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指協(xié)同擠出血滴。將玻片分為6等分，第1、2格備貼標(biāo)簽 及編號用；厚血膜涂在第3格中央，薄 血膜涂在第4格前緣至第6格中部。作為標(biāo)本的血片每張玻片涂厚、薄血膜各1個。血膜的位置薄血膜：取潔凈的載玻片2張，1張做載片，以左手拇指，食指夾持載玻片兩端，用另一張載玻片（最好為磨口邊緣）做推片，用右手大拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部用推片一端邊緣的中點(diǎn)從取血部分取約1l的血量（相當(dāng)于1/4火柴頭大?。寡闻c平置的載玻片接觸，并形成2535夾角，待血液向兩側(cè)擴(kuò)展約2厘米長度時，均勻而迅速地向左推出約2.5厘米長舌狀血膜。（涂片操作） 厚血膜 用推片的一角，從取血

3、部位刮取4 5l血量（相當(dāng)于火柴頭大?。?，使血滴與平置的載玻片接觸，再由里向外一個方向旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)4 6圈，涂成直徑0.8 1厘米大小圓形厚血膜，血膜厚薄均勻，過厚易于脫落，過薄達(dá)不到檢出率的要求。 厚血膜的厚度以一個油鏡視野內(nèi)可見5 10個白細(xì)胞為宜。 薄血膜 厚血膜 標(biāo)記處 標(biāo)準(zhǔn)的血涂片厚薄血膜的標(biāo)準(zhǔn) 厚血膜血量適宜，不宜過多或過少 薄血膜平整,無皺折和空泡.紅細(xì)胞單層排列血膜編號血膜制成后，立即用特種蠟筆或水筆于玻片面上寫上受檢者的號碼，以防出錯，待薄血膜干后再用鉛筆于薄血膜中寫上受檢者的個人編號。編號由省里統(tǒng)一，具體各縣市區(qū)的編碼見技術(shù)手冊附件。地市名稱（編號）縣（市、區(qū)）名稱（編號）血片

4、編號邯鄲市（HD）叢臺區(qū)（01）、邯山區(qū)（02）、復(fù)興區(qū)（03）、館陶縣（04）、魏縣（05）、大名縣（06）、曲周縣（07）、丘縣（08）、雞澤縣（09）、廣平縣（10）、肥鄉(xiāng)縣（11）、磁縣（12）、永年縣（13）、邯鄲縣（14）、峰峰礦區(qū)（15）、臨漳縣（16）、武安市（17）、成安縣（18）、涉縣（19）各縣（市、區(qū)）從XXXX001至XXXX999根據(jù)工作需求分配編號區(qū)間邢臺市（XT）橋東區(qū)（01）、橋西區(qū)（02）、沙河市（03）、臨城縣（04）、臨西縣（05）、隆堯縣（06）、內(nèi)丘縣（07）、巨鹿縣（08）、任縣（09）、寧晉縣（10）、邢臺縣（11）、廣宗縣（12）、南宮市（13

5、）、柏鄉(xiāng)縣（14）、南和縣（15）、新河縣（16）、平鄉(xiāng)縣（17）、威縣（18）、清河縣（19）石家莊市（SJ）長安區(qū)（01）、新華區(qū)（02）、橋東區(qū)（03）、橋西區(qū)（04）、裕華區(qū)（05）、正定縣（06）、井陘縣（07）、趙縣（08）、贊皇縣（09）、平山縣（10）、晉州市（11）、新樂市（12）、高邑縣（13）、鹿泉市（14）、辛集市（15）、行唐縣（16）、藁城市（17）、靈壽縣（18）、無極縣（19）、井陘礦區(qū)（20）、欒城縣（21）、元氏縣（22）、深澤縣（23）衡水市（HS）桃城區(qū)（01）、深州市（02）、阜城縣（03）、饒陽市（04）、故城縣（05）、冀州市（06）、武強(qiáng)縣（07

6、）、安平縣（08）、棗強(qiáng)縣（09）、景縣（10）、武邑縣（11）滄州市（CZ）運(yùn)河區(qū)（01）、新華區(qū)（02）、泊頭市（03）、海興縣（04）、肅寧縣（05）、東光縣（06）、青縣（07）、吳橋縣（08）、黃驊市（09）、滄縣（10）、獻(xiàn)縣（11）、河間市（12）、任丘市（13）、鹽山縣（14）、南皮縣（15）、孟村縣（16）保定市（BD）南市區(qū)（01）、北市區(qū)（02）、新市區(qū)（03）、滿城縣（04）、容城縣（05）、定興縣（06）、曲陽縣（07）、定州市（08）、安新縣（09）、安國市（10）、涿州市（11）、高碑店市（12）、蠡縣（13）、徐水縣（14）、高陽縣（15）、唐縣（16）、順平縣

7、（17）、博野縣（18）、清苑縣（19）、阜平縣（20）、望都縣（21）、易縣（22）、雄縣（23）、淶水縣（24）、淶源縣（25）廊坊市（LF）安次區(qū)（01）、廣陽區(qū)（02）、香河縣（03）、文安縣（04）、永清市（05）、固安縣（06）、霸州市（07）、大城縣（08）、三河市（09）、大廠縣（10）唐山市（TS）路南區(qū)（01）、路北區(qū)（02）、豐潤區(qū)（03）、豐南區(qū)（04）、開平區(qū)（05）、東礦區(qū)（06）、遵化市（07）、灤南縣（08）、樂亭縣（09）、遷西縣（10）、玉田縣（11）、遷安市（12）、唐海縣（13）、灤縣（14）秦皇島市（QH）海港區(qū)（01）、山海關(guān)區(qū)（02）、北戴河區(qū)（0

8、3）、盧龍縣（04）、青龍縣（05）、昌黎縣（06）、撫寧縣（07）承德市（CD）雙橋區(qū)（01）、雙灤區(qū)（02）、營子區(qū)（03）、圍場縣（04）、豐寧縣（05）、興隆縣（06）、寬城縣（07）、隆化縣（08）、平泉縣（09）、灤平縣（10）、承德縣（11）張家口市（ZJ）宣化區(qū)（01）、橋東區(qū)（02）、橋西區(qū)（03）、下花園區(qū)（04）、赤城縣（05）、張北縣（06）、崇禮縣（07）、康?？h（08）、沽源縣（09）、蔚縣（10）、尚義縣（11）、陽原縣（12）、懷安縣（13）、萬全縣（14）、懷來縣（15）、涿鹿縣（16）、宣化縣（17） 制作血膜的注意事項1、玻片清洗時，避免玻片碰撞、磨損。制

9、作血膜的載玻片必須完全清潔而毫無油漬或污垢。制片時，手指只能持玻片的邊緣，不能接觸表面，以免油污使薄血膜產(chǎn)生空白區(qū)以及厚血膜脫落。作為推片的玻片邊緣一定要平滑，才能使推出的血膜均勻一致。制作血膜的注意事項 2、剛涂制的血膜要平放在標(biāo)本盒內(nèi)，厚血膜未干前勿使標(biāo)本盒傾斜，以免血膜傾向一側(cè)，造成血膜厚薄不均，厚處不易溶血和著色而影響檢查結(jié)果；晾干血膜時應(yīng)注意防塵、防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸血膜，干后應(yīng)及時裝入標(biāo)本盒并蓋嚴(yán)，新的木制標(biāo)本盒需敞開放置一段時間，讓木醇揮發(fā)后才能使用，以免厚血膜血紅蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。制作血膜的注意事項3、讓血膜自然干燥，切忌用太陽曬或火烤，干透后才能用甲醇

10、固定薄血膜。夏天標(biāo)本盡可能48小時內(nèi)固定染色；冬天也不能超過72小時。放置時間越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及時染色，薄血膜宜先用甲醇固定，然后用過濾清水對厚血膜溶血，晾干后裝入盒內(nèi)蓋嚴(yán)，待以后染色。血片的染色（一）吉氏染液母液配置方法 取吉氏粉5克置于研缽中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，至250ml加完為止，倒入500ml有塞的有色玻璃瓶中。在研缽中加少量甲醇，洗去甘油濃液混入瓶內(nèi)，至250ml甲醇洗凈研缽中甘油染液為止，塞緊瓶塞，充分搖勻，置于溫箱內(nèi)24小時或室溫內(nèi)35天，每天搖動510min，即成原液。 材料： 1、吉氏粉5克 2、甘油250毫升 3、甲醇250毫升血片的

11、染色（二）吉氏染液血片染色方法 先用甲醇固定薄血膜，待干后進(jìn)行染色。 成批血片染色：將已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入新配制的2%吉氏染液稀釋液（2ml原液加中性蒸餾水98ml混合均勻），同時對厚薄血膜染色30min，然后向染色缸中注入緩沖液或自來水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，將染色缸中殘余的染液傾出，加入新水，反復(fù)沖洗23次，然后取出玻片，將血膜朝下插在晾片板上干燥。血片的染色（二）吉氏染色方法 先用甲醇固定薄血膜，待干后進(jìn)行染色。亦可在固定薄血膜后用清水對厚血膜溶脫血紅蛋白，然后再染色。 單張血片染色:薄血膜經(jīng)干燥固定后，用中性蒸餾水2ml，加吉氏原液23滴，混勻后滴在厚薄血膜上，

12、染色2030分鐘，然后用漂洗法輕輕將血膜上的染液沖洗干凈，晾干鏡檢。 快染:量筒內(nèi)量2ml緩沖液或凈水，直接滴加吉氏原液7滴，混勻，滴入待染標(biāo)本的厚薄血膜上，染色10min，清水漂洗，晾干鏡檢。吉氏染劑是最可靠的血膜染劑，其優(yōu)點(diǎn)是易于掌握，很少染色過度，染好后的血膜褪色較慢.質(zhì)量好的染色 : 核呈紅色,胞漿呈藍(lán)色或淡藍(lán)色 如果血片偏紅,說明染液偏酸性如果血片偏藍(lán),說明染液偏鹼性吉氏染色血片外觀血片的染色（三）注意事項 配置原液時過濾可除去雜質(zhì)顆粒，有助于提高鏡檢質(zhì)量。 固定薄血膜時不要將甲醇觸碰到厚血膜。 沖洗染液時，不要沖走厚血膜。(四）影響染色效果的因素血片染色好壞除了與玻片是否清潔，血片

13、制作質(zhì)量好壞等有關(guān)外，還受到以下幾個因素的影響：（1）染料溶劑的質(zhì)量 染料、甲醇和甘油如果不純，常使配制的染液偏酸或偏堿而影響染色效果。因此必須用分析純的甲醇和中性甘油，而且在配制時所用的器具必須干凈而無水份。影響染色效果的因素（2）染液的新舊 新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力較弱且常呈現(xiàn)偏堿性。染液存放時間越久，染色力越強(qiáng)。通常在染液配制12周后才使用，盛裝染液的瓶子應(yīng)加塞蓋嚴(yán)，以防吸潮而影響染液質(zhì)量。影響染色效果的因素（3）染液稀釋后使用時間 吉氏和瑞氏染液的主要成份是美藍(lán)、伊紅和由美藍(lán)氧化產(chǎn)生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊紅遇到美藍(lán)和天青即產(chǎn)生沉淀。因此，稀釋染液必

14、須在配制后半小時內(nèi)使用。影響染色效果的因素（4）染液的稀釋濃度 染液的濃度高著色快，各種細(xì)胞著色深，薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)粗大顯著，但顏色常偏堿；染液濃度低，著色慢，但各種細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色均勻、清晰，但薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)不夠清楚。影響染色效果的因素（5）染色時間 染色時間長染色效果好，反之較差。室溫高則著色快，染色時間可略縮短，氣溫低可適當(dāng)延長。因此染色時間應(yīng)根據(jù)染液的質(zhì)量、新舊、稀釋濃度和氣溫而適當(dāng)增減。影響染色效果的因素（6）染色用水 為使厚薄血膜著色好，應(yīng)使稀釋的染液呈中性或稍偏堿性，故應(yīng)用pH7.0 7.2的水稀釋。如果染液偏酸或偏堿，可用緩沖蒸餾水調(diào)整。染色后發(fā)現(xiàn)血膜顏色偏藍(lán)或偏紅時，可用與之相

15、反的酸、堿度水沖洗血片予以糾正。影響染色效果的因素（7）沖洗方法 染色后不要直接將染液倒掉，應(yīng)沿玻片或染色缸邊緣加水使染液表面一層溢出，并輕輕沖洗，以免染液色素顆粒沾污血膜。 查完整個厚血膜未查見瘧原蟲如何確定瘧原蟲血片為陰性瘧疾病人應(yīng)采集標(biāo)本制作血涂片采集濾紙血抗凝全血編號濾紙血樣式1.2cm1.2cm考試內(nèi)容1、血片制作與染色：在30分鐘內(nèi)，每人制作3張血片并做吉氏染色。具體考核標(biāo)準(zhǔn)見瘧原蟲血片制片染色技術(shù)考核評分表。2、鏡檢讀片：要求每人鏡檢6張標(biāo)本片，每張4分鐘，第3分鐘時提醒1次。 考試分組考試內(nèi)容8:40-9:10保定、廊坊、唐山血片制作、染色第一組血片秦皇島、石家莊血片鏡檢9:25-9:55秦皇島、石家莊血片制作、染色第二組血片保定、廊坊、唐山血片鏡檢10:10-10:40滄州、衡水、張家口血片制作、染色第三組血片邢臺、邯鄲、華油、承德血片鏡檢10:55-11:25邢臺、邯鄲、華油、承德血片制作、染色第四組血片滄州、衡水、張家口血片鏡檢瘧原蟲血片制片染色技術(shù)考核評分表項目檢查內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分值分值分值血片制作（80分）厚血膜（40分）血量（10分）45l10略多或略少7過多或過少5位置（10分）玻片右1/3 10稍偏右7偏右過多5直徑（10分）0.81.0cm100.70.8 或1.01.2cm81.2cm5外觀（10分）圓形厚膜均勻，邊緣整齊10圓形稍不均