實驗二十五基因重組實驗Ⅳ-重組體的篩選與鑒定

1、PAGE PAGE 11實驗二十五 基因重組實驗重組體的篩選與鑒定 原理 限制性內(nèi)切核酸酶酶切鑒定：具體原理見實驗二十一。PCR反應應鑒定：具體原原理見實實驗十八八。試劑1、DNAA模板2、引物3、Taqq DNNA聚合合酶4、dNTTPs（ddATPP、dGGTP、ddCTPP、dTTTP）5、10PCRR 反應應緩沖液液：1000mmmol/L TTriss-HCCl ppH 88.3，5500mmmoll/L KCll，155mmool/LL MggCl22，0.1%明明膠6、礦物油油超純水8、EcooR II酶解反反應液（110）: 1mool/LL pHH7.55 TTriss-HC

2、Cl , 0.5mool/LL NNaCll , 0.1mool/LL MMgCll2 。9、Hinnd IIII酶酶解反應應液（110）：1mmol/L ppH7.4 TTriss-HCCl , 1moll/L NaaCl , 0.007mool/LL MMgCll2 。3.50TAEE 電泳泳緩沖液液：稱取取2422克Trris，加加入577.1mml冰乙乙酸，1100mml 00.5mmol/L EEDTAA，調(diào)節(jié)節(jié)pH至至8.00，加蒸蒸餾水至至10000mll。10、.凝凝膠加樣樣緩沖液液：0.25%溴酚藍藍、0.25%二甲苯苯青FFF、400%蔗糖糖水溶液液（w/v）。11、1%（

3、1.5%）瓊瓊脂糖凝凝膠：11TAEE 1000mll含1gg（1.55g）瓊瓊脂糖。器材1、DNAA擴增儀儀2、電泳儀儀、電泳泳槽3、微量移移液器4、紫外投投射儀5、0.55ml塑塑料離心心管6、樣品槽槽模板（梳梳子）7、錐型瓶瓶（1000mll或500ml）8、一次性性塑料手手套9、凝膠成成像系統(tǒng)統(tǒng)操作步驟驟1. 酶酶切反應應體系的的建立（220l反應應體系） 按下下表要求求配制酶酶切反應應體系質(zhì)粒DNAA6l10Buuffeer2lHindIIII1lH2O10lEcoR I1l 混勻勻后置337水浴33h。2. PPCR反反應體系系的制備備(255l反應應體系)按下表要求求配制酶酶切反

4、應應體系DNA2l 10Buuffeer2.5lldNTP0.1ll H2O17.2lPrimeer-110.1llTaqE1lPrimeer-220.1ll50%甘油油2l混勻后，220000rpmm離心330seec，然然后按 944 5miin 944 40ssec 555 40ssec 335cyyclees 722 90ssec 722 3miin3. 電泳泳：1%瓊脂糖糖凝膠（酶酶切）和和1.55%瓊脂脂糖凝膠膠（PCCR反應應）將20ll酶切和和PCRR產(chǎn)物進進行電泳泳，觀察察結(jié)果。Vocabbulaary in Bioocheemiccal tecchnoologgyAAbso

5、rrbannce 吸光度Absorrbennt吸附劑Absorrptiion chrromaatoggrapphy吸附層析Absorrptiion speectrrum吸收光譜Acryllamiide, Aaa/Accr丙烯酰胺（單單體）Adeniine, A腺嘌呤Affinnityy chhrommatoograaphyy親和層析Agaroose瓊脂糖Agaroose gell ellecttropphorresiis，AAGE瓊脂糖凝膠膠電泳Allelle sspeccifiic ooliggonuucleeotiide, ASSO等位基因特特異性寡寡核苷酸酸雜交Ammonniumm pe

6、ersuulfaate, APP過硫酸胺Anglee rootorr角式轉(zhuǎn)頭Anionn exxchaangee chhrommatoograaphyy陰離子交換換層析CCarriier ampphollytee載體兩性電電解質(zhì)Catioon eexchhangge cchroomattogrraphhy陽離子交換換層析Celluulosse aacettatee meembrranee ellecttro -phhoreesiss，（CCAMEE）醋酸纖維薄薄膜電泳泳Celluulosse iion-excchanngerrs纖維素離子子交換劑劑Centrrifuuge離心機Centrrif

7、uugall foorcee離心力Centrrifuugall teechnniquue離心技術Coenzzymee輔酶Colummn cchroomattogrraphhy柱層析Cytossinee, CC胞嘧啶DDenatturee grradiientt geel eelettro -phhoreesiss , DGGGE變性梯度凝凝膠電泳泳Deoxyyribbonuucleeic aciid, DNAA脫氧核糖核核酸Dialyysiss透析Diffeerenntiaal ccenttriffugaatioon差速離心Discoontiinuoous PAGGE不連續(xù)聚丙丙烯酰胺胺凝膠電

8、電泳EEletrro-oosmoosiss電滲Emisssionn sppecttrumm發(fā)射光譜Excluusioon cchroomattogrraphhy排阻層析GGel cchroomattogrraphyy凝膠層析Gel ffilttrattionn凝膠過濾Guaniine，GG鳥嘌呤HHomoggeniizerr勻漿器Holozzymaase全酶IIon-eexchhangge cchroomattogrraphhy離子交換層層析Ion-eexchhangge ggel離子交換凝凝膠Ion-eexchhangge rresiin離子交換樹樹脂Isoellecttricc foocu

9、ssingg, IIEF等電點聚焦焦Isoennzymme同工酶LLigannd配基MMeltiing temmperratuure, Tmm溶解溫度Matriix載體Mobille pphasse流動相Molecculaar ssievve ffilttrattionn分子篩過濾濾NN,N,NN,NN-meethyylennc Bisaccryllamiide , BissN,N,NN,N-四亞甲甲基 雙雙丙烯酰酰胺N,N,NN,NN-ttetrrameethyyletthylleneedi -amminee, TTEMEED四甲基乙二二胺OOsmossis滲透PPaperr chhromm

10、atoograaphyy紙層析Partiitioon cchroomattogrraphhy分配層析Partiitioon ccoeffficciennt分配系數(shù)Photooeleectrric colloriimettry光電比色法法Plasmmid質(zhì)粒Polyaacryylammidee geel eelecctroophooressis, PAAGE聚丙烯酰胺胺凝膠Polymmeraase chaain reaactiion, PCCR聚合酶鏈反反應Primeer引物RRelattivee ceentrrifuugall foorcee, RRCF相對離心力力Restrricttionn

11、 enndonnuclleasse ，RRE限制性內(nèi)切切酶Restrricttionn frragmmentt leengtth ppolyymorrphiism, RFFLP限制性片段段長度多多態(tài)性Rate zonnal cenntriifuggatiion速率區(qū)離心心法Reverrse osmmosiis反向滲透Revollutiion perr miinutte ,rpmm每分鐘轉(zhuǎn)速速Ribonnuclleicc accid, RNNA核糖核酸Rotorr轉(zhuǎn)頭SSaltiing in鹽溶Saltiing outt鹽析Saphaadex葡聚糖凝膠膠SDS-PPAGEESDS-聚聚丙烯酰酰胺

12、凝膠膠Sedimmenttatiion coeeffiicieent 沉降系數(shù)Sedimmenttatiion vellociity沉降速率Sedimmenttatiion timme,SST沉降時間Sephaarosse瓊脂糖凝膠膠Sequeenciing測序Singlle sstraand connforrmattivee poolymmorpphissm, SSCCP單鏈構(gòu)象多多態(tài)性Sodiuum ddodeecyll suulfaate, SDDS十二烷基硫硫酸鈉Specttropphottomeeterr分光光度計計Specttropphottomeeterry分光光度法法Statiionaary phaase固定相Swingg-ouut rrotoor水平式轉(zhuǎn)頭頭TThin-layyer chrromaatoggrapphy, TLLC薄層層析Transsmitttannce透光率Thym