(人教版)DNA的粗提取與鑒定教學(xué)課件1

1、專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)課題1 DNA的粗提取與鑒定專題5 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 實驗設(shè)計（一）實驗材料的選取1、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取23種實驗材料）2、原則：凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大1、材料：魚卵、豬肝、菜花、香蕉、雞血、哺乳動物的紅細胞、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌。（從中選取23種實驗材料）2、原則：凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大 實驗設(shè)計（一

2、）實驗材料的選取1、材料：魚卵、豬肝、菜花（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液1、動物細胞的破碎：2、植物細胞的破碎： 以雞血為例，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。 提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。（二）破碎細胞，獲取含DNA的濾液1、動物細胞的破碎：2、植加入洗滌劑和食鹽的作用分別是？如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生什么影響？洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細胞膜，有利于DNA釋放；食鹽有利于DNA溶解會使細胞核內(nèi)DNA釋放不完全，提取DNA量變少，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺

3、鑒定不顯示藍色等加入洗滌劑和食鹽的作用分別是？洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解（三）去除濾液中的雜質(zhì)方案一：在濾液中加入NaCl，使NaCl溶液濃度為2mol/L，過濾除去不溶的雜質(zhì)，再調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L，析出DNA，過濾去除溶液中的雜質(zhì)，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。（三）去除濾液中的雜質(zhì)方案一：在濾液中加入NaCl，使NaC方案二：直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能夠分解蛋白質(zhì)。方案三：將濾液放在60-75的恒溫水浴中保溫10-15，注意嚴格控制溫度范圍。方案二：直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)10-15min，嫩肉粉-濃度可使DNA

4、溶解； -濃度可使DNA析出?；A(chǔ)知識一、DNA的溶解性0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L 2mol/L0.14mol/L-濃度可使DNA溶解；基礎(chǔ)知識一、D二、酒精是一種常用有機溶劑，但-卻不能溶于酒精；三、蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對-沒有影響四、大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080的高溫，而-在80以上才會變性DNADNADNA二、酒精是一種常用有機溶劑，但-卻不能溶于酒精；D五、洗滌劑可以溶解細胞的細胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對DNA沒有影響五、洗滌劑可以溶解細胞的細胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對DNA（四） DNA的析出與鑒定1、DNA的析出：將處理后的溶液過濾，加入與濾液體積相

5、等的、冷卻的酒精溶液（體積分數(shù)為95%），靜置23min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分。（四） DNA的析出與鑒定1、DNA的析出：2、DNA的鑒定：取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍。2、DNA的鑒定：六、DNA的鑒定DNA與-（沸水浴加熱）會被染成-，因此，二苯

6、胺可以作為鑒定DNA的試劑。-二苯胺藍色甲基綠（綠色）六、DNA的鑒定DNA與-（沸水浴加熱）會被染成操作提示2.加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。3.二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。1.以血液為實驗材料，每100ml加入3g檸檬酸鈉，作為抗凝劑。操作提示2.加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇D方法步驟 加入物質(zhì) 目的 1.制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細胞細胞核物質(zhì) 20 m1蒸餾水 3.溶解細胞核內(nèi)的DNA 2 m1L的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含DNA的

7、黏稠物 6.將DNA的黏稠物再溶解 2 molL的NaCl溶液20 mL 7.過濾含DNA的NaCl溶液 8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA 冷卻的95的酒精50 mL A:(1)向試管中加入0.015 molL的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺試劑 方法步驟 加入物質(zhì) 目的 1.制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出 使含DNA的黏稠物

8、被留在紗布上 使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中 除去含DNA的濾液中的雜質(zhì) 提取DNA A出現(xiàn)藍色 B無變化 加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固 加速血細胞破裂 2、實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 molL對DNA有何影響?1、在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出2、實驗中NaCl的物質(zhì)的量濃度為2 molL和0.14 3、DNA遇二苯胺(沸水浴)

9、會染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍色4、提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，關(guān)鍵是對雜質(zhì)的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白質(zhì))。答：D3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會染成( ) 4、提取雞血1.懷古思今，激發(fā)科技報國熱情，科技創(chuàng)新助推中華民族偉大復(fù)興的夢想早日實現(xiàn)2、歐共體形成、日本成為經(jīng)濟大國、不結(jié)盟運動興起和中國的振興，這些共同構(gòu)成了世界的多極化趨勢。3、多極化趨勢還只是一種趨勢和方向，不是一種成熟的國際關(guān)系格局。4、兩極格局雖然受到多極化的沖擊，在當(dāng)時仍是國際關(guān)系格局的總體的、基本的特征，因而多極化趨勢是兩極格局下的多極化趨勢。5、蘇聯(lián)解體后，兩極格局雖然瓦解，但多極化的世界格局并沒有最終形成，直到今天，仍處于向.6.這首題畫詩寫景兼抒情，并未刻