第十四章維生素類藥物的分析AnalysisofVitamines課件

1、第十四章 維生素類藥物的分析 Analysis of Vitamines第十四章 維生素類藥物的分析 An維生素A維生素B1維生素C維生素E維生素A一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1.結(jié)構(gòu) 環(huán)己烯 多烯醇（共軛雙鍵系統(tǒng)） R=H VA醇(維生素A1)：性質(zhì)活潑 R=CH3CO- VA醋酸酯：性質(zhì)穩(wěn)定第一節(jié) 維生素A的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第一節(jié) 維生素A的分析2.物理性質(zhì) 淡黃色或紅色油狀或固定物，幾乎無氣味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，環(huán)己烷和油中 VA醇：max(異丙醇)325nm VA酯：max(環(huán)己烷)328nm第一節(jié) 維生素A的分析2.物理性質(zhì)第一節(jié) 維生素A的分析3.化學性質(zhì) 日光照射裂解 空氣、氧化

2、劑、加熱或金屬離子等 產(chǎn)生環(huán)氧化物、醛、酸 三氯化銻反應 藍色產(chǎn)物（不穩(wěn)定）、漸變成紫紅色第一節(jié) 維生素A的分析3.化學性質(zhì)第一節(jié) 維生素A的分析（二） 鑒別 1. Carr-price反應（三氯化銻） 三氯化銻的氯仿液與VA作用產(chǎn)生藍色 漸變成紫紅色 無水：三氯化銻水解、VA不溶 無醇：乙醇能和反應中正碳離子作用第一節(jié) 維生素A的分析（二） 鑒別第一節(jié) 維生素A的分析 2.紫外法 本品加無水乙醇鹽酸溶解，立即紫外掃描 326nm單一吸收峰(VA) 水浴加熱30s，迅速冷卻，再掃描 348、367和389nm三個尖銳吸收峰(去水VA)第一節(jié) 維生素A的分析 2.紫外法第一節(jié) 維生素A的分析三、

3、含量測定紫外法（三點校正法）HPLC第一節(jié) 維生素A的分析三、含量測定第一節(jié) 維生素A的分析1.維生素A中存在的相關(guān)物質(zhì)和不相關(guān)物質(zhì)1）衍生物維生素A2（去氫維生素A） 維生素A3（去水維生素A） (一)紫外法（三點校正法）1.維生素A中存在的相關(guān)物質(zhì)和不相關(guān)物質(zhì)(一)紫外法（三點校2）異構(gòu)體 目前分離得到5個異構(gòu)體 新維生素Aa(2-順型) 新維生素Ab(4-順型)(一)紫外法（三點校正法）2）異構(gòu)體 (一)紫外法（三點校正法）新維生素Ac(2.4-順型)異維生素Aa(6-順型) 異維生素Ab(2.6-二順型)(一)紫外法（三點校正法）新維生素Ac(2.4-順型)異維生素Aa(6-順型) 3

4、）氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物，醛，酸 4）中間體、副產(chǎn)品： 5）裂解產(chǎn)物： 6）鯨醇（Kitol）:二聚體，非生物活性 7）不相關(guān)物質(zhì)：抗氧劑，稀釋用油 在325328nm處均有吸收 不相關(guān)吸收或背景吸收(一)紫外法（三點校正法） 3）氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物，醛，酸(一)紫外法（三點校正法2 .原理1）維生素A最大吸收波長附近（310340nm） 雜質(zhì)吸收近似一條直線2）物質(zhì)吸收光譜的加和性 A總=AVA+A雜質(zhì)(一)紫外法（三點校正法）2 .原理(一)紫外法（三點校正法）3.三點選擇(一)紫外法（三點校正法）(一)紫外法（三點校正法）維生素A醇 1) 三點：325、310、334nm 2) 等吸收點：A

5、310=A334= 3）校子公式： A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334(一)紫外法（三點校正法）維生素A醇(一)紫外法（三點校正法）維生素A酯 1）三點：328、316、340nm 2）波長等距：12nm 3）校正公式： A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(一)紫外法（三點校正法）維生素A酯(一)紫外法（三點校正法）4. 校正公式的應用及含量計算 第一法:樣品915IU/ml環(huán)己烷溶液 max326329nm 300、316、328、340、360nm （A1、A2、A3、A4、A5) 計算吸收度比值 (A1/A3、A2/A3

6、、A3/A3、A4/A3、A5/A3) 計算比值差(一)紫外法（三點校正法）4. 校正公式的應用及含量計算(一)紫外法（三點校正法）吸收度比值規(guī)定值波長（nm）300316328340360吸收度比值（規(guī)定）0.5550.9071.0000.8110.299max吸收度比值范圍Amax含量（效價）326329 0.02Amax(不須校正)326329 0.02 3%-3% -15%+3%第二法不在326329第二法(一)紫外法（三點校正法）吸收度比值規(guī)定值波長（nm）300316328340360吸 第二法： a、max不在326329nm b、校正與未校正吸收度比較+3% 樣品： 915IU

7、/ml(一)紫外法（三點校正法） 第二法：(一)紫外法（三點校正法） max323327nm之間 300、310、 325及334nm A300/A3250.73，計算A325（校正） a、校正在未校正吸收度土3% 以未校正吸收度計算 b、土3%，以校正吸收度計算(一)紫外法（三點校正法） max323327nm之間(一)紫外法（三點 max不在323327nm 或A300/A3250.73 需進一步純化(一)紫外法（三點校正法） max不在323327nm(一)紫外法（三點校5. 生物效價和換算因子（Biological potency and conversion factor,CF） 1

8、IU=0.344g VA醋酸酯 1IU=0.300g VA醇 1g VA醋酸酯:2.907106IU/g 1g VA醇:3.33106IU/g(一)紫外法（三點校正法）5. 生物效價和換算因子(一)紫外法（三點校正法）(一)紫外法（三點校正法）(一)紫外法（三點校正法） 換算因子： 單位百分吸收系數(shù)所相當于的效價 VA酯百分吸收系數(shù)=1530 VA醇百分吸收系數(shù)1820 CF(酯)=2.907106/1530=1900 CF(醇)=3.33106/1820=1830(一)紫外法（三點校正法） 換算因子：(一)紫外法（三點校正法） 6.注意問題 儀器波長校準 半暗室快速進行(一)紫外法（三點校正

9、法） 6.注意問題(一)紫外法（三點校正法）色譜柱：硅膠為填充劑流動相： 正己烷-異丙醇（997：3）檢測波長：325nm系統(tǒng)適應性試驗：維生素A醋酸酯主峰與 其順式異構(gòu)體峰的R應大于3.0。 進樣5次RSD3.0%。(二) HPLC色譜柱：硅膠為填充劑(二) HPLC第二節(jié) 維生素B1( Vit B1)Vit B1Thiamine Hydrochloride第二節(jié) 維生素B1( Vit B1)Vit B1ThiamiNaOHH2ONaOHH2O環(huán)合O2H硫色素Thiochtome環(huán)合O2H硫色素Thiochtome 結(jié)構(gòu)特點與鑒別 噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可被高鐵氰化鉀等氧化劑氧化，然后與嘧啶環(huán)上

10、的-NH2縮合生成具有熒光的硫色素，后者易溶于異丁醇中顯強烈的藍色熒光，該反應又稱為硫色素熒光反應。為維生素B1所特有。 結(jié)構(gòu)特點與鑒別 噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可被高鐵氰化鉀等氧化生成沉淀反應分子結(jié)構(gòu)中含有雜環(huán)，易與生物堿沉淀劑(碘化鉍鉀、碘化汞鉀、苦味酸等)，硅鎢酸，雷氏鹽等作用形成組成恒定的沉淀維生素B1在堿性加熱條件下反應放出H2S,與Pb(Ac)2試液形成黑色PbS。生成沉淀反應分子結(jié)構(gòu)中含有雜環(huán)，易與生物堿沉淀劑 含量測定 Assay硅鎢酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry 非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry 硫色素熒光法 Th

11、iochrone Fluoremetry 含量測定 Assay硅鎢酸重量法 Silicotu第三節(jié) 維生素C( Vit C)612345第三節(jié) 維生素C( Vit C)612345L-抗壞血酸 L-去氫抗壞血酸 L-二酮古羅糖酸有生物活性 有生物活性 無生物活性-2H+2HH2OOH-(H+)L-抗壞血酸 L-去氫抗壞血酸 50藍色H2O-3H2O糠醛-CO2戊糖50藍色H2O-3H2O糠醛-CO2戊糖鑒別利用其還原性 硝酸銀（銀鏡） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高錳酸鉀（褪色） 亞甲藍（藍色褪去） 磷鉬酸（鉬藍） 斐林氏溶液（紅色氧化亞銅）鑒別 （1）與硝酸銀反應 本品加水溶解加硝酸銀試液 銀

12、黑色沉淀（ChP、BP采用） （1）與硝酸銀反應（2）2，6二氯靛酚反應 本品加水溶解2,6二氯靛酚試液 顏色消失（ChP采用）（2）2，6二氯靛酚反應含量測定碘量法2,6-二氯靛酚法含量測定碘量法2,6-二氯靛酚法第五節(jié) 維生素E( Vit E)R1R2Vit E (dl-Tocopheryl Acetate)第五節(jié) 維生素E( Vit E)R1R2Vit E ( 鑒別 1.本品無水乙醇溶解硝酸，75加熱 鮮紅色，逐漸轉(zhuǎn)為橙紅色。 鑒別 2. 本品醇制KOH，煮沸 游離生育酚 乙醚提取 聯(lián)吡啶、三氯化鐵乙醇液 深紅色 2. 本品醇制KOH，煮沸第十四章維生素類藥物的分析AnalysisofVitamines課件ChP VE 中檢查生育酚 取Vit E 0.1g，加無水乙醇5ml溶解后，