氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠脂肪組織脂聯(lián)素造成的影響

1、氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠脂肪組織脂聯(lián)素造成的影響【摘要】目的：討論福辛普利和氯沙坦對自發(fā)性高血壓shr大鼠脂肪組織脂聯(lián)素的影響。方法：22周齡shr大鼠隨機被分成四組，分別予福辛普利、氯沙坦、福辛普利加氯沙坦、撫慰劑喂養(yǎng)。同系魏凱氏ky大鼠作對照組。8周后取尿檢測大鼠尿微量蛋白upr和n-乙酰-d-氨基葡萄糖苷酶nag含量，取脂肪組織用免疫組化法及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反響rt-pr檢測脂聯(lián)素的rna的表達。結(jié)果：shr大鼠脂肪組織脂聯(lián)素表達較ky大鼠降低；upr和nag酶程度升高p均0.01；福辛普利組和氯沙坦組與shr組比較血壓降低p0.01；upr和nag酶程度降低p0.01，脂聯(lián)素表達上調(diào)p

2、0.01。結(jié)論：(1)shr大鼠upr和nag酶程度升高，脂肪組織脂聯(lián)素表達下調(diào);(2)福辛普利和氯沙坦可以進步shr大鼠脂肪組織脂聯(lián)素表達，降低upr和nag酶程度?！娟P(guān)鍵詞】大鼠;脂聯(lián)素;福辛普利;氯沙坦authrsaddress：the163hspitalfpla,hangsha,hunan,410003,hinakeyrds：rat;adipnetin;fsinpril;lsartan脂聯(lián)素(adipnetin)是由脂肪組織分泌的一種激素蛋白。脂聯(lián)素具有改善胰島素抵抗ir、抗炎、抗動脈粥樣硬化的作用。目前已有研究說明肥胖、ir、型糖尿病和冠心病患者的血漿脂聯(lián)素濃度下降，也有部分研究說明

3、高血壓患者脂聯(lián)素程度也下降。本研究旨在研究shr大鼠脂肪組織脂聯(lián)素的表達情況，及福辛普利、氯沙坦在降壓的同時對脂肪組織脂聯(lián)素表達和尿微量蛋白upr、n-乙酰-d-氨基葡萄糖苷酶nag的影響。1資料與方法1.1實驗動物22周雄性自發(fā)性高血壓shr大鼠20只，以及其同系對照鼠kyistar-kyt大鼠5只，以上動物均由成都史萊克實驗動物研究所提供。1.2主要試劑與儀器兔抗鼠脂聯(lián)素抗體，nag酶試劑盒，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(tyb公司)；taq耐熱dna聚合酶(rrakar.公司)，超明晰度病理圖文分析系統(tǒng)pips-2000，凝膠分析系統(tǒng)，pr分析軟件；fr-900dna擴增儀(上海復(fù)日公司)。1.3觀察指

4、標及方法每組5只：高血壓組(shr組)，福辛普利組(fs組，福辛普利10g/kgd灌胃)，氯沙坦組l組，氯沙坦50g/kgd灌胃)，福辛普利氯沙坦組fsl組，福辛普利10g/kgd氯沙坦50g/kgd結(jié)合灌胃。22周齡雄性ky大鼠5只(ky組)，為正常對照組。shr組和ky組給予蒸餾水清晨灌胃。各組大鼠自由進食、飲水，共喂養(yǎng)8周。1血標本的采集：各組大鼠于實驗完畢時30周齡，稱體重，測尾動脈血壓，心臟采血5l，4離心10in，取上清液，-80保存待測。用德國羅氏公司的全自動生化儀測定血肌酐sr、血尿素氮bun；2尿標本的搜集：處死大鼠前一天，用代謝籠搜集大鼠24h尿液，離心，棄渣，留上清尿液，

5、-80保存待測。upr用放射免疫法檢測。按nag酶試劑盒說明檢測nag酶活性；3脂肪組織標本的采集與制備：麻醉大鼠，固定于蛙板上，剖腹，取出腎周脂肪組織，一部分置于多聚甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋，用于免疫組織化學(xué)染色分析。余脂肪組織用生理鹽水和0.1%焦碳酸二乙脂水沖洗后，置于液氮中保存，用于做rt-pr檢測。a值。1引物設(shè)計脂聯(lián)素：上游：5-tatagattaggtag-3；下游：5-tgatatggtgtaggtgaag-3，擴增片段長度為238bp。pr反響條件為94預(yù)變性，5in；變性：94，30se；退火：56，30se；延伸：72，1in；25反響循環(huán)，72，10in終止反響，4

6、冷卻；2-atin：上游：5-gttgaatgtaaaga-3，下游5-tggaaggtggaagtgag-3，擴增片段長度為201bp。pr反響條件與同管擴增目的基因條件一樣。pr擴增產(chǎn)物-20保存，備用于瓊脂糖凝膠電泳，照相及圖象半定量分析。比較采用方差分析anva和q檢驗，p0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1五組大鼠一般資料比較比較：五組大鼠體重(b)無顯著性差異(p0.05)。shr組與fs組，l組及fsl組收縮壓無顯著性差異(p0.05)，shr組和fs組，l組及fsl組收縮壓，upr，nag酶均明顯高于ky組(p均0.05)，見表1。表1實驗前五組大鼠一般資料比較注：與魏凱氏組比

7、較p0.05；fs組，l組和fs+l組三組比較無顯著差異。比較：shr組收縮壓，upr，sr和nag酶程度明顯高于ky組(p均0.05)，而fs組，l組及fsl組收縮壓，bun，sr與ky組比較無顯著性差異(p0.05)；fs組，l組及fsl組三組間血壓，upr，sr，bun和nag酶程度比較無顯著性差異(p0.05)；fs組，l組及fsl組收縮壓，upr，sr和nag酶程度明顯低于shr組(p均0.05)，見表2。2.2五組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素蛋白免疫組化染色免疫組化結(jié)果顯示，脂聯(lián)素蛋白主要表達在脂肪細胞胞漿中；shr大鼠脂肪組織中脂聯(lián)素蛋白含量明顯低于ky大鼠p0.05；而fs和l干預(yù)后脂肪

8、組織中脂聯(lián)素蛋白含量明顯增加p0.05；但fs組、l組、fs+l組脂肪組織中脂聯(lián)素蛋白含量仍明顯低于ky組p0.05；fs組、l組、fs+l組三組間脂肪組織脂聯(lián)素含量無顯著差異p0.05，見表3。2.3五組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素rna表達shr組脂聯(lián)素rna表達較ky組明顯降低p0.01，fs組，l組和fsl組脂聯(lián)素rna表達比shr組顯著增強p0.05，但三組間差異不顯著p0.05，見圖1。五組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素rna表達半定量分析結(jié)果見表4。表2實驗第8周五組大鼠血壓及腎功能相關(guān)指標比較表3五組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素蛋白表達半定量分析注：與ky組比較p0.05，p0.01；與shr組比較p0.05

9、；fs組，l組和fs+l組三組比較無顯著差異。表4五組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素rna表達半定量分析注：與ky組比較p0.05，p0.01；與shr組比較p0.05;fs,l,fs+l組三組間比較p0.05。3討論近年研究說明，脂肪組織不僅是一個能量儲存器官，而且是一個內(nèi)分泌器官，分泌許多生物活性物質(zhì)如脂聯(lián)素，腫瘤壞死因子tnf-，纖溶酶原激活劑抑制因子pai-1，瘦素、抵抗素等參與物質(zhì)代謝。脂聯(lián)素是由脂肪細胞特異性分泌的脂肪細胞因子，是1995年sherer等1首先從鼠的脂肪細胞中別離出來的一種蛋白質(zhì)。研究已證實脂聯(lián)素在改善胰島素敏感性、抗炎以及抗動脈粥樣硬化等方面，具有非常重要的作用。脂聯(lián)素通過促

10、進葡萄糖、脂肪的分解，改善胰島素敏感性、減低ir，同時具有抗炎、抗動脈粥樣硬化的作用。目前脂聯(lián)素與代謝綜合癥s的其他組成成分研究已經(jīng)較成熟，血漿脂聯(lián)素程度與肥胖癥、ir、2型糖尿并動脈粥樣硬化之間存在顯著相關(guān)性。作為s的組成成分之一的高血壓與脂聯(lián)素相關(guān)性的研究也正在進展中。huang等2報道，在68名安康青少年女性中，脂聯(lián)素與收縮壓、舒張壓呈顯著負相關(guān)。adaazk等3報道，原發(fā)性高血壓患者血漿脂聯(lián)素程度較正常血壓者明顯降低，并與收縮壓、舒張壓、平均動脈壓均呈顯著負相關(guān)。kazui等4報道，在正常青年男性中，與理想血壓者相比，血壓正常高值者血清脂聯(lián)素程度降低。朱俐俐等5發(fā)現(xiàn)老年高血壓組和s組的

11、血清脂聯(lián)素程度明顯低于正常對照組；直線相關(guān)分析說明，脂聯(lián)素程度與血壓、upr、體重指數(shù)呈負相關(guān)。我國學(xué)者林澤鵬等6研究發(fā)現(xiàn)高血壓患者用培哚普利及纈沙坦治療兩周后,平均壓顯著下降，血清脂聯(lián)素濃度和胰島素敏感性指數(shù)明顯升高；原發(fā)性高血壓患者血清脂聯(lián)素與收縮壓和舒張壓呈直線相關(guān)；血清脂聯(lián)素與胰島素敏感性指數(shù)和高密度脂蛋白膽固醇呈直線相關(guān)。原發(fā)性高血壓患者低脂聯(lián)素血癥與脂代謝紊亂和ir親密相關(guān)。腎素-血管緊張素系統(tǒng),可進步原發(fā)性高血壓患者胰島素敏感性,從而使血清脂聯(lián)素濃度升高。本實驗首次研究shr脂肪組織脂聯(lián)素的表達，實驗顯示高血壓模型大鼠脂肪組織脂聯(lián)素的表達下調(diào)，upr和尿nag酶程度升高，提示高血

12、壓模型大鼠出現(xiàn)早期腎損害。但經(jīng)腎素-血管緊張素系統(tǒng)阻滯劑福辛普利和腎素-血管緊張素系統(tǒng)受體拮抗劑氯沙坦干預(yù)后高血壓模型大鼠血壓得到控制，upr和尿nag酶程度下降，腎功能明顯改善，脂聯(lián)素的表達上調(diào)，現(xiàn)有的研究已證實脂聯(lián)素在改善胰島素敏感性、抗炎以及抗動脈粥樣硬化等方面有著重要的作用。脂聯(lián)素有抗ir的作用，同時脂聯(lián)素通過減弱生長因子誘導(dǎo)的平滑肌細胞的dna合成，并抑制生長因子刺激的平滑肌細胞的增殖和遷移；脂聯(lián)素可以抑制巨嗜細胞轉(zhuǎn)化為泡沫細胞，而改善和抑制動脈粥樣硬化的形成；脂聯(lián)素還可以抑制tnf-在動脈內(nèi)皮細胞誘導(dǎo)的粘附分子的表達，從而抑制單核細胞向動脈內(nèi)皮細胞的粘附和對內(nèi)皮細胞的損傷。高血壓腎

13、損害主要是由于腎動脈硬化，纖維化所致，福辛普利和氯沙坦降低血壓同時上調(diào)脂聯(lián)素的表達，改善ir，能降低upr和尿nag酶程度，對高血壓所導(dǎo)致的腎動脈硬化和腎動脈纖維化有改善作用。本課題研究結(jié)果為進一步研究脂聯(lián)素在高血壓發(fā)病中的作用和高血壓靶器官腎損害的治療提供了新的思路和方法?！緟⒖嘉墨I】1shererpe,illianss,fglian,etal.anvelseruprteinsiilart1q,prduedexlusivelyinadpytesj.jbilhe,1995,270:26746-26749.2huangk,henl,huangl,etal.plasaadipnetinlevelsandbldpressuresinnndiabetiadlesentfealesj.jlinendrinletab，2022,88:4130-4134.3adazak，ieeka，funahashit，etal.dereasedplasaadipnetinnentratininpatientsithessentialhypertensinj.ajhypertens，2022，16(1)：72-75.4kazuit，kaaguhia，sakaik，etal.yungenithhigh|nralbldpressurehavelerseruadipnetin,sallerldl|size,an