銀杏葉提取物對大鼠局灶性腦缺血的保護作用

1、銀杏葉提取物對大鼠局灶性腦缺血的保護作用【摘要】目的觀察銀杏葉提取物GBE對大鼠局灶性腦缺血的保護作用，并討論其作用機制。方法采用線栓阻斷大鼠大腦中動脈建立局灶性腦缺血模型，觀察GBE對模型大鼠神經(jīng)損傷病癥、腦堵塞范圍及血清SD活性、DA含量的影響。結(jié)果GBE能顯著改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)病癥，降低腦堵塞范圍及血清DA含量，進步血清SD活性。結(jié)論GBE對大鼠局灶性腦缺血具有保護作用，其機制可能與抗氧化作用有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】銀杏葉提取物；大鼠；局灶性腦缺血；堵塞范圍；脂質(zhì)過氧化EffetfGinkgbilbaExtratnerebralIsheia-reperfusinInjuryinRatsGu

2、angdngheialandPharaeutialPrfessinalllege,Guangzhu510520,hinaAbstrat：bjetiveTbservetheeffetfGinkgbilbaextrat(GBE)nerebralisheiainjuryinratsandexplreitsehanis.ethdsRaterebralisheiainjurydelasinduedbyiddleerebralarterylusin,thenerveinjurysyptsereevaluated,theinfartinareaandthelevelfSDandDAinserurerdete

3、rined.ResultsGBEuldiprvethenerveinjurysypts,reduetheinfratinareafbrainandthelevelfDA,inreasetheativityfSD.nlusinGBEhasprtetiveeffetnerebralisheiainjuryinratsanditsehanisaybeassiatedithantixidantativity.Keyrds：Ginkgbilba;Rats;erebralisheiainjury;Infartinarea;Lipidprexidatin銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgbilba的葉，性味苦

4、、澀、平，主要功能為活血化淤、通絡(luò)活絡(luò)。當(dāng)前，其提取物Ginkgbilbaextrat,GBE被廣泛用于治療心腦血管疾病及其后遺癥等。研究說明，GBE的主要活性成分為黃酮苷和萜內(nèi)酯1。本研究采用線栓阻斷大鼠大腦中動脈建立局灶性腦缺血模型，觀察GBE對大鼠局灶性腦缺血的保護作用，并初步討論其作用機制，為臨床防治腦血管疾病提供參考。1材料1.1動物雄性SD大鼠，體重20020g，由廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供。實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。1.2藥品與試劑銀杏葉提取物商品名：天寶寧片，浙江康恩貝集團制藥，規(guī)格40g其中含銀杏總黃酮苷9.8g，批號030124。尼莫地平，天津市中央藥業(yè)消費，批號031220。2

5、，3，5-氯化三苯基四氮唑TT，分析純，上海醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司。SD，DA試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號分別為20220128，20220120。1.3儀器電子分析天平，上海精科分析儀器廠。LXJ-IIB低速大容量離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠。754紫外可見分光光度計，上海分析儀器廠。2方法2.1動物分組及給藥取大鼠60只，隨機分為6組，即GBE高、中、低劑量組劑量分別為48，24，12g/kg，尼莫地平組劑量為2g/kg，模型對照組和假手術(shù)組，每組10只。各組分別于造模前給藥，1次/d，共給藥4次，給藥容量均為10l/kg。模型對照組和假手術(shù)組給等容量的生理鹽水。2.2模型制作方法

6、末次給藥后1h，參照文獻方法2，3，用10%水合氯醛350g/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定，常規(guī)消毒皮膚，頸部正中切開，鈍性別離右側(cè)頸總動脈、頸外動脈和頸內(nèi)動脈。沿頸內(nèi)動脈向下別離出翼腭動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內(nèi)動脈上近頸總動脈向下別離出翼動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內(nèi)動脈上近頸總動脈分叉處剪一切口，將一魚線直徑約0.30沿頸內(nèi)動脈緩慢插入至大腦中動脈口，略感阻力時停頓，插入長度約18.00.5，結(jié)扎固定魚線。結(jié)扎頸內(nèi)動脈近心端，取下動脈夾，恢復(fù)頸外動脈血流。假手術(shù)組除不插魚線阻斷大腦中動脈外，其余操作同手術(shù)組。2.3觀察指標(biāo)2.3.1神經(jīng)病癥評分參照文獻方法4，

7、5，按受損程度擬定神經(jīng)病癥評分等級。無神經(jīng)損傷病癥為級；不能完全伸展左側(cè)前爪為級；不能完全伸展左側(cè)前爪，向左側(cè)轉(zhuǎn)圈為級；不能完全伸展左側(cè)前爪，向左側(cè)傾倒為級；不能自發(fā)行走，意識喪失為級。按上述標(biāo)準(zhǔn)，于造模后24h，采用單盲法對各組大鼠進展神經(jīng)病癥評分。2.3.2血清SD活性及DA含量測定造模后24h，水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，離心別離血清，按試劑盒操作方法，比色法測定血清SD活性及DA含量。2.3.3腦堵塞范圍測定斷頭取腦，去除嗅味、小腦，生理鹽水洗凈，濾紙吸盡水分，將大腦沿冠狀面切成厚約5腦片，置1%TT磷酸鹽緩沖液中37避光溫孵10in，洗去染色液，再用10%中性甲醛溶液固定24h，

8、取出稱總?cè)局?，然后切取堵塞區(qū)稱重，計算堵塞范圍。堵塞范圍=堵塞區(qū)重100%/總?cè)局亍?.4統(tǒng)計分析結(jié)果采用s表示，多組間均數(shù)比擬采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS13.0FRinds軟件處理。等級資料統(tǒng)計采用Ridit檢驗。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1對神經(jīng)損傷病癥的影響由表1可知，給藥后24h，GBE高劑量組大鼠神經(jīng)損傷病癥顯著改善，與模型對照組比擬有顯著性差異P0.05。表1對神經(jīng)損傷病癥的影響略3.2對堵塞范圍的影響由表2可知，GBE高、中劑量組大鼠腦堵塞重量顯著降低，與模型對照組比擬有顯著性差異。GBE高劑量組大鼠腦堵塞范圍亦顯著降低，與模型對照組比擬有顯著性差異。GBE中

9、、低劑量組大鼠腦堵塞范圍有下降趨勢，但與模型對照組比擬無統(tǒng)計學(xué)差異P0.05。表2對堵塞重量及堵塞范圍的結(jié)果略3.3對血清SD活性及DA含量的影響由表3可知，GBE高劑量組大鼠血清SD活性顯著升高，和模型組比擬有顯著性差異P0.05。GBE高、中劑量組大鼠血清DA含量明顯下降，與模型對照組比擬有顯著性差異P0.05。表3對血清SD活性及DA含量的影響略4討論缺血性腦血管疾病以其高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率而嚴(yán)重危害人們的安康。腦缺血可導(dǎo)致嚴(yán)重的遲發(fā)性神經(jīng)元損傷，影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù)。臨床上腦缺血最多見于大腦中動脈，其供血區(qū)腦組織由于缺血缺氧、能量代謝耗竭而導(dǎo)致缺血性壞死，相應(yīng)支配區(qū)出現(xiàn)運動、感覺和語言障礙，學(xué)習(xí)記憶才能減退。大鼠大腦中動脈線栓法腦缺血模型操作簡便，無需開顱，制備部位較恒定，腦堵塞范圍差異較小，被廣泛用于研究藥物腦保護作用6。因此，本實驗采用大鼠大腦中動脈線栓模型觀察GBE對腦缺血的保護作用。正常生物體內(nèi)自由基生成與去除處于動態(tài)平衡，腦缺血時，大量的自由基生成，使腦內(nèi)脂質(zhì)過氧化作用加強，導(dǎo)致細胞及細胞屏障損害，神經(jīng)元壞死或凋亡，引起和加重缺血腦組織水腫。SD為抗氧化酶，是體內(nèi)主要的自由基去除劑，能催化超氧自由基發(fā)生歧化反響，生成過氧化氫和氧，而超氧自由基的產(chǎn)生是其它自由基產(chǎn)生和增殖的關(guān)鍵步驟，SD活性可以間接反映機體去除自由基