實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai新版課件

1、實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.自己動手觀察鏈球菌、腦膜炎雙球菌的形態(tài);示教觀察結(jié)核桿菌、白喉?xiàng)U菌的形態(tài)。2.觀察腸道桿菌的雙糖發(fā)酵，鑒別培養(yǎng)基（ss培養(yǎng)基）的生化反應(yīng)。3.化膿性球菌的鑒定三種葡萄球菌的色素觀察乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察抗“O”實(shí)驗(yàn)。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容三、作業(yè)：1.鏡下繪出4種形態(tài)圖2.根據(jù)生化特性及產(chǎn)生色素，葡萄球菌分為哪幾種類型？三、作業(yè)： 管號加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml緩沖液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.2

2、5ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml結(jié)果 管號12345血清（Ab）1：25Salmonella -Shigella Mediun主要成分 基礎(chǔ)營養(yǎng) 乳糖 指示劑 抑制劑分解乳糖不分解乳糖產(chǎn)酸PH指示劑變紅色紅色大菌落大腸桿菌等無明顯變化無色半透明小菌落志賀菌等Salmonella -Shigella Mediun主要大腸桿菌痢疾桿菌大腸桿菌痢疾桿菌實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai新版課件甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察2、37孵育182

3、4小時(shí)，取出觀察結(jié)果。1：15 4002、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管+ +白葡 同上 白色 -凝集物可被涂散，變陰性。變形桿菌 - + + +/- + - /陽性對照 陰性對照 待測血清甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)指示劑金葡菌 白葡菌普通瓊脂平板 血平板三種葡萄球菌的色素觀察靛基質(zhì)試驗(yàn)（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）結(jié)核分枝桿菌抗酸染色甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)結(jié)核分枝桿乙型溶血性鏈球菌溶血環(huán)乙型溶血性鏈球菌溶血環(huán)白喉棒狀桿菌異染顆粒白喉棒狀桿菌異染顆粒葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡

4、萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物菌落形狀 色素 溶血性、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表變形桿菌 - + + +/- + - /再加SLO膠乳1滴輕搖3min傷寒 痢疾：菌落無色半透明。實(shí)驗(yàn)四 病原性球菌2、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵陽性對照 陰性對照 待測血清血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法傷寒 痢疾：菌落無色半透明。甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)（371824h）甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象凝集物可被涂散，

5、變陰性。各加溶血素“O” 1滴輕搖1min未知菌1 未知菌2實(shí)驗(yàn)四 病原性球菌1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物3. 血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法 試管法4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定示教（操作，1人/組）示教示教示教（操作，1人/組）葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai新版課件肺炎球菌特殊染色可見的莢膜肺炎球菌特殊染色可見的莢膜實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai新版課件實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai新版課件 G+球菌：金葡菌鏈球菌肺炎雙球菌1. 五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性示教 G+球菌

6、：金葡菌鏈球菌肺炎雙球菌1. 五類病原性球菌 G-球菌： 淋球菌 腦膜炎球菌 G-球菌： 淋球菌 腦膜炎球菌2. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物示教 普通瓊脂平板 血平板 菌落形狀 色素 溶血性 金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +檸葡 同上 檸檬色 - 白葡 同上 白色 - 表12. 葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物示教 血平板甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)乙型鏈球菌 針尖小菌落、透明寬大溶血環(huán) 巧克力血平板腦膜炎雙球菌 菌落透明似露滴狀 表2 表3 血平板 3. 血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法（操作，1人/組） 原理：方法： 兔血漿 兔血漿 生理鹽水 123金葡 白葡 金葡 + + +凝集（+）不凝

7、集（-）不凝集（-）3. 血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法（操作，1人/組） 原理：方法4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法） 金葡菌 白葡菌 + + 兔血漿 兔血漿 3730水浴觀察凝集為陽性不凝集為陰性示教4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法） 金葡菌 五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）腸道致病菌（SS培養(yǎng)基）2、37孵育1824小時(shí)，取出觀察結(jié)果。葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵（371824h）D大腸：大而不透明的紅色菌落。試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)各加溶血素“O” 1滴輕搖1min再加SLO膠乳1滴輕

8、搖3min血平板陽性對照 陰性對照 待測血清+ +五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察再加SLO膠乳1滴輕搖3min鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長情況甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)白葡 同上 白色 -（371824h）凝固酶實(shí)驗(yàn)（試管法） 五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）凝固酶實(shí)驗(yàn)（試管法） 五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO） 快速膠乳法 高滴度病人血清被適量溶血素中和了正常水平 的抗體后，還有多余ASO，這些多余抗體即與SLO膠乳 試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。 （操作，1人/組） 原理： （操作，1

9、人/組） 原理： 陽性對照 陰性對照 待測血清 各加溶血素“O” 1滴輕搖1min 再加SLO膠乳1滴輕搖3min 觀察結(jié)果 方法： 陽性對照 陰性對照 待稀釋度 ASO （IU/ml）1：15 4001：30 8001：60 1600ASO250 IU/ml 陰性 結(jié)果判定：稀釋度 ASO （IU/ml注意事項(xiàng)：液體量要一樣，菌量一樣。血漿多挑幾環(huán)（一滴的量），菌少挑點(diǎn)， 不能干。3. 涂菌時(shí)間一樣，出現(xiàn)凝集為陽性，再涂 凝集物可被涂散，變陰性。注意事項(xiàng)：液體量要一樣，菌量一樣。腸道桿菌一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性 二、腸道桿菌的培養(yǎng)特性 三、腸道桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn) 四、Widal實(shí)驗(yàn)?zāi)c道桿菌

10、一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性 腸道桿菌的形態(tài)及染色片腸道桿菌的形態(tài)及染色片腸道菌的菌落形態(tài)EMB 大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。 傷寒 痢疾：菌落無色半透明。 SS D大腸：大而不透明的紅色菌落。 傷寒 痢疾：中等大小淡黃色菌落。腸道菌的菌落形態(tài)EMB 大腸桿菌（EMB培養(yǎng)基）大腸桿菌（EMB培養(yǎng)基）腸道致病菌（SS培養(yǎng)基）腸道致病菌（SS培養(yǎng)基）糞便標(biāo)本中致病性腸道桿菌的分離與鑒定 糞便標(biāo)本中致病性腸道桿菌的分離與鑒定 生化反應(yīng)1單糖發(fā)酵葡萄糖及乳糖發(fā)酵 一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理 了解糖發(fā)酵試驗(yàn)方法 二）實(shí)驗(yàn)材料 1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌培養(yǎng)物 2、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管 三）實(shí)

11、驗(yàn)方法 、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。 2、37孵育1824小時(shí)，取出觀察結(jié)果。 生化反應(yīng)1單糖發(fā)酵葡萄糖及乳糖發(fā)酵 傷寒 痢疾：菌落無色半透明。大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。未知菌1 未知菌24、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。試管法陽性對照 陰性對照 待測血清2、37孵育1824小時(shí)，取出觀察結(jié)果。痢疾桿菌 + - - - +/- - -/+常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表+ +（371824h）5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定ASO250 IU/ml 陰性乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察兔

12、血漿 兔血漿 生理鹽水血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)）鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長情況4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)?zāi)c道桿菌的形態(tài)及染色片5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定動力檢測傷寒 痢疾：菌落無色半透明。動力檢測菌名 葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基質(zhì) 甲基紅 VP 試驗(yàn) 枸椽 酸鹽 硫化氫 尿素 分解 動力 福氏志賀菌 + + /+ + 傷寒沙門菌 + + + /+ + + 乙型副傷寒沙門菌 + + + 大腸桿菌 + + + 產(chǎn)氣桿菌 + + + 普通變形桿菌 + + /+ + + + 常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表 菌名 葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基質(zhì) 甲基紅 VP 枸椽 硫化斜面 底部

13、H2S 初步鑒定 + + 非病原菌 非病原菌 + +/ 副傷寒桿菌及其他沙門氏菌 + + 傷寒桿菌 + 痢疾桿菌 鐵質(zhì)雙糖瓊脂基上各種腸道桿菌的生長情況 斜面 底部 H2S 初步鑒定 + + 非病原菌 腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性Indol實(shí)驗(yàn)生化反應(yīng)2Indol實(shí)驗(yàn)Indol實(shí)驗(yàn)生化反應(yīng)2Indol實(shí)驗(yàn)2. 腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象示教 大腸桿菌 傷寒桿菌SS平板 紅色大菌落 無色透明小菌落 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，乳糖(底物)，膽鹽、煌綠(抑制非致病菌)，中性紅（指示劑）。SS培養(yǎng)基：2. 腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象示教 3. 五類腸道桿菌的生化反應(yīng)及

14、動力 示教大腸桿菌 - - + + + /變形桿菌 - + + +/- + - /乙型副傷寒桿菌 - + - - + -/傷寒桿菌 + - +/- - - + -/+痢疾桿菌 + - - - +/- - -/+葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵3. 五類腸道桿菌的生化反應(yīng)及動力 示教大腸桿菌 甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察5、膿汁中葡萄球菌的分離鑒定雙糖鐵培養(yǎng)基(乳糖/固體/上，葡萄糖/半固體/下)葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）寒桿菌 - + - - + -/（371824h）乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象

15、觀察再加SLO膠乳1滴輕搖3min腸道桿菌的形態(tài)及染色片1：30 800金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +基礎(chǔ)營養(yǎng)1：15 400兔血漿 兔血漿 生理鹽水各加溶血素“O” 1滴輕搖1min2、培養(yǎng)基：乳糖及葡萄糖發(fā)酵管4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)1：15 400腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象4. 腸道桿菌未知菌1和未知菌2的鑒定（操作，2人/組）未知菌雙糖鐵培養(yǎng)基(乳糖/固體/上，葡萄糖/半固體/下)生化反應(yīng)葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵尿素酶試驗(yàn)H2S試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）動力試驗(yàn)（半固體培養(yǎng)基）（微量發(fā)酵管） 方法：血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)）（371824h）甲型鏈球

16、菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)4. 腸道傷寒診斷血清 傷寒診斷血清 + + 未知菌1 未知菌2血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)）？ ？傷寒診斷血清 傷寒診斷血清 血清學(xué)鑒定（玻片凝集反應(yīng)痢疾桿菌 + - - - +/- - -/+甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)（371824h）普通瓊脂平板 血平板傷寒 痢疾：菌落無色半透明。金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +巧克力血平板乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察腸道桿菌的形態(tài)及染色片陽性對照 陰性對照 待測血清涂菌時(shí)間一樣，出現(xiàn)凝集為陽性，再涂五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）再加SLO膠乳1滴輕搖3min菌落形狀 色素 溶血性、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒

17、桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +基礎(chǔ)營養(yǎng)凝集物可被涂散，變陰性。五類病原性球菌的形態(tài)、排列及染色性腸道致病菌（SS培養(yǎng)基）葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵血漿凝固酶試驗(yàn)-玻片法葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物腸道桿菌的形態(tài)及染色片（371824h）甲型鏈球菌 針尖小菌落、草綠色狹窄溶血環(huán)巧克力血平板（371824h）常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表靛基質(zhì)試驗(yàn)（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）傷寒 痢疾：菌落無色半透明。兔血漿 兔血漿 生理鹽水實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）靛基質(zhì)試驗(yàn)（蛋白胨水液體培養(yǎng)基）巧克力

18、血平板金葡 圓形凸起光滑中等大小 金黃色 +實(shí)驗(yàn)四病源性球菌與桿菌xiugai凝集物可被涂散，變陰性。一、腸道桿菌的形態(tài)及染色性五、抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）大腸：菌落呈紫黑色，有金屬光澤。？ ？Salmonella -Shigella Mediun未知菌1 未知菌2乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察白葡 同上 白色 -葡萄球菌、鏈球菌的培養(yǎng)物4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)陽性對照 陰性對照 待測血清4、血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）再加SLO膠乳1滴輕搖3min的抗體后，還有多余ASO，這些多余抗體即與SLO膠乳常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表大腸桿菌 傷寒桿菌乙型鏈球菌的溶血現(xiàn)象觀察常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表4、抗鏈球菌溶血素”O(jiān)”（ASO）乳膠試驗(yàn)生化反應(yīng)1單糖發(fā)酵葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基質(zhì) 動力 雙糖鐵腸道桿菌在KI培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特性大腸桿菌（EMB培養(yǎng)基）觀察腸道桿菌的雙糖發(fā)酵，鑒別培養(yǎng)基（ss培養(yǎng)基）的生化反應(yīng)。傷寒 痢疾：菌落無色半透明。普通瓊脂平板 血平板常見腸道桿菌的生化反應(yīng)鑒別表2、37孵育1824小時(shí)，取出觀察結(jié)果。白葡 同上 白色 -白葡 同上 白色 -、用接種環(huán)將大腸桿菌、傷寒桿菌分別各接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管中（方法同前）。未知菌1