花青苷種類、提取及檢測

1、花青昔種類、提取及檢測一.種類花色素均具有類黃酮的基本結(jié)構(gòu)，由兩個(gè)苯環(huán)和一個(gè)含氧雜環(huán)組成的(C6-C3-C6)C15化 合物(如圖)，根據(jù)B環(huán)羥基化和甲基化位置和數(shù)目的不同而將花色素主要分為六類:天竺葵色 素(Pelargonidin)、矢車菊色素(cyanidin)、芍藥色素(peonidin)(3-甲基矢車菊色素)、飛燕草 色素(delphinidin)、矮牽牛色素(petunidin)(3 ,5 -甲基飛燕草色素)和錦葵色素(malvidin)( 3 ,5 二甲基飛燕草色素)。不同植物中花色素發(fā)生糖昔化的位點(diǎn)(C3、C5和C7位等)和數(shù)目的差異， 及酞化程度的不同使植物中存在著不同的花色

2、素普，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，但都以這六種花色素為基 本結(jié)構(gòu)(Grotewold， 2006)。0H國1.1茬色素基本化學(xué)猛柚.無竺蘑色素，R1=H、R2=H：矢車菊色素飛慕景也；RI=OH, EU-OHFl*. ChcmkaJ structure f RntbocynDlns. Fdaigonidin： R】=H, R2=H; Cyanidin： 11.1=01, R2=H. DElphinidin: RI-OH,R2=OHr二提取國內(nèi)外學(xué)者對(duì)花青昔的提取做了大量研究，提取目的及目標(biāo)花青昔不同，提取方法略有 差異?；ㄇ辔粢兹苡谒?、甲醇、乙醇等極性溶液，花青昔的穩(wěn)定性受酶、溫度、氧氣、光、 pH值、金屬離

3、子等理化性質(zhì)的影響，在中性和堿性條件下不穩(wěn)定。提取過程常采用酸性溶液，酸能夠破壞植物細(xì)胞膜并溶解水溶性色素，甲醇溶液提取效 率高于乙醇及水溶液。花青昔一般用于食品著色，考慮到甲醇的不安全因素，一般選用體積 分?jǐn)?shù)為1%的乙醇溶液。采用鹽酸酸化可保持提取液pH值較低，阻止無?；ㄇ辔舻慕到狻?隨著鹽酸被濃縮，pH值升高，導(dǎo)致花青昔的降解。為獲得更接近于天然狀態(tài)的花青首，采 用弱有機(jī)酸或中性溶劑做初步提取，弱有機(jī)酸多用甲酸、乙酸、丙酸、檸檬酸和酒石酸，中 性溶劑一般采用丙酮作提取劑。粗提后的花青昔提取液濃度很低，濃縮時(shí)一般不超過40C， 時(shí)間也不宜太長。1.花色素昔和類黃酮、總酚的測定參照Pirel

4、li等的方法略作修改，O.lg葉片， 洗凈，用5ml的0.1S6HCL甲醇(V/V)4DC浸提Z4L測定提取液在530nm色素有;), 320 nm(類黃酮)和2S0nm (總酚)的吸光值，。=。口5技g.FW作為一個(gè)花色素昔單位， U=OD325/g.?w作為一個(gè)類黃酮單位，U=DD如龜.Fw作為一個(gè)總酚單位，2.花青昔含量的測定：用0.1%的鹽酸甲醇浸提葉片2 h后，測657nm、530nm處的吸光度。3.花色脊的測定摻考仝月澳等198。的方法，將葉片取回，洗凈，擦 干，剪碑后，采用1.5 m&l-L-1 HC1 : 95%乙醇=15 : 85fv/v）混合液,在黑 暗條件下浸提里后用島津

5、UV-2450紫外可見分光光度計(jì)檢測535 nm 波長的光密度值，參照胡位榮等口。4）的計(jì)算方法進(jìn)行花色背含量的計(jì) 算，葉綠素L b和類胡蘿卜素的含量參腹Lichtenthaler等（1983的方4.花青昔的主要吸收峰是5知nm左右，葉綠素的吸收峰是在6&0mn左右，幾種提取液比較的結(jié)果表 明，95%乙醇* .5mol/LHCl=8S : 15的混合液所提取的色素的主要吸收峰與花青昔和葉簸素的吸收 峰相吻合，并且對(duì)色素的提取效果校好，放選擇95%乙醇，L5moMLHCl = 8S，15的混合液作為以后5.結(jié)果表明對(duì)提取影響最大的是pH,其次為乙醇濃度，料液比，提取時(shí)間，最佳提取條 件為：濃度6

6、0址、pH= 1的乙醇溶液為提取劑料液比1： 60?提取時(shí)間60 mm. 紫外可見光譜分析純化后的紫甘藍(lán)色素，在筌罷nm, 3 23 nm和5% nm處的 吸收峰說明紫甘藍(lán)色素屬于花青脊類物質(zhì)，且含有?；幕ㄇ嗉?，色素的性質(zhì)比普通 花青背稽定，6.2.2 測定方法22，1 樣品處理將含有花青素的植物葉片（鮮）用刀成L-2mm碎片，準(zhǔn)確稱里1- 00g,置于5。知，_/fi瓶中,加入lOmL。.lmol/L鹽酸溶液,杯口用封口膜扎緊以防水分蒸發(fā).32-C恒溫培養(yǎng)箱中浸提4L不時(shí)搖蕩。取出過濾，濾液作為待測溶液。2. 2- 2 測定用Em比色皿在TU 1221型紫外可見光分光光度計(jì)上，于530n

7、m處測定其吸光度（大）， 以0. Imol/L捷酸溶液作為空白對(duì)照口 2-2. 3 計(jì)算設(shè)每 也樣品在0. Imcl/L鹽酸溶液中 的浸提液的吸光度A = Q1 一個(gè)花青素單位，以 此比較花青素的相對(duì)含量.花青素含量（花青素單位 lOmL 0* Imol/L 鹽酸）-10AB式中，1。- 將吸光度換算成為花青素單位A測得的吸光度 H稀釋倍數(shù)7.花色甘在中性和弱堿性溶液中不太穩(wěn)定:因此.提取過程通常要采用酸性溶劑.就于提取溶劑:甲醇是最佳選擇,因?yàn)?甲醇提取效率比乙醇高20%,比水#73%25o酸性溶劑在破壞植物紐胞膜的同時(shí)溶解水溶性色素.最常用的提取溶劑是 峻的鹽酸甲醇溶液但是用丁食版著色時(shí)，

8、考慮到甲醇的毒性，可以選擇1%的鹽酸乙醇溶液.花色昔的最大吸收區(qū)在雙 550tm范圍內(nèi)，而離這一范圍最近的類黃酮的最大吸收范圍在350 38%皿 在新鮮的植 物提取物中;因?yàn)楹苌俸性诨ㄉ舻淖畲笪諈^(qū)發(fā)生吸收的干擾物質(zhì),花色昔總量瓦以利用比耳定量通過適當(dāng)波長處的 吸光度來測定囪。8.2. 1.3花青素的提取及其含量的分光光度法測定勇取硫燈或氮燈光照培養(yǎng)34d（4片真葉期）的番茄助苗真葉0.5g,經(jīng)過液氮冷凍Ihr. 然后用研缽研成細(xì)粉，加L2mol/LHCMml提取花青素在530nm處刪定提取液的 光吸收（A53O）換算成單位鮮重葉片在530nm波長的光吸收（A53W&FW）來表示葉片 中花

9、青素相對(duì)含量。9.3花青素的提取和鑒別花青素分子中存在高度分子共相體系，具有 酸性與堿性基團(tuán)，易溶于水、甲醇、乙醇等極性 溶劑中.通常用含有少量鹽酸或甲酸的甲醇做溶 劑提取，其中的酸能防止非酰基化的花色昔的降 解，然而在蒸發(fā)濃縮時(shí)這些酸會(huì)導(dǎo)致色素的降 解，在一些植物中，少量的酸會(huì)使?；幕ㄉ?昔部分或全部的水解，ReviLla在19%年對(duì)從葡萄 中提取花青素的多種方法進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn)，證明 當(dāng)溶劑中的HC1達(dá)到0- llmol/l時(shí)就能使酰基化 的花色昔部分水解后來，用丙酮提取花青 素，與用酸性甲醇相比，用丙酮提取效果更好， 消除了果膠的影響，并且提取溫度低“七 對(duì)于 三.檢測紫外一可見光譜是花青苷結(jié)構(gòu)鑒定的經(jīng)典方法，其鑒定方法為：花青苷有2個(gè)最大吸 收波長,500540nm附近及27nm附近，據(jù)此可判定是否為花青苷色素；若B環(huán)有鄰位酚羥 基，則向體積分?jǐn)?shù)0.01%鹽酸-甲醇溶液中滴加35滴AlCl3，甲醇或乙醇溶液時(shí)會(huì)出現(xiàn)藍(lán)移; 糖苷位置可據(jù)花青苷吸光度比值A(chǔ)440/Amax判定；在波長300330nm間有吸收峰，表明存 在?；?；若在波長440n處有肩峰，則5號(hào)位羥基沒被取代；若在紫外光下有熒光，表明 在5號(hào)位有取代基。（