第10章-1-腸桿菌科及大腸埃希菌課件

1、第十章 腸桿菌科(Enterobacteriaceae) 第十章 概述定義分類共同特征檢驗(yàn)程序初步分群臨床意義 概述一、定義：是一大群寄居在人和動(dòng)物腸道中生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性無芽胞的短小桿菌。一、定義：是一大群寄居在人和動(dòng)物腸道中生物學(xué)性狀相似的革蘭陰二、分類依據(jù)生化反應(yīng)抗原構(gòu)造核酸雜交序列分析技術(shù)DNA G+C mol為39 mol59 mol 二、分類依據(jù)生化反應(yīng)三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)（三）生化特征（四）抗原構(gòu)造 （五）變異性 （六）抵抗力三、共同特性（一）形態(tài)三、共同特性（一）形態(tài)均為革蘭陰性桿狀或球桿菌，大小為0.5m1.0m2m3m。無芽胞，多有鞭毛能運(yùn)動(dòng)（除克雷伯菌屬

2、、志賀菌屬）致病性菌株多數(shù)有菌毛。部分菌株有微莢膜或包膜多數(shù)菌具有F、R、Col等質(zhì)粒三、共同特性（一）形態(tài)三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)需氧或兼性厭氧在普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上生長良好，形成光滑、濕潤、灰白色、中等大?。?mm3mm）的S型菌落。在液體培養(yǎng)基上呈均勻混濁生長。生長溫度：大多22-35，部分22-28：耶爾森菌屬、哈夫尼亞菌屬、致病桿菌屬、光桿菌屬三、共同特性（一）形態(tài)普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)特性：兼性厭氧菌，3042生長良好，最適溫度37 ，營養(yǎng)要求不高在普通培養(yǎng)基上形成中等大小光滑型菌落普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)特性：兼性厭氧菌，3042生長良好，最適三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)（三

3、）生化特征生化反應(yīng)活躍，但各不相同，可用于鑒定三、共同特性（一）形態(tài)主要的生化特性 發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣），氧化酶陰性，觸酶均陽性，可將硝酸鹽還原至亞硝酸鹽。 乳糖的發(fā)酵與否是區(qū)別致病性與非致病性腸桿菌科細(xì)菌的重要依據(jù) 主要的生化特性 發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣），氧化酶陰性，觸第10章-1-腸桿菌科及大腸埃希菌課件氧化酶試驗(yàn)陽性：紫紅色 陰性：無色氧化酶試驗(yàn)陽性：紫紅色 陰性：無色觸酶試驗(yàn)觸酶試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性：紅色 陰性：淡黃色 硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性：紅色 陰性：淡黃色 主要的生化特性 發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣），氧化酶陰性，觸酶均陽性，可將硝酸鹽還原至亞硝酸鹽。 乳糖的發(fā)酵與否

4、是區(qū)別致病性與非致病性腸桿菌科細(xì)菌的重要依據(jù) 主要的生化特性 發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣），氧化酶陰性，觸第10章-1-腸桿菌科及大腸埃希菌課件三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)（三）生化特征（四）抗原構(gòu)造：3種菌體（O）抗原鞭毛（H）抗原表面抗原 三、共同特性（一）形態(tài)1. O抗原 外膜三層結(jié)構(gòu)：類脂A：為內(nèi)毒素的毒性核心多糖：各屬細(xì)菌的核心多糖相同具有屬特異性特異多糖：核心多糖的外側(cè)是由重復(fù)的低聚糖組成的多糖鏈，決定O抗原的特異性。血清學(xué)分群和分型的依據(jù) 1. O抗原 2. H抗原 多數(shù)腸道菌鞭毛抗原具有特異性血清學(xué)分群和分型的依據(jù) 2. H抗原 3.表面抗原 不耐熱的多糖抗原（粘液或莢膜多

5、糖）抗原特異性可阻斷O抗原與抗體的反應(yīng)，加熱可消除在不同菌屬中有不同的名稱：大腸埃希菌：K抗原傷寒沙門菌：Vi抗原志賀菌：B抗原 3.表面抗原 三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)（三）生化特征（四）抗原構(gòu)造（五）變異性S-R變異H-O變異其他變異 三、共同特性（一）形態(tài)1.S-R變異 菌落由光滑型到粗糙型的變異1.S-R變異 1.S-R變異 2.H-O變異鞭毛從有到無的變異3.其他變異轉(zhuǎn)導(dǎo)，溶原性轉(zhuǎn)換或接合等轉(zhuǎn)移遺傳信息耐藥菌株的形成細(xì)菌產(chǎn)生毒素、抗原性和生化反應(yīng)等特征上發(fā)生的改變，對(duì)細(xì)菌的致病性、耐藥性及鑒定等方面均有重要意義。 1.S-R變異 三、共同特性（一）形態(tài)（二）培養(yǎng)（三）生化特征（

6、四）抗原構(gòu)造（五）變異性（六）抵抗力三、共同特性（一）形態(tài)（六）抵抗力弱能耐膽鹽，在一定程度上能抵抗染料的抑菌作用腸道選擇培養(yǎng)基：MAC、SS （六）抵抗力弱腸桿菌科的共同特性1. 形態(tài)染色相似2. 培養(yǎng)特性相同 普通培養(yǎng)基上生長良好 3. 生化反應(yīng)活潑 發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性，觸酶陽性，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，O/F試驗(yàn)為發(fā)酵型。4. 抗原構(gòu)造復(fù)雜5. 抵抗力弱 6. 易變異腸桿菌科的共同特性1. 形態(tài)染色相似致病物質(zhì)所致疾病臨床意義致病物質(zhì)臨床意義菌毛或菌毛樣結(jié)構(gòu)莢膜或微莢膜外膜蛋白內(nèi)毒素外毒素致病物質(zhì)菌毛或菌毛樣結(jié)構(gòu)致病物質(zhì)所致疾病腸道感染 腹瀉、食物中毒、腸熱癥腸道外感染 鼠疫（烈性傳染

7、病）、泌尿道感染、 肺炎、腦膜炎、傷口化膿、菌血癥所致疾病腸道感染 四、檢驗(yàn)程序 增菌培養(yǎng) 糞便、直腸試子尿液、體液血液膿、痰、分泌物離心 涂片染色 分離培養(yǎng)（SBA、SS、MAC、EMB） 分離培養(yǎng)SS、MAC、EMB） 可疑菌落 純培養(yǎng) 最后鑒定 （全面生化、血清學(xué)鑒定） 初步鑒定 菌落特征、氧化酶、觸酶、硝酸鹽、KIA、MIU、IMVC） ） 四、檢驗(yàn)程序 增菌培養(yǎng) 糞便、直腸試子尿液、體液血液膿、痰、五、初步分群鑒定腸桿菌科細(xì)菌的方法主要有雙歧索引法：表解法：見表10-1數(shù)字編碼法概率鑒定法自動(dòng)化儀器法 五、初步分群鑒定腸桿菌科細(xì)菌的方法主要有鑒定原則 1. 科間鑒別 2. 將腸桿菌科

8、分為三大類3. 屬、種、群、型的區(qū)分 4. 腸桿菌科細(xì)菌綜合鑒定流程鑒定原則 1. 科間鑒別 （一）腸桿菌與相關(guān)科（或菌群、屬）鑒別依據(jù)：革蘭染色、形態(tài)氧化酶陰性（鄰單胞菌屬除外）O-F發(fā)酵型周鞭毛或無鞭毛硝還試驗(yàn)陽性 （一）腸桿菌與相關(guān)科（或菌群、屬）鑒別依據(jù)：（二）科內(nèi)菌屬之間的鑒別依據(jù)：苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn) 葡萄糖酸鹽試驗(yàn)（或V-P試驗(yàn)）分為三群： （1）苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)+、葡萄糖酸鹽試驗(yàn)（2）苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn) 、葡萄糖酸鹽試驗(yàn)+（3）苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn) 、葡萄糖酸鹽試驗(yàn)（二）科內(nèi)菌屬之間的鑒別依據(jù)：腸桿菌科常見菌的初步分群菌屬苯丙氨酸葡萄糖酸鹽變形桿菌屬+普羅威登斯菌屬+摩根均屬+克

9、雷伯菌屬+腸桿菌屬+沙雷菌屬+哈夫尼亞菌屬+埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬枸櫞酸桿菌屬愛德華菌屬耶爾森菌屬腸桿菌科常見菌的初步分群菌屬苯丙氨酸葡萄糖酸鹽變形桿菌屬+第一節(jié) 埃希菌屬（Escherichia）一、分類二、細(xì)菌特性三、臨床意義四、微生物學(xué)檢驗(yàn)第一節(jié) 埃希菌屬（Escherichia）一、分類一 分類大腸埃希菌（E .coli）：腸道G-的主要成員，重要的條件致病菌衛(wèi)生學(xué)中，常用作被糞便污染的檢測指標(biāo)在分子生物學(xué)和基因工程研究中發(fā)揮重要作用蟑螂埃希菌（E. blat tae）弗格森埃希菌（E. fergusonii）赫爾曼埃希菌（E. hermannii）傷口埃希菌（E.vulneris）

10、艾伯特埃希菌（E.albertii） 一 分類大腸埃希菌（E .coli）：致瀉大腸埃希菌：有些大腸埃希菌具有一定的毒力，稱為致病性大腸埃希菌。腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（enterotoxigenic E. coli, ETEC）腸致病型大腸埃希菌（enteropathogenic E. coli, EPEC）腸侵襲型大腸埃希菌（enteroinvasive E. coli, EIEC）腸出血型大腸埃希菌（enterohemorrhagic E. coli, EHEC）腸凝聚型大腸埃希菌（enteroaggregative E. coli, EAggEC） 致瀉大腸埃希菌：有些大腸埃希菌具有一定的毒

11、力，稱為致病性大腸二、細(xì)菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌特性形態(tài)特征第10章-1-腸桿菌科及大腸埃希菌課件第10章-1-腸桿菌科及大腸埃希菌課件大腸埃希菌KIA（AA）MIU（）大腸埃希菌KIA（AA）MIU（）三、抵抗力在水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在較低溫的糞便中存活更長。膽鹽、煌綠等有選擇性抑制作用。 三、抵抗力在水中可存活數(shù)周至數(shù)月，在較低溫的糞便中存活更長。致病物質(zhì)所致疾病四、臨床及衛(wèi)生意義致病物質(zhì)四、臨床及衛(wèi)生意義致病物質(zhì)侵襲力 菌毛、K抗原內(nèi)毒素腸毒素 耐熱腸毒素（ST）不耐熱腸毒素（LT）致病物質(zhì)侵襲力 菌毛、K抗原所致疾病腸道外感染 泌尿道感染（最常見）膽道感染、腹膜

12、炎、肺炎菌血癥、新生兒腦膜炎腸道感染 ETEC、EPEC、EIEC、EHEC、EaggEC引起輕微腹瀉至霍亂樣嚴(yán)重腹瀉引起致死性并發(fā)癥如溶血性尿毒綜合征 所致疾病腸道外感染 （一）檢驗(yàn)程序（二）標(biāo)本采集（三）檢驗(yàn)方法感染性標(biāo)本的檢驗(yàn) 致病性大腸埃希菌的檢驗(yàn) 衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查 五、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)程序五、微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸埃希菌檢驗(yàn)程序大腸埃希菌檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)方法1.顯微鏡檢查 2.分離培養(yǎng) 3.鑒定 ETECEPECEIECEHECEaggEC檢驗(yàn)方法1.顯微鏡檢查 （1）ETEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型+腸毒素測定（最可靠的方法）（2）EPEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型 （3）EIEC的鑒定生

13、化反應(yīng)+血清分型+毒力試驗(yàn)（4）EHEC的鑒定血清分型+生化反應(yīng)（5）EAEC的鑒定（1）液體培養(yǎng)-凝集試驗(yàn)(1iquid-culture clump aggregation test)（2）粘附細(xì)胞試驗(yàn)（3）DNA探針技術(shù) （1）ETEC的鑒定（1）ETEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型+腸毒素測定（最可靠的方法）（1）ETEC的鑒定LT和ST性質(zhì)比較 性質(zhì)LT (heatlabile toxin，LT)ST(heatstable toxin，ST)分子量 大小耐熱性 不耐熱耐熱免疫源性有無致病機(jī)制 cAMPcGMP細(xì)胞毒性有細(xì)胞毒作用 無兔毛細(xì)血管通透性增加無乳鼠灌胃試驗(yàn) 不敏感敏感LT和ST性

14、質(zhì)比較 性質(zhì)LT (heatlabile toxETEC腸毒素的測定方法 試驗(yàn)方法LTST兔、小鼠腸結(jié)扎試驗(yàn) 皮膚毛細(xì)血管通透性試驗(yàn) 乳鼠灌胃試驗(yàn) 中國地鼠卵巢細(xì)胞(CHO)培養(yǎng) Y1腺瘤細(xì)胞培養(yǎng) (Elek)法 被動(dòng)免疫溶血法 固相放射免疫測定法(RIA)SPA協(xié)同凝集ELISA法 基因探針 ETEC腸毒素的測定方法 試驗(yàn)方法LTST兔、小鼠腸結(jié)扎試驗(yàn)（2）EPEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型用市售多價(jià)抗血清O抗原。凝集試驗(yàn)取510個(gè)菌落，逐個(gè)進(jìn)行凝集試驗(yàn)不凝時(shí)，加熱處理陽性的菌株，必須測定其凝集滴度同時(shí)還要做H抗原測定(O：H分型) ELISA：細(xì)胞毒性試驗(yàn)：對(duì)Hep-2或HeLa細(xì)胞呈局灶性

15、粘附DNA探針 （2）EPEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型（3）EIEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型+毒力試驗(yàn)與志賀菌相似 G桿菌動(dòng)力 乳糖或遲緩發(fā)酵（最常見的O152、O124為乳糖陰性）葡萄糖產(chǎn)氣陰性賴氨酸脫羧酶在選擇平板上菌落特征相似某些與志賀菌的抗血清有交叉反應(yīng) （3）EIEC的鑒定生化反應(yīng)+血清分型+毒力試驗(yàn)EIEC與志賀菌的鑒別 EIEC志賀菌醋酸鈉葡萄糖銨利用試驗(yàn)粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸試驗(yàn)EIEC與志賀菌的鑒別 EIEC志賀菌醋酸鈉葡萄糖銨利用（4）EHEC的鑒定血清分型+生化反應(yīng) 山梨醇麥康凱瓊脂(SMAC)不發(fā)酵山梨醇的菌落(無色菌落)經(jīng)次代培養(yǎng)后做玻片凝集試驗(yàn)（O157、H7）生化反應(yīng)證實(shí)為

16、大腸埃希菌即使不檢測Vero細(xì)胞毒素也可確診。 （4）EHEC的鑒定血清分型+生化反應(yīng) O157:H7菌落特征（MAC）O157:H7菌落特征(SMAC)O157:H7菌落特征（MAC）O157:H7菌落特征(SO157:H7顯色培養(yǎng)基 -+O157:H7形成紫紅色菌落，而其它大腸桿菌形成鐵蘭色菌落。O157:H7顯色培養(yǎng)基 -+O157:H7形成紫紅色菌落， 1、患者血清中脂多糖（LPS）抗體測定 2、患者血清中溶血素抗體測定O157:H7感染者血清抗體的測定：O157:H7感染者血清抗體的測定：EHEC確診依據(jù)1、SMAC上無色菌落2、與O157和H7抗血清凝集3、生化反應(yīng)符合為大腸埃希菌4、不檢測Vero細(xì)胞毒素 EHEC確診依據(jù)1、SMAC上無色菌落（5）EAEC的鑒定（1）液體培養(yǎng)-凝集試驗(yàn)(1iquid-culture clump aggregation test)（2）粘附細(xì)胞試驗(yàn)（3）DNA探針技術(shù) （5）EAEC的鑒定（1）液體培養(yǎng)-凝集試驗(yàn)(1iquid-液體培養(yǎng)中凝塊聚集試驗(yàn)挑取分離平板上典型菌落M-H肉湯 35 18-24h表面形成凝塊者陽性均勻混濁無凝塊者陰性 液體培養(yǎng)中凝塊聚