免疫沉淀實驗課件

1、實驗一免疫沉淀類反應(yīng)實驗一免疫沉淀類反應(yīng)免疫沉淀反應(yīng)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體在溶液或凝膠中接觸形成肉眼可見的抗原抗體復(fù)合物沉淀稱為免疫沉淀反應(yīng)。免疫沉淀反應(yīng)：可溶性抗原與相應(yīng)抗體在溶液或凝膠中接觸形成肉眼沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)瓊脂擴散試驗單向擴散試驗電泳技術(shù)火箭免疫電泳對流免疫電泳雙向擴散試驗沉環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)瓊脂擴散試驗單向擴散試驗電火箭免一、雙向免疫擴散試驗指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴散，彼此相遇，在濃度比例適當處形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的有無、形狀和位置對抗原或抗體進行定性分析，也可用于抗體的半定量檢測本次實驗利用此原理進行抗體效價的測定實驗原理一、雙向免疫擴散

2、試驗指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴ABCABC試劑與器材 抗體：兔抗人全血清 抗原：人血清 10-15g/L 瓊脂（以生理鹽水配制） 載玻片、打孔器、微量進樣器 37水浴箱試劑與器材 抗體：兔抗人全血清 制板 取加熱融化的鹽水瓊脂約4ml，均勻澆在水平放置的載玻片上，使成厚度約為1.5mm的瓊脂板，待冷凝。打孔 打梅花孔（如圖），各孔間的距離為4-5mm。實驗步驟1制板 取加熱融化的鹽水瓊脂約4ml，均勻澆在水平放置的載玻片倍比稀釋抗體 （見下表）加樣 用微量加樣器分別取抗原、抗體10ul加入各孔。中央孔加10ul抗原，周圍6孔分別加不同稀釋度的抗體。溫育 將玻片放在濕盒中，37溫育

3、24h，觀察沉淀線。123456生理鹽水2525252525抗人血清502525252525倍比稀釋抗體 （見下表）123456生理鹽水25252525在抗原和抗體孔之間會看到白色的沉淀線，將出現(xiàn)白色沉淀線的抗體最高稀釋孔作為該抗體的效價。 結(jié)果判斷在抗原和抗體孔之間會看到白色的沉淀線，將出現(xiàn)白色沉淀線的抗體應(yīng)用 檢測未知抗原或抗體 抗原性質(zhì)分析 抗體效價滴定 抗原或抗體純度鑒定應(yīng)用 檢測未知抗原或抗體玻片要清潔，邊緣無破損。澆制瓊脂板時要均勻、無氣泡。孔要打得圓整光滑，邊緣不要破裂，底部勿與載玻片脫離。加樣時應(yīng)盡量避免氣泡或加到孔外，以保證結(jié)果的準確性。反應(yīng)時間要適宜，時間過長，沉淀線可解離

4、而導(dǎo) 致假陰性、不出現(xiàn)或不清楚。注意事項玻片要清潔，邊緣無破損。注意事項對流免疫電泳是將雙向免疫擴散和電泳相結(jié)合的一種技術(shù)。在pH8.6的緩沖液中，抗原帶負電荷，向正極移動；抗體在電滲作用下向負極移動。在兩者相遇的最適比例處形成白色沉淀線。實驗原理二、對流免疫電泳對流免疫電泳是將雙向免疫擴散和電泳相結(jié)合的一種技術(shù)。實驗原理免疫沉淀實驗課件抗原：人全血清抗體：兔抗人全血清1瓊脂：0.05mol/L pH8.6的巴比妥緩沖液配制電泳槽、電泳儀、載玻片、水浴箱、打孔器、微量加樣器試劑和器材抗原：人全血清試劑和器材制板 取已經(jīng)融化的1%瓊脂約4ml，加到水平放置的載玻片上，使成厚度約為1.5mm的瓊脂

5、板，待冷凝。打孔 用打孔器打孔，孔徑3mm，兩孔間隔4-5mm。（如下圖所示）實驗步驟制板 取已經(jīng)融化的1%瓊脂約4ml，加到水平放置的載玻片上，加樣 用微量加樣器分別取10vl抗原、抗體，按圖加樣。+AgAb人血清羊抗人血清生理鹽水加樣 用微量加樣器分別取10vl抗原、抗體，按圖加樣。+A 電泳 將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)（抗原端放陰極側(cè)，抗體端放陽極側(cè)），兩端貼上用電泳液浸濕的紗布。通電，調(diào)整電壓為4V/cm長或電流3-4mA/cm寬，電泳30min-1h。 電泳 將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)（抗原端放陰極側(cè)，抗體端放陽極側(cè)結(jié)果判斷在黑色背景上方，用散射光多個角度觀察，在對孔之間是否有白色沉淀線出現(xiàn)。如

6、果沉淀線不清晰，可將瓊脂板放入濕盒于37保溫數(shù)小時，可增強沉淀線的清晰度。結(jié)果判斷在黑色背景上方，用散射光多個角度觀察，在對孔之間是否注意事項加樣時不要起氣泡，勿溢出瓊脂孔?？乖⒖贵w的量應(yīng)相近，如抗原量過多， 可造成假陰性結(jié)果，須通過稀釋抗原加以解決。電泳時電壓不宜過高或過低，過高可能會將瓊脂拉斷；過低時沉淀線出現(xiàn)的時間會延長。注意事項加樣時不要起氣泡，勿溢出瓊脂孔。 結(jié)束語當你盡了自己的最大努力時，失敗也是偉大的，所以不要放棄，堅持就是正確的。When You Do Your Best, Failure Is Great, So DonT Give Up, Stick To The End 結(jié)束語