普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件

1、普通植物病理學(xué)植物病毒普通植物病理學(xué)植物病毒病毒發(fā)現(xiàn)的歷史Ivnowsky (1892): TMVBeijerinck (1898)： filterable virusLoeffler（1898）口蹄疫病毒Towort（1915）噬菌體病毒發(fā)現(xiàn)的歷史病毒的發(fā)現(xiàn)1886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家 邁爾在荷蘭 的接種試驗(yàn) (煙草花葉病是一種傳染性疾病)病毒的發(fā)現(xiàn)1886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家 邁爾在荷蘭 的接種試驗(yàn)1892年，俄羅斯 伊萬諾夫斯基 煙草花葉病感病因子（細(xì)菌濾器濾過性）1892年，俄羅斯 伊萬諾夫斯基 1892年從事煙草病工作的年青 的俄國科學(xué)家伊萬諾夫斯基(Ivanovski)發(fā)現(xiàn)感受花葉病的

2、葉汁，即使經(jīng)過細(xì)菌濾器的過濾也仍具有傳染的性質(zhì)。這項(xiàng)觀察提示了存在一種比以前所知的任何一種都小的病原，他認(rèn)為該病是由產(chǎn)生毒素的細(xì)菌引起的。 1892年從事煙草病工作的年 1898年，荷蘭科學(xué)家貝葉林克 (Beijerinck)重復(fù)了伊萬諾夫的實(shí)驗(yàn)， 他從患花葉病的煙草葉中擠出汁液，并使之通過細(xì)菌濾器。表明濾液仍有侵染性。貝杰林克相信他的濾器阻擋住了細(xì)菌。將汁液置于瓊脂凝膠塊的表面時(shí)，發(fā)現(xiàn)侵染性物質(zhì)在凝膠中以適當(dāng)?shù)乃俣葦U(kuò)散，而細(xì)菌仍滯留于瓊脂的表面。因此認(rèn)為這種侵染性物質(zhì)要比通常的細(xì)菌小。貝杰林克用“病毒(Virus)”來命名這種史無前例的小病原體。不難看出真正發(fā)現(xiàn)病毒存在的是貝葉林克。 189

3、8年，荷蘭科學(xué)家1935年，美國生物化學(xué)家 斯坦萊 煙草花葉病毒結(jié)晶1935年，美國生物化學(xué)家 斯坦萊不難看出真正發(fā)現(xiàn)病毒存在的是貝葉林克。核酸雜交：核酸雜交主要在DNA和RNA之間進(jìn)行，因?yàn)槎咧g存在著堿基互補(bǔ)關(guān)系。5 光譜吸收特性：260/280紫外線峰值比表示核酸與蛋白質(zhì)含量的比值。(煙草花葉病是一種傳染性疾病)病毒主要由多粘菌和瘡痂病菌傳播，病毒存在于游動(dòng)孢子75種蚜蟲均能傳毒，主要為棉蚜和桃蚜，非持久性傳毒，也可機(jī)械傳播或由種子傳播。第七節(jié) 重要的植物病毒屬及典型種核酸雜交：核酸雜交主要在DNA和RNA之間進(jìn)行，因?yàn)槎咧g存在著堿基互補(bǔ)關(guān)系。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片

4、斷叫做雜交探針，也稱為cDNA探針。1 蚜蟲：主要傳播非持久性關(guān)系病毒。不同植物病毒屬具有不同的傳播介體，確定病毒的傳播介體可以作為病原鑒定的一個(gè)證據(jù)，同時(shí)也為防治提供依據(jù)。完整的病毒粒體是由一或多個(gè)核酸分子(DNA或 RNA)包被在蛋白或脂蛋白衣殼里構(gòu)成的。2 葉蟬和飛虱：絕大多數(shù)增殖型病毒。構(gòu)成病毒基因的核酸類型（DNA或RNA）；另外的部分則需要轉(zhuǎn)錄一次才能使用?？?，SMV（大豆花葉病毒）-豆科。國際病毒分類委員會(huì)(InternationaI Committee on Taxonomy of Viruses， ICTV) 。（一）介體傳毒的基本概念 按它們寄主的不同，病毒分為:寄生植物的

5、植物病毒(PIant virus)、寄生動(dòng)物的動(dòng)物病毒(Animal virus)醫(yī)學(xué)病毒（人類病毒）；真菌病毒寄生細(xì)菌的噬菌體(細(xì)菌病毒bacteriophage）。等。不難看出真正發(fā)現(xiàn)病毒存在的是貝葉林克。 病毒與人類的關(guān)系有害方面：引起人類疾?。ㄌ旎ā圩滩?、非典型肺炎、肝炎、流感、小兒麻痺等）。引起畜禽疾?。袢?、口蹄疫、豬瘟、牛瘟、雞瘟、鴨瘟）。引起植物病害（大麥黃矮病毒病、椰子死亡類病毒）。病毒與人類的關(guān)系有害方面：引起人類疾?。ㄌ旎?、愛滋病、非典非典型肺炎”元兇冠狀病毒非典型肺炎”元兇冠狀病毒使我們知道在十七世紀(jì)就存在一種植物病毒病-郁金香碎色病。不同株系在形狀上有差異。到20

6、00年， ICTV先后發(fā)表病毒分類與命名報(bào)告七次，在第六次報(bào)告中，植物病毒與動(dòng)物病毒和細(xì)菌病毒一樣實(shí)現(xiàn)了按科、屬、種分類。到2000年， ICTV先后發(fā)表病毒分類與命名報(bào)告七次，在第六次報(bào)告中，植物病毒與動(dòng)物病毒和細(xì)菌病毒一樣實(shí)現(xiàn)了按科、屬、種分類。病毒為 +ssRNA，核酸占56%。病毒與其它病原生物大小比較這種類型的核酸 稱為雙義RNA（ambisense RNA)。1亞基因組RNAs策略：由基因組3末端轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一到多個(gè)亞基因組(sub genomic)RNA，從各個(gè)亞基因組5端的開放閱讀框架翻譯出功能性蛋白，如煙草花葉病毒屬。3 介體與病毒?；宰R別的可能機(jī)制高侵染活性:50100分子可

7、侵染成功，病毒需100萬粒體。他認(rèn)為該病是由產(chǎn)生毒素的細(xì)菌化溫度5065，稀釋限點(diǎn)10-210-6。3 介體與病毒專化性識別的可能機(jī)制將汁液置于瓊脂凝膠塊的表面時(shí)，發(fā)現(xiàn)侵染性物質(zhì)在凝膠中以適當(dāng)?shù)乃俣葦U(kuò)散，而細(xì)菌仍滯留于瓊脂的表面。（三）傳播方式：血液及分泌物經(jīng)由粘膜表面或皮膚破損處進(jìn)入2、馬鈴薯Y病毒屬及PVY潛伏期(incubation period)是指介體從獲得病毒到能傳播病毒的時(shí)間，在循回型相互關(guān)系中也稱循回期。非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒核酸編碼的非結(jié)構(gòu)必需的蛋白，包括病毒復(fù)制需要的酶，傳播、運(yùn)動(dòng)需要的功能蛋白等。植物病毒基因組所包含的基因數(shù)目從一個(gè)（衛(wèi)星病毒）至十二個(gè)（植物呼腸孤病毒），一般為

8、47個(gè)基因，分子量從0.僅侵染韌皮部組織，由數(shù)種蚜蟲以持久非增殖型方式傳播。聯(lián)體病毒科（Geminiviridae）病毒含有這種類型基因組，復(fù)制時(shí)單鏈DNA先合成雙鏈DNA，再以常規(guī)途徑轉(zhuǎn)錄生成mRNA。植物呼腸孤病毒的基因組屬這一類型。一、艾滋病毒（一）形態(tài)：圓球形（二）侵染特點(diǎn)：逆轉(zhuǎn)錄病毒。AIDS：獲得性免疫缺失綜合病癥HIV：人類免疫缺陷病毒（三）傳播方式：血液及分泌物經(jīng)由粘膜表面或皮膚破損處進(jìn)入使我們知道在十七世紀(jì)就存在一種植物病毒病-郁金香碎色病 瘋牛病HIV 瘋牛病HIV艾滋病毒 T淋巴細(xì)胞中的愛滋病毒艾滋病毒 T淋巴細(xì)胞中的愛滋病毒植物病毒被病毒感染的植物植物病毒被病毒感染的植

9、物病毒與人類的關(guān)系有益方面：用作基因工程的載體或元件。有害生物控制（害蟲、真菌及雜草生防）。環(huán)境保護(hù)（利用藻類病毒消除水面藻類污染）?；ɑ茉錾ń鹦狞S楊、金邊瑞香、雜色郁金香） 1576，荷蘭人Charles de Lieclase描述郁金香雜色花。“郁金香熱”。一株郁金香（球根）：數(shù)頭牛、豬、綿羊；幾頓谷物；上千磅奶酪；一個(gè)磨坊。 。病毒與人類的關(guān)系有益方面：用作基因工程的載體或元件。 第一個(gè)記載的植物病毒病的是 郁金香碎色病，因?yàn)橹两窈商m 阿姆斯特丹的Rijks博物館還保存著一張1619年荷蘭畫師的一幅得病的郁金香靜物畫。當(dāng)時(shí)一個(gè)得病郁金香球莖竟能換來成噸的谷物或上千磅的奶酪。在1634-

10、1637年的荷蘭，這種嗜好達(dá)到了可稱做“郁金香熱”的高潮。使我們知道在十七世紀(jì)就存在一種植物病毒病-郁金香碎色病。 第一個(gè)記載的植物病毒病的是染病郁金香01碎色染病郁金香01碎色染病郁金香02染病郁金香02普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件二、昆蟲病毒防治農(nóng)林害蟲的優(yōu)勢： 專一性高擴(kuò)散性強(qiáng)毒力大后效長環(huán)保功能對人類的不利作用：經(jīng)濟(jì)昆蟲(蜂、蠶)病毒病 斜紋夜蛾病毒殺蟲劑及甜菜夜蛾病毒殺蟲劑：一種核型多角體病毒（NPV） 二、昆蟲病毒防治農(nóng)林害蟲的優(yōu)勢：斜紋夜蛾病毒殺蟲劑及甜菜夜蛾第一節(jié) 植物病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與組分觀察植物病毒的形態(tài)則需要放大數(shù)萬倍的電子顯微鏡。度量病毒大小的尺度為納米(nm)。第一

11、節(jié) 植物病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與組分引起人類疾?。ㄌ旎?、愛滋病、非典型肺炎、肝炎、流感、小兒麻痺等）。ssRNA病毒，病毒負(fù)鏈核酸需先轉(zhuǎn)錄為正鏈核酸（mRNA)?？共∑贩N和藥劑有一定防效。+ssRNA病毒基因組五種翻譯策略：寄主范圍廣，傳播不需要介體，靠接觸傳播，有時(shí)靠6、黃癥病毒屬及BYDVDNA病毒(ssDNA病毒和dsDAN病毒)需要寄主的轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄 mRNA。通讀蛋白(read-through)策略：基因5開放閱讀框架的終止密碼子可能漏讀(leaky)，允許一定比例的核糖體繼續(xù)向下游翻譯，直至下一個(gè)終止密碼子，從而產(chǎn)生第二個(gè)更長的功能蛋白，如煙草花葉病毒屬復(fù)制酶的翻譯。病毒與其它病原生物大小

12、比較病毒的不同株系往往由不同的蚜蟲傳播，一次得毒可以由葉蟬持久性傳播，屬于增殖型，機(jī)械和1 蚜蟲：主要傳播非持久性關(guān)系病毒。野生寄主是初侵染來源。75種蚜蟲均能傳毒，主要為棉蚜和桃蚜，非持久性傳毒，病毒球形，有棱角，含有12條dsRNA， 占22%，核酸可編碼傳毒真菌主要是油壺菌屬、多粘菌屬和粉痂菌屬的5種真菌，能傳播20種病毒。（4）單鏈DNA（ssDNA）另外的部分則需要轉(zhuǎn)錄一次才能使用。除蛋白和核酸外，植物病毒含有的最大量的其它組分是水分。科，SMV（大豆花葉病毒）-豆科。煙草花葉病毒結(jié)晶這種特殊的 繁殖方式稱為復(fù)制增殖(multiplication)。病毒與其它病原生物大小比較引起人類

13、疾?。ㄌ旎?、愛滋病、非典型肺炎、肝炎、流感、小兒麻病毒與其它生物大小比較病毒與其它生物大小比較 一、植物病毒的形態(tài) 植物病毒的基本形態(tài)為粒體(virion, virus particle)，大部分病毒的粒體為球狀、桿狀和線狀，少數(shù)為彈狀、桿菌狀和雙聯(lián)體狀等。 一、植物病毒的形態(tài)普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件球狀病毒：直徑大多在2035nm，少數(shù)可以達(dá)到7080nm；球狀病毒也稱為多面體病毒或二十面體（icosahedral particle)病毒。大約一半左右的植物病毒科、屬是屬于這種形態(tài)。球狀病毒：直徑大多在2035nm，少數(shù)可以達(dá)到7080n桿狀病毒多為2080nm100250nm，兩端平

14、齊；桿狀病毒粒體剛直；線狀病毒多為 1113nm750nm，個(gè)別可以達(dá)到2000nm以上，粒體有不同程度的彎曲。桿狀病毒多為2080nm100250nm，兩端平齊；桿二、植物病毒的結(jié)構(gòu)完整的病毒粒體是由一或多個(gè)核酸分子(DNA或 RNA)包被在蛋白或脂蛋白衣殼里構(gòu)成的。絕大多數(shù)病毒粒體都只是由核酸和蛋白衣殼(capsid)組成，但植物彈狀病毒(PIant rhabdovirus)粒體外面有囊膜(envelope)包被。二、植物病毒的結(jié)構(gòu)三、植物病毒的組分（一）蛋白質(zhì)1 衣殼蛋白的組成和結(jié)構(gòu)絕大多數(shù)物病毒的衣殼只有一種蛋白，蛋白多肽鏈經(jīng)過三維折疊形成衣殼的基本結(jié)構(gòu)單位，稱作蛋白亞基（subuni

15、t，也稱結(jié)構(gòu)亞基)。多個(gè)蛋白亞基聚集起來形成殼基。殼基是一種形態(tài)單位，主要表現(xiàn)在球狀病毒上，多數(shù)殼基構(gòu)成衣殼，起到保護(hù)核酸鏈的作用。殼三、植物病毒的組分殼普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件植物病毒有兩種基本結(jié)構(gòu)方式：螺旋對稱型結(jié)構(gòu)和等面體對稱型結(jié)構(gòu)。 螺旋對稱型結(jié)構(gòu)：桿狀病毒的結(jié)構(gòu)，TMV為代表。蛋白亞基呈螺旋狀排列，鑲嵌在 RNA螺旋鏈上，一個(gè)亞基和三個(gè)核苷酸相結(jié)合。等面體對稱形結(jié)構(gòu)：球形病毒的結(jié)構(gòu)。殼基有規(guī)則地結(jié)合、分布在二十個(gè)正三角形組成的面上；殼基經(jīng)常由5、6、2、3個(gè)蛋白亞基聚集而成，常被分別稱為五鄰體、六鄰體、二聚體和三聚體。這種結(jié)構(gòu)使病毒消耗的能量最小，粒體最穩(wěn)定。植物病毒有兩種基本

16、結(jié)構(gòu)方式：螺旋對稱型結(jié)構(gòu)和等面體對稱型結(jié)構(gòu)普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件2 植物病毒的蛋白種類植物病毒的基因組很小，編碼的蛋白質(zhì)種類也很少，按照其功能可分為結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。結(jié)構(gòu)蛋白：主要是衣殼蛋白(coat protein，縮寫為 CP)和囊膜蛋白。非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒核酸編碼的非結(jié)構(gòu)必需的蛋白，包括病毒復(fù)制需要的酶，傳播、運(yùn)動(dòng)需要的功能蛋白等。2 植物病毒的蛋白種類不同植物病毒屬具有不同的傳播介體，確定病毒的傳播介體可以作為病原鑒定的一個(gè)證據(jù)，同時(shí)也為防治提供依據(jù)。病毒粒體中的單鏈RNA不具侵染性，必需先轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)鏈，才能翻譯蛋白。8、真菌傳桿狀病毒屬（Furovirus）及SWMV另外的

17、部分則需要轉(zhuǎn)錄一次才能使用。傷瘤病毒主要侵染雙子葉植物，在根部形成腫瘤。含3個(gè)種。（三）種子和花粉傳播：核酸占21%，為 +ssRNA。殺蟲劑：一種核型多角體病毒（NPV）典型種是傷瘤病毒（wound tumor virus）獲毒(取食)期(acquisition period)是指介體獲得病毒所需的取食時(shí)間。（4）單鏈DNA（ssDNA）引起人類疾病（天花、愛滋病、非典型肺炎、肝炎、流感、小兒麻痺等）。科、屬名書寫時(shí)應(yīng)用斜體，確定種(definitive species)的名稱應(yīng)用斜體，而暫定種(tentative species)的名稱或?qū)倜炊ǖ牟《静徊捎眯斌w。球狀病毒也稱為多面體病毒或

18、二十面體（icosahedral particle)病毒。在光學(xué)顯微鏡下觀察到內(nèi)含體；（五）核酸雜交及PCR技術(shù)2 葉蟬和飛虱：絕大多數(shù)增殖型病毒。核糖體移碼(trans-frame)策略：在翻譯接近開放閱讀框架的終止密碼子時(shí)，核糖體回讀一個(gè)核苷酸(少數(shù)情況是跳過一個(gè))，這樣使終止密碼子UAG分到兩個(gè)三聯(lián)體密碼中，使翻譯繼續(xù)到下一個(gè)開放閱讀框架，從而產(chǎn)生一個(gè)大蛋白。專一性高擴(kuò)散性強(qiáng)毒力大后效長環(huán)保功能植物病毒基因組所包含的基因數(shù)目從一個(gè)（衛(wèi)星病毒）至十二個(gè)（植物呼腸孤病毒），一般為47個(gè)基因，分子量從0.內(nèi)部，在休眠孢子囊內(nèi)可存活多年。（二）核酸 核酸是病毒遺傳信息的載體，植物病毒粒體中的核酸

19、主要是其基因組，有些含DNA，有些含mRNA。一套基因組含有病毒侵染、復(fù)制、運(yùn)轉(zhuǎn)、傳播等生命活動(dòng)所需的全部基因，決定病毒的增殖、生物學(xué)特性及致病性等。不同植物病毒屬具有不同的傳播介體，確定病毒的傳播介體可以作為 植物病毒基因組所包含的基因數(shù)目從一個(gè)（衛(wèi)星病毒）至十二個(gè)（植物呼腸孤病毒），一般為47個(gè)基因，分子量從0.4106d到15.5106d，通常具有外殼蛋白基因、復(fù)制酶基因及運(yùn)動(dòng)蛋白基因等。大部分植物病毒基因組能編碼47種蛋白質(zhì)。 1、植物病毒的核酸類型 植物病毒的基因組多數(shù)為核糖核酸（RNA），少數(shù)為脫氧核糖核酸（DNA）。根據(jù)核酸性質(zhì)及功能，可將植物病毒基因組分為下列5種類型： 植物病

20、毒基因組所包含的基因數(shù)目從一個(gè)（衛(wèi)星?。?）正單鏈RNA（+ssRNA） 單鏈RNA具有侵染性，可以直接翻譯，起mRNA的作用。大部分重要植物病毒的基因組屬這一類型。 70%，TMV，CMV（黃瓜花葉病毒），PVY（馬鈴薯Y病毒 ）；多分體病毒。（1）正單鏈RNA（+ssRNA） 單鏈RNA具有侵染性，（2）負(fù)單鏈RNA（-ssRNA） 病毒粒體中的單鏈RNA不具侵染性，必需先轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)鏈，才能翻譯蛋白。植物彈狀病毒的基因組屬這一類型。如小麥叢矮病。（3）雙鏈RNA（dsRNA） 其中一條鏈具有mRNA的作用。負(fù)鏈變正鏈才能作為mRNA。植物呼腸孤病毒的基因組屬這一類型。 水稻矮縮病。（2）負(fù)

21、單鏈RNA（-ssRNA） （4）單鏈DNA（ssDNA） 聯(lián)體病毒科（Geminiviridae）病毒含有這種類型基因組，復(fù)制時(shí)單鏈DNA先合成雙鏈DNA，再以常規(guī)途徑轉(zhuǎn)錄生成mRNA。（5）雙鏈DNA（dsDNA） 核酸類型與高等動(dòng)、植物的相同，為互補(bǔ)的雙鏈DNA，花椰菜花葉病毒屬（Caulimovirus）、桿狀DNA病毒屬（Badnavirus）具有這種類型基因組。 （4）單鏈DNA（ssDNA） 2、病毒粒體核酸含量 球狀病毒：15%45%。線狀及桿狀病毒：5%6%。彈狀病毒：1%。3、病毒的多分體現(xiàn)象單體基因組：病毒基因組分布于一條核酸鏈上。分段基因組：病毒基因組分布于多條核酸鏈上

22、。單分體病毒：一個(gè)病毒粒體中包含有全套基因組。多（雙、三）分體病毒：分段基因組分別包裝于不同的病毒粒體中。2、病毒粒體核酸含量 球狀病毒：15%45%。3、病毒的多分體現(xiàn)象單分體病毒 整個(gè)遺傳信息存在于一條核酸鏈上、包被在一種粒體中的病毒，如常見的煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)、馬鈴薯 X病毒屬(Potxvirus)和馬鈴薯 Y病毒屬(Potyvirus).雙分體病毒 遺傳信息為雙組分基因組包被在兩種粒體里的病毒，如煙草脆裂病毒屬(Tobravirus)和蠕傳病毒屬(Nepovirus).三分體病毒 核酸包被在三種粒體中的病毒。如黃瓜花葉病毒屬（Cucumovirus）和苜?；ㄈ~病毒

23、(AMV)，它們均有四條核酸鏈，但被包裝在三種或四種粒體中。 基因組分離和多分體病毒的產(chǎn)生對植物病毒的遺傳及進(jìn)化有重要的作用。3、病毒的多分體現(xiàn)象單分體病毒球狀病毒也稱為多面體病毒或二十面體（icosahedral particle)病毒。分段基因組：病毒基因組分布于多條核酸鏈上。3 介體與病毒專化性識別的可能機(jī)制土壤中的介體傳毒距離有限，主要是由根部侵染，遠(yuǎn)距離傳播主要靠種子和苗木。(Beijerinck)重復(fù)了伊萬諾夫的實(shí)驗(yàn)，植物病毒分類依據(jù)的是病毒最基本、最重要的性質(zhì)：通過分子雜交可檢測出相近病毒間的同源程度。反應(yīng)要經(jīng)過加熱變性-退火結(jié)合-DNA病毒為 +ssRNA，核酸占56%。（4）

24、單鏈DNA（ssDNA）1、煙草花葉病毒TMV大約一半左右的植物病毒科、屬是屬于這種形態(tài)。到2000年， ICTV先后發(fā)表病毒分類與命名報(bào)告七次，在第六次報(bào)告中，植物病毒與動(dòng)物病毒和細(xì)菌病毒一樣實(shí)現(xiàn)了按科、屬、種分類。植物病毒從一植株轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散到其它植物的過程稱為傳播（transmission)，而從植物的一個(gè)局部到局部的過程稱為移動(dòng)(movement)。黃瓜花葉病毒屬的學(xué)名為 Cucumo virus，Cucumovirus；2、馬鈴薯Y病毒屬及PVY不同植物病毒屬具有不同的傳播介體，確定病毒的傳播介體可以作為病原鑒定的一個(gè)證據(jù)，同時(shí)也為防治提供依據(jù)。（5）雙鏈DNA（dsDNA）傳毒真菌主

25、要是油壺菌屬、多粘菌屬和粉痂菌屬的5種真菌，能傳播20種病毒。他認(rèn)為該病是由產(chǎn)生毒素的細(xì)菌植物病毒的內(nèi)含體病毒為 +ssRNA，核酸占56%。4 衛(wèi)星RNA在某些多分體病毒中發(fā)現(xiàn)了小分子量的RNA，其與病毒RNA沒有同源性，單獨(dú)不能侵染，要依賴病毒的核酸才能侵染和增殖，這種核酸稱為衛(wèi)星RNA（satellite RNA，sRNA），其依賴的病毒稱為輔助病毒。衛(wèi)星 RNA與輔助病毒包被在同一衣殼內(nèi)，并能夠抑制輔助病毒的復(fù)制，降低其濃度并改變其致病力，利用 sRNA與病毒的關(guān)系，可進(jìn)行生物防治及基因工程育種研究。球狀病毒也稱為多面體病毒或二十面體（icosahedral （三）其它組分除蛋白和核酸

26、外，植物病毒含有的最大量的其它組分是水分。碳水化合物主要發(fā)現(xiàn)在植物彈狀病毒科病毒中，以糖蛋白或脂類的形式存在于病毒的囊膜中。某些病毒粒體含多胺，主要是精胺和亞精胺，它們與核酸上的磷酸基團(tuán)相互作用，為穩(wěn)定折疊的核酸分子。金屬離子也是許多病毒必須的，主要有鈣離子、鈉離子和鎂離子。這些金屬離子與衣殼蛋白亞基上的離子結(jié)合位點(diǎn)作用，穩(wěn)定衣完蛋白與核酸的結(jié)合。（三）其它組分 第二節(jié) 植物病毒的復(fù)制和增殖病毒在活細(xì)胞內(nèi)增殖需要進(jìn)行：核酸的復(fù)制和核酸信息的表達(dá)。一、病毒基因組的復(fù)制大部分植物病毒的核酸復(fù)制仍然是由 RNA復(fù)制 RNA。 第二節(jié) 植物病毒的復(fù)制和增殖二、植物病毒基因組信息的表達(dá) 病毒基因組信息的

27、表達(dá)的不同點(diǎn)主要在于:基因組轉(zhuǎn)錄mRNA具有多種形式 mRNA翻譯蛋白有多種策略。二、植物病毒基因組信息的表達(dá)（一）病毒核酸的轉(zhuǎn)錄ssRNA病毒的核酸可以直接作為 mRNA使用，稱為單義RNA。ssRNA病毒，病毒負(fù)鏈核酸需先轉(zhuǎn)錄為正鏈核酸（mRNA)。轉(zhuǎn)錄過程中所必須的復(fù)制酶是由病毒進(jìn)入時(shí)隨病毒粒體帶進(jìn)去的。所以這些病毒的精提純核酸不能完成復(fù)制的過程。dsRNA病毒，核酸鏈的部分可以作為mRNA使用；另外的部分則需要轉(zhuǎn)錄一次才能使用。這種類型的核酸 稱為雙義RNA（ambisense RNA)。DNA病毒(ssDNA病毒和dsDAN病毒)需要寄主的轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄 mRNA。（一）病毒核酸的轉(zhuǎn)錄單

28、鏈DNA病毒另一種特殊類型雙鏈DNA病毒負(fù)單鏈RNA病毒正單鏈RNA病毒雙鏈RNA病毒單鏈DNA病毒另一種特殊類型雙鏈DNA病毒負(fù)單鏈RNA病毒正（二）植物病毒核酸的表達(dá)由于真核生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)合成機(jī)構(gòu)僅僅識別病毒RNA上的第一個(gè)開放閱讀框架(open reading frame，ORF)，同一核酸鏈上其它基因的表達(dá)則要借助病毒的特殊翻譯策略。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)十ssRNA病毒基因組在真核生物蛋白合成系統(tǒng)中有五種翻譯策略： 1.亞基因組RNAs策略: 2.多聚蛋白策略 3.多體基因組策略 4.通讀蛋白(readthrough)策略 5.核糖體移碼(transframe)策略 （二）植物病毒核酸的表達(dá)+s

29、sRNA病毒基因組五種翻譯策略：1亞基因組RNAs策略：由基因組3末端轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一到多個(gè)亞基因組(sub genomic)RNA，從各個(gè)亞基因組5端的開放閱讀框架翻譯出功能性蛋白，如煙草花葉病毒屬。2多聚蛋白策略：基因組核酸具有編碼多個(gè)蛋白的能力，但是其翻譯僅從單一開放閱讀框架進(jìn)行，產(chǎn)生的多聚蛋白(polyproteins)在病毒編碼的蛋白酶作用下，分解為多個(gè)最終的基因翻譯產(chǎn)物，如馬鈴薯Y病毒屬。+ssRNA病毒基因組五種翻譯策略：1亞基因組RNAs策略3. 多體基因組策略：病毒的基因組分裝在不同的核酸鏈上，每條核酸鏈均從5端進(jìn)行翻譯，直接產(chǎn)生基因的翻譯產(chǎn)物，如黃瓜花葉病毒屬。4. 通讀蛋白(r

30、ead-through)策略：基因5開放閱讀框架的終止密碼子可能漏讀(leaky)，允許一定比例的核糖體繼續(xù)向下游翻譯，直至下一個(gè)終止密碼子，從而產(chǎn)生第二個(gè)更長的功能蛋白，如煙草花葉病毒屬復(fù)制酶的翻譯。5. 核糖體移碼(trans-frame)策略：在翻譯接近開放閱讀框架的終止密碼子時(shí)，核糖體回讀一個(gè)核苷酸(少數(shù)情況是跳過一個(gè))，這樣使終止密碼子UAG分到兩個(gè)三聯(lián)體密碼中，使翻譯繼續(xù)到下一個(gè)開放閱讀框架，從而產(chǎn)生一個(gè)大蛋白。3. 多體基因組策略：病毒的基因組分裝在不同的核酸鏈上，每條（三）植物病毒的基因組結(jié)構(gòu)及功能煙草花葉病毒(TMV)為例進(jìn)行介紹。TMV為SSRNA病毒，基因組核酸全長639

31、5個(gè)核苷酸，共有5個(gè)開放閱讀框架。核酸的5端有帽子結(jié)構(gòu)，3端有類似tRNA的結(jié)構(gòu)。 （三）植物病毒的基因組結(jié)構(gòu)及功能普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件 植物病毒的內(nèi)含體植物病毒基因組的翻譯的蛋白有時(shí)會(huì)與病毒的核酸、寄主的蛋白等物質(zhì)聚集起來，形成一定的大小和形狀，稱為內(nèi)含體 (inclusions)。內(nèi)含體可以分為核內(nèi)含體(nuclear inclusions)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含體(cytoplasmic inclusions)兩類。不同屬的植物病毒往往產(chǎn)生不同類型、不同形狀的內(nèi)含體，利用這種不同可作為鑒別不同病毒的方法。 植物病毒的內(nèi)含體（二）植物病毒核酸的表達(dá)專一性高擴(kuò)散性強(qiáng)毒力大后效長環(huán)保功能觀察植

32、物病毒的形態(tài)則需要放大數(shù)萬倍的電子顯微鏡。病毒與其它病原生物大小比較主要侵染煙草、番茄等作物，引起花葉病。（三）種子和花粉傳播：介體內(nèi)的專化性持毒位點(diǎn)：在介體消化道內(nèi)有一定的待毒位點(diǎn)與所傳病毒有?；P(guān)系。Potyvirus是植物病毒中最大的一個(gè)屬，含有75個(gè)種和93植物病毒從一植株轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散到其它植物的過程稱為傳播（transmission)，而從植物的一個(gè)局部到局部的過程稱為移動(dòng)(movement)。度量病毒大小的尺度為納米(nm)。（5）雙鏈DNA（dsDNA）一株郁金香（球根）：數(shù)頭牛、豬、綿羊；是煙草和黃瓜，局部枯斑寄主為莧色藜、昆諾藜和豇豆。病毒通過維管束的轉(zhuǎn)移稱作長距離轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移速

33、度較快。（2）負(fù)單鏈RNA（-ssRNA）病毒粒體中的單鏈RNA不具侵染性，必需先轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)鏈，才能翻譯蛋白。2 葉蟬和飛虱：絕大多數(shù)增殖型病毒。第三節(jié) 植物病毒的傳播和移動(dòng)二是對確信的病毒病標(biāo)本做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)診斷，必要時(shí)還需作進(jìn)一步的病原鑒定。6、黃癥病毒屬及BYDV非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒核酸編碼的非結(jié)構(gòu)必需的蛋白，包括病毒復(fù)制需要的酶，傳播、運(yùn)動(dòng)需要的功能蛋白等。高侵染活性:50100分子可侵染成功，病毒需100萬粒體。核內(nèi)含體核質(zhì)內(nèi)含體一般是由蛋白或病毒粒體構(gòu)成的晶體結(jié)構(gòu)，少有纖維狀的內(nèi)含體(只有在電子顯微鏡下才能看到)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含體細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含體在形狀、大小、組成和結(jié)構(gòu)方面差異很大，主要分為不

34、定形內(nèi)含體、假晶體、晶體內(nèi)含體和風(fēng)輪狀內(nèi)含體等五種類型（光學(xué)顯微鏡下可見）。（二）植物病毒核酸的表達(dá)核內(nèi)含體普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件三、植物病毒的增殖（組裝）植物病毒作為一種分子寄生物，分別合成核酸和蛋白組分再組裝成子代粒體。這種特殊的 繁殖方式稱為復(fù)制增殖(multiplication)。三、植物病毒的增殖（組裝）普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件第三節(jié) 植物病毒的傳播和移動(dòng)一、定義植物病毒從一植株轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散到其它植物的過程稱為傳播（transmission)，而從植物的一個(gè)局部到局部的過程稱為移動(dòng)(movement)。根據(jù)自然傳播方式的不同，傳播可以分為介體

35、傳播和非介體傳播兩類第三節(jié) 植物病毒的傳播和移動(dòng)二、介體傳播（一）介體傳毒的基本概念1 介體傳毒過程 介體傳毒過程可分為幾個(gè)時(shí)期：獲毒(取食)期(acquisition period)是指介體獲得病毒所需的取食時(shí)間。潛伏期(incubation period)是指介體從獲得病毒到能傳播病毒的時(shí)間，在循回型相互關(guān)系中也稱循回期。接毒（取食）期（inoculative period)是指介體傳毒所需的取食時(shí)間。持毒期（retention period)是指介體能保持傳毒能力的時(shí)間。二、介體傳播2 介體與所傳病毒之間的關(guān)系2 介體與所傳病毒之間的關(guān)系3 介體與病毒專化性識別的可能機(jī)制介體傳毒?；詸C(jī)

36、制涉及到介體病毒寄主三者的相互識別或作用?？赡軝C(jī)制如下：介體內(nèi)的?；猿侄疚稽c(diǎn)：在介體消化道內(nèi)有一定的待毒位點(diǎn)與所傳病毒有專化關(guān)系。輔助因子(Helper component，簡稱 HC) 在蚜蟲傳播的非持久病毒的寄主細(xì)胞中，發(fā) 現(xiàn)有一種由病毒編碼的蛋白與傳毒有關(guān)，如除去它，蚜蟲也就失去傳毒能力。3 介體與病毒?；宰R別的可能機(jī)制內(nèi)部，在休眠孢子囊內(nèi)可存活多年。1 線蟲：病毒與線蟲之間的生物學(xué)關(guān)系類似于蚜蟲傳播病毒的非持久性關(guān)系。植物病毒分類依據(jù)的是病毒最基本、最重要的性質(zhì)：75種蚜蟲均能傳毒，主要為棉蚜和桃蚜，非持久性傳毒，寄生植物的植物病毒(PIant virus)、1898年，荷蘭科學(xué)家

37、貝葉林克也可機(jī)械傳播或由種子傳播。的俄國科學(xué)家伊萬諾夫斯基(Ivanovski)發(fā)現(xiàn)感受花葉病的葉汁，即使經(jīng)過細(xì)菌濾器的過濾也仍具有傳染的病毒運(yùn)動(dòng)蛋白在運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮很大作用。三、植物病毒的增殖（組裝）傳播方式簡單:農(nóng)具、嫁接刀、種子，個(gè)別需節(jié)肢動(dòng)物。使我們知道在十七世紀(jì)就存在一種植物病毒病-郁金香碎色病。病毒與其它病原生物大小比較主要侵染煙草、番茄等作物，引起花葉病。主要引起菜豆和豇豆的花葉和斑駁病。類病毒是指無外殼蛋白包被的小分子環(huán)狀單鏈RNA，單獨(dú)具侵染性，能自我復(fù)制，致病或不致病。通過分子雜交可檢測出相近病毒間的同源程度。5cm/hr 不完全是被動(dòng)3 介體與病毒?；宰R別的可能機(jī)制病毒在線

38、蟲體內(nèi)存活時(shí)間很長，但不能扶植。DNA病毒(ssDNA病毒和dsDAN病毒)需要寄主的轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄 mRNA。當(dāng)時(shí)一個(gè)得病郁金香球莖竟能換來成噸的谷物或上千磅的奶酪。（二）昆蟲介體1 蚜蟲：主要傳播非持久性關(guān)系病毒。2 葉蟬和飛虱：絕大多數(shù)增殖型病毒。在15000種葉蟬中，只有49種是病毒的傳播介體；飛虱亞目中的一部分是傳播介體；介體寄主主要是禾本科植物的如水稻矮縮病，小麥叢矮病和玉米粗縮病。 葉蟬和飛虱傳播的大多是增殖型病毒，大多終生傳毒，灰飛虱傳播的小麥叢矮病毒、黑尾葉蟬傳播的水稻矮縮病毒可經(jīng)卵傳40代。 白粉虱、粉蚧、薊馬、咀嚼式口器的甲蟲、蚱蜢也可傳播。內(nèi)部，在休眠孢子囊內(nèi)可存活多年。（

39、二）昆蟲介體普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件（三）土壤中的介體1 線蟲：病毒與線蟲之間的生物學(xué)關(guān)系類似于蚜蟲傳播病毒的非持久性關(guān)系。已經(jīng)知道5個(gè)屬的38種線蟲可傳播80種病毒。其中多數(shù)屬于蠕傳病毒屬和煙草脆裂病毒屬的病毒2 真菌：可以傳播持久性關(guān)系病毒和非持久性關(guān)系病毒。 傳毒真菌主要是油壺菌屬、多粘菌屬和粉痂菌屬的5種真菌，能傳播20種病毒。土壤中的介體傳毒距離有限，主要是由根部侵染，遠(yuǎn)距離傳播主要靠種子和苗木。（三）土壤中的介體1 線蟲：病毒與線蟲之間的生物學(xué)關(guān)系類似于三、非介體傳播（一）機(jī)械傳播：也稱為汁液摩擦傳播。（二）無性繁殖材料和嫁接傳播：（三）種子和花

40、粉傳播：三、非介體傳播四、病毒在植物體內(nèi)的移動(dòng) 病毒在植物葉肉細(xì)胞間的移動(dòng)稱作細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，這種轉(zhuǎn)移的速度很慢。病毒通過維管束的轉(zhuǎn)移稱作長距離轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移速度較快。(一)病毒在細(xì)胞間的移動(dòng)通過胞間連絲，轉(zhuǎn)移慢, 810個(gè)細(xì)胞d（0.01-2mm/d)另外病毒并不是總以完整粒體形式通過。 病毒移動(dòng)速度受溫度影響，一般每小時(shí)幾個(gè)納米。 不同部位病毒含量不一致。胞間聯(lián)絲是細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸?shù)耐ǖ?。?nèi)含鏈管，兩個(gè)膜之間的空間約為5納米，胞間聯(lián)絲的分子排阻限是8001000u，病毒粒體或核酸的分子量在105-6u，是運(yùn)動(dòng)蛋白擴(kuò)大胞間聯(lián)絲通透性。(二)病毒的長距離移動(dòng)植物輸導(dǎo)組織，與營養(yǎng)主流方向一致，進(jìn)行上下雙向

41、轉(zhuǎn)移。四、病毒在植物體內(nèi)的移動(dòng)(二)病毒的長距離移動(dòng)植物輸導(dǎo)組織，與營養(yǎng)主流方向一致，進(jìn)行上下雙向轉(zhuǎn)移。篩管：快速轉(zhuǎn)移，0.1-0.5cm/hr 不完全是被動(dòng)甲蟲傳播的病毒是通過木質(zhì)部。移動(dòng)速度每分鐘幾個(gè)厘米。病毒運(yùn)動(dòng)蛋白在運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮很大作用。(二)病毒的長距離移動(dòng)植物輸導(dǎo)組織，與營養(yǎng)主流方向一致，進(jìn)行普通植物病理學(xué)植物病毒優(yōu)選課件第四節(jié) 植物病毒的分類與命名國際病毒分類委員會(huì)(InternationaI Committee on Taxonomy of Viruses， ICTV) 。到2000年， ICTV先后發(fā)表病毒分類與命名報(bào)告七次，在第六次報(bào)告中，植物病毒與動(dòng)物病毒和細(xì)菌病毒一樣實(shí)現(xiàn)

42、了按科、屬、種分類。近代病毒分類體系趨于將病毒這類非細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分子寄生物列為獨(dú)立的“病毒界”，下分為 RNA病毒和DNA病毒兩大類。但為方便及習(xí)慣，仍按寄主種類分為動(dòng)物病毒、植物病毒、微生物病毒等實(shí)用系統(tǒng)分類。第四節(jié) 植物病毒的分類與命名一、植物病毒的分類（一）分類依據(jù)植物病毒分類依據(jù)的是病毒最基本、最重要的性質(zhì)： 1.構(gòu)成病毒基因的核酸類型（DNA或RNA）； 2.核酸是單鏈還是雙鏈； 3.病毒粒體是否存在脂蛋白包膜； 4.病毒形態(tài)； 5.核酸分段情況；根據(jù)上述主要特性，將植物病毒分在15個(gè)科73個(gè)屬中(其中有些屬、種尚未確定) 。一、植物病毒的分類病毒的不同株系往往由不同的蚜蟲傳播，一次得

43、毒可以花葉是基本癥狀，在番茄上表現(xiàn)厥葉。2 葉蟬和飛虱：絕大多數(shù)增殖型病毒。1886年，德國農(nóng)業(yè)化學(xué)家 邁爾在荷蘭 的接種試驗(yàn)病毒為 +ssRNA，核酸占56%。在1634-1637年的荷蘭，這種嗜好達(dá)到了可稱做“郁金香熱”的高潮。Potyvirus是植物病毒中最大的一個(gè)屬，含有75個(gè)種和93聯(lián)體病毒科（Geminiviridae）病毒含有這種類型基因組，復(fù)制時(shí)單鏈DNA先合成雙鏈DNA，再以常規(guī)途徑轉(zhuǎn)錄生成mRNA。CMV粒體球形，直徑28nm。6 病毒的化學(xué)特性：指核酸的類型、核酸的鏈數(shù)以及分子量是煙草和黃瓜，局部枯斑寄主為莧色藜、昆諾藜和豇豆。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片斷叫做

44、雜交探針，也稱為cDNA探針。近代病毒分類體系趨于將病毒這類非細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分子寄生物列為獨(dú)立的“病毒界”，下分為 RNA病毒和DNA病毒兩大類。1892年從事煙草病工作的年青也可機(jī)械傳播或由種子傳播。(煙草花葉病是一種傳染性疾病)土壤中的介體傳毒距離有限，主要是由根部侵染，遠(yuǎn)距離傳播主要靠種子和苗木。引起人類疾病（天花、愛滋病、非典型肺炎、肝炎、流感、小兒麻痺等）。主要引起菜豆和豇豆的花葉和斑駁病。大部分植物病毒基因組能編碼47種蛋白質(zhì)。寄主范圍廣，傳播不需要介體，靠接觸傳播，有時(shí)靠PCR可檢測特定DNA是否存在。病毒的不同株系往往由不同的蚜蟲傳播，一次得毒可以二、植物病毒的命名植物病毒的名稱目

45、前不采用拉丁文雙名法，仍以寄主英文俗名加上癥狀來命名，如煙草花葉病毒為Tobacco mosaic virus，縮寫為TMV；黃瓜花葉病毒為Cucumber mosaic virus，縮寫為 CMV。屬名為專用國際名稱，常由典型成員寄主名稱(英文或拉丁文)縮寫 主要特點(diǎn)描述(英文或拉丁文)縮寫 virus拼組而成。如：黃瓜花葉病毒屬的學(xué)名為 Cucumo virus，Cucumovirus；煙草花葉病毒屬為 Tobamovirus，Tobamovirus。植物病毒屬的結(jié)尾是一virus?？?、屬名書寫時(shí)應(yīng)用斜體，確定種(definitive species)的名稱應(yīng)用斜體，而暫定種(tentat

46、ive species)的名稱或?qū)倜炊ǖ牟《静徊捎眯斌w。類病毒(Viroid)在命名時(shí)遵循相似于病毒的規(guī)則，因縮寫名易與病毒混淆，新命名規(guī)則 規(guī)定類病毒的縮寫為 Vd，如馬鈴薯紡錘塊莖類病毒(Potato spindle tuber viroid)縮寫為PSTVd。二、植物病毒的命名第五節(jié) 植物類病毒(viroid) 類病毒是指無外殼蛋白包被的小分子環(huán)狀單鏈RNA，單獨(dú)具侵染性，能自我復(fù)制，致病或不致病。 1971年Diener首次在描述馬鈴薯紡錘塊莖病的病原時(shí)使用類病毒（viroid）一詞。之后陸續(xù)在一些植物中發(fā)現(xiàn)這類小分子核酸寄生物。第五節(jié) 植物類病毒(viroid) 類病毒是指 菊花矮

47、化類病毒Chrysanthemum stunt viroid Affected flowers in the foreground are also showing premature opening and colour break. 菊花矮化類病毒Chrysant菊花矮化類病毒 （ Chrysanthemum stunt viroid）Affected flower (right) The flower is reduced in size and showing marked colour bleaching. 菊花矮化類病毒 （ Chrysanthemum stunt 類病毒的主要特性

48、耐熱性:類病毒失活需要100以上的高溫。高侵染活性:50100分子可侵染成功，病毒需100萬粒體。局限的存在部位:僅在細(xì)胞核中。核酸組成相近:G/C比接近，5558%。不顯性感染: 90%以上的寄主都不顯癥，潛育期可長達(dá)幾 個(gè)月至幾年。傳播方式簡單:農(nóng)具、嫁接刀、種子，個(gè)別需節(jié)肢動(dòng)物。（三）類病毒的檢測分兩個(gè)科：馬鈴薯紡錘塊莖科和鱷梨日斑科。不能用生物學(xué)和血清學(xué)方法，只能靠核酸雜交和PCR擴(kuò)增等手段。類病毒的主要特性耐熱性:類病毒失活需要100以上的高溫。第六節(jié) 植物病毒病的診斷 植物病毒病的診斷包括兩個(gè)方面：一是對發(fā)病植物標(biāo)本初步檢查和判斷；二是對確信的病毒病標(biāo)本做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)診斷，必要時(shí)還

49、需作進(jìn)一步的病原鑒定。一、病害初步識別二、實(shí)驗(yàn)室診斷（一）鑒別寄主診斷（二）傳染實(shí)驗(yàn)（三）顯微鏡觀察（四）血清學(xué)技術(shù)（五）核酸雜交及PCR技術(shù)（六）物理化學(xué)特性第六節(jié) 植物病毒病的診斷病毒病害的癥狀：以花葉、矮縮、壞死為多見。無病征。病毒病害的癥狀：以花葉、矮縮、壞死為多見。無病征。（一）鑒別寄主診斷（一）鑒別寄主診斷（二）傳染實(shí)驗(yàn) 不同植物病毒屬具有不同的傳播介體，確定病毒的傳播介體可以作為病原鑒定的一個(gè)證據(jù)，同時(shí)也為防治提供依據(jù)。（三）顯微鏡觀察在光學(xué)顯微鏡下觀察到內(nèi)含體；在電鏡下觀察病毒粒體（二）傳染實(shí)驗(yàn)（四）血清學(xué)技術(shù)瓊脂雙擴(kuò)散法（四）血清學(xué)技術(shù) 酶聯(lián)免疫吸附檢測 酶聯(lián)免疫吸附檢測含3

50、個(gè)種。國際病毒分類委員會(huì)(InternationaI Committee on Taxonomy of Viruses， ICTV) 。非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒核酸編碼的非結(jié)構(gòu)必需的蛋白，包括病毒復(fù)制需要的酶，傳播、運(yùn)動(dòng)需要的功能蛋白等。1 蚜蟲：主要傳播非持久性關(guān)系病毒。以前所知的任何一種都小的病原，3 介體與病毒?；宰R別的可能機(jī)制第一節(jié) 植物病毒的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與組分核酸的復(fù)制和核酸信息的表達(dá)。介體內(nèi)的?；猿侄疚稽c(diǎn)：在介體消化道內(nèi)有一定的待毒位點(diǎn)與所傳病毒有?；P(guān)系。通過胞間連絲，轉(zhuǎn)移慢, 810個(gè)細(xì)胞d（0.（二）無性繁殖材料和嫁接傳播：金屬離子也是許多病毒必須的，主要有鈣離子、鈉離子和鎂離子。

51、野生禾本科植物是病毒的侵染來源。介體傳毒專化性機(jī)制涉及到介體病毒寄主三者的相互識別或作用。DNA病毒(ssDNA病毒和dsDAN病毒)需要寄主的轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄 mRNA。環(huán)境保護(hù)（利用藻類病毒消除水面藻類污染）。干旱少雨發(fā)病重，前茬為茄科植物或油菜、蘿卜發(fā)病重?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)十ssRNA病毒基因組在真核生物蛋白合成系統(tǒng)中有五種翻譯策略：介體內(nèi)的?；猿侄疚稽c(diǎn)：在介體消化道內(nèi)有一定的待毒位點(diǎn)與所傳病毒有?；P(guān)系。阿姆斯特丹的Rijks博物館還保存著一張1619年荷蘭畫師的一幅得病的郁金香靜物畫。通過分子雜交可檢測出相近病毒間的同源程度。不難看出真正發(fā)現(xiàn)病毒存在的是貝葉林克。（五）核酸雜交及PCR技術(shù)血清學(xué)

52、是檢測蛋白，核酸雜交和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR是檢測核酸。核酸雜交：核酸雜交主要在DNA和RNA之間進(jìn)行，因?yàn)槎咧g存在著堿基互補(bǔ)關(guān)系。在一定條件下，RNADNA形成異質(zhì)雙鏈的過程稱為雜交。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片斷叫做雜交探針，也稱為cDNA探針。通過分子雜交可檢測出相近病毒間的同源程度。PCR技術(shù)： PCR是體外基因擴(kuò)增法，可在試管內(nèi)將所研究的目的基因或DNA片斷在數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增上百萬倍。 PCR反應(yīng)最重要的是引物（一般20個(gè)核苷酸長度）和Taq DNA聚合酶。反應(yīng)要經(jīng)過加熱變性-退火結(jié)合-DNA合成這一循環(huán)。退火溫度一般在75度。 PCR可檢測特定DNA是否存在。含3個(gè)種。（五

53、）核酸雜交及PCR技術(shù)（六）物理化學(xué)特性1 稀釋限點(diǎn)(DEP)：保持病毒侵染力的最高稀釋度。 2 鈍化溫度(TIP)：處理十分種使病毒喪失活性的最低溫度。一般在5570，TMV在97。 3 體外存活期(LIP)：在室溫下，病毒抽提液保持侵染力的最長時(shí)間。一般在數(shù)天到數(shù)月。4 沉降系數(shù)（S）：指病毒在20度水中在1達(dá)因的引力下的沉降速度。單位厘米/秒。 5 光譜吸收特性：260/280紫外線峰值比表示核酸與蛋白質(zhì)含量的比值。比值小多為線型。 6 病毒的化學(xué)特性：指核酸的類型、核酸的鏈數(shù)以及分子量（六）物理化學(xué)特性1 稀釋限點(diǎn)(DEP)：保持病毒侵染力的最第七節(jié) 重要的植物病毒屬及典型種1、煙草花葉病毒TMV病毒直桿狀，直徑18nm，長300nm。核酸占5%，蛋白質(zhì)占95%。核酸為 + ssRNA。 寄主范圍廣，傳播不需要介體，靠接觸傳播，有時(shí)靠種子傳播。 TMV體外存或期在幾個(gè)月以上，在干燥的葉片中可以存活50多年。稀釋限點(diǎn)10-410-7，鈍化溫度90左右。