乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證課件

1、乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證1乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證 乙肝表面抗原的課程要求掌握： 乙肝表面抗原的ELISA法定量檢測方法； ELISA法方法學(xué)評價的方法。熟悉： 定量檢測的酶標儀操作要領(lǐng)； 各種緩沖液的配制。了解： ELISA檢測中的影響因素和注意事項。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證2課程要求掌握：乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證2試驗?zāi)康?進行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學(xué)驗證。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證3試驗?zāi)康?進行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的

2、方法學(xué)驗證。 試驗材料 1 試劑盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析試劑盒，福州藍圖生物工程有限公司出品。2 儀器及酶標板酶標儀：Bio-Rad 680 ；洗板機：Bio-Rad 1575；超純水系統(tǒng)：Millipore Elix ；電熱恒溫培養(yǎng)箱(DNP-9052):上海精宏實驗設(shè)備有限公司。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證4 試驗材料 1 試劑盒乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法3 溶液配制0.01M pH7.4的PBS緩沖液： 稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4

3、，最后加蒸餾水定容至1L即可。質(zhì)控品： 用PBS緩沖液將標準品配制成6、3、1.5ng/ml三個質(zhì)控品，每質(zhì)控品1ml。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證53 溶液配制乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證5試驗方法 1 標準曲線各濃度的配制用PBS緩沖液將標準品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625ng/ml。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證6試驗方法 1 標準曲線各濃度的配制乙肝表面抗原的ELISA法2 測定方法 設(shè)計標準品、質(zhì)控品及空白分配方案；取出試劑盒中已包被酶標板，取出板條，按需要重新配制；在相應(yīng)孔中加入系列標準品、質(zhì)控品及空白

4、對照，每孔50ul；37溫育30min，洗板4次；加入酶標抗體，生物素二抗，50 ul/孔；37溫育30min，洗板4次；加入A、B液,50 ul/孔，37溫育15分鐘。加入終止液，50 ul/孔。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證72 測定方法 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證73 標準曲線制作及結(jié)果計算酶標板放入酶標儀，蓋上蓋子；在電腦上打開Microplate Manager 5.2軟件選擇450nm波長（參照波長630nm），設(shè)置LAYOUT和報告模式，測定各孔吸收值；輸入標準品各濃度值，以雙對數(shù)法制備標準曲線，獲取各孔的濃度值，打印標準曲線圖和計算結(jié)果。乙肝表面

5、抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證83 標準曲線制作及結(jié)果計算乙肝表面抗原的ELISA法定量分析ELISA法標準曲線示意圖乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證9ELISA法標準曲線示意圖乙肝表面抗原的ELISA法定量分析4 準確度（回收率）計算 按示例表1樣式列表并計算回收率。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證104 準確度（回收率）計算 乙肝表面抗原的ELISA法定量分VEGFR2-Fc(ng/ml)測定值(ng/ml)回收率(%)平均回收率RR(%)SD(%)2021.765108.825103.1599.1517.78988.94520.301101.50522.61

6、2113.0620.692103.461011.279112.79116.0923.8211.148111.4811.739117.3911.828118.2812.052120.5256.467129.34102.528 15.884.69593.94.41988.385.123102.464.92898.56乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證11VEGFR2-Fc測定值(ng/ml)回收率(%)平均回收率5 按示例表列表并計算精密度 。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證125 按示例表列表并計算精密度 。乙肝表面抗原的ELISA法板內(nèi)精密度VEGFR2-Fc（ng/ml

7、）測定值RSD(%)123452021.76517.78920.30122.61320.69220.6321.838.871011.27911.14811.73911.82812.05211.6090.383.2756.4674.6954.4195.1234.9285.1260.7915.41乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證13板內(nèi)精密度VEGFR2-Fc測定值RSD(%)1234520板間精密度VEGFR2-Fc（ng/ml）測定值RSD(%)2021.76419.26221.5197.78914.76015.63020.30116.95517.86222.61219.64322

8、.16020.69218.14420.43919.3022.3912.381011.27810.09012.17311.1489.92811.86911.73910.45912.55811.82810.47912.45512.05210.70912.58411.4230.917.9756.4765.6886.7344.6954.0634.7864.4173.7884.4935.1234.4635.3244.9284.2735.1354.9590.8316.737乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證14板間精密度VEGFR2測定值RSD(%)2021.7647.6 檢測限（LOD）計算：取空白孔的OD值的均數(shù)加2倍標準差。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證156 檢測限（LOD）計算：乙肝表面抗原的ELISA法定量分注意事項標準品和質(zhì)控品配制要準確。實驗各個環(huán)節(jié)都很重要，每步操作都要認真。乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗證16注意事項標準品和質(zhì)控品配制要準確。乙肝表面抗原的ELISA法討 論1.實驗背景介紹（目的、采用的方法、檢測原理、方法學(xué)驗證的基本知識介紹）2.本實驗的設(shè)計及實施特點3.實驗結(jié)果分析4.臨床應(yīng)用及分析乙肝表面抗原的ELISA法定量