最近頻繁用到酶標(biāo)儀,對OD值和吸光度值(abs)的概念和其線性范圍不甚理

1、最近頻繁用到酶標(biāo)儀 OD 值吸光度值的概念和其線性范圍不甚明白得了多 資料包園子里先輩的總結(jié)和從其他網(wǎng)站上取得的包括我個人的明白得在此做更 全面的總結(jié)（因為園子里的都是 年的老帖子，且不是很全面，呵呵）希望能供戰(zhàn)友們 參考、首先明白什么是朗伯比爾定律朗伯比爾（Lambertbeer）光吸收定律：A cA光度，又稱光密“”。T透光度， TI / I I為照射到吸收池上的光強I為透過吸收池的光強。 摩爾吸光系數(shù)或克分子吸光系數(shù)L?mol樣品光程（常利用 1.0cm 的收地，b=1cm。樣品濃度（mol/L由上式可以看出：吸光度 A 物質(zhì)的吸光系數(shù)和質(zhì)濃“C成比。、OD 值定義OD 值 表某一物質(zhì)在

2、某一個特定波長下的吸光度ABS 是光值 absorbance 的縮寫 在析化學(xué)里,某化學(xué)物質(zhì)都可吸收一定波長的光 ,并且對光的吸收度與此化學(xué)物 質(zhì)的濃度成正比.此可以利用吸光度的大小來測定某種物的濃.其中某物質(zhì)在特定波長下對光的吸收,就是 值一般用經(jīng)過石英管后的光強比上照射到 石英管前的光強來表.、吸光度值）定義吸光度absorbance,是指光線通過溶液或一物質(zhì)前的入射光強度 與該光線通過溶液或物質(zhì) 后的透射光強度比值的對數(shù)，影響它的因素有溶劑、濃度、溫度等等。吸光系數(shù)與入射光的波長以及被光通過的物質(zhì)有關(guān)要光的波長被固定下來一種 物質(zhì)，吸光系數(shù)就不變。當(dāng)一束光通過一個吸光物質(zhì)（通常為溶液）時

3、，溶質(zhì)吸收了光能，光的強度減弱。吸光 度就是用來衡量光被吸收程度的一個物理量。吸光度用 A 表。A，其中 a 為吸光系數(shù)，單位 為層厚度（一樣為比色皿的厚度 位 ， 為液濃度，單 影響吸光度的因數(shù)是 和 c。 是溶質(zhì)有關(guān)的一個常量。此外，溫度通過影響 ，而 影響 A。符號 A表物質(zhì)對光的吸收程度。 97801 式中 I0 是過均勻的液體介質(zhì)的一束平行 光的入射光的強度；It 是射光強度 是透射比A 值大，表示物質(zhì)對光的吸收越大。 根據(jù)比爾定律，吸光度與吸光物質(zhì)的量濃度 成比，以 A 對 c 作，可得到光度分析的 校準(zhǔn)曲線在組分體系中如各組分的吸光質(zhì)點彼此不發(fā)生作用那么吸光度便等于各 組分吸光度

4、之和一律稱吸度的加和性此可以進(jìn)行多組分同時測定及某些化學(xué)反 應(yīng)平衡常數(shù)的測定在光度測中，為抵消吸收池對入射光的吸收射及溶劑試 等對入射光的吸收散等因素可選用雙光束分光光度計選學(xué)性質(zhì)相同厚度相等 的吸收池分別盛待測溶液和參比溶液。、國外資料的權(quán)威總結(jié)Optical can also refer index of refraction.In absorbance A also called optical density is defined as: Awhere I is the intensity of light at a specified wavelength that has pass

5、ed through a sample light I0 the intensity of the light before it enters the sample light intensity (or power). Absorbance measurements are out in analytical since the of proportional to thickness of sample concentration of absorbing in sample, in to the I of a which varies with concentration.Absorb

6、ance transmittanceAbsorbanceTransmittance (I / I0)Percent transmittance (100 * I / I0) 0.1 0.79 79 0.56 560.5 0.32 32 0.18 180.9 0.13 13 0.1 10 0.01 measurement range real instrument a limited range which it can must be calibrated and known if are to trusted. Many will non-linear (fail the Beer-Lamb

7、ert law) starting at Transmission). It is to values (below 10?4) with commercially for In such cases, laser-based can they limits that those obtained conventional of (detections been demonstrated all way down to for most commercially available is in the path length or concentration then, be adjusted

8、 achieve this range.、再看看園子里的精華總結(jié)OD 值 朗伯爾（）光吸收定律：A cA光度，又稱光密“”。T透光度， TI / I I為照射到吸收池上的光強I為透過吸收池的光強。 摩爾吸光系數(shù)或克分子吸光系數(shù)L?mol樣品光程（常利用 1.0cm 的收地，b=1cm。樣品濃度（mol/L由上式可以看出：吸光度 A 物質(zhì)的吸光系數(shù)和質(zhì)濃“C成比。 和 RNA 的 值2.1 原理嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使堿基、核苷、核苷酸和核酸在 的紫外波段有 一強烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性DNA 鈉的紫外吸收在 260nm 近有最大 吸收值（圖 3-25 處為吸收低谷，其吸光率（

9、） A260 表， 是核酸的重要性質(zhì)， 鈉鹽的吸收曲線與 無顯區(qū)別，蛋白質(zhì)在 處最大 的吸收峰，鹽和小分子則集中在 230nm ，對于純的核酸溶液，測定 A260，即可利用核酸 的比吸光系數(shù)計算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系數(shù)是指濃度為 1gmL 的酸水溶液 在 處的吸光率天然狀態(tài)的雙鏈 DNA 的比吸光系數(shù)為 ，性 DNA 和 RNA 的 比吸光系數(shù)為 朗比爾光吸收定律 A-lgTbc 知A/b 一為 1cm 因此常 1OD 值當(dāng)于 gmL 雙螺旋 DNA 40gmL 單旋 DNA（或 RNA 或 g 寡苷酸計算。2.2 純度 和 RNA 的度可以通過測定 和 280nm 的紫外吸收來測定

10、在 ，OD260 應(yīng)于 ，的 RNA 在 ，果 比高于 1.8-1.9，可能有 RNA 沒有去除干凈，如果 DNA 比小于 ，能含有 酚或者蛋白質(zhì)（ 含有酚或者蛋白質(zhì)比值也會降低 230 小 說有 殘存的鹽或小分子雜質(zhì)污染。2.3 濃度 和 RNA 的量，據(jù)朗波爾光吸收定律 A 知量樣品的濃度為 A/b， 又知 1），那么未稀的樣品的濃度為 稀倍數(shù)（）50A稀釋 倍數(shù)1000（）2.4 注意事項： 比杯應(yīng)為石英杯，玻璃杯在此波長時讀數(shù)不準(zhǔn)。 檢時應(yīng)使 值 到 之，數(shù)值比較準(zhǔn)確。 這比值測定的方法僅僅適用于核酸濃度大于 0.25ulml 的時候濃小于 0.25ulml 的時候測量誤差較大。 既有

11、 RNA 又有蛋白質(zhì)也可能使比值維持在 1.8個時候要根據(jù)電情況鑒定是不 是含有 RNA或者測定一下是不是含有蛋白質(zhì)； 比可提供 純度的一個參考，但 比會受 影。如果 未調(diào) ，值可能與實際差別很大。果需要準(zhǔn)確數(shù)值，建議在 10 mM Tris Cl, pH 8.5 中 檢測，此時純凈的 A260/A280 比應(yīng)為 （注意使用同樣緩沖液作為對照 進(jìn) OD 值定時，光光度計上顯示的數(shù)值為每毫升溶液中的 OD 值 可在 之間進(jìn)行掃描，此掃描可以檢測是否有其它因素影響 D260如在 處有吸光值說明有污染物或比色皿不干凈) 的與 nm 處吸光度值OD 值成正比，在引物設(shè)計時1 個 的合 成 DNA 重量

12、約為 33 mg 也有一定量的。細(xì)胞數(shù)量不同，同樣細(xì)胞數(shù)接觸到的 量就不一樣。而 MTT 濃 度越高，細(xì)胞染色越深。所以經(jīng)常遇到這樣的情況，細(xì)胞數(shù)明顯少了，可 測的 值卻一樣如細(xì)心的話你可以現(xiàn)，細(xì)胞少的那組，單個細(xì)胞的染色很深。所以如果細(xì)胞 數(shù)不是有很大的差別 是不出來的。計數(shù)吧，呵呵酶標(biāo)儀也是紫外光譜，紫外的有效測定范圍 ，超出此范圍后雖然可以顯示值，但是 不是呈線性了，就不準(zhǔn)確了。測 時果值超出 1，就應(yīng)該稀釋，用原來的溶劑稀即可。OD 是 optical delnsity光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，是檢測方法里出 現(xiàn)的專有名詞 一般人理解較困 具檢測涉及到很多物理等方面知

13、識 你須知道是陰性 即可光通過被檢測物前后的能量差即是被檢測物吸收掉的能量特定波長下同一種被檢測 物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測單位用 值示， OD 是 optical delnsity（光密度）的縮寫表示被檢測物吸收 掉的光密度， OD（1trans中 為測物的透光值。吸光度吸光度absorbance,是指光線通過溶液或一物質(zhì)前的入射光強度 與該光線通過溶液或物質(zhì) 后的透射光強度比值的對數(shù)，影響它的因素有溶劑、濃度、溫度等等吸光系數(shù)與入射光的波長以及被光通過的物質(zhì)有關(guān)光的波長被固定下來種質(zhì)， 吸光系數(shù)就不變。當(dāng)一束光通過一個吸光物質(zhì)（通常為溶液）時，溶質(zhì)吸收了光能，光的強度減弱。吸光

14、度就 是用來衡量光被吸收程度的一個物理量。吸光度用 A 表。Aabc中 為吸光系數(shù)位 L/(g?cm),b 為液層厚常為比色皿的厚度 cm ， c 為液濃度，單位 g/L影響吸光度的因數(shù)是 和 c 是溶質(zhì)有關(guān)的個常量外度過影響 而影響 A 污細(xì)菌可導(dǎo)致 過。 細(xì)過多一般會減小方差而會增大之因細(xì)胞長滿后， 生長速度會減小，包括腫瘤細(xì)胞。如果 OD 太，可吸出一半溶劑，再加入相同體積溶劑，重測。以減小 OD 值 每的 6 個數(shù)刪 個離群（以是最大值和最小值可以是 最大或 最小 值統(tǒng)計 個。 血不影響 實。但我對 HT-29 不楚。 請考文獻(xiàn)中關(guān)于 HT-29 的 實驗方法。不管做 和過時的 仍是做 、測 純等都會用到酶標(biāo)儀，而且前 都以為 OD 值 之才知足線性關(guān)系我看了一下 T Scientific 酶標(biāo)儀的說明書，里面說 孔只要 吸光度值都知足線性關(guān)系Linearity (Photometry)0 to 4 Abs, (96-well at 450nm, 2%0 to 3 Abs (384-well plate) at 450nm, 2% (Photometry)2% or Abs, w