分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、關(guān)于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)第1頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四基因多態(tài)性多態(tài)性是指在一個(gè)生物群體中，同時(shí)和經(jīng)常存在兩種或多種不連續(xù)的變異型或基因型(genotype)或等位基因(allele)，亦稱遺傳多態(tài)性(genetic polymorphism)或基因多態(tài)性。DNA片段長(zhǎng)度多態(tài)性基因多態(tài)性DNA重復(fù)序列多態(tài)性單核苷酸多態(tài)性 第2頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四DNA片段長(zhǎng)度多態(tài)性(FLP)：即由于單個(gè)堿基的缺失、重復(fù)和插入所引起限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的變化，而導(dǎo)致DNA片段長(zhǎng)度的變化，又稱限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。DNA重復(fù)序列的多態(tài)性(RSP) ：主要

2、表現(xiàn)于重復(fù)序列拷貝數(shù)的變異 ，如小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA。單核苷酸多態(tài)性(SNP) ：即散在的單個(gè)堿基的不同，基因組中單核苷酸的缺失,插入與重復(fù)序列不屬於SNP，但更多的是單個(gè)堿基的置換。 第3頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四CLEC 是C type lectin（C型凝集素）家族基因 CLEC4M基因是19號(hào)染色體上C型凝集素家族中的一員，它被證明是多種傳染性疾病病毒的受體，如HIV-1, SARS-Cov, HCV等。該基因的第4外顯子的VNTR (Variable Number of Tandem Repeats，VNTR )在全球人類群體中存在3-9次重復(fù)的

3、多態(tài)現(xiàn)象，并被認(rèn)為這種不同長(zhǎng)度的多態(tài)可能和宿主對(duì)病毒的易感性有關(guān)。 第4頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四第5頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四CLEC4M 與SARS體內(nèi)存在一種SARS冠狀病毒的受體L-SIGN，由CLEC4M基因所編碼。該基因第4外顯子存在3-9個(gè)69bp的重復(fù)片段，人群中超過50%的人以7個(gè)重復(fù)為主，常見的基因型為7/7，5/5，7/5 等不同的純合或雜合狀態(tài)，這個(gè)重復(fù)區(qū)編碼位于胞外受體的頸部。研究表明，純合型如7/7或 5/5的個(gè)體較雜合型7/5的個(gè)體較少感染SARS病毒。第6頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)

4、13分，星期四CLEC 4M基因序列第7頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四實(shí)驗(yàn)原理原理：用裂解液和蛋白酶K裂解口腔黏膜細(xì)胞，釋放DNA，用濃鹽法沉淀蛋白質(zhì)，離心去除蛋白質(zhì)，再用異丙醇沉淀DNA。裂解液配方：10mM Tris-HCl，10mM KCl, 10mM MgCl2, 2mM EDTA, 0.4M NaCl, 1%SDS.第8頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四第9頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四2PCR mixddH2O引物1，引物22PCR mix 10l引物1，引物2 各0.4lddH2O 6.2l DNA樣

5、品 3l PCR反應(yīng)體系， 總共20 l第10頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四在PCR管蓋上標(biāo)記號(hào)碼，便于辨認(rèn)第11頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四放入PCR儀，并設(shè)置程序變性 95 5min 95 20s30循環(huán) 59 30s 72 45s延伸 72 5min第12頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四PCR過程大概100分鐘第13頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四PCR儀器界面和參數(shù)第14頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四紫外透射分析第15頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四點(diǎn) 樣將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物加入瓊脂糖凝膠孔內(nèi)，點(diǎn)樣量10l第16頁(yè)，共18頁(yè)，2022年，5月20日，11點(diǎn)13分，星期四100bp DNA marker，最亮的為500bp500bp雜合子，根據(jù)位置判斷為589和727bp。雜帶，分子量小，或是引物二聚體結(jié)果分析同學(xué)們，你們的基因是