生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)課件

1、生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私獬Ｓ没瘜W(xué)消毒劑對(duì)微生物的作用 實(shí)驗(yàn)一 化學(xué)因素對(duì)微生物生長的影響常用的化學(xué)消毒劑主要有重金屬及其鹽類、有機(jī)溶劑（酚、醇、醛等）、鹵族元素及其化合物、染色劑和表面活性劑等。2生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?實(shí)驗(yàn)一 化學(xué)因素對(duì)微生物生長的影響常用的化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理：1 氧化劑：通過強(qiáng)烈的氧化作用殺死微生物。 碘的殺菌力強(qiáng)，37碘溶于7083的乙醇中 成碘酒。2 重金屬鹽類：使蛋白質(zhì)變性、沉淀，使酶失活。 00202HgCl2（升汞）溶液對(duì)大多數(shù)細(xì)菌有致死作用。 3生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)原理：3生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)3 有機(jī)溶劑：使蛋白質(zhì)及核酸變性、

2、破壞細(xì)胞膜透性，抑制脫氫酶，氧化酶活性。乙醇（70%）4 表面活性劑：具有降低表面張力效應(yīng)的物質(zhì)，可抑菌或殺菌。甲酚殺菌力最強(qiáng)煤酚皂液（來蘇爾）為甲酚和肥皂的混合液。 新潔爾滅：破壞細(xì)胞的滲透性4生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)3 有機(jī)溶劑：使蛋白質(zhì)及核酸變性、破壞細(xì)胞膜透性，抑制脫氫酶實(shí)驗(yàn)材料1 菌種： 大腸桿菌2 培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基3 消毒劑： 2.5%碘酒，0.5%石碳酸，75%乙醇， 100%乙醇，1%來蘇爾， 0.25%新潔爾滅，無菌生理鹽水5生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)材料1 菌種：5生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)步驟1 倒牛肉膏蛋白胨平板2 取0.2ml大腸桿菌菌液加入平板中，涂布均勻。3

3、將平板(皿底）劃分為6等份，分別將浸有各種消毒劑的小圓濾紙片貼在平板的每一等份中。4 將貼好濾紙片的含菌平板，置37倒置培養(yǎng)24-48h。5 測量并記錄抑菌圈的直徑，根據(jù)其直徑的大小，可初步確定測試藥品的抑菌效能。（自帶尺子）6生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)步驟1 倒牛肉膏蛋白胨平板6生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)培訓(xùn)課件實(shí)驗(yàn)結(jié)果思考題 書p97思考題第11題消毒劑抑（殺）菌圈直徑/mm消毒劑抑（殺）菌圈直徑/mm 2.5%碘酒5%石炭酸（苯酚)100乙醇1%來蘇爾75%乙醇0.25%新潔爾滅8生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果思考題 書p97思考題第11題消毒劑抑（殺）菌圈直實(shí)驗(yàn)二：細(xì)菌的生理

4、生化反應(yīng) （IMViC 與硫化氫試驗(yàn)） 吲哚（I）、甲基紅（M）、V.P.試驗(yàn)（Vi）、檸檬酸鹽利用（C）試驗(yàn)。用以將大腸桿菌與其形狀十分相近的腸桿菌屬的細(xì)菌鑒別開來。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1 學(xué)習(xí)幾種主要微生物的生理代謝試驗(yàn)及檢驗(yàn)方法 認(rèn)識(shí)微生物代謝類型的多樣性。 2 了解IMViC反應(yīng)在腸道菌鑒定中的意義和方法 9生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)二：細(xì)菌的生理生化反應(yīng)9生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)原理： 1 吲哚試驗(yàn) ： 用來檢測吲哚的產(chǎn)生，有些細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙氨酸。吲哚 + 對(duì)二甲基氨基苯甲醛 紅色的玫瑰吲哚色氨酸吲哚玫瑰吲哚 吲哚試劑10生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)原理：色氨

5、酸吲哚玫瑰吲哚10生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)2 甲基紅試驗(yàn)（M.R） ：大腸桿菌與產(chǎn)氣腸桿菌在利用葡萄糖進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，前者可產(chǎn)生大量的混合酸，使pH4.5；后者則產(chǎn)生大量的中性化合物丁二醇，pH4.5，因此在發(fā)酵液中加入甲基紅試劑時(shí)，前者呈紅色，后者呈黃色。11生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)2 甲基紅試驗(yàn)（M.R） ：11生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí) 葡萄糖 乳酸 丙酮酸乙醛 乙酰CoA 甲酸乙醇 乙酰乳酸 二乙酰 3-羥基丁酮 2,3-丁二醇CO2 H2-乙酰乳酸合成酶-乙酰乳酸脫羧酶2,3-丁二醇脫氫酶一些細(xì)菌具有-乙酰乳酸合成酶系而進(jìn)行丁二醇發(fā)酵。EMP產(chǎn)氣桿菌大腸桿菌大腸桿菌3 V.P.試驗(yàn)堿性條件 氧紅色化合

6、物（與培養(yǎng)基中精氨酸的胍基結(jié)合）發(fā)酵途徑：12生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí) 葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 二乙酰紅色化合物 + 胍基化合物葡萄糖丙酮酸 大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌13生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 二乙酰紅色化合物 +4 檸檬酸鹽利用試驗(yàn)：有些細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌能利用檸檬酸鹽作為碳源，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的 pH 升高，當(dāng)加入溴麝香草酚藍(lán)指示劑時(shí)，培養(yǎng)基會(huì)由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。14生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)4 檸檬酸鹽利用試驗(yàn)：有些細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌能利用檸檬酸鹽作為I M Vi C試驗(yàn)VP testCitrate utilization testIndol testMethyl test I

7、M Vi C大腸桿菌 + + 產(chǎn)氣腸桿菌 + +常用于腸道桿菌的鑒定15生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)I M Vi C試驗(yàn)VP testCitrate utili5 硫化氫試驗(yàn)：有些細(xì)菌能分解含硫的氨基酸，產(chǎn)生硫化氫，當(dāng)其遇到培養(yǎng)基中的鉛或鐵鹽時(shí)，形成黑色的沉淀物。16生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)5 硫化氫試驗(yàn)：有些細(xì)菌能分解含硫的氨基酸，產(chǎn)生硫化氫，當(dāng)其實(shí)驗(yàn)材料菌種： 大腸桿菌 、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌培養(yǎng)基： 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗(yàn)） 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗(yàn)和伏普試驗(yàn)）檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基、醋酸鉛培養(yǎng)基（硫化氫試驗(yàn)）17生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)材料菌種：17生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)步驟一 接種與培養(yǎng)1

8、 用接種針將大腸桿菌 、變形桿菌分別穿刺接入2支醋酸鉛培養(yǎng)基2 將大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗(yàn)）、 4支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗(yàn)和V.P.試驗(yàn)）中，置37培養(yǎng)24 -48h 。3 檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基4 對(duì)照（所有同學(xué)共用）二 結(jié)果觀察(時(shí)間)18生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)實(shí)驗(yàn)步驟一 接種與培養(yǎng)18生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)2、學(xué)生按實(shí)驗(yàn)書所介紹的操作方法進(jìn)行生化反應(yīng)試驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn) 結(jié)果填入下表中（六人一組結(jié)果共享）菌種吲哚試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)V.P.試驗(yàn)H2S試驗(yàn)檸檬酸鹽大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌變形桿菌）3 思考題：見書p120思考題第1題19生理生化主題醫(yī)學(xué)知識(shí)2、學(xué)生按實(shí)驗(yàn)書所介紹

9、的操作方法進(jìn)行生化反應(yīng)試驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn) 硫化氫試驗(yàn) 培養(yǎng)24h后觀察黑色硫化鐵的產(chǎn)生。吲哚試驗(yàn) 在培養(yǎng)24h后的蛋白胨水培養(yǎng)基中加入3-4滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置1-3min，待乙醚上升后，沿試管徐徐加入2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。甲基紅試驗(yàn) 在培養(yǎng)24h后的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變紅者為陽性，變黃者為陰性。（注意：甲基紅試劑加得過多，可出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。）伏普試驗(yàn) 在培養(yǎng)24h后的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入510滴40KOH，然后加入等量的5-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37溫箱中保溫1530分鐘。反應(yīng)物呈紅色者，為伏普反應(yīng)陽性。培養(yǎng)48h后觀察檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基上是否有細(xì)菌生長和是否變色，藍(lán)色為陽性，綠