基因工程試題

1、基因工程試卷 B一名詞解釋 （每個 2 分，共 20 分）1、轉(zhuǎn)化 :2、質(zhì)粒轉(zhuǎn)移性 :3、 DNA 文庫 :4、 RACE:5、選擇標記基因 :6、降落 PCR7、載體 :8、感受態(tài)細胞 :9CaMV35s:10、ORF:二、選擇題（每題1 分，共 15 分）1() 限制性核酸內(nèi)切酶是由細菌產(chǎn)生的，其生理意義是A 修復自身的遺傳缺陷B 促進自身的基因重組C 強化自身的核酸代謝D 提高自身的防御能力2()生物工程的下游技術(shù)是A 基因工程及分離工程B 蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程C 基因工程及蛋白質(zhì)工程D 分離工程 及蛋白質(zhì)工程3( )基因工程操作常用的酶是 :(I 內(nèi)切酶 II 連接酶 III 末端轉(zhuǎn)

2、移酶 IV 聚合酶A.I+IIB.I+III+IVC.II+III+IVD.I+II+IV+III4 ()限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指：A 在非常規(guī)條件下，識別和切割序列也不發(fā)生變化的活性。B 活性大大提高C 切割速度大大加快D 識別序列與原來的完全不同5()下列五個 DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ()關(guān)于 cDNA 的不正確的提法是：A 同 mRNA 互補的單鏈 RNAB 同 mRNA 互補的含有內(nèi)含子的DNAC 以 mRNA 為模板合成的雙鏈RNA以上

3、都不正確7 ()下列有關(guān)連接反應的敘述，錯誤的是A. 連接反應的最佳溫度為37 B. 連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于 10%C. 連接反應緩沖體系的ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應過量 2-5 倍8 () T 4 -DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團是A. 2 -OH 和 5 PB. 2 -OH和 3-PC. 3 -OH 和 5 PD. 5 -OH和 3-P( )載體的功能是外源基因進入受體的搭載工具不能為外源基因提供整合能力不能提供復制能力不能為外源基因提供表達能力10 () 黏性末端連接法，不僅操作方便，而且A 產(chǎn)生新切點B 易于

4、回收外源片段C 載體不易環(huán)化D 影響外源基因的表達11 ()下列哪種克隆載體對外源DNA 的容載量最大 ?質(zhì)粒黏粒酵母人工染色體 (YAC)D噬菌體12 ()考斯質(zhì)粒（ cosmid）是一種容量最大一種載體由 -DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C.是一種單鏈 DNA 環(huán)狀載體不能在受體細胞內(nèi)復制，但可以表達13 ( )某一重組 DNA 的載體部分有兩個 BamHI 酶切位點。用 BamHI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的BamHI 酶切位點共有A.4 個B.3 個C.1 個D. 2個14()下列哪一種酶作用時需要引物?A 限

5、制酶B 末端轉(zhuǎn)移酶C 反轉(zhuǎn)錄酶D DNA連接酶15 用下列方法進行重組體的篩選，只有()說明外源基因進行了表達。(a)Southem印跡雜交(b)Northem 印跡雜交(c)Western 印跡(d)原位菌落雜交三、簡答題（每題5 分，共 25 分）1、簡述獲得目的基因常用的幾種方法。2、什么是 - 互補篩選？3、簡述酶切反應體系及反應條件？4、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？5、限制性核酸內(nèi)切酶有幾種類型？常用是哪種類型并簡述其特性。四、論述題（每題10 分，共 40 分）論述重組子的篩選和鑒定常用的方法?；蚬こ袒静僮鞒绦?。3 試述 5RACE 技術(shù)原理和方法試舉例說明基因工程中為什么常用大

6、腸桿菌作為工程菌？基因工程試題標準答案及評分標準 B 一、選擇題（每題 1 分，共 15 分）1、D2、A3、A4、D 5、D6、C 7、A8、C9、D10、C11、C12、 B13、D14、C 15、C二、名詞解釋（每題2 分，共 20 分）1、嚴格地說是指感受態(tài)的大腸桿菌細胞捕獲和表達質(zhì)粒載體 DNA 分子的生命過程2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA 文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、RACE ：是一種通過 PCR 進行 cDNA 末端快速克隆的技術(shù)， 是以 mR

7、NA 為模，板反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 第一鏈后用 PCR 技術(shù)擴增出某個特異位點到 3 或 5 端之間未知序列的方法。5、基因文庫：通過克隆方法保存在適當宿主中的某種生物，組織，器官或細胞類型的所有 DNA 片段而構(gòu)成的克隆集合體。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA ，以寡聚 dT 為引物合成 cDNA 第一鏈，然后用已知一對引物，擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、載體：指基因工程中攜帶外源基因進入受體細胞的運載工具， 它的本質(zhì)是 DNA 復制子。8、S-D 序列：在大腸桿菌mRNA 的核糖體結(jié)合位點上，含有一個轉(zhuǎn)譯起始密碼，子及同 16S 核糖體 RNA 3 末端堿基互補的序列

8、， 該序列最初由 Shine 、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為 Shine Dalgarno 序列，簡稱 S-D 序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復制起點的選擇標記，因而可在兩種不同宿主細胞中存活和復制的質(zhì)粒載體。10、MCS：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點的 DNA 片段。三、簡答題（共25 分，每題 5 分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達時， 常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在， 這種晶狀體即包涵體。 包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現(xiàn)象， 這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合， 而不是形成成熟的天然

9、態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、什么是 - 互補篩選？lac），當外源插入到它的 lac，質(zhì)粒載體具有 - 半乳糖苷酶基因（ZDNAZ可造成表達后的 - 半乳糖苷酶失活，利用這一點就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有 X-gal-IPTG 培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有 lac Z 基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lac Z 基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實現(xiàn)互補的現(xiàn)象叫 互補。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA 樣品的純度。DNA 的甲基化程

10、度。酶切反應的溫度與時間。DNA 分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應緩沖液。4、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？核酸提取與純化核酸的檢測與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交5、基因工程誕生的理論基礎是什么？是現(xiàn)代分子生物學領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：證實了 DNA 是遺傳物質(zhì)揭示了 DNA 分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復制機理遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA 切割DNA 連接酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA 片段的連接基因工程載體的研究與應用四、問答題（每題10 分，共 40 分）1 如何有效地提高外源基因的表達效率？提高啟動子強度縮短

11、啟動子同克隆基因間距離高效的翻譯起始序列高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整 SD序列與 AUG間的距離用點突變的方法改變某些堿基增加 mRNA的穩(wěn)定性的 減輕細胞的代謝負荷： 誘導表達表達載體的誘導復制 提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達融合蛋白采用某種突變菌株表達分泌蛋白質(zhì)試述載體構(gòu)建一般方法目的基因分析（ 1） ORF 分析（ 2）酶切位點分析載體選擇與分析（ 1）多克隆位點分析（ 2）抗性標記分析（ 3）啟動子與其他篩選標記分析連接體系與連接時間確定試述 5RACE 技術(shù)原理和方法PCR用于擴增代表 mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點與其3或

12、5末端之間區(qū)域的部分 cDNA稱為快速擴增 cDNA末端技術(shù)（RACE）。如果已知 mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設計基因特異引物，用原先存在的 poly(A) 尾（ 3末端）或附加的同聚尾（ 5末端）互補的序列做末端引物，就可以獲得從未知末端直到已知區(qū)域的部分 cDNA序列。為獲得 5末端部分 cDNA克隆需用基因特異引物，產(chǎn)物第一鏈產(chǎn)物，可用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶及 dATP加 poly(A) 尾。通過 QT引物和反轉(zhuǎn)錄使用的上游基因特異引物生成第二鏈 cDNA。大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點是什么？優(yōu)點：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎生物學、分子遺傳學等方面的背景知識清楚， 對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解， 而且歷經(jīng)二十年的基因工程實踐， 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系， 有多種適