益壽飲抗D半乳糖所致衰老作用研究

1、益壽飲抗D-半乳糖所致衰老作用研究【摘要】目的討論益壽飲延緩D-半乳糖所致衰老作用機理。方法采用小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖溶液制備小鼠亞急性衰老模型，空白對照組、模型對照組、陽性對照組維生素E20g/kg和3個不同劑量的益壽飲給藥組1，2，3g生藥/kg分別灌胃45d后，測定小鼠脾臟指數(shù)和全血中過氧化氫酶AT、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px活力。結(jié)果益壽飲高、中、低3個劑量組及陽性對照組均能顯著進步亞急性衰老小鼠脾臟指數(shù)和全血中AT和GSH-Px活力P0.05，P0.01。結(jié)論益壽飲對于D-半乳糖誘發(fā)的亞急性衰老模型有明顯的延緩衰老作用?！娟P(guān)鍵詞】益壽飲延緩衰老；脾臟指數(shù)；過氧化氫酶；谷胱甘

2、肽過氧化物酶Abstrat：bjetiveTinvestigatetheantiagingeffetf“YiShuYininagingieinduedbyD-galatse.ethdsThesubauteagingdelasestablisnedbysubutaneusinjetinfD-galatsedailyfrnseutive45daysalngthebakie.nralgrup,delgrup,psitivedruggrup(VitaineE20g/kg)andthreedifferentdsesf“YiShuYin(1grudedrug/kg,2grudedrug/kg,3grude

3、drug/kg)grupsereintragastriallyadinisteredfr45days.Theindexesfspleen,thelevelsfatalase(AT)andglutathineperxidese(GSH-Px)inblderedeteted.Resultsparedithdelgrup,threedsesf“YiShuYinandthepsitivedrugiprvedtheativitiesfATandGSH-PxinbldrearkablyP0.05，P0.01),andtheindexesfspleenin“YiShuYingrupsandthepsitiv

4、edruggrupereinreased.nlusin“YiShuYinshsagdantiagingatinnthesubauteagingdelinduedbyD-galatse.Keyrds：YiShuYin;Antiaging;IndexfSpleen;atalase;GlutathinePerxidese中藥益壽飲由蓮子、山藥等假設(shè)干味中藥提取制備而得。根據(jù)查閱相關(guān)書籍及文獻資料，該方中各味藥物均具有一定的益氣養(yǎng)陰、延緩衰老作用。為了系統(tǒng)地研究該復(fù)方中藥提取液的延緩衰老作用，筆者考察了益壽飲提取液對D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠的脾臟指數(shù)、全血中過氧化氫酶AT和谷胱甘肽過氧化物酶GSH

5、-Px活力的影響，從而對益壽飲提取液延緩衰老的效果及作用機理進展初步討論。1材料與儀器1.2藥物益壽飲提取液：由中藥蓮子、山藥等按照處方經(jīng)水提取后濃縮制備，本實驗室自制；陽性藥物維生素E膠丸批號20220124，由北京雙鶴藥業(yè)消費；D-半乳糖批號20221201，購自北京化學(xué)試劑公司。1.3試劑AT試劑盒批號：20220518、GSH-Px試劑盒批號：20220519，均由南京建成生物工程研究所消費。1.4儀器752-紫外光柵分光光度計，上海分析儀器總廠制造；AE100電子天平，梅特勒-托利多儀器；LD5-2A離心機，北京醫(yī)用離心機廠。2方法2.1動物分組與給藥劑量將安康二級昆明種小鼠隨機分成

6、6組：空白對照組，模型對照組，益壽飲低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，各組小鼠皮下注射及灌胃劑量見表1。各組動物連續(xù)給藥45d，第46天準(zhǔn)確稱取小鼠體質(zhì)量后，摘除眼球取血，待測AT和GSH-Px活力；取血后將小鼠脫臼處死，別離小鼠脾臟，計算小鼠脾臟指數(shù)。表1各組實驗動物分組及給藥劑量略2.2測定指標(biāo)及測定方法2.2.1脾臟指數(shù)記錄小鼠脾臟重量及體質(zhì)量，按照下面公式計算脾臟指數(shù)。脾臟指數(shù)=脾臟重量/g體質(zhì)量/g2.2.2全血中AT測定方法取小鼠新穎血液20l，加雙蒸水980l，混勻配成149的溶血液，按照試劑盒說明書進展測定。2.2.3全血中GSH-Px測定方法取小鼠新穎血液10l，加雙

7、蒸水1490l，混勻配成1149的溶血液，充分混勻后，放置5in直至玻璃管中的溶血液對光呈完全透明狀，按照試劑盒說明書進展測定。2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)用Statistia6.0軟件進展統(tǒng)計學(xué)處理。3結(jié)果3.1益壽飲對小鼠脾臟指數(shù)的影響由表2數(shù)據(jù)可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液100g/kg體質(zhì)量45d后，模型對照組小鼠脾臟指數(shù)明顯低于空白對照組，證明皮下注射D-半乳糖溶液制備得到的亞急性衰老小鼠模型具備自然衰老小鼠的特征，而3個給藥劑量組及陽性對照組與模型對照組相比，小鼠脾臟指數(shù)分別進步了14.44%，21.04%，23.39%和14.43%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，空白對照組、陽性對照組、益壽飲中

8、劑量組、益壽飲高劑量組與模型對照組之間均有顯著性差異P0.05，其中空白對照組、益壽飲中劑量組和高劑量組與模型對照組之間有極顯著差異P0.01；空白對照組與陽性對照組、益壽飲低劑量組之間有顯著差異P0.05，其余各組之間均無顯著性差異P0.05。表2各組動物給藥后脾臟指數(shù)變化略3.2益壽飲對小鼠全血中AT和GSH-Px的影響由表3數(shù)據(jù)可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液100g/kg體質(zhì)量45d后，模型對照組小鼠全血中AT和GSH-Px活力明顯降低降低百分率為67.88%和37.60%，而3個給藥劑量組及陽性對照組與模型對照組相比，小鼠全血中AT活力分別進步了110.54%，154.31%，190

9、.70%和238.83%；GSH-Px活力分別進步了36.18%，38.43%，48.28%和35.17%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，空白對照組、陽性對照組及益壽飲低、中、高3個給藥劑量組與模型對照組全血中AT活力均有極顯著性差異P0.01；益壽飲低劑量組、中劑量組與陽性對照組有顯著性差異P0.05，其中低劑量組與陽性對照組之間有極顯著性差異P0.01；空白對照組與低劑量組、中劑量組有極顯著性差異P0.01；低劑量組與中劑量組、高劑量組之間均有顯著性差異P0.05，其中低劑量組與高劑量組之間有極顯著性差異P0.01，其余各組互相之間均無顯著性差異P0.05。表3各組動物給藥后全血中AT和GSH-Px活力變

10、化略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.4討論衰老一般是指機體生長發(fā)育成熟后，機體的生理功能逐漸下降，組織器官逐步發(fā)生退行性改變，并最終走向死亡的過程。衰老雖然是一切生物開展的自然規(guī)律，而且具有不可逆性，但是在一定條件下，衰老的速度是可以減慢的。從古至今，人們一直在探究衰老的機制，試圖延緩衰老。到目前為止，有關(guān)衰老的學(xué)說有很多，有代表性的有自由基學(xué)說1、免疫學(xué)說2、線粒體學(xué)說3、內(nèi)分泌功能減退學(xué)說4、端粒學(xué)說5等。本文從自由基和免疫學(xué)說兩方面對益壽飲延緩衰老的作用機理進展了初步討論。脾臟是細胞成熟分化成漿細胞的重要器官，反映體液免疫的功能，同時，脾臟還具有內(nèi)分泌功能，是機體免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)環(huán)路中心

11、的一個重要組成局部6。此外，脾臟是機體最大的周圍淋巴器官，由白髓和紅髓組成：白髓是密集的淋巴組織，圍繞中央靜脈而分布，由動脈周圍淋巴鞘和脾小結(jié)組成，動脈周圍淋巴鞘主要由大量T細胞構(gòu)成，是脾內(nèi)的胸腺依賴區(qū)，脾小結(jié)主要由B細胞構(gòu)成；紅髓由脾索和脾血竇組成。在人類，65歲以上老人免疫系統(tǒng)功能下降同時，脾生發(fā)中心數(shù)量和體積比2630歲年輕人明顯減少；大于22月齡小鼠脾內(nèi)生發(fā)中心數(shù)量及其內(nèi)的細胞數(shù)減少60%95%7。隨年齡的增長，白髓和紅髓之間界限不清，白髓所占比例減小，脾小結(jié)不明顯，免疫才能隨之下降。本實驗中模型對照組小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖溶液促其衰老，也表現(xiàn)了這一組織學(xué)特征。而給藥組小鼠在注射

12、D-半乳糖同時，用益壽飲提取液或維生素E混懸液灌胃，其脾臟重量明顯高于模型對照組，證明其脾小結(jié)明顯多于模型對照組，動脈周圍淋巴鞘明顯，生發(fā)中心數(shù)量較多。說明益壽飲對亞急性衰老小鼠脾臟組織構(gòu)造的衰退起到了抑制作用，即對老齡小鼠的脾組織起到了一定的保護作用，使之與空白對照組即青年小鼠的組織構(gòu)造類似8。過氧化氫酶AT是細胞內(nèi)的一種抗氧化酶，它分布在紅細胞、肝及腎的細胞中，它可以消除細胞新陳代謝的副產(chǎn)物過氧化氫。過氧化氫又名“雙氧水，它是活潑的強氧化劑，能引起氧化反響破壞細胞的新陳代謝過程，同時又會產(chǎn)生一系列新的氧化性活潑物質(zhì)即自由基。由華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授彼得拉比諾維奇指導(dǎo)的這個研究小組發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)

13、過氧化氫酶增加的實驗鼠，壽命比對照組的實驗鼠都有不同程度的增加。特別是細胞線粒體內(nèi)增加過氧化氫酶的實驗鼠，平均壽命到達4個半月，比對照組的實驗鼠延長了20%。研究人員還發(fā)現(xiàn)，線粒體內(nèi)過氧化氫酶增加的實驗鼠，心肌纖維遠比對照組的實驗鼠安康，這說明過氧化氫酶保護了心肌細胞不發(fā)生衰老引起的病變。同時，這些實驗鼠的細胞線粒體突變更少，基因中發(fā)生氧化的局部也更少。拉比諾維奇說，新研究成果的意義首先在于支持了自由基引起衰老的理論。這一理論認為，衰老首先是機體在細胞程度上受自由基損害的結(jié)果，自由基能干擾細胞的新陳代謝過程，損害基因，進而引起心臟并癌癥等，假如能保護細胞不受自由基的損害，那么不僅可以預(yù)防衰老相

14、關(guān)的疾病，還可以延緩衰老進程。其次，新研究成果證明了線粒體在衰老過程中的關(guān)鍵作用，提醒了衰老發(fā)生的步驟。線粒體是細胞的“能源工廠，在生成細胞能源的過程中會產(chǎn)生大量自由基，因此，在線粒體這個“源頭上防止自由基生成，將是延長壽命最有效的方法。本實驗中，通過頸背部皮下注射D-半乳糖溶液造成的亞急性衰老小鼠模型全血中AT活力明顯低于空白對照組即正常青年小鼠，而通過灌胃給予益壽飲提取液以后，可以拮抗AT活力下降，使其維持在與正常小鼠大致一樣的程度，與陽性對照藥物相差不大，證明益壽飲提取液可以通過進步衰老小鼠體內(nèi)AT活力來起到延緩衰老的作用。GSH-Px是機體內(nèi)重要的抗氧化酶類之一，它對由活性氧和羥自由基H-誘發(fā)的脂質(zhì)氫過氧化物L(fēng)H有很強的去除才能，可催化LH復(fù)原為帶有羥基的脂質(zhì)LH，也可催化過氧化氫的分解9。在細胞質(zhì)中，GSH-Px一局部存在于線粒體內(nèi)，在線粒體及胞漿中所產(chǎn)生的過氧化氫?？縂SH-Px