醫(yī)學實驗室生物安全(附件)課件

1、醫(yī)學實驗室生物安全醫(yī)學實驗室生物安全本標準規(guī)定了微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全防護的基本原則、實驗室的分級、各級實驗室的基本要求。本標準為最低要求。本標準適用于疾病預(yù)防控制機構(gòu)、醫(yī)療保健、科研機構(gòu)?？倓t本標準規(guī)定了微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全防護的基本原則、實定 義實驗室生物安全防護：實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微生物及其毒素時，通過在實驗室設(shè)計建造、使用個體防護裝置、嚴格遵從標準化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染。定 義實驗室生物安全防護：實驗室工作人員所處理的實驗對象含有當建設(shè)使用傳染性或有潛在傳染性材料的實

2、驗室前，必須進行微生物危害評估。應(yīng)依據(jù)傳染性微生物致病能力的程度、傳播途徑、穩(wěn)定性、感染劑量、操作時的濃度和規(guī)模、實驗對象的來源、是否有動物實驗數(shù)據(jù)、是否有有效的預(yù)防和治療方法等諸因素進行微生物危害評估。通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安全防護實驗室中進行操作根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。微生物危害評估當建設(shè)使用傳染性或有潛在傳染性材料的實驗室前，必須進行微生物第一類，不引起健康成年人疾病第二類，可通過破損皮膚、消化道及粘膜暴露等方式引起人類疾病第三類，本土或外來的微生物，通過吸入途徑暴露時可以造成嚴重或

3、潛在致死性疾病第四類，可以引起嚴重且威脅生命的人類疾病，可通過氣溶膠傳播，或相關(guān)的傳播危險性不明的微生物生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。美國CDC/NIH對微生物指導(dǎo)性分類Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th Edition, May 1999 第一類，不引起健康成年人疾病美國CDC/NIH對微生物指導(dǎo)性實驗室生物安全防護的基本原則實驗室生物安全防護的內(nèi)容包括安全設(shè)備、個體防護裝置和措施（一級屏障），實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)要求（二級屏障），嚴格的管理制度和標準化的操作程序及

4、規(guī)程。應(yīng)將每一特定實驗室從立項、建設(shè)到使用維護的全過程中有關(guān)生物安全防護綜合措施的內(nèi)容編入各實驗室的生物安全手冊中。必須設(shè)有專職的生物安全負責人。生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。實驗室生物安全防護的基本原則實驗室生物安全防護的內(nèi)容包括安安全設(shè)備和個體防護是確保實驗室工作人員不與致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。生物安全柜是最重要的安全設(shè)備，形成最主要的防護屏障。實驗室應(yīng)按要求分別配備、級生物安全柜。所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產(chǎn)生氣溶膠的操作，除實際上不可實施外，都必須在生物安全柜內(nèi)進行。不得用超凈工作臺代替生物安全柜。安全設(shè)備和個體防護（一級屏

5、障）安全設(shè)備和個體防護是確保實驗室工作人員不與致病微生物及其毒素必要時實驗室應(yīng)配備其它安全設(shè)備，如設(shè)置配有排風凈化裝置的排氣罩等，或采用其它不使致病微生物逸出確保安全的設(shè)備。實驗室所配備的離心機應(yīng)在生物安全柜或其它安全設(shè)備中使用，否則必須使用安全密封的專用離心杯。必須給實驗室工作人員配備必要的個體防護用品，如個人防護服、防毒面具、安全眼鏡或眼罩。安全設(shè)備和個體防護（一級屏障）必要時實驗室應(yīng)配備其它安全設(shè)備，如設(shè)置配有排風凈化裝置的排氣生物安全柜（biosafety cabinet） 處理危險性微生物時所用的箱型空氣凈化安全裝置。 I類生物安全柜（class I biosafety cabine

6、t） 至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)時保證工作人員不受侵害，但不保證實驗對象不受污染。生物安全柜生物安全柜（biosafety cabinet）生物安全柜類生物安全柜（class biosafety cabinet） 至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時既保證工作人員不受侵害，又保證實

7、驗對象不受污染。類生物安全柜三、CLASS II 二級生物安全柜 CLASS II 級生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流 分配不同主要是外排氣流不同分為： A型:（30%排在室內(nèi) ） B型: B1 （70%接管道外排） B2 （100%接管道外排） B3 （30% 接管道外排）三、CLASS II 二級生物安全柜 CLASS II A 生物安全柜 由向下的氣流和從開口處向內(nèi)進入的氣流混合后部分經(jīng)HEPA高效過濾形成向下的氣流進入工作區(qū)，部分（30%氣流）經(jīng)HEPA過濾后外排在室內(nèi)； 允許經(jīng)HEPA過濾的外排氣流在實驗室內(nèi)排放； CLASS II A 生物安全柜CLASS II B1生物安全柜 經(jīng)過HE

8、PA高效過濾的向下氣流大部分由未經(jīng)污染的向內(nèi)進入的氣流和循環(huán)氣流組成 大部分被污染的向下的氣流（70%）通過專用的管道經(jīng)HEPA過濾后接管道外排至室外；CLASS II B1生物安全柜 經(jīng)過HEPA高效CLASS II B2生物安全柜 來自實驗室內(nèi)或室外的經(jīng)過HEPA過濾的向下氣流 （即：向下的氣流中沒有在安全柜內(nèi)循環(huán)的氣流）； 所有向內(nèi)進入的氣流和向下的氣流均通過HEPA過濾后排到室外而不在柜內(nèi)循環(huán)，也不能排入實驗室；100%接管道外排。 所有的被污染的管道和氣流通道都在負壓狀態(tài)下或被直接外排的負 壓管道或氣流管道所包圍。 CLASS II B2生物安全柜3.3CLASS II B3生物安全

9、柜 經(jīng)過HEPA過濾后的向下氣流是由共用外排風道中的向下的氣流和內(nèi)向氣流組成； 全部外排到室外的氣流（30%）均經(jīng)過HEPA高效過濾 它與CLASS II A型氣流方向相同，但與CLASS A型不同的是，它30%外排氣是接管道排到室外的。 3.3CLASS II B3生物安全柜 經(jīng)過HE類生物安全柜（class biosafety cabinet） 至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。正面上部為觀察窗，下部手套箱式操作口。箱內(nèi)對外界保持負壓可確保人體與柜內(nèi)物品完全隔絕。類生物安全柜（class biosafety cabiCLASS III

10、生物安全柜 全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風柜 通過與柜體聯(lián)結(jié)的橡膠手套進行操作；柜內(nèi)保持至少120Pa的負壓(0.50wg)；供氣通過HEPA抽入內(nèi)；外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。 CLASS III生物安全柜 全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通管理制度實驗室內(nèi)設(shè)置和準入在主實驗室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)非實驗有關(guān)人員和物品不得進入實驗室實驗室工作人員、外來合作者、進修和學習人員在進入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準管理制度實驗室內(nèi)設(shè)置和準入實驗室工作人員資格和培訓(xùn)實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨立工作前須在中高級實驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進行上崗培訓(xùn)

11、，達到合格標準，方可開始工作實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程實驗室工作人員資格和培訓(xùn)實驗室特殊管理對可能的危險因素，制定保證安全的工作程序事前進行有效的培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練對于意外事故要能夠提供包括緊急救助或?qū)I(yè)性保健治療的措施，足以應(yīng)付緊急情況實驗室事故處理及上報實驗室特殊管理實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學的普通微生物實驗室等。包含微生物舉例 大腸桿菌 格魯伯耐格里原蟲 感染性犬肝炎病毒 枯草桿菌一級生物安全防護實驗室實驗室結(jié)構(gòu)

12、和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已實驗室應(yīng)設(shè)洗手池（靠近出口處）實驗室圍護結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯實驗室中的家具應(yīng)牢固。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺（架）實驗臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗一級生物安全防護實驗室實驗室設(shè)計及建造實驗室應(yīng)設(shè)洗手池（靠近出口處）一級生物安全防護實驗室實驗室設(shè) 工作過程中禁止非工作人員進入實驗室。接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及存儲食物一級生物安全防護實驗室標準微生物操作規(guī)程 工作過程中禁止非工作人員進入實驗室。一級

13、生物安全防護實驗室使用機械移液器吸取液體，禁止口吸制定尖銳器具的安全操作規(guī)程按照實驗室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室前須進行滅活（如高壓）。需運出實驗室滅活的物品必須放在專用密閉容器內(nèi)。一級生物安全防護實驗室標準微生物操作規(guī)程一級生物安全防護實驗室標準微生物操作規(guī)程一級生物安全防護實驗室 安全設(shè)施和個體防護一般無須使用生物安全柜等專用安全設(shè)備工作人員在實驗室應(yīng)穿工作服，帶防護眼鏡工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應(yīng)戴手套一級生物安全防護實驗室 安全設(shè)施和個體防護實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或

14、環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。包含微生物舉例 麻疹病毒 沙門氏菌 乙型肝炎病毒 HIV 血清學檢測 衣原體 志賀氏菌二級生物安全防護實驗室實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有設(shè)計和建造的特殊要求 消毒設(shè)施（高壓滅菌鍋、化學消毒裝置等） 洗眼裝置 可自動關(guān)閉的門鎖 門口有發(fā)光指示裝置 換氣裝置（3-4次/小時）設(shè)計和建造的特殊要求滿足一級實驗室 (標準微生物操作規(guī)程) 各款要求，在此基礎(chǔ)上特別注意制定出入制度實驗室人口貼上生物危險標志制定實驗室特定的生物安全操作規(guī)則每年一次最新培訓(xùn)制度二級生物安全防護實驗室特殊微生物操作規(guī)程生物危險級滿足一級實驗室 (標準微生物操作規(guī)程)

15、 各款要求，二級生物安 禁止用手處理破碎的玻璃器具。二級生物安全防護實驗室特殊微生物操作規(guī)程使用塑料器材代替玻璃器材。 培養(yǎng)基、組織、體液及其它具有 潛在危險性的廢棄物須放在防漏的容器中儲存、運輸及消毒、滅菌 禁止用手處理破碎的玻璃器具。二級生物安全防護實驗室特殊用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射器取下。用過的針頭必須直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運送到特定區(qū)域消毒，最好進行高壓消毒用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射醫(yī)學實驗室生物安全(附件)課件工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測 (如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要時收

16、集從事危險性工作人員的本底血清嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測 HIV 抗體和備案制度。每半年進行一次 HIV 抗體檢測，并保留樣品對從事艾滋病實驗室工作的人員，因工作中意外事故造成HIV 職業(yè)暴露者，所在單位應(yīng)負責解決抗病毒及其它相應(yīng)治療的醫(yī)療費用二級生物安全防護實驗室特殊微生物操作規(guī)程工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測 (如乙型肝炎疫苗，卡介苗實驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向?qū)嶒炇邑撠熑藚R報，并記錄事故經(jīng)過和處理方案禁止將無關(guān)動物帶入實驗室實驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒處理以下致病微生物時應(yīng)在生物安全柜 (級) 中進行 ，包括: 高濃度 大容量

17、 有噴濺可能性上述材料的離心操作如使用密封的離心機轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且只在生物安全柜中開閉，可在實驗室中進行。級生物安全柜必須每年進行一次年度現(xiàn)場檢測。二級生物安全防護實驗室安全設(shè)施和個體防護處理以下致病微生物時應(yīng)在生物安全柜 (級) 中進行 ，包括安全設(shè)施和個體防護當微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進行時，須使用面部保護裝置應(yīng)有相應(yīng)的SOP安全設(shè)施和個體防護二級生物安全防護實驗室安全設(shè)施和個體防護在實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護服，不得穿著外出。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。當手可能接觸感染材料、污染的設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不

18、得戴著手套離開實驗室，工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。二級生物安全防護實驗室安全設(shè)施和個體防護在實驗室中應(yīng)穿著工作 樣品從一個實驗室轉(zhuǎn)送到另外一個實驗室，必須是血清或血漿，除特殊需要外，一般不能用全血。且需置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，防止樣品流出，試管上應(yīng)有明顯的標記。清楚地標記為感染性材料（按所在生物安全防護實驗室的級別標明相同的級別）。感染性材料必須放在密閉的管子中，再放入含有足夠吸水材料的生物危險管中，以防泄漏。將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理，在所放試劑管周圍上下均墊有軟性物質(zhì)，以免破碎，容器外表有HIV檢測專用字樣。如果路程較遠或者氣候炎熱時，

19、盛有樣本的容器應(yīng)至于4以下轉(zhuǎn)運 樣本的轉(zhuǎn)送和發(fā)放生物危險級 樣本的轉(zhuǎn)送和發(fā)放生物危險級實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素。通常已有預(yù)防的疫苗。包含微生物舉例 結(jié)核分枝桿菌 牛分枝桿菌 鼠疫桿菌 炭疽桿菌 Q熱病原體 HIV (血清學檢測除外) 澳大利亞立克次氏體 加拿大立克次氏體 三級生物安全防護實驗室實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。與上

20、述情況類似的不明微生物，也必須在四級生物安全防護實驗室中進行，帶有充分數(shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在四級還是在較低級別的實驗室中處理。包含微生物舉例 黃病毒 埃博拉病毒 中歐蜱傳腦炎病毒 四級生物安全防護實驗室實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度職業(yè)暴露是指實驗室、醫(yī)護、預(yù)防保健人員以及有關(guān)的監(jiān)管工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、體液污染了破損的皮膚或非胃腸道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情況。 實驗室事故處理職業(yè)暴露是指實驗室、醫(yī)護、預(yù)防保健人

21、員以及有關(guān)的監(jiān)管工作人員美國CDC的研究顯示：影響針頭刺傷后的危險性因素包括 傷口的深度有可見的血液從傷口溢出針頭刺破了靜脈或動脈污染源來自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒載量高)美國CDC的研究顯示：影響針頭刺傷后的危險性因素包括 傷口的緊急處理措施皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷出的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當?shù)南緞┙?，?0%乙醇或其它皮膚消毒劑。 緊急處理措施粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒處理。污染物潑濺： 發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即進行消毒

22、處理。 發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責人到達事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒的程序。粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。事故登記事故發(fā)生的時間、地點及詳細經(jīng)過。暴露方式；受傷部位、傷口深淺、暴露程度；污染物種類（培養(yǎng)液、血液或其它體液）以及其中含有HIV的情況。事故登記處理方法和經(jīng)過，包括專家或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場指導(dǎo)和處理的情況。是否采用暴露后藥物預(yù)防，如果是，應(yīng)詳細記錄用藥情況，包括首次用藥時間、服藥方案和毒副作用。隨訪檢測的日期、項目和結(jié)果。處理方法和經(jīng)過，包括專家或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場指導(dǎo)和處理的情況。報告和檢測發(fā)生重大事故時，在緊急處理的同時要立即向主管領(lǐng)導(dǎo)和專家報

23、告。同時抽血檢測HIV抗體，暴露一年內(nèi)要定期檢測。發(fā)生小型事故時可在緊急處理后立即將事故情況和處理方法報告主管領(lǐng)導(dǎo)和專家，檢測同前。報告和檢測HIV職業(yè)暴露后的預(yù)防由于預(yù)防性治療藥物的效力和毒性以及不同暴露方式導(dǎo)致HIV感染的危險性不同，所以預(yù)防性治療藥物應(yīng)在HIV職業(yè)暴露預(yù)防性治療藥品儲備庫（點）和HIV/AIDS防治方面的專家的指導(dǎo)下使用。根據(jù)使用藥物反應(yīng)情況，可改變處方。HIV職業(yè)暴露后的預(yù)防對感染可能性很大的醫(yī)護、檢驗人員可使用預(yù)防性治療藥物，治療方案須根據(jù)暴露情況由專家決定。對于感染危險性很小的，建議不使用藥物預(yù)防。對可能有危險的人，是否用藥治療，應(yīng)權(quán)衡較低的感染危險性與使用藥物的效

24、力和藥物毒、副反應(yīng)以及堅持用藥的依從性等利弊。對感染可能性很大的醫(yī)護、檢驗人員可使用預(yù)防性治療藥物，治療方暴露物是否是體液、含血體液、其他污染物或其沾染器械是否其它污染物血液或含血液體暴 露 的 類 型粘膜或可能有損傷的皮膚不需PEP只沾染完整的皮膚刺、割傷皮膚暴露量不需PEP危險度量小暴露時間短1 級暴露低危：如表皮擦傷、針刺等量大暴露時間長2 級暴露高危：如傷口較深、儀器上可見血液等2 級暴露3 級暴露步驟1：確定暴露級別（Exposure Code） 暴露物是否是體液、含血體液、其他污染物或其沾染器械是否其它污步驟2：確定HIV暴露源頭嚴重程度 HIV暴露源級別不明HIV暴露源級別1（輕度）HIV陰性HIV陽性暴露源的HIV情況如何？無需PEP暴露源不明暴露源的HIV滴度低（無癥狀、CD4計數(shù)高）暴露源的HIV滴度高（有癥狀、CD4計數(shù)低）HIV暴露源級別2（重度）步驟2：確定HIV暴露源頭嚴重