發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件

1、第二章 工業(yè)發(fā)酵菌種選育第二章 工業(yè)發(fā)酵菌種選育發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)水平取決于生產(chǎn)菌種發(fā)酵工藝提取工藝工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)水平取決于生產(chǎn)菌種發(fā)酵工藝提取工藝第一節(jié) 工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)菌種一、微生物代謝產(chǎn)物的類型1.初級代謝產(chǎn)物：微生物通過代謝活動所產(chǎn)生的、自身生長和繁殖所必需的物質(zhì)。如氨基酸、核苷酸、多糖、脂類、維生素等。2.次級代謝產(chǎn)物：微生物生長到一定階段才產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜、對該微生物無明顯生理功能，或并非是微生物生長和繁殖所必需的物質(zhì)。如抗生素、毒素、激素、色素等。兩者之間的關(guān)系：P12第一節(jié) 工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)菌種一、微生物代謝產(chǎn)物的類型1.初級代謝二：工業(yè)化菌種的要求

2、能夠利用廉價的原料，簡單的培養(yǎng)基，大量高效地合成 產(chǎn)物 有關(guān)合成產(chǎn)物的途徑盡可能地簡單，或者說菌種改造的 可操作性要強 遺傳性能要相對穩(wěn)定 不易感染其它微生物或噬菌體生產(chǎn)菌及其產(chǎn)物的毒性必須考慮（在分類學(xué)上最好與致病 菌無關(guān)） 生產(chǎn)特性要符合工藝要求二：工業(yè)化菌種的要求 能夠利用廉價的原料，簡單的培養(yǎng)基，大量三、 工業(yè)上常用菌種細菌（bacteria）：常用的有枯草芽孢桿菌、醋酸桿菌、棒狀桿菌、短桿菌等。啤酒酵母棒狀桿菌短桿菌 棒狀桿菌yeasts短桿菌：GA、Gln、lys枯草芽孢桿菌：淀粉酶（BF7658）、堿性蛋白酶等地衣芽孢桿菌：HASS(耐高溫-淀粉酶) -Amylase蘇云金芽孢桿

3、菌：BT生物農(nóng)藥梭狀芽孢桿菌：丙酮、丁酸等的發(fā)酵三、 工業(yè)上常用菌種細菌（bacteria）：常用的有枯草芽酵母菌（yeast）：屬單細胞真核生物，主要分布于含糖較多的酸性環(huán)境中。常用的有：啤酒酵母、假絲酵母、類酵母等。啤酒酵母：釀酒、輔酶類物質(zhì)的發(fā)酵酒香酵母：釀酒漢遜酵母：釀酒，用于乙酸乙酯的發(fā)酵假絲酵母：單細胞蛋白生產(chǎn)，石油發(fā)酵酵母菌（yeast）：屬單細胞真核生物，主要分布于含糖較多的霉菌（mould）：喜偏酸性環(huán)境?？捎糜谏a(chǎn)多種酶制劑、抗生素、有機酸及甾體激素等。放線菌霉菌黑曲霉：檸檬酸工業(yè)、釀酒業(yè)、糖化酶黃曲霉：醬油生產(chǎn)，面醬青霉菌：青霉素的生產(chǎn)紅曲霉：紅曲制造，南方紅曲酒（女兒紅

4、）；紅色；豆腐乳赤霉菌：赤霉素的生產(chǎn)霉菌（mould）：喜偏酸性環(huán)境。可用于生產(chǎn)多種酶制劑、抗生放線菌（actionmycetes）：原核微生物類群。在含有機質(zhì)豐富的微堿性土壤中分布較為廣泛。主要用于生產(chǎn)多種抗生素。真菌（青霉素、頭孢等）植物或動物來源放線菌（鏈霉素四環(huán)素；紅霉素等） 一些產(chǎn)芽孢的細菌放線菌（actionmycetes）：原核微生物類群。在含有擔子菌（basidiomycetes）：主要用于多糖、橡膠物質(zhì)和抗癌藥物的開發(fā)。藻類（alga）：許多國家已把它作為人類保健食品和飼料。還可通過藻類將CO2轉(zhuǎn)變?yōu)槭?；國外還有從“藻類農(nóng)場”獲得氫能的報道。硅藻擔子菌擔子菌（basidio

5、mycetes）：主要用于多糖、橡膠物微生物（包括動、植物細胞）幾乎可以生產(chǎn)我們所需的一切產(chǎn)品，但是涉及到工業(yè)化生產(chǎn)對于某一種特定的產(chǎn)品，只有特定的微生物才具有大量表達的潛力。問題：生產(chǎn)抗生素的微生物能不能用于生產(chǎn)氨基酸？禮來(Eli lilly),花了10年的時間從40萬株微生物中，發(fā)現(xiàn)了三種有潛力的新抗生素。例：微生物（包括動、植物細胞）幾乎可以生產(chǎn)我們所需的一切產(chǎn)品，但菌種選育經(jīng)驗育種自然選育誘變育種主要通過突變和篩選來育種定向育種雜交育種分子育種常規(guī)的雜交育種原生質(zhì)體融合通過DNA重組技術(shù)來育種第二節(jié) 工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)菌種來源從菌種保藏機構(gòu)獲得菌種選育菌種選育經(jīng)驗育種自然選育誘變育種主要通

6、過突變定向育種雜交育種（一）從自然界分離菌種采 樣 增殖培養(yǎng) 純種分離 純培養(yǎng) 生產(chǎn)性能測定 方法、地點、時間和周圍環(huán)境記錄純種分離的原則就是使培養(yǎng)物獲得單個菌落：1稀釋分離法 2平板劃線分離法 涂菌： 劃線分離：分步劃線法；一次劃線法： 3組織分離法 測定代謝產(chǎn)物或其它目的性狀目的：高效地獲取一株高產(chǎn)目的產(chǎn)物的微生物（一）從自然界分離菌種采 樣 增殖培養(yǎng) 純種（）采樣和采集方法為了從一特定生態(tài)系統(tǒng)中分離出具有代表性的細菌菌群，特別是分離那些在唯一微環(huán)境區(qū)域中出現(xiàn)的菌群時，必須十分重視樣本的采集。樣本采集時所需的工具通常有無菌刮鏟、土樣采集器、鑷子、解剖刀、手套、無菌小塑料袋和塑料瓶等。（）采

7、樣和采集方法為了從一特定生態(tài)系統(tǒng)中分離出具有代表性的采樣的注意事項1、采樣時應(yīng)盡可能保持相對無菌；2、所采集的樣本必須具有某種代表性；3、采好的樣必須完整地標上樣本的種類及采集日期、地點以及采集地點的地理、生態(tài)參數(shù)等；4、應(yīng)充分考慮采樣的季節(jié)性和時間因素，因為真正的原地菌群的出現(xiàn)可能是短暫的；5、采好的樣應(yīng)及時處理，暫不能處理的也應(yīng)貯存于4下，但貯存時間不宜過長。這是因為一旦采樣結(jié)束，試樣中的微生物群體就脫離了原來的生態(tài)環(huán)境，其內(nèi)部生態(tài)環(huán)境就會發(fā)生變化，微生物群體之間就會出現(xiàn)消長采樣的注意事項1、采樣時應(yīng)盡可能保持相對無菌；土樣采集方法森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下層向上層順序采集；水田等

8、浸水土壤在不損土層結(jié)構(gòu)的情況下插入圓筒采集。如果層次要求不嚴格，可取離地面515cm處的土。將采集到的土樣盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。在采集植物根際土樣時，一般方法是自土壤中慢慢拔出植物根，在大量無菌水中浸漬約20min，洗去粘附在根上的土壤，然后再用無菌水漂洗下根部殘留的土，這部分上卻為根際土樣。土樣采集方法森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下層向上層順序采植物體采集方法 在采集葉面時，一般是用滅菌的剪刀、打孔器、安全刀片等，由幾片新鮮葉片的同一部位切取一小塊，并注意不要損傷周圍邊緣。選擇葉面時應(yīng)考慮葉位、葉齡、葉片正反面和在一片葉上的取樣部位。采集植物根及根系時，方法與根際土樣采集方法相似。將洗

9、凈的根裝入采樣袋中，采集根系時，一般與根際土樣一起保存。植物體采集方法 在采集葉面時，一般是用滅菌的剪刀、打孔器 水樣采集方法用于細菌檢測的水樣應(yīng)收集于100m1干凈、滅菌的廣口塑料瓶中。由于表層水中含有泥沙，故在采樣時應(yīng)在較深的靜水層中采集水樣。方法是：握住采樣瓶底浸入水中30-50cm處，然后瓶口朝下打開瓶蓋，讓水樣進入。如果有急流存在的話，應(yīng)直接將瓶口反向于急流。采集瓶從水中取出時應(yīng)迅速并帶有較大的弧度。水樣不應(yīng)裝滿采樣瓶。所有水樣都應(yīng)在24h之內(nèi)迅速進行檢測，或者4下貯存。 水樣采集方法用于細菌檢測的水樣應(yīng)收集于100m1干凈、滅菌富集的三種方案： 定向培養(yǎng):采用特定的有利于目的微生物

10、富集的 條件，進行培養(yǎng)。（二）增殖培養(yǎng)目的：富集目的微生物，讓目的微生物在種群中占優(yōu)勢，使篩選變得可能。 當不可能采用定向培養(yǎng)時，則可設(shè)計在一個分 類學(xué)中考慮， 不能提供任何有助于篩選產(chǎn)生菌的信息，這 時只能通過隨機分離的辦法富集的三種方案： 定向培養(yǎng):采用特定的有利于目的微生物富集的定向培養(yǎng)的富集方法1、養(yǎng)分2、pH條件3、培養(yǎng)時間4、培養(yǎng)溫度等一切能提高目的微生物相對生長速度的手段，培養(yǎng)（固體、液體；分批連續(xù)）后使目的微生物在種群中占優(yōu)勢。定向培養(yǎng)的富集方法1、養(yǎng)分2、pH條件3、培養(yǎng)時間4、培養(yǎng)溫（）純種分離 盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離，純化

11、。在這步，增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進一步應(yīng)用，而且控制得細一點，好一點。純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法。（）純種分離 盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微 傾注平板 傾注平板接種和分離工具1接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀 挑菌落接種和分離工具 挑菌落發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件純化（平板劃線法）倒平板劃線培養(yǎng)挑菌落純種（純培養(yǎng)） 純化（平板劃線法）發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件isolation plateisolation plate 制備土壤稀釋液 制備土壤稀釋液 發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件菌落的

12、選出 從產(chǎn)物角度出發(fā)在培養(yǎng)時以產(chǎn)物的形成有目的的設(shè)計培養(yǎng)基利用簡單、快速的鑒定方法，如抗生素 從形態(tài)的角度 菌落的外觀形態(tài)，是微生物的一個重要表征。如多糖產(chǎn)生菌在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上生長，從具有粘液性的菌落外觀上就可以初步識別。菌落的選出 從產(chǎn)物角度出發(fā)在培養(yǎng)時以產(chǎn)物的形成有目的的設(shè)計培實例：堿性纖維素酶產(chǎn)生菌的篩選采樣（造紙廠）80度30分鐘處理文獻:產(chǎn)生菌為中性牙孢桿菌，嗜堿牙孢桿菌、放線菌及霉菌0.0075%曲利本藍1%CMC（羧甲基纖維素），pH10.5培養(yǎng)34天，選擇有凹陷圈的菌落從285個土樣中獲得62株26株為組成型36株為誘導(dǎo)型實例：堿性纖維素酶產(chǎn)生菌的篩選采樣（造紙廠）80度30分

13、鐘（）生產(chǎn)性能的測定這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進行小型發(fā)酵試驗，以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。這種直接從自然界分離得到的菌株稱為野生型菌株，以區(qū)別于用人工育種方法得到的變異菌株。（）生產(chǎn)性能的測定這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（5）毒性試驗 自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒的，將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當十分當心，尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種，更應(yīng)慎重。據(jù)有的國家規(guī)定，微生物中除啤酒酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草桿菌作為食用無須作毒性試驗外，其他微生物作為食用，均需通過兩年以上的毒性試驗。（5）毒性試驗 自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒（二）誘變育種以微生物的自

14、然變異作為基礎(chǔ)的生產(chǎn)選種的機率很低，一個基因的自然突變頻率僅10-610-10左右。誘變育種：以誘發(fā)突變?yōu)榛A(chǔ)的育種，是國內(nèi)外提高菌種產(chǎn)量、性能的主要手段。（二）誘變育種以微生物的自然變異作為基礎(chǔ)的生產(chǎn)選種的機率很低誘變育種：用各種物理、化學(xué)的因素人工誘發(fā)基因突變進行的篩選，稱為誘變育種。誘變劑：能夠提高生物體突變頻率的物質(zhì)稱為誘變劑誘變劑物理：紫外線，快中子，X射線，射線，激光化學(xué)：堿基類似物、與堿基反應(yīng)的物質(zhì) 生物誘變劑誘變育種：用各種物理、化學(xué)的因素人工誘發(fā)基因突變進行的篩選發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件確定出發(fā)菌株 菌種的純化選優(yōu) 出發(fā)菌株的性能鑒定同步培養(yǎng) 制備單細胞（或單孢子

15、）懸液 活菌濃度測定誘變劑的選擇與確定誘變劑量的預(yù)試驗 誘變處理 平板分離 計形態(tài)變異的菌落數(shù)，計算突變率挑取疑似突變菌落純培養(yǎng) 突變體的初步篩選 用簡單快捷的方法重復(fù)篩選 搖瓶發(fā)酵試驗選出突變體（根據(jù)情況進行生產(chǎn)試驗或重復(fù)誘變處理）二、微生物的誘變育種確定出發(fā)菌株二、微生物的誘變育種 出發(fā)菌株的選擇1自然界新分離的野生型菌株，對誘變處理較敏感，容易達到好的效果。2在生產(chǎn)中的菌株因經(jīng)多次誘變，應(yīng)考慮新的誘變方法。3. 要盡量選擇單倍體細胞、單核或核少的多細胞體來作出發(fā)誘變細胞， 出發(fā)菌株的選擇1自然界新分離的野生型菌株，對誘變處理較敏 處理菌懸液的制備這一步驟的關(guān)鍵是制備單細胞和單孢子狀態(tài)的菌

16、懸液，為此要進行合適培養(yǎng)基的培養(yǎng)，并要離心，洗滌，過濾。 處理菌懸液的制備這一步驟的關(guān)鍵是制備單細胞和單孢子狀態(tài)的 誘變處理 根據(jù)前面有關(guān)誘變劑及誘變處理的介紹，結(jié)合誘變對象的實際，設(shè)計誘變處理方案。 誘變處理 根據(jù)前面有關(guān)誘變劑及誘變處理的介紹，結(jié)合誘變對分離和篩選篩選分初篩和復(fù)篩。初篩以迅速篩出大量的達到初步要求的分離菌落為目的，以量為主。復(fù)篩則是精選，以質(zhì)為主，也就是以精確度為主。因此在具體方法上就有差異. 例如初篩可以在平皿上形成的透明圈或抑菌圈的大小來挑取參加復(fù)篩者，而將90%的菌落淘汰。在數(shù)量減少后就要仔細比較參加復(fù)篩和再復(fù)篩的菌株，最后才能選得優(yōu)秀菌株。分離和篩選篩選分初篩和復(fù)篩

17、。初篩以迅速篩出大量的達到初步要求紫外線的誘變育種 紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長為2537A燈與處理物的距離為1530cm，照射時間依菌種而異，一般為幾秒至幾十分鐘。一般我們常以細胞的死亡率表示，希望照射的劑量死亡率控制在7080%為宜。例紫外線的誘變育種 紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈，波長 被照射的菌懸液細胞數(shù)，細菌為106個ml左右，霉菌孢子和酵母細胞為106107個ml。由于紫外線穿透力不強，要求照射液不要太深，約0.51.0cm厚，同時要用電磁攪拌器或手工進行攪拌，使照射均勻。由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進行。 被照射的菌懸液細

18、胞數(shù)，細菌為106個ml左右，霉菌孢子 (二)操作步驟 1將細菌培養(yǎng)液以3000rmin離心5min，傾去上清液，將菌體打散加入無菌生理鹽水再離心洗滌。 2將菌懸液放入一巳滅菌的，裝有玻璃珠的三角瓶內(nèi)用手搖動，以打散菌體。將菌液倒入有定性濾紙的漏斗內(nèi)過濾，單細胞濾液裝入試管內(nèi)，一般處于渾濁態(tài)的細胞液含細胞數(shù)可達108個ml左右，作為待處理菌懸液。3取24m1制備的菌液加到直徑9cm培養(yǎng)皿內(nèi)，放入一無菌磁力攪拌子，然后置磁力攪拌器上、15W紫外線下30cm處。在正式照射前，應(yīng)先開紫外線10min，讓紫外燈預(yù)熱，然后開啟皿蓋正式在攪拌下照射1050s。操作均應(yīng)在紅燈下進行，或用黑紙包住，避免白熾光

19、。 (二)操作步驟 4取未照射的制備菌液和照射菌液各o.5ml進行稀釋分離，計數(shù)活菌細胞數(shù)。 5取照射菌液2ml于液體培養(yǎng)基中(300ml三角瓶內(nèi)裝30ml培養(yǎng)液)，120rmin振蕩培養(yǎng)46h。 6取中間培養(yǎng)液稀釋分離、培養(yǎng)。 7挑取菌落進行篩選。 4取未照射的制備菌液和照射菌液各o.5ml進行稀釋分離亞硝基胍誘變曲霉菌 亞硝基胍(MNNG)對真核或原核微生物都有強烈的誘變作用。其精確的作用機制尚不很清楚，據(jù)認為是伴隨著重氮甲烷的生成及在酸性條件下生成亞硝酸，直接作用于細胞內(nèi)的DNA復(fù)制系統(tǒng)，從而誘發(fā)了變異。例亞硝基胍誘變曲霉菌 亞硝基胍(MNNG)對真核或原核微生 (二)操作步驟 1單孢子

20、懸液制備 取斜面，加入6ml 0.1molL pH6.o的磷酸緩沖液，用接種環(huán)刮下孢子，振蕩試管，立即通過帶濾紙漏斗過濾，由此制得單孢子懸液，若孢子液渾濁狀，其孢子濃度可達l06個ml，此為待處理孢子懸液。2MNNG溶液的制備 用分析天平稱取2mg，加入2ml 0.1molL pH 6.0磷酸緩沖液，于暗處振蕩溶解。 3誘變處理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢子懸液中，30振蕩30min，立即稀釋1000倍停止作用，然后以10-4稀釋度分離培養(yǎng)，30 3天后計數(shù)。 4挑取菌落進行糖化酶及蛋白酶產(chǎn)量篩選 3誘變處理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢（三）雜交育種指兩個不同基因型的菌

21、株通過接合或原生質(zhì)體融合使遺傳物質(zhì)重新組合，再從中分離篩選具有新性狀的菌株。融合生長快、產(chǎn)量高 菌B生長快，產(chǎn)量低 菌A生長慢，產(chǎn)量高（三）雜交育種指兩個不同基因型的菌株通過接合或原生質(zhì)體融合使細胞壁細胞壁溶解酶細胞膜營養(yǎng)細胞原生質(zhì)體原生質(zhì)體融合融合細胞原生質(zhì)體形成原生質(zhì)體融合細胞壁再生原生質(zhì)體融合的基本過程（1）原生質(zhì)體融合細胞壁細胞壁細胞膜營養(yǎng)細胞原生質(zhì)體原生質(zhì)體融合融合細胞原生質(zhì)影響原生質(zhì)體融合的主要因素菌體的前處理菌體的培養(yǎng)時間融合劑的濃度融合劑作用的時間陽離子濃度融合的溫度及體系的pH值等影響原生質(zhì)體再生的主要因素菌體自身的再生性能原生質(zhì)體制備的條件再生培養(yǎng)基成分再生培養(yǎng)條件等影響原

22、生質(zhì)體融合的主要因素菌體的前處理影響原生質(zhì)體再生的主要發(fā)酵工程第二章-工業(yè)發(fā)酵菌種選育課件（2）基因重組把外源DNA分子結(jié)合到任何病毒、質(zhì)粒、或其它載體系統(tǒng)中，組成新的遺傳物質(zhì)，并轉(zhuǎn)入宿主細胞內(nèi)進行繁殖的過程?？梢詮膹?fù)雜的DNA分子中分離出單獨的DNA片段?？梢源罅可a(chǎn)高純度的基因片段及其產(chǎn)物?？梢栽诖竽c桿菌中研究來自其它生物的基因。在高等動植物中也可以發(fā)展和建立這種基因操作系統(tǒng)。（2）基因重組把外源DNA分子結(jié)合到任何病毒、質(zhì)粒、或其它載基因重組過程目標DNA片段的獲得與載體DNA分子的連接重組DNA分子引入宿主細胞篩選含有所需重組DNA分子的宿主細胞對外源基因的表達及穩(wěn)定性的鑒定基因重組過

23、程目標DNA片段的獲得與載體DNA分子的連接重組D第三節(jié) 菌種的保藏與復(fù)壯微生物菌種的衰退菌種的復(fù)壯菌種的保藏第三節(jié) 菌種的保藏與復(fù)壯微生物菌種的衰退一、菌種的衰退微生物個體特征微生物群體特征各方面發(fā)生變化營養(yǎng)物質(zhì)代謝和生長繁殖能力下降發(fā)酵周期延長抗不良環(huán)境的性能減弱目的產(chǎn)物的產(chǎn)量下降一、菌種的衰退微生物個體特征各方面營養(yǎng)物質(zhì)代謝和生長繁殖能力1、菌種退化的原因： 基因突變；變異菌株性狀分離；誘變的單菌落是由個以上孢子或細胞形成菌落由個孢子或單個細胞形成，但它是多核細胞單核孢子發(fā)生突變時，雙鏈DNA上僅條鏈上某個位點發(fā)生變化1、菌種退化的原因： 連續(xù)傳代其它因素菌種保藏不當 生長條件不滿足（培

24、養(yǎng)基組成、培養(yǎng)條件） 連續(xù)傳代2、防止衰退的措施1）減少傳代次數(shù)；2）創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件；3）利用單核體傳代4）經(jīng)常進行純種分離，并對相應(yīng)的性狀指標進行檢查；5）采用有效的菌種保藏方法；2、防止衰退的措施二、菌種的復(fù)壯1）從衰退的菌種群體中把少數(shù)個體再找出來，重新獲得具有原有典型性狀的菌種。a）純種分離；b）通過寄主體進行復(fù)壯；c）淘汰已衰退的個體；2）有意識地利用微生物會發(fā)生自發(fā)突變的特性，在日常的菌種維護工作中不斷篩選“正變”個體。二、菌種的復(fù)壯1）從衰退的菌種群體中把少數(shù)個體再找出來，重新(一)菌種的提純 即從已衰退的菌種中，通過分離純化，將尚未退化的個體分離出來，以恢復(fù)和建立具有原來生產(chǎn)性狀的群體，繼續(xù)供科研及生產(chǎn)使用。菌種提純：要求達到菌落純化的水平，通過稀釋平板法、劃線法等。如檸檬酸生產(chǎn)菌在