APE1在肝細(xì)胞癌組織芯片的表達(dá)及臨床病理

1、APE1在肝細(xì)胞癌組織芯片的表達(dá)及臨床病理【摘要】目的討論脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(ape1)基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(h)的表達(dá)及其與臨床病理變化的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法,檢測(cè)包含h及轉(zhuǎn)移灶、癌旁肝硬化組織、癌旁慢性肝炎組織和正常肝組織的組織芯片中ape1的表達(dá)情況,結(jié)合臨床病理資料進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果ape1在癌旁肝硬化組織、癌旁慢性肝炎組織和正常肝組織以細(xì)胞核表達(dá)為主,在h和轉(zhuǎn)移灶組織以細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核結(jié)合表達(dá)為主(p0.01)。細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核染色強(qiáng)度均與h分級(jí)和轉(zhuǎn)移親密相關(guān)(p0.01),細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度還與腫瘤包膜有無(wú)浸潤(rùn)有關(guān)(p0.01)。結(jié)論ape1蛋白表達(dá)與h惡性表型有關(guān),ape

2、1蛋白過(guò)表達(dá)及細(xì)胞質(zhì)表達(dá)的出現(xiàn)可能成為h預(yù)后不良的指標(biāo)之一?！娟P(guān)鍵詞】癌,肝細(xì)胞;內(nèi)切核酸酶類;芯片分析技術(shù);免疫組織化學(xué);預(yù)后expressinfape1anditslinialipliatininhepatelluararinausingtissuehipassayzhengzhihua,huangaiin,liujingfeng,zangshengbin,galingyun,henshuiping1.divisinfpathlgy,shlfbasiedialsiene,institutefnlgy,fujianedialuniversity,fuzhu350004,hina2.depar

3、tentfsurgery,theaffiliatedfirsthspital,fujianedialuniversity,fuzhu350005,hinaabstrat:bjetivetstudytheassiatinfapurin/apyriidiniendnulease1(ape1)expressinithlinipathlgiparaetersinhepatelluararina(h).ethdsape1prteinasdetetedinseventissuehips,hihntainsh,para-arinatissues,para-arinahrnihepatitistissuesa

4、ndnrallivertissuesbyiunhistheistry.detailedanalysisfape1expressinithlinipathlgiparaetersasperfred.resultsape1asainlydetetedinnuleifpara-arinatissues,para-arinahrnihepatitistissuesandnrallivertissues.hileape1expressedinbthnuleusandytplasnlyfundinhandetastatitur(p0.01).astatistisignifianttyrrelatinbet

5、eenthepsitivedegreefape1expressininbthnuleusandytplasithhistlgialgradefhandetastasis(p0.01).furtherre,thepsitivedegreeinytplasasrrelatedithapsuleinvasin(p0.01).nlusintheexpressinfape1isassiatediththealignantphentypefh.verexpressinandytplaslalizatinfape1anbeusedasaprlyprgnstiarkerfrh.keyrds:arina,hep

6、atelluar;endnuleases;irhipanalytialpredures;iunhistheistry;prgnsis肝細(xì)胞癌(hepatellulararina,h)是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其癌變是一個(gè)多步驟的漸進(jìn)過(guò)程,與慢性肝臟損傷、肝炎和肝硬化有關(guān)。脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(ape1)是一種多功能的堿基切除修復(fù)途徑的關(guān)鍵酶,具有脫嘌呤/脫嘧啶位點(diǎn)(ap位點(diǎn))核酸內(nèi)切酶(ape)活性,修復(fù)烷化劑、氧自由基、電離輻射等因素產(chǎn)生的dna損傷。ap位點(diǎn)是dna最常見(jiàn)的損傷位點(diǎn)之一,具有細(xì)胞毒性和基因毒性,假設(shè)不能修復(fù),可阻礙dna的復(fù)制,導(dǎo)致基因突變、染色體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性或細(xì)

7、胞凋亡,最終可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。ape1又名氧化復(fù)原因子1(ref-1),可調(diào)節(jié)許多轉(zhuǎn)錄因子的dna結(jié)合活性,參與細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞凋亡等多種關(guān)鍵的細(xì)胞反響。筆者采用組織芯片技術(shù)檢測(cè)ape1在h、轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況,分析ape1表達(dá)與h臨床病理因素的關(guān)系。1對(duì)象與方法1.1對(duì)象搜集福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院19982022年手術(shù)切除標(biāo)本,其中h126例,癌旁肝硬化組織(距癌組織2,鏡下無(wú)癌)95例,癌旁慢性肝炎組織(距癌組織5)46例,肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移灶29例,術(shù)前均未化療及放療。男性114例,女性10例,60歲28例,60歲96例。根據(jù)?中國(guó)常見(jiàn)腫瘤診治標(biāo)準(zhǔn)?對(duì)腫瘤進(jìn)展組織學(xué)分類:梁狀型、假腺管型、

8、實(shí)體型、硬化型。根據(jù)edndsn組織學(xué)分級(jí)法進(jìn)展病理學(xué)分級(jí)分為i級(jí),并判斷有無(wú)包膜癌浸潤(rùn)和發(fā)生肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移。根據(jù)腫瘤大小和數(shù)量分為3組:腫瘤直徑3,腫瘤直徑35,腫瘤數(shù)量2個(gè)或直徑5。另搜集正常肝組織5例,來(lái)源于1998-2022年福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除的肝血管瘤的瘤旁肝組織。1.2方法鼠抗人ape1ab(克隆號(hào)13b8e52,美國(guó)nvusbilgials公司),工作濃度118000;elivisinplus免疫組織化學(xué)試劑盒(kit-9901,福州邁新生物科技)。按照免疫組織化學(xué)elivisinplus二步法試劑盒說(shuō)明操作,dab顯色。以pbs代替一抗作為陰性對(duì)照。1.3制作組織芯片

9、根據(jù)研究目的設(shè)計(jì)點(diǎn)陣,選擇典型區(qū)域在玻片和相應(yīng)蠟塊做標(biāo)記。將本研究小組已制成的定位板蓋在受體蠟塊上1,按照定位板的點(diǎn)陣打孔,并從供體蠟塊已標(biāo)記的典型區(qū)域鉆取組織,每個(gè)區(qū)域3個(gè)組織孔,轉(zhuǎn)移到受體蠟塊的承載孔。將組織芯片和周圍蠟質(zhì)加熱交融。1.4結(jié)果判斷1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析,選用參數(shù)秩和檢驗(yàn)對(duì)兩個(gè)樣本半定量等級(jí)資料進(jìn)展分析,選用kurskal-allish檢驗(yàn)對(duì)多個(gè)樣本半定量資料進(jìn)展分析,選用spearan秩相關(guān)進(jìn)展指標(biāo)間的相關(guān)分析。2結(jié)果組織芯片免疫組織化學(xué)封片后觀察,局部組織有脫片,以每個(gè)病灶的3個(gè)點(diǎn)(至少有2個(gè)點(diǎn))滿足研究需求為標(biāo)準(zhǔn),否那么剔除該病例。126例h中

10、2例由于組織脫落不能進(jìn)展分析,其余124例均進(jìn)入有效分析。2.1ape1定位表達(dá)ape1蛋白在各組織的定位表達(dá)見(jiàn)表1。不同實(shí)驗(yàn)組ape1表達(dá)方式不同,在正常肝組織、癌旁肝炎組織和癌旁肝硬化組織,ape1主要以細(xì)胞核表達(dá)為主;在h和轉(zhuǎn)移灶,ape1主要以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核結(jié)合表達(dá)為主,顯微鏡下觀察到細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1a)。124例h中,44例為單純細(xì)胞核染色,鏡下僅在細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1b)。表1各組ape1蛋白的定位表達(dá)略2.2ape1的半定量表達(dá)各組細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)著色強(qiáng)度見(jiàn)表2。表2各實(shí)驗(yàn)組ape1蛋白的半定量表達(dá)略2.3ape1表達(dá)與h臨床病理因素的關(guān)系隨著病理組織學(xué)

11、分級(jí)的升高,ape1細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度依次增高(rs=0.353,p=0.001),細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度亦有依次增高(rs=0.217,p=0.015)。包膜浸潤(rùn)組與包膜無(wú)浸潤(rùn)組相比,細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度具有顯著差異(p0.001),而細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度無(wú)差異。與無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移組相比,腫瘤轉(zhuǎn)移組中細(xì)胞核陽(yáng)性強(qiáng)度明顯升高(p=0.002)。細(xì)胞質(zhì)陰性染色13例,占轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組的44.8,其他3種染色強(qiáng)度結(jié)果均低于陰性染色組。ape1表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大孝組織學(xué)分型無(wú)關(guān)(表3)。表3ape1蛋白表達(dá)與h臨床病理特征的關(guān)系略3討論本研究采用組織芯片和免疫組織化學(xué)相結(jié)合,檢測(cè)ape1在h的表達(dá),節(jié)約實(shí)驗(yàn)本錢,大大進(jìn)步實(shí)驗(yàn)效

12、率,并保證實(shí)驗(yàn)條件的同一性,減少了因普通實(shí)驗(yàn)方法中分批、分次實(shí)驗(yàn)造成的實(shí)驗(yàn)誤差,進(jìn)步了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可*性。同時(shí),通過(guò)對(duì)手工制作組織芯片的方法進(jìn)展改進(jìn),應(yīng)用改進(jìn)的打孔針和取材針,進(jìn)步芯片制作的效率和質(zhì)量,使檢測(cè)ape1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)更符合觀察和進(jìn)一步研究需要。ape1是一個(gè)具有雙功能的限速酶,既負(fù)責(zé)修復(fù)各種因素產(chǎn)生的ap位點(diǎn),又通過(guò)保持許多轉(zhuǎn)錄因子(如p53、nf-b、pax-5、pax-8、hif-1、reb、atf和hlf等)dna結(jié)合區(qū)域特異性半胱氨酸的復(fù)原狀態(tài),維持轉(zhuǎn)錄因子的激活復(fù)原態(tài),從而調(diào)節(jié)dna結(jié)合活性,發(fā)揮重要作用。以上兩種功能的異常均可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在人體細(xì)胞中,ape1的表達(dá)

13、可以細(xì)胞質(zhì)型、細(xì)胞核型、細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞核型3種形式存在。既往研究在卵巢癌、皮膚惡性黑色素瘤和結(jié)腸癌等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn),正常組織中ape1以細(xì)胞核表達(dá)為主,腫瘤組織以質(zhì)核結(jié)合表達(dá)為主,ape1表達(dá)定位的改變與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化親密相關(guān)3-5。本研究結(jié)果顯示,質(zhì)核結(jié)合表達(dá)方式比例在癌旁肝炎組織和癌旁肝硬化組織、h和轉(zhuǎn)移灶組依次遞增,正常肝組織未見(jiàn)質(zhì)核結(jié)合表達(dá)方式,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示hape1蛋白表達(dá)定位的改變,即從細(xì)胞核表達(dá)方式轉(zhuǎn)變成細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方式,具有重要意義。細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方式的出現(xiàn),可能與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。該結(jié)果與以往對(duì)肺癌、乳腺癌的相關(guān)研究結(jié)果一致6-7。目前,對(duì)ape1的定位表達(dá)機(jī)制尚缺乏

14、明確的闡述。tell等研究發(fā)現(xiàn),各種導(dǎo)致ape1表達(dá)增強(qiáng)的應(yīng)激因素(如uv、hbv、hv和rs等),可參與調(diào)控ape1在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸8。ape1在惡性腫瘤中的細(xì)胞質(zhì)定位,可能是外來(lái)因子造成了線粒體內(nèi)的dna損傷,在線粒體內(nèi)出現(xiàn)了dnaap位點(diǎn)的修復(fù)。因此,推測(cè)ape1在惡性腫瘤中的定位機(jī)制與其所受的應(yīng)激有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)ape1在h中主要定位于細(xì)胞質(zhì),而hbx是引起ape1移位至細(xì)胞質(zhì)的主要損傷因子,推測(cè)h中ape1在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)與hbx損傷有親密關(guān)系。vittri等發(fā)現(xiàn),低分化肝細(xì)胞癌與高分化肝細(xì)胞癌相比,ape1細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)9。在腦星形細(xì)胞腫瘤中發(fā)現(xiàn),、級(jí)腫瘤的ape1核表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度顯

15、著高于級(jí),并與腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)10,進(jìn)一步提示ape1的表達(dá)增強(qiáng)與腫瘤的惡性分化具有明顯關(guān)系。本研究結(jié)果顯示,細(xì)胞核表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度和細(xì)胞質(zhì)表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度在各實(shí)驗(yàn)組中不同。在正常組、癌旁肝炎組、癌旁肝硬化組、h組和轉(zhuǎn)移組同樣分別呈依次遞增趨勢(shì)(p0.001)。因此認(rèn)為ape1過(guò)表達(dá)與h發(fā)生、開(kāi)展親密相關(guān)。進(jìn)一步分析ape1表達(dá)程度與臨床各病理參數(shù)之間的關(guān)系,結(jié)果顯示ape1細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性強(qiáng)度與腫瘤病理學(xué)分級(jí)、有無(wú)肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移灶親密相關(guān),后者還與包膜有無(wú)腫瘤浸潤(rùn)有關(guān)。ape1在細(xì)胞質(zhì)和胞核過(guò)表達(dá)均與h的惡性臨床表型有親密關(guān)系。puglisi等研究結(jié)果顯示,ape1蛋白的細(xì)胞質(zhì)定位與肺癌、乳腺癌的不良預(yù)后

16、有關(guān)6-7。由于本研究尚缺乏完好的隨訪資料,未能對(duì)ape1蛋白的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系進(jìn)展直接闡述,但本研究顯示,ape1的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān),且ape1過(guò)表達(dá)還與包膜進(jìn)犯和病理學(xué)分級(jí)有關(guān)系,而這些參數(shù)與h的侵襲力和預(yù)后均有非常親密的關(guān)系。因此推測(cè),ape1蛋白的細(xì)胞質(zhì)表達(dá)及細(xì)胞質(zhì)+細(xì)胞核過(guò)表達(dá)可能與h的預(yù)后有關(guān)。對(duì)h中ape1表達(dá)特點(diǎn)的研究具有重要意義,其細(xì)胞質(zhì)表達(dá)方式的出現(xiàn)和陽(yáng)性強(qiáng)度的變化,可作為判斷h患者預(yù)后和腫瘤惡性表型的指標(biāo)之一?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1臧盛兵,黃愛(ài)民,高凌云,等.手工制作組織芯片方法的改進(jìn)及其在肝細(xì)胞癌研究中的應(yīng)用j.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2022，163:385-3

17、88.2babergera,riethdrfl,ilde-langshk,etal.strnglyreduedexpressinftheellyleinhibitrp27inendetrialneplasiaj.virhsarh,1999,434(5):423-428.3tannerb,gries,shifferi,etal.nulearexpressinfapurini/apyriidiniendnuleaseinreasesithprgressinfvarianarinasj.gynelnl,2022,92(2):568-577.4yangs,iranik,heffrnse,etal.al

18、teratinsintheexpressinftheapurini/apyriidiniendnulease-1/redxfatr-1(ape/ref-1)inhuanelanaandidentifiatinfthetherapeutiptentialfresveratrlasanape/ref-1inhibitrj.lanerther,2022,4(12):1923-1935.5牟江洪,肖華亮,向德兵,等.大腸癌ref-1/ape的表達(dá)特點(diǎn)及其意義j.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2022,28(2):111-113.6puglisif,aprileg,inisinia,etal.prgnstisignifianefape1/ref-1subellularlalizatininnn-sallelllungarinasj.antianerres,2001,21(6a):4041-4049.7puglisif,barbnef,tellg,etal.prgnstirlefape/ref-1subellularexpressininstage-breastarinasj.nlrep,2002,9(1):11-17.8tellg,daanteg,aldelld,etal.theintrae