羅氏試劑盒說明書 sFlt-1 05340519001V1

1、05340519001V1可溶性fms樣酪氨酸激酶-1（sFlt-1） 2008-11, V 1 中文 6/6 Elecsys 和 cobas e 分析儀05109523 190 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于體外定量檢測人血清中可溶性fms樣酪氨酸激酶-1(sFlt-1)濃度。結(jié)合Elecsys sFlt-1、PIGF檢測及臨床信息可輔助先兆子癇。Elecsys和cobas e 免疫分析儀的工作原理是電化學發(fā)光免疫分析“ECLIA”。概要先兆子癇（PE）是一種嚴重的妊娠

2、并發(fā)癥，其主要臨床表現(xiàn)是在孕后20周左右出現(xiàn)高血壓和蛋白尿。1約有3-5%的妊娠婦女會發(fā)生先兆子癇，并能導致產(chǎn)婦、胎兒或新生兒的死亡。先兆子癇的臨床癥狀的程度輕重不一。與血小板減少以及肝臟酶活性升高相關(guān)的先兆子癇可表現(xiàn)為血小板減少綜合征（溶血，肝臟酶升高，血小板減少）。2，3，4，5，6先兆子癇的發(fā)生是由于胎盤釋放出血管生成因子從而引起的內(nèi)皮功能障礙?；枷日鬃影B女性的血清PIGF（胎盤生長因子）和sFlt-1（可溶性酪氨酸激酶-1，或稱血管內(nèi)皮生長因子受體-1）的濃度水平會出現(xiàn)改變。此外，血循環(huán)中PIGF和sFlt-1的水平可先于臨床癥狀出現(xiàn)前鑒別正常妊娠和先兆子癇。正常妊娠的前6個月血管性前

3、因子PIGF水平升高并隨著妊娠的進展直至終止而逐漸減低。與此相反，抗血管性因子sFlt-1水平在妊娠早期和中期保持穩(wěn)定，直到妊娠終止期才平穩(wěn)升高。患先兆子癇的婦女sFlt-1水平高于正常妊娠水平，同時PIGF水平低于正常妊娠水平。7，8，9，10測定sFlt-1與PIGF的比值比單獨檢測sFlt-1或PIGF更有價值。10胎盤endoglin是組織生長因子（TGF-）家族中的一員，其在先兆子癇中被上調(diào)并以可溶性的endoglin形式被釋放至母體血循環(huán)中?？扇苄詄ndoglin已被證實在先兆子癇的重癥病例中明顯升高。12，13，14，15總之，使用免疫學的方法測定母體血液中PIGF和sFlt-1

4、的濃度，并結(jié)合臨床癥狀、蛋白尿表現(xiàn)和子宮動脈多普勒超聲檢查可提高先兆子癇的診斷準確性。16，17檢測原理雙抗體夾心法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：20l標本、生物素化的sFlt-1單克隆特異性抗體和釕（Ru）a標記的sFlt-1特異性單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗體夾心復合物。第二次孵育：添加包被鏈霉親和素的磁珠微粒進行孵育，復合體與磁珠通過生物素和鏈霉素的作用結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復合體化學發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。儀器自動通過2點校正的定標曲線計算得到檢測結(jié)果。a)Tr

5、is(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M包被鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉親和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素化的抗sFlt-1抗體（灰蓋），每瓶，9ml；生物素化的抗sFlt-1單克隆抗體（小鼠），濃度0.5mg/L，磷酸緩沖液100mmol/L，pH 7.2；防腐劑。R2 Ru(bpy)32+標記的抗sFlt-1抗體（黑蓋），每瓶，9ml，釕標記的抗sFlt-1單克隆抗體（小鼠）復合物，濃度1.0mg/L，磷酸緩沖液100mmol/l，Ph7.2；防腐劑。警告和注

6、意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和樣本（樣本、定標液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒（M,R1和R2）為即用型，不能分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼閱讀獲取。儲存及穩(wěn)定性存放于28。請垂直擺放Elecsys sFlt-1試劑盒，確保儀器的自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2812周放置分析儀上6周樣本的采集和準備僅以下羅列的樣本類型通過檢測要求。血清樣本須用標準試管或有分離膠的真空管收集。穩(wěn)定性：2-8可保存8小時；-

7、20可保存4個月，一次凍融。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導。有沉淀的樣本檢測前必須先作離心處理。避免使用熱滅活的樣本。添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品均不能使用。檢測前，樣本、定標液及質(zhì)控品須室溫平衡(20-25)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”17章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號05109531190, sFlt-1 CalSet, 規(guī)格4 x1 ml貨號

8、05156394190, PreciControl sFlt-1，規(guī)格2 x1ml，分別為PreciControl sFlt-1 1和2實驗室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號11662988122, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL,測量池洗液 貨號11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號11933159001,

9、SysClean 適配器 貨號11706802001, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反應(yīng)管貨號11706799001, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L測量池洗液 貨號03023141001, PC/CC杯, 12個用于在檢測前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號03005712190,Probe

10、Wash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號03004899190,PreClean M, 5 x 600 mL 直接清洗液貨號12102137001,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝84反應(yīng)杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號03023150001, WasteLiner,廢物袋 貨號03027651001,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導，并參照分析儀操作手冊。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處

11、于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e分析儀：必須使用PreClean M 清洗液。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。定標溯源性：該檢測方法可溯源至另一種可靠的商業(yè)化檢測。每套Elecsys sFlt-1試劑的條碼標簽上均含有其批特異的定標信息。使用Elecsys sFl

12、t-1定標液可調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標曲線。定校頻率：新批號試劑必須進行定標（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl sFlt-1 1和2進行質(zhì)量控制。其他合適的質(zhì)控品也適用。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標后也須進行質(zhì)控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個

13、試驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。請遵循政府或地方導則的質(zhì)控要求。注意：質(zhì)控品不具有條碼，需要按照外部質(zhì)控的方式進行操作。靶值和范圍需要手工輸入。具體參見儀器操作手冊的“QC”章節(jié)。計算儀器會自動計算每個樣本中的分析物濃度，單位pg/mL。干擾因素檢測結(jié)果不受黃疸（膽紅素427mol/L或25 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.311mmol/L或 0.5 g/dL）, 脂血(脂肪乳劑 1400mg/dL)和生物素30 ng/mL或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。檢測結(jié)果不受類風濕因子影響（RF600 IU/ml）。sFlt-1檢測不受hook效應(yīng)影響（sFlt-1濃度200

14、000 pg/mL）。體外對18種常用藥物進行試驗未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果。個別病例中高濃度的抗分析特異性抗體（如：HAMA），生物素抗體或釕抗體會影響檢測結(jié)果。通過適宜性的實驗設(shè)計可將影響因素降到最低。作為診斷指標，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。檢測范圍10-85000 pg/mL（通過最低檢出限和廠商定標曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報告85000 pg/mL。稀釋檢測范圍較廣無需稀釋。期望值臨床研究仍在進行中。初期的數(shù)據(jù)通過收集280名單胎且妊娠過程正常（如：無PE/HELLP，子宮內(nèi)生長抑制）孕婦的524份血清獲得。每份樣本檢測sFlt-1和PIGF，并計

15、算sFlt-1/PIGF的比值。孕周：以最后一次月經(jīng)開始計算孕周。實驗結(jié)果如下：sFlt-1百分比（pg/mL）妊娠周10-1415-1920-2324-2829-3334-3637-生產(chǎn)5th perc.555470649630707978167150th perc.144514591576144919342972440095th perc.23612785294438906688992111324N404482981057877sFlt-1百分比（pg/mL）妊娠周10-1415-1920-2324-2829-3334-3637-生產(chǎn)5th perc.29.465.712513073.36

16、2.752.350th perc.62.813526541243923216195th perc.18320354111081108972659N404482981057877sFlt-1/PIGF比值百分比妊娠周10-1415-1920-2324-2829-3334-3637-生產(chǎn)5th perc.5.214.322.191.010.9451.383.6550th perc.22.712.66.093.804.0313.326.295th perc.57.326.914.816.986.492.0138N404482981057877每個實驗室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時根據(jù)

17、具體情況制訂自己的參考范圍。特殊的性能指標試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差異。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質(zhì)控品驗證重復性，按照CLSI的EP5-A2執(zhí)行：每天2次，共21天 (n=84)。下面是獲得的結(jié)果:Elecsys 2010 和 cobas e 411 分析儀重復性中間精密度樣本均值Pg/ml標準差Pg/ml變異系數(shù)%標準差Pg/ml變異系數(shù)%人血清163.10.9841.62.714.3人血清25894.80.813.82.3人血清3345163591.010172.9人血清4791019151.229333.7

18、PreciContrl sFlt-16766.51.015.82.3PreciControl sFlt-2518553.61.01362.6MODULAR ANALYTICS E170 和 cobas e 601分析儀重復性中間精密度樣本均值Pg/ml標準差Pg/ml變異系數(shù)%標準差Pg/ml變異系數(shù)%人血清165.50.84人血清261711.51.915.72.5人血清3342435271.511483.4人血清47867712131.530543.9PreciControl sFlt-169812.31.820.93.0PreciControl sFlt-25209

19、87.51.71342.6分析靈敏度空白檢出限（LoB）,最低檢出限（LoD）,定量檢出限（LoQ）LoB6 pg/mLLoD10 pg/mLLoQ15 pg/mL空白檢出限和最低檢出限參照CLSI的EP17-A執(zhí)行。定量檢出限等于功能靈敏度的結(jié)果?？瞻讬z出限取n60的不含分析物樣本的95位點結(jié)果。不含分析物樣本的檢測結(jié)果低于空白檢出限的概率為95。最低檢出限是基于空白檢出限和最低分析物濃度的標準差。最低檢出限指能夠檢測出的最低分析物濃度（值高于空白檢出限的概率為95）。定量檢出限（功能靈敏度）指最低分析物濃度的樣本批間重度測定CV值20所對應(yīng)的濃度值。使用低濃度的sFlt-1樣本測定獲得。臨

20、床靈敏度和特異性一項外部研究平行檢測268名正常妊娠婦女（如：無PE/HELLP，子宮內(nèi)生長抑制）和71名PE/HELLP病人的Elecsys sFlt-1和PIGF結(jié)果，最適的sFlt-1/PIGF比率cutoff值為85。此cutoff值計算得到的靈敏度和特異性分別為82和95。ROC曲線下面積為0.95。收集37名有早期PE表現(xiàn)的婦女，使用相同的cutoff值計算得到的靈敏度和特異性分別為89和97。ROC曲線下面積為0.97。所有的妊娠均為單胎。PE定義為孕周20周后孕婦出現(xiàn)新的高血壓癥狀（收縮壓140 mmHg或舒張壓90 mmHg）和蛋白尿（0.3 g/24h或隨機尿試紙條測試蛋白

21、結(jié)果1個+）。孕周34周前出現(xiàn)臨床PE表現(xiàn)的可定義為PE妊娠。所有病例（）和對照（）的散點圖如下：方法學比較使用臨床標本比較Elecsys sFlt-1檢測（y）和可靠的商業(yè)化sFlt-1檢測（x），相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標本數(shù)n=109Passing/Bablok18 線性回歸y = 1.11x 47.3 y = 1.05x -23.7r = 0.827 r = 0.952樣品比較的濃度范圍約為421860 pg/mL 分析特異性使用高度特異性的抗人sFlt-1單克隆抗體。參考文獻1Brown MA, et al. The classification and diagnosis of the h

22、ypertensive disorders of pregnancy: statement from the InternationalSociety for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP). Hypertens Pregnancy 2001;20(1):IX-XIV.2. Villar J, Say L, Glmezoglu AM, et al. Eclampsia and pre-eclampsia: a health problem for 2000 years. In: Critchley H, MacLean A, Pos

23、ton L, Walker J, eds. Preeclampsia. London: RCOG Press, 2003;189-207.3. Roberts JM, Cooper DW. Pathogenesis and genetics of pre-eclampsia. Lancet 2001;357:53-56.4. Lain K, Roberts JM. Contemporary Concepts of the Pathogenesis and Management of Preeclampsia. JAMA 2002;287:3183-3186.5. Sibai B, Dekker

24、 G, Kupferminc M. Pre-eclampsia. Lancet 2005;365:785-799.6. Redman CW, Sargent IL. Latest Advances in Understanding Preeclampsia. Science 2005;308:1592-1594.7. Maynard SE, et al. Excess placental soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFlt1) may contribute to endothelial dysfunction, hypertension, and

25、proteinuria in preeclampsia. J Clin Invest 2003;111:649-658.8. Levine RJ, et al. Urinary Placental Growth Factor and Risk of Preeclampsia. JAMA 2005;293:77-85.9. Kendall R, Thomas K. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor.Proc Natl

26、Acad Sci USA 1993;90:10705-10709.10. Lam C, Lim KH, Karumanchi S. Circulating Angiogenic Factors in the Pathogenesis and Prediction of Preeclampsia. Hypertension Res 2005;46:1077-1085.11. Bushimschi C, et al. Urinary angiogenic factors cluster hypertensive disorders and identify women with severe preeclampsia. Am J Obstet Gynecol 2005;192:734-741.12. De Vivo A, et al. Endoglin, PlGF and sFlt-1 as markers for predicting preeclampsia. Acta Obstet Gynecol 2008;87:837-842.13. Levine RJ, et al. Soluble Endoglin and Other Circulating Antiangiogenic Factors in Preeclampsia. N Engl J Med 200