臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)課件

1、臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院1臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院1 腫瘤免疫和檢驗(yàn)2 腫瘤免疫和檢驗(yàn)2第一節(jié) 概 述 實(shí)踐表明，內(nèi)在的遺傳因素、免疫狀態(tài)和外部的誘變因子，是構(gòu)成腫瘤發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)和條件。其中，機(jī)體的免疫狀態(tài)，尤其是細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱，已被視為是否發(fā)生腫瘤的重要內(nèi)在因素。3第一節(jié) 概 述 實(shí)踐表明，內(nèi)在的遺傳因素、免疫狀態(tài)最普遍的惡性腫瘤死亡原因4最普遍的惡性腫瘤死亡原因4臨床：病史、體癥物理檢查：X光、CT、磁共振、B超 術(shù)前：穿刺、刮片、拉網(wǎng)術(shù)后：組織切片免疫：腫瘤抗原和代謝物測(cè)定分子生物：腫瘤相關(guān)基因分析腫瘤診斷輔助病理5臨床：病史、體癥物理檢查：X光、CT、磁共振、

2、B超術(shù)前：穿刺腫瘤抗原（tumor antigen）：是指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中新出現(xiàn)的或過(guò)度表達(dá)的抗原物質(zhì)。6腫瘤抗原（tumor antigen）：是指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展腫瘤的發(fā)展及診斷期7腫瘤的發(fā)展及診斷期7腫瘤的免疫逃避機(jī)制？腫瘤細(xì)胞缺乏有效的抗原性表位，難以觸發(fā)足夠的抗腫瘤免疫效應(yīng)腫瘤細(xì)胞的MHC分子表達(dá)發(fā)生改變，異常表達(dá)的MHC分子，有礙機(jī)體免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別，影響抗原遞呈作用不能正常表達(dá)B7等活化免疫細(xì)胞的共刺激分子和黏附分子患者血清中存在著封閉因子。腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的某些細(xì)胞因子對(duì)T細(xì)胞的產(chǎn)生有抑制作用腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL，和活化CTL的Fas結(jié)合，介導(dǎo)CTL凋亡8腫瘤的免疫逃

3、避機(jī)制？腫瘤細(xì)胞缺乏有效的抗原性表位，難以觸發(fā)足體液免疫效應(yīng)（熟悉）激活補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用介導(dǎo)殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒作用調(diào)理吞噬作用干擾腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為其他作用第二節(jié) 機(jī)體的抗腫瘤免 效應(yīng)機(jī)制9體液免疫效應(yīng)（熟悉）激活補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用第二節(jié) 機(jī)體的抗腫細(xì)胞免疫效應(yīng)T細(xì)胞 生物學(xué)效應(yīng)包括T細(xì)胞的直接殺傷和對(duì)免疫系統(tǒng)其它成分的活化。（1）CD4陽(yáng)性的輔助T細(xì)胞（2）CD8陽(yáng)性的細(xì)胞毒T細(xì)胞10細(xì)胞免疫效應(yīng)T細(xì)胞10（1）CD4陽(yáng)性的輔助T細(xì)胞 與腫瘤免疫關(guān)系密切的是Th1細(xì)胞。Th1的激活： 腫瘤抗原+抗原遞呈細(xì)胞（樹(shù)突狀細(xì)胞）+MHC II類(lèi)分子Th1的效應(yīng)： 通過(guò)釋放細(xì)胞因子（TNF，IFN-）發(fā)

4、揮抗腫瘤作用。 11（1）CD4陽(yáng)性的輔助T細(xì)胞11（2）CD8陽(yáng)性的細(xì)胞毒T細(xì)胞 是腫瘤免疫的主要途徑。通過(guò)釋放毒性物質(zhì)或促發(fā)靶細(xì)胞上的死亡受體，而直接溶解靶細(xì)胞，或通過(guò)分泌IFN- 間接殺傷腫瘤細(xì)胞。12（2）CD8陽(yáng)性的細(xì)胞毒T細(xì)胞12NK細(xì)胞 NK細(xì)胞是宿主固有免疫或一線防御機(jī)制的一部分，非MHC限制性，不需要對(duì)宿主或其免疫功能進(jìn)行調(diào)整適應(yīng)。對(duì)腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞比對(duì)大多數(shù)正常細(xì)胞更具有毒性作用。其作用機(jī)制類(lèi)似于CTL，還可分泌大量的細(xì)胞因子以調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)。 13NK細(xì)胞13巨噬細(xì)胞 活化的巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合可觸發(fā)細(xì)胞毒活性，細(xì)胞毒性介質(zhì)有細(xì)胞溶解蛋白酶、TNF-及其相關(guān)因

5、子、IFN- 和IFN-、IL-1，過(guò)氧化氫，NO、精氨酸酶。14巨噬細(xì)胞14樹(shù)突狀細(xì)胞 是一類(lèi)專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞，輔佐T、B細(xì)胞參與特異性殺傷腫瘤的過(guò)程。 制備腫瘤特異性樹(shù)突狀細(xì)胞以進(jìn)行腫瘤的生物治療。15樹(shù)突狀細(xì)胞15第三節(jié) 腫瘤抗原的分類(lèi)腫瘤特異性抗原腫瘤相關(guān)性抗原16第三節(jié) 腫瘤抗原的分類(lèi)腫瘤特異性抗原腫瘤相關(guān)性抗原16一、腫瘤特異性抗原（TSA） 為腫瘤細(xì)胞所特有，只表達(dá)于腫瘤細(xì)胞，而不存在于任何處于不同發(fā)育階段的正常細(xì)胞。1.化學(xué)物質(zhì)誘發(fā) 17一、腫瘤特異性抗原（TSA）1.化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)172.病毒誘發(fā) 無(wú)嚴(yán)格的特異性，通常由同一種病毒誘發(fā)的所有腫瘤，都具有相同的TSA。血清學(xué)試驗(yàn)和

6、腫瘤特異性CTL的檢測(cè)，均有助于抗原的檢定。其可誘導(dǎo)機(jī)體的免疫應(yīng)答，故又被稱(chēng)為腫瘤特異性移植抗原。其成分多系病毒基因的表達(dá)成分。182.病毒誘發(fā)183.自發(fā) 自發(fā)腫瘤系無(wú)明顯誘因的腫瘤，很難檢測(cè)到特異性的抗原標(biāo)志物，其原因可能有：早期腫瘤細(xì)胞及近親本子代細(xì)胞一定時(shí)間內(nèi)可以表達(dá)，但后代細(xì)胞因?yàn)槿旧w的隨機(jī)突變而失去表達(dá)?？赡艽嬖冢珕为?dú)使用抗原抗體方法難以得到確定答案。193.自發(fā)19二、腫瘤相關(guān)抗原（TAA） 指非腫瘤細(xì)胞所特有的抗原成分，也少量存在于正常細(xì)胞，但在腫瘤發(fā)生的機(jī)體可異常表達(dá)，可分為胚胎性抗原和分化抗原兩種類(lèi)型。 胚胎抗原分化抗原20二、腫瘤相關(guān)抗原（TAA） 指非腫瘤細(xì)胞所特有

7、的抗原成第四節(jié) 常見(jiàn)腫瘤的免疫診斷及 應(yīng)用原則21第四節(jié) 常見(jiàn)腫瘤的免疫診斷及21腫瘤標(biāo)志物及其特點(diǎn) 是顯示腫瘤存在的生物化學(xué)指示物，其特點(diǎn)與腫瘤相伴產(chǎn)生抗原或激素或酶蛋白存在于血液、體液及組織中可定量或定性檢測(cè)到可以作為辨認(rèn)和追蹤腫瘤存在和發(fā)展的標(biāo)志22腫瘤標(biāo)志物及其特點(diǎn) 是顯示腫瘤存在的生物化學(xué)指示物，其腫瘤標(biāo)志物研究歷史1845 Bence-Jones 本周蛋白 1930 Zondek HCG1959 Markert 同工酶 1963 Abelev AFP1965 Gold & Freeman CEA1969 Hubner & Todaro 癌基因1975 Kohler & Milste

8、in 單克隆抗體1978 Herberman 提出腫瘤標(biāo)志物概念1979 英國(guó)第7屆腫瘤發(fā)生生物學(xué)和醫(yī)學(xué)會(huì)議 腫瘤標(biāo)志物被確認(rèn)并應(yīng)用臨床1980 Koprowski CA19-91981 Bast et al CA1251981 Colcher et al CA72-41984 Kufe et al CA15-3. 23腫瘤標(biāo)志物研究歷史1845 Bence-Jones 本已建立的腫瘤標(biāo)志物24已建立的腫瘤標(biāo)志物24常用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用 腫瘤 首選標(biāo)志物 補(bǔ)充標(biāo)志物肺癌 NSE、CYFRA21-1 CEA、TPA、SCC、ACTH、降鈣素肝癌 AFP AFU、GT、CEA、ALP乳

9、腺癌 CA15-3、CA549 CEA、hCG、降鈣素、鐵蛋白 胃癌 CA72-4 CEA、CA19-9、CA50前列腺癌 PSA f-PSA、c-PSA、PAP結(jié)腸直腸癌 CEA CA19-9、CA50 胰腺癌 CA19-9 CA50、CEA、CA125 卵巢癌 CA125 CEA、hCG、CA72-4 睪丸腫瘤 AFP、hCG宮頸癌 SCC CEA、CA125、TPA 膀胱癌 無(wú) TPA、CEA 骨髓瘤 2-M、本周蛋白 25常用腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的臨床應(yīng)用 肺癌 腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物：位于細(xì)胞中的物質(zhì)或抗原，如激素受體、白血病表型。體液腫瘤標(biāo)志物：病理情況下，濃度增加時(shí)可在血液

10、、尿液或其他體液中測(cè)得的物質(zhì)，如AFP、CA19-9、 CEA、 CA15-3等。腫瘤表型標(biāo)志物：酶、胚胎性抗原、異位性蛋白、激素等。出現(xiàn)于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化和臨床進(jìn)展階段。腫瘤基因標(biāo)志物：基因突變、基因表達(dá)異常等，出現(xiàn)于癌前起動(dòng)階段。26腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物：位于細(xì)胞中的物質(zhì)或抗原，如激體液腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)和命名尚未完全統(tǒng)一，一般分為： 胚胎抗原類(lèi)：如AFP，CEA等， 糖鏈抗原類(lèi)：如CA125，CA15-3，CA19-9等。 激素類(lèi)：如患甲狀腺髓樣癌時(shí)降鈣素升高，患絨毛膜 細(xì)胞癌時(shí)hCG明顯升高。 酶和同工酶類(lèi)：GT，PAP等。 蛋白質(zhì)類(lèi)：2微球蛋白，鐵蛋白，本周蛋白等 癌基因產(chǎn)物類(lèi):如

11、ras基因蛋白，myc基因蛋白，p53抑癌基因蛋白等。27體液腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)和命名尚未完全統(tǒng)一，一般分為：27特異性好與腫瘤類(lèi)型 (大小/分期) 有關(guān)靈敏度高，能腫瘤能早期發(fā)現(xiàn)。具有器官特異性監(jiān)測(cè)腫瘤治療效果監(jiān)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā) 理想的腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后28特異性好與腫瘤類(lèi)型 (大小/分期) 有關(guān)靈敏度高，能腫瘤能早一、常見(jiàn)的腫瘤抗原及其意義29一、常見(jiàn)的腫瘤抗原及其意義291.甲胎蛋白（AFP） AFP是胎兒發(fā)育早期合成的一種糖蛋白(1球蛋白)，分子量70kD，胎兒出生后不久即逐漸消失。參考值：血清AFP 300g/L，但有部分患者AFP始終不升高； 病毒性肝炎與肝硬化患者，血清中AFP可

12、有不同程度的增高，但一般在300g/L以下； 生殖系統(tǒng)腫瘤和胚胎性腫瘤，如睪丸癌、畸胎瘤等升高； 妊娠三個(gè)月后，血清AFP含量開(kāi)始升高，分娩后三周恢復(fù)正常。若孕婦血清中AFP異常升高，應(yīng)考慮有胎兒神經(jīng)管缺損畸形的可能性。31 原發(fā)性肝癌，77%的患者AFP300g/L，但有部分2.癌胚抗原（CEA）1965年CEA發(fā)現(xiàn)于成人結(jié)腸癌組織中，分子量約為200kD，可溶性糖蛋白，主要存在于成人癌組織以及胎兒的胃腸管組織中，故名癌胚抗原，是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物。參考值：血清CEA 5.0g/L322.癌胚抗原（CEA）1965年CEA發(fā)現(xiàn)于成人結(jié)腸癌組織中 結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌，轉(zhuǎn)

13、移性惡性腫瘤也有不同程度的陽(yáng)性率；在惡性腫瘤的隨訪，病情監(jiān)測(cè)，療效評(píng)價(jià)等方面有重要價(jià)值。 腸道息肉、憩室炎、結(jié)腸炎、肝硬化、肝炎、胰腺炎和肺 部疾病也可有不同程度的升高； 吸煙者中約有33%的人CEA5g/L。CEA陽(yáng)性見(jiàn)于：33 結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌，轉(zhuǎn)移性惡性腫3.前列腺特異性抗原 (PSA) 參考值：血清 t-PSA 4.0 g/L， f-PSA 25PSA是一種由前列腺上皮細(xì)胞分泌的蛋白酶。在血清中PSA以兩種生化形式存在： 一部分(5%40%)是以低分子量(33kD)的 游離PSA（f-PSA）形式存在； 大部分(60%90%)是以PSA和1抗糜蛋白酶、 2-巨

14、球蛋白等結(jié)合的形式存在， 稱(chēng)復(fù)合PSA(c-PSA)。 總PSA（t-PSA）,包括血清中f-PSA和c-PSA。343.前列腺特異性抗原 (PSA) 參考值：血清 t-P4. 糖類(lèi)抗原12-5（CA125） 是卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)志物分子量為20萬(wàn)的糖蛋白可被單克隆抗體OC125所識(shí)別在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來(lái) 源的病理和正常組織中表達(dá)，其生物 學(xué)功能不明。 354. 糖類(lèi)抗原12-5（CA125） 35正常人血清中CA125的臨界值為35U/ml CA125的半衰期僅4.8天，在血中很快代謝，所測(cè)即時(shí)結(jié)果能反映腫瘤近期的變化狀態(tài)36正常人血清中CA125的臨界值為35

15、U/ml 36 CA125在卵巢癌，尤其是上皮性卵巢 癌、子宮內(nèi)膜癌可出現(xiàn)升高，還可在 肺癌、宮頸癌等腫瘤狀態(tài)時(shí)升高。 CA125在子宮內(nèi)膜異位癥、1%的健 康婦女、3%的患良性卵巢疾病婦女 及其他非腫瘤患者也可見(jiàn)到升高。37 CA125在卵巢癌，尤其是上皮性卵巢 CA125的臨床應(yīng)用卵巢癌的輔助診斷觀察病情及預(yù)測(cè)預(yù)后 -血清CA125升高（或降低）2倍的患者 中大于80%的病例為病情進(jìn)展（或消退） -CA12535U/ml的病人中有95%在第二次 手術(shù)時(shí)仍有腫瘤存在38CA125的臨床應(yīng)用385.糖類(lèi)抗原19-9（CA199） CA19-9是胰腺、胃和腸癌的標(biāo)記物。 正常人群血清CA19-9

16、陽(yáng)性的臨界值為 37U/ml395.糖類(lèi)抗原19-9（CA199）39診斷可以作為胰腺和膽管癌較好的標(biāo)志物用于臨床，胰腺癌的陽(yáng)性率可達(dá)70%92%，膽管癌為66.7%對(duì)胃癌、肝癌和結(jié)直腸癌的陽(yáng)性率分別可達(dá)25%60%、56%60%，18%58%CA199的 應(yīng)用40診斷CA199的 應(yīng)用40療效監(jiān)測(cè) 治療中及術(shù)后含量下降乃至正常表示治療方案正確復(fù)發(fā)跟蹤 升高可作為腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的亞臨床診斷或重要的輔助診斷指標(biāo)41療效監(jiān)測(cè)416.神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NSE）同功酶類(lèi)腫瘤標(biāo)志物，正常僅存于神 經(jīng)組織和紅細(xì)胞中正常人血清值為 13g/L小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)內(nèi) 分泌腫瘤及腦損傷時(shí)升高待測(cè)標(biāo)本

17、絕對(duì)禁止溶血，溶血可出現(xiàn) NSE血清水平升高426.神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NSE）同功酶類(lèi)腫瘤標(biāo)志物，正常僅跟蹤監(jiān)測(cè)癌腫病情進(jìn)展和療效判斷 -肺癌NSE高于11.8 g/L預(yù)示肺癌患者生存期較短化療24小時(shí)后 NSE下降是治療效果良好的標(biāo)志神經(jīng)原特異性烯醇化酶的臨床應(yīng)用43跟蹤監(jiān)測(cè)癌腫病情進(jìn)展和療效判斷神經(jīng)原特異性烯醇化酶的臨床應(yīng)用7.人絨毛膜促性腺激素（HCG） 糖蛋白類(lèi)激素，由蛋白核心與位于 羧基端的以唾液酸為終止的側(cè)鏈組成兩個(gè)亞基組成: &: 與 - LH, TSH 和 FSH相同:與-LH有交叉由合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生 被證實(shí)是一種原始物質(zhì) (可作為一種有用的腫瘤標(biāo)志物)447.人絨毛膜

18、促性腺激素（HCG） 糖蛋白類(lèi)激素HCG的臨床應(yīng)用：HCG上升：幾乎所有絨毛膜上皮細(xì)胞 癌、70%的非精原細(xì)胞性睪丸癌，胃 腸道、肺、 乳腺腫瘤時(shí)亦可見(jiàn)HCG水平與腫瘤大小、疾病預(yù)后有關(guān)腦脊液中HCG上升提示腫瘤有腦轉(zhuǎn)移可用于監(jiān)測(cè)治療45HCG的臨床應(yīng)用：45二、常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的免疫方法46二、常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的免疫方法46 待測(cè)物質(zhì)濃度與檢測(cè)手段 臨床化學(xué)分析10-1210-910-610-310-0pg/mLng/mLmg/mLmg/mLg/L免疫分析Therapeutic DrugsThyroid HormoneFertility HormoneAllergyCancer MarkersInfectious DiseaseVitaminsSerum Proteins47 待測(cè)物質(zhì)濃度與檢測(cè)手段 臨床化學(xué)分析1