兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用69張課件

1、兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用1、不要輕言放棄，否則對不起自己。2、要冒一次險(xiǎn)!整個(gè)生命就是一場冒險(xiǎn)。走得最遠(yuǎn)的人，常是愿意去做，并愿意去冒險(xiǎn)的人?！胺€(wěn)妥”之船，從未能從岸邊走遠(yuǎn)。-戴爾卡耐基。3、人生就像一杯沒有加糖的咖啡，喝起來是苦澀的，回味起來卻有久久不會退去的余香。4、守業(yè)的最好辦法就是不斷的發(fā)展。5、當(dāng)愛不能完美，我寧愿選擇無悔，不管來生多么美麗，我不愿失去今生對你的記憶，我不求天長地久的美景，我只要生生世世的輪回里有你。兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用1、不要輕言放棄，否則對不起自己。2、要冒一次險(xiǎn)!整個(gè)生命就是一場冒險(xiǎn)。走得最遠(yuǎn)

2、的人，常是愿意去做，并愿意去冒險(xiǎn)的人。“穩(wěn)妥”之船，從未能從岸邊走遠(yuǎn)。-戴爾卡耐基。3、人生就像一杯沒有加糖的咖啡，喝起來是苦澀的，回味起來卻有久久不會退去的余香。4、守業(yè)的最好辦法就是不斷的發(fā)展。5、當(dāng)愛不能完美，我寧愿選擇無悔，不管來生多么美麗，我不愿失去今生對你的記憶，我不求天長地久的美景，我只要生生世世的輪回里有你。兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用磐安縣人民醫(yī)院 申屠橋民一、兒科常見皰疹類病毒感染的病原體種類、危害及診治現(xiàn)狀語言是文化的表現(xiàn)形式，通過這種表現(xiàn)形式能夠反映出我國傳統(tǒng)文化的內(nèi)涵與內(nèi)容，還能通過語言來反映我國人民的文化特征與特點(diǎn)，這需要對我國人文與文化環(huán)境有所了解和掌握

3、。雖然說我國的學(xué)生在學(xué)習(xí)英語的過程中掌握了較為豐富的英語詞匯，但是仍然有很多學(xué)生不能夠流利用英語進(jìn)行交流。之所以出現(xiàn)這樣的問題，主要原因就在于學(xué)生對外國的文化背景缺乏了解，沒有將英語思維應(yīng)用到學(xué)習(xí)過程中。如果學(xué)生們在用英語進(jìn)行交流的過程中沒有使用英語思維，就會對交流的速度和準(zhǔn)確性產(chǎn)生消極影響。所以說，英語和漢語這兩種不同的語言，它們的不同之處不單單表現(xiàn)在語音、語法以及結(jié)構(gòu)等多方面，還主要表現(xiàn)在雙方思維方式上：中國人具備整體思維，而西方人主要是個(gè)體思維。 一、思維方式差異對語言產(chǎn)生的影響 （一）漢英語言邏輯順序不一樣 1.把握對象的思維方式不同 中國人在把握對象的時(shí)候通常使用的是綜合性思維，他們

4、不會從一開始就準(zhǔn)確地指出一個(gè)概念的含義，通常是在一種動(dòng)態(tài)的過程中，根據(jù)上下文語境進(jìn)行確定含義。舉例來說：“你吃飯了沒有？”在上面這句話中，飯主要包括：早飯、午飯、晚飯。在說這句話的時(shí)候人們通常不需要明確指出，這是因?yàn)榭梢愿鶕?jù)說話的時(shí)間來確定飯具體指什么。同樣的一個(gè)詞語，在英文中則會被譯為“breakfast”“l(fā)unch”“supper”，分得十分清楚。 2.漢英邏輯順序不同 在漢語當(dāng)中，往往是按照先因后果的邏輯順序，先假設(shè)后論證，按照由遠(yuǎn)及近、由大到小的秩序進(jìn)行排列。然而在英語當(dāng)中，可以通過多樣的連接詞進(jìn)行表示，主要按照含義與自身的結(jié)構(gòu)進(jìn)行靈活性安排。舉例來說，在對時(shí)間進(jìn)行表示的問題上，英語

5、中主要是由小到大排列，即分、時(shí)、日、月、年；在漢語中主要是由大到小排列，即年、月、日、時(shí)、分。 （二）英漢雙方在形態(tài)與功能方面的差異 在英語中，每一種語法意義都會有一個(gè)明確的方式來表達(dá)出來，并且具有較為具體的標(biāo)志。舉例來說，名詞復(fù)數(shù)+S或者+ES；一般將來時(shí)加動(dòng)詞原形。通過對英語漢語的比較來看，英語更加注重以形統(tǒng)意，而漢語在對詞語、短語、句子的形式方面沒有確定的標(biāo)志，更多的是依靠整體關(guān)系來確定的。舉例來說，在句子“我今天有事”中，“我”是這句話中的話題，說明部分是“今天有事”。這句話在上下文聯(lián)系的前提下，便可以表述為“今天有事”。在這句話中話題“我”可以省略，這一省略主要體現(xiàn)出了漢語中的意合，

6、本質(zhì)上表現(xiàn)的是一種整體思維。對于英漢雙方教學(xué)的特點(diǎn)來說，教師在英語教學(xué)中不單要培養(yǎng)學(xué)生聽說讀寫的能力，還要培養(yǎng)學(xué)生的英文思維能力，幫助學(xué)生養(yǎng)成良好的跨文化交際能力。 二、優(yōu)化小學(xué)英語教學(xué)中對學(xué)生跨文化交際意識的策略 （一）重視在不同情境中對英語詞匯的正確運(yùn)用 單詞作為英語學(xué)習(xí)中的重要部分，已經(jīng)成為跨文化交際意識培養(yǎng)的重點(diǎn)內(nèi)容，要想更好地培養(yǎng)快文化交際能力，首先應(yīng)當(dāng)從單詞和短語入手。另外，在造句上需要有以下幾個(gè)方面注意。 首先，語域方面。主要指的是在不同條件下運(yùn)用不同的語言形式。舉例來說，當(dāng)一個(gè)人與其他人打招呼的時(shí)候，什么時(shí)候用“how do you do”，什么時(shí)候用“Good Morning

7、”等等。另外，在表示男孩英俊的?r候應(yīng)當(dāng)用“handsome”，在表達(dá)女孩漂亮的時(shí)候應(yīng)該用“pretty”，諸如此類的問題應(yīng)當(dāng)注意避免錯(cuò)誤。 其次，搭配方面。主要指的是在英語當(dāng)中有一些單詞的搭配能力比較強(qiáng)，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對重點(diǎn)詞語的講解與應(yīng)用指導(dǎo)。舉例來說，在學(xué)習(xí)到Man這個(gè)詞語的時(shí)候，就可以擴(kuò)充學(xué)習(xí)“policemen”“postman”等等。 再次，同義詞、反義詞方面。在英文中，英文單詞通常可以用同義詞、反義詞來表達(dá)。為了能夠更加有效地提升跨文化交際能力，教師應(yīng)當(dāng)培養(yǎng)學(xué)生注重英文同義詞與反義詞的合理運(yùn)用。 （二）突出英美習(xí)語和習(xí)慣用法的引用介紹 在和英美人士進(jìn)行交流溝通的過程中，不難發(fā)現(xiàn)的是他們

8、經(jīng)常會使用俚語、習(xí)語，而這恰恰是中國人比較頭疼的部分。之所以會出現(xiàn)這樣的情況，主要原因就在于中國人通常會按照字面意思去理解。舉例來說，英美人在說big fish（大人物）的時(shí)候，中國人通常會理解成“大魚”。正是因?yàn)闁|西方文化之間存在較大的差異，所以二者在風(fēng)俗習(xí)慣上是大相徑庭的。舉例來說，“Im beat”這句話的含義被理解為“我被打了”，而不是“我很累”。要想更加合理地利用這些習(xí)慣用語，務(wù)必結(jié)合上下文情境，還要將習(xí)慣用語應(yīng)用到具體的場景中進(jìn)行記憶，這樣會有效提高記憶效果。英語教師在教學(xué)的過程中要根據(jù)學(xué)生的具體情況來制定教學(xué)方法，培養(yǎng)學(xué)生使用英文習(xí)慣用語的良好習(xí)慣。舉例來說每天可以在課堂上準(zhǔn)備課

9、前1分鐘的Free talk，利用這段時(shí)間來介紹習(xí)慣用語。另外，教師應(yīng)當(dāng)提醒學(xué)生如果在日常交際的過程中遇到了這些習(xí)慣用語，切記要綜合分析與應(yīng)用。之所以要這樣做，主要原因就在于成語具有一定的整體性，要想更好地區(qū)分，需要弄清楚它們的含義，而不是根據(jù)詞語表面的意思進(jìn)行簡單的相加。 （三）加強(qiáng)對英語句式和漢語句式語序結(jié)構(gòu)的區(qū)別 句子是構(gòu)成語篇的最重要內(nèi)容，考慮到中西雙方思維模式的差異，會直接影響到雙方語言邏輯順序的不同。構(gòu)成語篇的最主要內(nèi)容就是句子，然而考慮到中西雙方在思維方式方面存在的不同之處，以及在中英雙方語言邏輯順序上的迥異，這就要求英語教師在對小學(xué)生進(jìn)行英語教學(xué)的過程中重視這兩種語言句式以及結(jié)

10、構(gòu)上的不同。舉例來說：“Its the first day of the new term.”在這句話當(dāng)中，英語教師應(yīng)當(dāng)讓學(xué)生們掌握“of”的用法，主要指的是這一個(gè)詞語所構(gòu)成的結(jié)構(gòu)在中英雙方文章中是相反的。如果按照正確的順序進(jìn)行翻譯，答案應(yīng)為：“這是新學(xué)期的第一天?！痹俦热缯f：“那個(gè)穿白衣服的女孩是南希?！碑?dāng)學(xué)生們對這個(gè)句子進(jìn)行漢譯英的時(shí)候，應(yīng)當(dāng)遵從英語思維將這句話翻譯成：“That girl in white is Nancy.”通過這些例子，英語教師應(yīng)當(dāng)發(fā)現(xiàn)的是在日常教學(xué)英語的過程中，要重點(diǎn)對這些學(xué)生不容易理解的知識點(diǎn)、語序結(jié)構(gòu)、句型等進(jìn)行強(qiáng)化練習(xí)，從而更好地培養(yǎng)學(xué)生英語思維的成長與發(fā)展。

11、 （四）聯(lián)系生活實(shí)際，創(chuàng)設(shè)真實(shí)有效的交際情景 發(fā)展語言的本質(zhì)和主要目的就是為了交際溝通，要想在英語教學(xué)過程中培養(yǎng)學(xué)生跨文化交際的能力，就應(yīng)當(dāng)在模擬場景中對學(xué)生展開行之有效的活動(dòng)。在英語課堂的日常交流活動(dòng)中，表演是其中具有一定特色的方法。英語教師們可以在當(dāng)前的教學(xué)課堂上多利用現(xiàn)代化教學(xué)手段，通過這些教學(xué)手段來更好地活躍課堂氛圍，讓學(xué)生可以在生活場景中學(xué)會使用英語，從而更好地交流。教師們可以通過現(xiàn)代化多媒體手段來活躍課堂氣氛，讓學(xué)生們在生活與情境中學(xué)會交流。舉例來說，教師在講授購買水果這一刻的時(shí)候，可以先給同學(xué)們做示范，再讓學(xué)生們找課下時(shí)間在父母的陪同下一起購買水果，在課堂上將自己的所見所聞準(zhǔn)確表

12、達(dá)出來，并且按照購買水果時(shí)的場景展開交際活動(dòng)，可以通過編造對話的形式來使這一活動(dòng)變得豐富多彩。在以上這些對話過程中，無一不反映了西方文化的背景知識，通過這些對話我們可以看出在西方服務(wù)人員的熱情與優(yōu)質(zhì)服務(wù)。與此同時(shí)，教師還可以精心組織學(xué)生們?yōu)橐晃贿^生日的同學(xué)設(shè)計(jì)一組對話，并在舉辦生日宴會的時(shí)候先讓他們對西方人當(dāng)面拆禮物的習(xí)慣有所了解，這樣一來，學(xué)生們可以在對話過程中表達(dá)自己的謝意。學(xué)生們一旦了解到西方文化中的這一習(xí)俗，便可以在對話與溝通的過程中變得更加流暢、自然。舉例來說： A： This present is for you. Please open and have a look. B：Oh

13、，how nice！ I like it very much. Thank you. 通過以上這一組對話，我們可以做到讓學(xué)生們通過對話身臨其境，讓學(xué)生們在課堂上就能感受到對話中的獨(dú)特魅力。通過對英語的展示和學(xué)習(xí)，有效地激發(fā)了學(xué)生自身對英語學(xué)習(xí)的興趣和愛好，從而使得他們有更多的興趣來學(xué)習(xí)外國的風(fēng)俗文化。 （五）講究閱讀教學(xué)方法，提高學(xué)生跨文化意識 為了能夠更加有效地幫助學(xué)生提高跨文化交際意識和能力，英語教師們可以適當(dāng)?shù)剡x擇一些課外閱讀文章與書籍，通過這些來有目的地讓學(xué)生們對英美國家人們的生活習(xí)慣、家庭關(guān)系、教育方式以及社會背景等多方面內(nèi)容進(jìn)行了解和掌握。教師還應(yīng)在日常教學(xué)的過程中加強(qiáng)對相關(guān)文化知

14、識介紹的教學(xué)方法，主要包括以下幾點(diǎn)： 首先是直接闡釋法。對于這一方法的利用，英語教師可以在對英文閱讀材料的講解過程中注意，哪個(gè)知識點(diǎn)是學(xué)生容易產(chǎn)生困惑的地方。舉例來說，學(xué)生遇到了困難的文化點(diǎn)等現(xiàn)象，需要教師對這一內(nèi)容進(jìn)行直接的解釋。如“boss”一詞在英美文化當(dāng)中一般指的是自己的上司，而在中國文化當(dāng)中這一詞主要指的是老板、擁有企業(yè)的人或者大款。又如，在日常閱讀練習(xí)中，多數(shù)還會遇到以下問題： A：How about my watch？ B：Thats very nice A：_.” 有很多同?W當(dāng)看到這道題的時(shí)候，會選擇答案“Thank you”。雖然說這個(gè)答案和問題十分相配，但是這卻是在用中國

15、人的思維去考慮外國的背景與習(xí)慣。以上的這個(gè)例子充分證明了，只有對英美國家的文化背景與風(fēng)俗習(xí)慣進(jìn)行了詳細(xì)了解，才能選擇正確答案，這就要求英語教師要提高對學(xué)生跨文化交際意識的培養(yǎng)發(fā)展。 其次是比較學(xué)習(xí)法。應(yīng)當(dāng)將英文閱讀文章中關(guān)于文化因素的內(nèi)容與漢語相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行比較，只有這樣才能有效地將二者進(jìn)行區(qū)分。舉例來說，對于稱贊來講，中英雙方就有不同的理解和接受方式。在中國，人們一旦接受了別人的稱贊，通常會表現(xiàn)出不太好意思接受的樣子，往往是推脫一番之后才接受；而在西方，人們通常會十分愉快地接受并表示感謝。通過這種對比我們可以發(fā)現(xiàn)，就是通過運(yùn)用比較法，才使得學(xué)生們清楚地意識到雙方文化存在的差異，從而有效提高學(xué)生

16、跨文化交際的意識和能力。 【學(xué)生怕作文，農(nóng)村學(xué)生更怕作文。農(nóng)村學(xué)生相較于城里學(xué)生而言，他們生活中可感知的新鮮事物稀少，可供閱讀的書籍匱乏，社交能力更無法與城里孩子相比。這些困境和現(xiàn)狀相信每一個(gè)在農(nóng)村從事過教育工作的人都會有體會。在農(nóng)村小學(xué)從事語文教學(xué)過程中，我在作文教學(xué)中我花了不少心血，但收效平平。在一次次失望中我開始反思我所運(yùn)用的指導(dǎo)方法是否最適合農(nóng)村孩子，如何突破，才走出一條更有助于提高農(nóng)村學(xué)生作文水平的訓(xùn)練方法。 基于此，本人結(jié)合教學(xué)實(shí)踐談?wù)勣r(nóng)村小學(xué)語文教學(xué)中作文訓(xùn)練的有效方法。 一、培養(yǎng)學(xué)生的寫作興趣 俗話說“興趣是最好的老師”，興趣也是指導(dǎo)學(xué)生寫作文的最好的老師。在教學(xué)過程中，教師的

17、目的就是要激發(fā)學(xué)生的寫作熱情，讓學(xué)生發(fā)自內(nèi)心的喜歡寫作，在生活中積累寫作的素材。首先，教師在作文教學(xué)中所選的教學(xué)內(nèi)容要貼近農(nóng)村孩子的心靈；其次，要盡可能地貼近學(xué)生實(shí)際生活；第三，要把老師的架子放下來，與學(xué)生融為一體，跟學(xué)生用商量的語氣該寫什么，怎么樣寫。學(xué)生只要對作文產(chǎn)生了濃厚的興趣，就會留心觀察，分析周圍的每一個(gè)人，每一件事，每一處景物，寫起文章來自然合情若泉涌，滔滔不絕。 二、注重平時(shí)的素材積累 作文也像語文基礎(chǔ)知識、閱讀一樣需要積累，比如好詞、句、精彩片段等。首先，要用到學(xué)生根據(jù)課文內(nèi)容來積累 。新課標(biāo)要求要重視文本，很多課文的思考練習(xí)中都出現(xiàn)“背誦自己喜歡的自然段，摘抄好詞、佳句”這樣

18、的練習(xí)，讓學(xué)生在背誦時(shí)感受語言文字的優(yōu)美，摘抄中積累材料。如果學(xué)生能掌握一些好詞佳句就為寫作做好了鋪墊，能夠讓他們有詞可用、有話可說。堅(jiān)持寫日記是積累材料的是最好方式，也是練筆的最佳途徑。 三、培養(yǎng)學(xué)生的觀察能力 對于農(nóng)村孩子來說，農(nóng)村自然風(fēng)景，鄉(xiāng)土氣息濃厚。教師要利用這種優(yōu)勢，引導(dǎo)學(xué)生仔細(xì)觀察，使他們“觸景生情”。把這種情景教育引進(jìn)小學(xué)作文教學(xué)中，會收到事半功倍的效果。如寫一寫家中養(yǎng)的貓，教師可引導(dǎo)學(xué)生觀察貓吃食、貓睡覺、貓捉老鼠等等，幫他們列出觀察項(xiàng)目，學(xué)生就會有目的的觀察，寫作時(shí)就不會無話可說了。讓學(xué)生每天回憶發(fā)生的事，說一說、議一議，寫一寫，久而久之，學(xué)生就知道了什么事是有價(jià)值的了。事

19、不在大小，在事情的內(nèi)容。指導(dǎo)學(xué)生寫自己熟悉而又真實(shí)的生活，而不是寫那些“虛構(gòu)生活”讓學(xué)生知道，說真話、寫事實(shí)、敘真情就是作文。 四、讓學(xué)生在活動(dòng)中寫作 農(nóng)村孩子由于閱力淺，詞匯積累少，有很多事物會說不會表達(dá)，在作文課堂中創(chuàng)設(shè)操作情境，引導(dǎo)學(xué)生做一做，想一想，說一說，寫一寫。如：提供簡單幾何圖形，啟發(fā)學(xué)生任意拼一拼，然后根據(jù)拼得的事物做想像作文，鼓勵(lì)學(xué)生利用自已手中報(bào)刊上面的圖畫剪一剪，貼一貼或畫一畫，然后再展開想象進(jìn)行創(chuàng)編故事，指導(dǎo)學(xué)生做一做或試一試（小制作、小實(shí)驗(yàn)）等，然后練寫小制作、小實(shí)驗(yàn)報(bào)告，在這種情境中，學(xué)生邊做邊想，做后再想，通過“做”與“寫”結(jié)合以做促想、促寫。因而學(xué)生腦中便有了具

20、體感知的形象，從而更容易寫出想象豐富、文從字順的文章。 五、鼓勵(lì)學(xué)生說真話抒真情 農(nóng)村學(xué)生的作文存在一個(gè)通病，那就是東拼西湊，毫無感情。所以，我們在作文教學(xué)中，應(yīng)竭力教育學(xué)生寫真事、說真話、抒真情。當(dāng)學(xué)生說出具有自己特色的話時(shí)，教師應(yīng)大力表揚(yáng)和肯定。讓學(xué)生知道真實(shí)的東西容易打動(dòng)人，有特色的語言才能吸引人，有感情的語句才能感動(dòng)人。在習(xí)作中我們不難發(fā)現(xiàn)，學(xué)生作文總是在贊揚(yáng)生活，贊揚(yáng)好人好事，這些固然是好的。但是，我們應(yīng)該讓學(xué)生知道，生活中不總是有真、善、美，還有丑與惡。如：人類為了個(gè)人利益而破壞環(huán)境的種種丑態(tài)；鄰里之間，同學(xué)之間的沖突、矛盾、誤會、爭吵等，都可以是作文的素材，教師要鼓勵(lì)學(xué)生我手寫我

21、心，敢于表達(dá)自己的思想。學(xué)生實(shí)話實(shí)說，作文就不再空白無力，而且教師可以以作文為載體，及時(shí)對學(xué)生進(jìn)行人格教育。 六、利用好多媒體教學(xué)優(yōu)勢 農(nóng)村學(xué)生對外面的世界了解甚少，城市學(xué)生有優(yōu)越的學(xué)習(xí)環(huán)境及良好的學(xué)習(xí)資源，而農(nóng)村學(xué)生只與優(yōu)美的大片自然接觸，缺乏良好的學(xué)習(xí)資源。特別在前些年農(nóng)村學(xué)生還不知道什么是電腦，什么是多媒體，什么是遠(yuǎn)程教育.而今天的農(nóng)村學(xué)生可以利用網(wǎng)絡(luò)資源，根據(jù)教學(xué)內(nèi)容的需求，下載好的學(xué)習(xí)資料，通過這些好的學(xué)習(xí)資源，讓學(xué)生更為直觀地了解更多知識。這樣既開拓了農(nóng)村學(xué)生的視野，又豐富了農(nóng)村學(xué)生寫作的素材。農(nóng)村學(xué)生通過優(yōu)秀的網(wǎng)絡(luò)資源，了解豐富的寫作素材，寫起作文來得心應(yīng)手，不再是無從下手的現(xiàn)狀

22、了，通過豐富的網(wǎng)絡(luò)資源，農(nóng)村學(xué)生突破了寫作困難的障礙。 七、在閱讀中豐富寫作語言 沒有大量的閱讀，就沒有豐富的語言積累。這就要求學(xué)生要大量閱讀，要求學(xué)生在讀書時(shí)做到把自己的心真正放到文章里面，使自己的情感流露與作者的情感表達(dá)產(chǎn)生強(qiáng)烈的共鳴。因此教師在做好正常教學(xué)工作的基礎(chǔ)上，一周專門拿出兩節(jié)課讓學(xué)生靜心讀書。閱讀即對時(shí)事新聞、報(bào)刊雜志、網(wǎng)絡(luò)的閱讀；同時(shí)誦讀古詩詞、中華經(jīng)典名錄、現(xiàn)代優(yōu)秀詩文的誦讀。 總之，隊(duì)農(nóng)村小學(xué)作文教學(xué)來說，冰凍三尺非一日之寒，學(xué)生的習(xí)作水平很難在短時(shí)間內(nèi)迅速提高，因此，作為語文教師應(yīng)立足實(shí)際，正視現(xiàn)實(shí)，在教學(xué)中掌握學(xué)情，循序漸進(jìn)，因材施教，采用適合農(nóng)村小學(xué)生的教法，走出一

23、條農(nóng)村小學(xué)語文作文教學(xué)的新路。兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用1、不要輕言放棄，否則兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用69張課件兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用69張課件兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用69張課件兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用69張課件在常見感染性疾病中，細(xì)菌與病毒共占了90%以上（其中細(xì)菌與病毒各占45%左右）。在95重大攻關(guān)項(xiàng)目中，成功地創(chuàng)建了16SrRNA基因PCR基因芯片快速、準(zhǔn)確診斷不同細(xì)菌的感染，使細(xì)菌診斷上了一新的臺階，其研究成果也列入了全國新生兒敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)。在常見感染性疾病中，細(xì)菌與病毒共占了90%以上（其中細(xì)菌與病但病毒的快速

24、早期診斷方法仍未見報(bào)道。兒童是祖國的未來，如何早期明確診斷兒童病毒感染將是能否治愈病毒感染的關(guān)鍵。但病毒的快速早期診斷方法仍未見報(bào)道。兒童是祖國的未來，如何早2 、兒科皰疹類病毒感染的危害兒童病毒感染造成嚴(yán)重危害涉及兒科與圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)二大范疇。兒科領(lǐng)域中，病毒感染致死的主要原因是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，典型的感染為單純皰疹病毒型（HSV）所致的腦膜腦炎（HSE）。 2 、兒科皰疹類病毒感染的危害HSE是散發(fā)性病毒性腦炎中最常見的病原。其次表現(xiàn)為發(fā)熱、肝脾淋巴結(jié)腫大等原因不明的病毒感染，最具代表性的疾病是傳染性單核細(xì)胞增多癥。目前已知主要是由于EB病毒感染所致。EB病毒還對神經(jīng)系統(tǒng)危害嚴(yán)重，如引起腦膜腦炎

25、、格林巴利綜合癥、Fishers綜合癥等。 HSE是散發(fā)性病毒性腦炎中最常見的病原。其次表現(xiàn)為發(fā)熱、肝脾在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中，病毒感染的危害在于宮內(nèi)感染，最具典型的是巨細(xì)胞病毒（CMV），其次是單純皰疹病毒型（HSV）。同時(shí)，CMV腦炎也是AIDS患者中最常見的并發(fā)癥。 在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中，病毒感染的危害在于宮內(nèi)感染，最具典型的是巨細(xì)胞皰疹類病毒導(dǎo)致兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，不及時(shí)治療往往造成智力低下、驚厥發(fā)作、語言不清、神經(jīng)性耳聾等中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重后遺癥，尤其是HSV引起的腦炎，未經(jīng)治療死亡率高達(dá)70%，而有效的抗病毒藥物治療后可明顯改善HSE的愈合，使死亡率降至20-30%，但要確保早期用藥。 皰疹類病毒

26、導(dǎo)致兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染，不及時(shí)治療往往造成智力3 、兒科感染皰疹類病毒的種類造成兒童感染致死的主要病毒是HSV、EBV、HCMV、HSV。這些病毒同屬于皰疹類病毒，分別是皰疹病毒（HSV/）、皰疹病毒（HCMV）、皰疹病毒（EBV）。 3 、兒科感染皰疹類病毒的種類皰疹類病毒尚包括水痘帶狀皰疹病毒（VZV），常易致腦膜腦炎、脊髓炎及神經(jīng)炎；人皰疹病毒6型（HHV 6）、7型（HHV 7），以及最近發(fā)現(xiàn)的HHV 8，已有論據(jù)顯示壞死性腦炎和Griscellis綜合癥的病兒腦組織中發(fā)現(xiàn)了HHV 6病毒。 皰疹類病毒尚包括水痘帶狀皰疹病毒（VZV），常易致腦膜腦炎、4、皰疹類病毒感染診治現(xiàn)狀目前

27、，對皰疹病毒感染仍缺乏快速、敏感、特異的診斷方法。傳統(tǒng)的診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”為病毒分離，培養(yǎng)一般需要5-21天，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且敏感性和特異性均欠佳。大多數(shù)情況下，腦炎的特異性病毒檢測率僅30%，約2/3的感染者無法用病毒分離獲得明確診斷。 4、皰疹類病毒感染診治現(xiàn)狀病毒特異性抗體IgM，在體液中要達(dá)到有效濃度需10天左右，同時(shí)可與其他病毒感染產(chǎn)生交叉反應(yīng)，從而使其診斷的敏感性和特異性大大降低。病毒特異性抗體IgM，在體液中要達(dá)到有效濃度需10天左右，同而IgG抗體則有95%的患者將維持終生，故IgG抗體的存在只能說明有既往感染，不能說明是現(xiàn)時(shí)感染，如要用IgG抗體作為現(xiàn)時(shí)感染的診斷依據(jù)，必需動(dòng)態(tài)觀察其

28、滴度的變化，因而不能滿足臨床早期診斷的需要。 而IgG抗體則有95%的患者將維持終生，故IgG抗體的存在只聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）是近十幾年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)，它可在一定條件下，短時(shí)間內(nèi)（數(shù)小時(shí)）使病原體基因片段發(fā)生上百萬倍的擴(kuò)增，然后用凝膠電泳、核酸雜交、限制性酶切分析、序列檢測。 聚合酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）是近十幾年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)，近幾年來，PCR診斷技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于臨床診斷皰疹類病毒感染，Pozo應(yīng)用多對引物的多重PCR來診斷皰疹類病毒感染，雖然能區(qū)分不同的病毒，但因其引物間可互相干擾，使其敏感性較低。也有人用各種病毒基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)不同引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，但只能檢測一種

29、病毒，易造成漏診。 近幾年來，PCR診斷技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于臨床診斷皰疹類病毒感染因此，許多學(xué)者提出能否構(gòu)建通用引物來對所有皰疹類病毒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而達(dá)到能一次性檢測所有皰疹類病毒，以及它們的混合感染。 因此，許多學(xué)者提出能否構(gòu)建通用引物來對所有皰疹類病毒進(jìn)行PC皰疹類病毒是由一組病毒組成，具有許多相似的生物學(xué)特征及分子結(jié)構(gòu)。具有高度同源序列的基因?yàn)镈NA多聚酶基因，它所編碼的蛋白質(zhì)是DNA多聚酶，為病毒復(fù)制所必需，該基因?yàn)樗邪捳铑惒《舅灿校矣懈叨鹊谋Ｊ匦?，理論上可在此區(qū)構(gòu)建通用引物同時(shí)對多種皰疹類病毒進(jìn)行檢測。 皰疹類病毒是由一組病毒組成，具有許多相似的生物學(xué)特征及分子結(jié)Yamamo

30、to曾在此區(qū)構(gòu)建通用引物對35例臨床懷疑皰疹病毒感染腦炎患者的腦脊液（CSF）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后進(jìn)行Southern雜交，檢測了6種皰疹類病毒，但未能區(qū)分各自不同的病毒。 Yamamoto曾在此區(qū)構(gòu)建通用引物對35例臨床懷疑皰疹病毒由于病毒的生物學(xué)特性比較復(fù)雜，各種病毒差異很大，即使同屬皰疹類病毒，其抗病毒藥差異甚大。如抑制CMV的更昔洛韋，對EBV無任何作用。阿昔洛韋、泛昔洛韋對HSV、VZV有效，但對CMV無效。因此，只有明確具體的病毒感染才能指導(dǎo)臨床用藥。 由于病毒的生物學(xué)特性比較復(fù)雜，各種病毒差異很大，即使同屬皰疹國外在這方面也有過嘗試，如在皰疹類病毒基因組的保守區(qū)設(shè)計(jì)幾對兼并引物進(jìn)

31、行PCR擴(kuò)增，雖能檢測各種病毒，但該方法操作繁雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不能滿足臨床需要。國外在這方面也有過嘗試，如在皰疹類病毒基因組的保守區(qū)設(shè)計(jì)幾對二、浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目兒科常見皰疹類病毒分子診斷及其臨床應(yīng)用二、浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目（一）、國內(nèi)外現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 （一）、國內(nèi)外現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 檢索國內(nèi)外近15年有關(guān)皰疹類病毒的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)外傳統(tǒng)的診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”病毒分離因時(shí)間需1-3周，敏感性及特異性欠佳，達(dá)不到早期準(zhǔn)確診斷的目的。免疫、分子生物學(xué)診斷技術(shù)一直是希望提高診斷準(zhǔn)確性的方向。 檢索國內(nèi)外近15年有關(guān)皰疹類病毒的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)外傳統(tǒng)的診斷特異性IgM、IgG的酶聯(lián)免疫技術(shù)因其出現(xiàn)的時(shí)間及維

32、持時(shí)間的限制，加之滴度的變化需重復(fù)檢測，限制了該技術(shù)的發(fā)展。近10年來，國內(nèi)外研究的重點(diǎn)主要集中在PCR技術(shù)的診斷 。特異性IgM、IgG的酶聯(lián)免疫技術(shù)因其出現(xiàn)的時(shí)間及維持時(shí)間的病毒特異性引物建立高度敏感的PCR技術(shù)已經(jīng)在臨床應(yīng)用，如我們的研究團(tuán)隊(duì)于90年代末成功地建立了套式PCR加限制酶分析檢測巨細(xì)胞病毒，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明具有高度的特異性與敏感性。 病毒特異性引物建立高度敏感的PCR技術(shù)已經(jīng)在臨床應(yīng)用，如我們?nèi)欢捳铑惒《靖腥酒渑R床表現(xiàn)相似，有時(shí)幾種皰疹類病毒同時(shí)感染需用多對引物進(jìn)行多次PCR來檢測不同的皰疹類病毒，使得特異性PCR在臨床實(shí)際診斷中受到限制。 然而，皰疹類病毒感染其臨床表現(xiàn)相似，

33、有時(shí)幾種皰疹類病毒同時(shí)感許多學(xué)者因此提出構(gòu)建通用引物擴(kuò)增所有皰疹類病毒，從而達(dá)到一次即能檢測所有皰疹類病毒。Bouquillon用通用引物擴(kuò)增6種皰疹類病毒，Sakulwira等用通用引物擴(kuò)增5種皰疹類病毒，并用RFLP區(qū)分不同的病毒。 許多學(xué)者因此提出構(gòu)建通用引物擴(kuò)增所有皰疹類病毒，從而達(dá)到一次我們的研究團(tuán)隊(duì)對兒童常見的皰疹類病毒運(yùn)用通用引物進(jìn)行體外DNA擴(kuò)增，進(jìn)一步用RFLP、測序等方法區(qū)分不同病毒，取得較好結(jié)果7，但仍存在需多種酶切、Southern雜交等的煩瑣，使得在臨床常規(guī)使用時(shí)受到限制。 我們的研究團(tuán)隊(duì)對兒童常見的皰疹類病毒運(yùn)用通用引物進(jìn)行體外DN（二）、研究內(nèi)容、研究目標(biāo)、擬解決

34、的問題和今后研究思路 （二）、研究內(nèi)容、研究目標(biāo)、擬解決的問題和今后研究思路 1、研究內(nèi)容基礎(chǔ)部分1、研究內(nèi)容基礎(chǔ)部分（1）、以臨床常見皰疹病毒感染的診斷為目標(biāo)，經(jīng)計(jì)算機(jī)查索核酸序列庫，選取保守DNA區(qū)域設(shè)計(jì)引物，建立能擴(kuò)增所有6-8種皰疹類病毒的PCR方法。對標(biāo)準(zhǔn)毒株HSV（F株）、HSV（G株）、CMV（169株）、EBV（B95-8株）、VZV（EF株），以及HHV6（GS株）進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并選擇其他病毒如HBV、細(xì)菌（大腸桿菌、金葡菌等）、真菌（新型隱球菌）作為對照，以摸索出進(jìn)行通用引物PCR所需的最小檢出量，及其各自反應(yīng)體系的適宜條件。 （1）、以臨床常見皰疹病毒感染的診斷為目標(biāo)，

35、經(jīng)計(jì)算機(jī)查索核酸（2）、在皰疹類病毒的可變區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，建立擴(kuò)增對各自特異病毒DNA的PCR方法，包括CMV、HSV、EBV、VZV、HHV6、HHV7、HHV8等的PCR方法。并比較各自特異PCR方法與通用引物PCR檢測標(biāo)準(zhǔn)毒株其敏感性、準(zhǔn)確性等方面的差異。 （2）、在皰疹類病毒的可變區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，建立擴(kuò)增對各自（3）、經(jīng)核酸序列GenBank比較，設(shè)計(jì)各自特異的DNA探針，并進(jìn)一步分子克隆、序列分析，明確HSV、HHV6的亞型基因，設(shè)計(jì)HSV/、HHV6A/6B等的特異性探針。 （3）、經(jīng)核酸序列GenBank比較，設(shè)計(jì)各自特異的DNA探（4）、對設(shè)計(jì)的DNA探針末端修飾，微陣

36、列，制作基因芯片。內(nèi)容包括固相載體的選擇、玻片表面修飾、探針末端修飾、微陣列制備技術(shù)、核酸探針的固定及雜交。（4）、對設(shè)計(jì)的DNA探針末端修飾，微陣列，制作基因芯片。內(nèi)（5）、基因芯片雜交系統(tǒng)參數(shù)的確定及檢測，包括DNA固液相雜交、熒光標(biāo)記與檢測方法，靈敏度及特異性測定等。（5）、基因芯片雜交系統(tǒng)參數(shù)的確定及檢測，包括DNA固液相雜2、研究內(nèi)容臨床部分2、研究內(nèi)容臨床部分我院臨床有中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，包括急性、散發(fā)性、局灶性腦炎，腦膜腦炎等患兒，收取腦脊液及外周靜脈血，對全身不明原因發(fā)熱、皮疹、黃疸、肝脾腫大等患兒抽取靜脈血，進(jìn)行DNA抽提、PCR擴(kuò)增，陽性結(jié)果進(jìn)一步進(jìn)行基因芯片分析。 我院臨床

37、有中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染，包括急性、散發(fā)性、局灶性腦炎，腦同時(shí)對臨床標(biāo)本血清（血漿）進(jìn)行HSV、EBV、CMV等的特異性IgM、IgG檢測。試圖調(diào)查兒童皰疹病毒感染的實(shí)際情況，研究兒童病毒感染的早期診斷價(jià)值，發(fā)現(xiàn)特定皰疹病毒感染或混合感染情況，以闡明PCR-基因芯片在診斷及區(qū)分不同病毒感染時(shí)的實(shí)際意義。 同時(shí)對臨床標(biāo)本血清（血漿）進(jìn)行HSV、EBV、CMV等的特異在研究過程中，同時(shí)設(shè)立健康體檢兒童的對照組及非病毒感染的腦脊液標(biāo)本，進(jìn)行PCR-基因芯片檢測，以排除假陽性、假陰性等情況，擬在解決目前病毒感染缺乏早期、快速、準(zhǔn)確診斷的問題。 在研究過程中，同時(shí)設(shè)立健康體檢兒童的對照組及非病毒感染的腦脊3、

38、研究目標(biāo)3、研究目標(biāo)在皰疹類病毒高度同源序列的DNA多聚酶基因內(nèi)設(shè)計(jì)通用引物擴(kuò)增所有皰疹類病毒DNA，對其PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分子克隆、序列測定，通過序列分析找到各自特異的DNA序列及亞型序列，設(shè)計(jì)特異探針，建立皰疹病毒DNA基因芯片區(qū)分不同病毒感染，為臨床皰疹類病毒感染的早期、快速診斷提供有效手段。在皰疹類病毒高度同源序列的DNA多聚酶基因內(nèi)設(shè)計(jì)通用引物擴(kuò)增4、擬解決的問題4、擬解決的問題（1）、在皰疹病毒的高度同源序列選擇通用引物，建立能檢測CMV、HSV、VZV、HHV等所有皰疹類病毒的PCR方法。（1）、在皰疹病毒的高度同源序列選擇通用引物，建立能檢測CM（2）、在皰疹病毒的可變區(qū)選擇特

39、異DNA探針，并對HSV型與型、HHV6A與HHV6B等亞型進(jìn)行分子克隆、序列分析，找到各自特異DNA序列，建立基因芯片，區(qū)分不同皰疹病毒及其亞型。（2）、在皰疹病毒的可變區(qū)選擇特異DNA探針，并對HSV型5、今后研究思路5、今后研究思路不斷成熟完善PCR-基因芯片技術(shù)在臨床皰疹類病毒診斷中的應(yīng)用，研發(fā)相關(guān)診斷試劑盒；同時(shí)探索該技術(shù)在其他兒童常見病毒感染中的診斷價(jià)值。不斷成熟完善PCR-基因芯片技術(shù)在臨床皰疹類病毒診斷中的應(yīng)用6、研究方法6、研究方法（1）、在PubMed、GenBank中選取通用引物建立能擴(kuò)增所有病毒的通用引物PCR方法。選取特異引物建立能擴(kuò)增特定皰疹病毒的PCR方法。引物合

40、成由上海生工有限公司391型儀合成。（1）、在PubMed、GenBank中選取通用引物建立能擴(kuò)（2）、經(jīng)計(jì)算機(jī)GenBank查閱，在皰疹類病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中，設(shè)計(jì)6種皰疹類病毒特異DNA探針，對HSV、HHV6體外擴(kuò)增、序列分析，選擇亞型DNA片段，區(qū)分不同的亞型。對以上所有DNA片段探針經(jīng)微陣列，建立基因芯片技術(shù)。特異性探針合成及Amino-link修飾及polydT等由日本TaKaLa生物公司完成。（2）、經(jīng)計(jì)算機(jī)GenBank查閱，在皰疹類病毒高度同源序列（3）、標(biāo)準(zhǔn)病毒株DNA提取采用分子克隆二版的經(jīng)典方法，血及CSF DNA抽提采用我院自行建立的快速抽提DNA方法 。（3）、標(biāo)準(zhǔn)病毒株DNA提取采用分子克隆二版的經(jīng)典方法，血及（4）、血特異性IgM、IgG檢測，采用德國歐蒙公司ELISA試劑盒，按說明書操作。（4）、血特異性IgM、IgG檢測，采用德國歐蒙公司ELIS（5）、收集臨床懷疑皰疹病毒感染的血及CSF標(biāo)本約100例進(jìn)行臨床驗(yàn)證。標(biāo)本采集前告知患兒監(jiān)護(hù)人該標(biāo)本將用于科研研究，并與患兒監(jiān)護(hù)人簽署臨床研究知情同意書。（5）、收集臨