土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿課件

課題2土壤(tǔrǎng)中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第一頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿一、課題(kètí)背景1、尿素(niàosù)的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能(cáinéng)被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O第二頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿4、課題(kètí)目的①?gòu)耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素(niàosù)的細(xì)菌②統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中究竟含有多少(duōshǎo)這樣的細(xì)菌第三頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿一.研究(yánjiū)思路㈠.篩選(shāixuǎn)菌株㈡.統(tǒng)計(jì)(tǒngjì)菌落數(shù)目㈢.設(shè)置對(duì)照第四頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿

1、實(shí)例(shílì)：?jiǎn)⑹荆簩ふ夷康?mùdì)菌種時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?wēndù)70～800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來(lái)。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。㈠.篩選菌株第五頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選(shāixuǎn)原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度(wēndù)、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。什么(shénme)是選擇性培養(yǎng)基？第六頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離(fēnlí)與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：①?gòu)奈锢硇再|(zhì)(wùlǐxìngzhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體(gùtǐ)培養(yǎng)基第七頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿②在此培養(yǎng)基中哪些(nǎxiē)作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素(niàosù)

氮源：尿素培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖(fánzhí)，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理第八頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿6、怎樣證明(zhèngmíng)此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素(niàosù)為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉(niúròu)膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無(wú)選擇性實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結(jié)果只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌生長(zhǎng)多種微生物是第九頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿6、怎樣證明(zhèngmíng)此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素(niàosù)為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉(niúròu)膏蛋白胨培養(yǎng)基

是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無(wú)選擇性實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結(jié)果只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌生長(zhǎng)多種微生物是第十頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿1、顯微鏡直接(zhíjiē)計(jì)數(shù)：利用(lìyòng)血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。㈡.統(tǒng)計(jì)(tǒngjì)菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn)第十一頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）⑴原理(yuánlǐ)：在稀釋度足夠高時(shí)，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的，即一個(gè)菌落代表原先的一個(gè)單細(xì)胞。⑵常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品(yàngpǐn)中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。第十二頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確(zhǔnquè)，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。第十三頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiēguǒ)的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiēguǒ)的可信度。㈢.設(shè)置(shèzhì)對(duì)照：第十四頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿實(shí)例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)的106

倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落(jūnluò)。分析其原因。原因：⑴土樣不同，⑵培養(yǎng)基污染(wūrǎn)或操作失誤(或者是混入了其他的含氮物質(zhì))第十五頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿小結(jié)：通過(guò)這個(gè)事例可以看出(kànchū)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相同(xiānɡtónɡ)土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案二：將A同學(xué)配制(pèizhì)的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測(cè)：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。第十六頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿二.實(shí)驗(yàn)的具體操作

㈠.土壤取樣

從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌(mièjūn)。㈡.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。第十七頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿◆應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂?xīshì)土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行[三]樣品(yàngpǐn)的稀釋第十八頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿㈣.取樣(qǔyàng)涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記(biāojì)。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。第十九頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿㈣.取樣(qǔyàng)涂布◆分離(fēnlí)不同的微生物采用不同的稀釋度稀釋倍數(shù)目的細(xì)菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因(yuányīn)：不同微生物在土壤中含量不同第二十頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿㈤.微生物的培養(yǎng)(péiyǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄(jìlù)作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。

培養(yǎng)不同(bùtónɡ)微生物往往需要不同(bùtónɡ)培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌：25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌：25～28℃的溫度下培養(yǎng)3～4d。第二十一頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿◆如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上(yǐshàng)菌落數(shù)目在30——300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。第二十二頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿微生物的培養(yǎng)(péiyǎng)與觀察第二十三頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿三.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30—300個(gè)菌落的稀釋倍計(jì)算(jìsuàn)每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實(shí)驗(yàn)不精確。第二十四頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿四、操作(cāozuò)提示

無(wú)菌操作(cāozuò)

做好標(biāo)記(biāojì)

規(guī)劃時(shí)間

第二十五頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿五.課外延伸在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說(shuō)明該細(xì)菌能夠(nénggòu)分解尿素。測(cè)定飲水(yǐnshuǐ)中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后，將濾膜放到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過(guò)記述得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。第二十六頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿大腸桿菌(dàchánɡɡǎnjūn)呈黑色中心,有或無(wú)金屬光澤大腸桿菌(dàchánɡɡǎnjūn)在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征

第二十七頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿本課題(kètí)知識(shí)小結(jié):第二十八頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿六、例題(lìtí)解析

例1．對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定正確的表述是A．在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行B．至少接種一種細(xì)菌C．接種一個(gè)細(xì)菌D．及時(shí)(jíshí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)解析：細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定是人們?cè)谝欢l件下進(jìn)行的。這些(zhèxiē)條件是：一種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時(shí)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測(cè)定出細(xì)菌的生長(zhǎng)規(guī)律。測(cè)定時(shí)只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長(zhǎng)；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能通過(guò)樣品推測(cè)細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌，則會(huì)發(fā)生種間斗爭(zhēng)而不能測(cè)定一種微生物的生長(zhǎng)規(guī)律。在接種時(shí)，要保證一定的接種量。答案：A第二十九頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿1.對(duì)細(xì)菌群體生長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定的正確的表述是（）

A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行B.至少接種一種細(xì)菌

C.接種一個(gè)(yīɡè)細(xì)菌D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（）

A.培養(yǎng)細(xì)菌

B.培養(yǎng)真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素實(shí)踐(shíjiàn)訓(xùn)練A

CD第三十頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿4.下列說(shuō)法不正確的是（）

A.科學(xué)家從70－80度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶

B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值

C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度

D.同其他生物環(huán)境相比(xiānɡbǐ)，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）

A.較多的氮源物質(zhì)B.較多的碳源物質(zhì)

C.青霉素類藥物D.高濃度食鹽BC第三十一頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿

練一練

用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)(tǒngjì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比（）

A.比實(shí)際值高

B.比實(shí)際值低

C.和實(shí)際值一致

D.比實(shí)際值可能高也可能低第三十二頁(yè)，共三十六頁(yè)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)定稿