核酸檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量控制教案課件

會(huì)計(jì)學(xué)1核酸檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量控制第1頁(yè)/共71頁(yè)會(huì)計(jì)學(xué)1核酸檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量控制第1頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)二、質(zhì)量控制要點(diǎn)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第2頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第2頁(yè)/共71頁(yè)一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第3頁(yè)/共71頁(yè)一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第3頁(yè)/共71頁(yè)常用儀器設(shè)備第4頁(yè)/共71頁(yè)常用儀器設(shè)備第4頁(yè)/共71頁(yè)加樣器PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)試驗(yàn)區(qū)。第5頁(yè)/共71頁(yè)加樣器PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器多通道連續(xù)可調(diào)式移液器單道連續(xù)移液器單道移液管配合使用的移液器第6頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器第6頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的使用第7頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的使用第7頁(yè)/共71頁(yè)第8頁(yè)/共71頁(yè)第8頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式計(jì)量局廠家自較時(shí)間視使用頻率定（6個(gè)月-1年）第9頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式第9頁(yè)/共71頁(yè)加樣器-注意事項(xiàng)

根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。第10頁(yè)/共71頁(yè)加樣器-注意事項(xiàng)根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開(kāi)按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開(kāi)，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過(guò)猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過(guò)其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無(wú)吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置。加樣器-注意事項(xiàng)第11頁(yè)/共71頁(yè)吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后（一）高速（冷凍）離心機(jī)電機(jī)轉(zhuǎn)速最低轉(zhuǎn)速最高轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)頭消毒方式標(biāo)準(zhǔn)配件系統(tǒng)噪音第12頁(yè)/共71頁(yè)（一）高速（冷凍）離心機(jī)電機(jī)第12頁(yè)/共71頁(yè)高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)。打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。第13頁(yè)/共71頁(yè)高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。開(kāi)機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭按裝是否牢固，機(jī)腔有無(wú)異物掉入。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)，離心機(jī)周圍30cm范圍內(nèi)不能有人和危險(xiǎn)物品。揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法第14頁(yè)/共71頁(yè)機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。在沒(méi)有相應(yīng)的防護(hù)措施時(shí)，不能離心有毒的、放射性的物質(zhì)或病原微生物。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)不可人為地打開(kāi)蓋子。如果轉(zhuǎn)頭和蓋子有可見(jiàn)的腐蝕或磨損的痕跡，則應(yīng)立即停止使用。使用的玻璃或塑料離心管應(yīng)能承受相應(yīng)的離心力并大小合適。非金屬轉(zhuǎn)頭不可用紫外照射。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法第15頁(yè)/共71頁(yè)易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。高速（冷凍）全自動(dòng)核酸提取儀第16頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第16頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第17頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第17頁(yè)/共71頁(yè)第18頁(yè)/共71頁(yè)第18頁(yè)/共71頁(yè)第19頁(yè)/共71頁(yè)第19頁(yè)/共71頁(yè)第20頁(yè)/共71頁(yè)第20頁(yè)/共71頁(yè)基于核酸的分子診斷技術(shù)第21頁(yè)/共71頁(yè)基于核酸的分子診斷技術(shù)第21頁(yè)/共71頁(yè)病毒顆粒DNARNAFQ-PCRRT-FQPCR裂解熒光信號(hào)檢測(cè)核酸提取熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng)熒光定量PCR檢測(cè)加樣第22頁(yè)/共71頁(yè)病毒顆粒DNARNAFQ-PCRRT-FQPCR裂解熒光信病毒熒光定量PCR反應(yīng)內(nèi)容1份樣品的量DEPC

H2O2.875ulMasterMIX6.25ulRT-MIX0.125ul引物0.25ul探針0.25ul程序循環(huán)數(shù)溫度反應(yīng)時(shí)間115030min219515min3459515sec601min反應(yīng)體系配置反應(yīng)條件設(shè)置對(duì)照設(shè)置：陰性對(duì)照：滅菌雙蒸水代替標(biāo)本陽(yáng)性對(duì)照：提取好的陽(yáng)性核酸標(biāo)本第23頁(yè)/共71頁(yè)病毒熒光定量PCR反應(yīng)內(nèi)容1份樣品的量DEPC

H2O2.8典型熒光定量PCR結(jié)果

陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)增曲線陰性標(biāo)本擴(kuò)增曲線第24頁(yè)/共71頁(yè)典型熒光定量PCR結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)增曲線

二、質(zhì)量控制要點(diǎn)第25頁(yè)/共71頁(yè)二、質(zhì)量控制要點(diǎn)第25頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制涉及到整個(gè)基因檢測(cè)擴(kuò)增的所有階段，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，嚴(yán)禁各類交叉污染事故的發(fā)生。第26頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)的過(guò)程主要包括：標(biāo)本處理與核酸提取擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備核酸擴(kuò)增與產(chǎn)物分析測(cè)定后的結(jié)果報(bào)告第27頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)的過(guò)程主要包括：第PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備嚴(yán)格實(shí)行分區(qū)操作試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和核酸制備區(qū)核酸擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)實(shí)驗(yàn)人員的操作技能第28頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備第理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字口訣”PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則第29頁(yè)/共71頁(yè)理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣標(biāo)本處理與核酸提取的質(zhì)量控制核酸提取試劑的選擇核酸擴(kuò)增試劑的選擇試劑的分裝保存試劑的配置對(duì)照的設(shè)立核酸擴(kuò)增儀器擴(kuò)增參數(shù)的設(shè)定第30頁(yè)/共71頁(yè)標(biāo)本處理與核酸提取的質(zhì)量控制核酸提取試劑的選擇第30頁(yè)/共7擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與分析熒光定量普通凝膠電泳毛細(xì)管電泳第31頁(yè)/共71頁(yè)擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與分析第31頁(yè)/共71頁(yè)污染的控制和預(yù)防常見(jiàn)污染的來(lái)源控制污染的措施消除污染的措施第32頁(yè)/共71頁(yè)污染的控制和預(yù)防常見(jiàn)污染的來(lái)源第32頁(yè)/共71頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第33頁(yè)/共71頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第33頁(yè)/共71頁(yè)為什么關(guān)注實(shí)驗(yàn)室生物安全？三起SARS疫情后期的實(shí)驗(yàn)室感染事件2003年9月8日：新加坡國(guó)立大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，在P3實(shí)驗(yàn)室同時(shí)開(kāi)展西尼羅病毒與SARS病毒的研究，一位27歲華人研究員感染；2003年12月6日：臺(tái)灣省國(guó)防大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所，一名47歲的中校研究員，在P3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清理SARS實(shí)驗(yàn)后的廢棄物時(shí)，未戴手套，因而感染；2004年4月22日：中國(guó)CDC病毒所，跨室開(kāi)展SARS病毒研究，并引發(fā)三代、9例病例、1例死亡；另有兩例“隱性”感染者。第34頁(yè)/共71頁(yè)為什么關(guān)注實(shí)驗(yàn)室生物安全？三起SARS疫情后期的實(shí)驗(yàn)室引起實(shí)驗(yàn)室生物污染的原因很多很多人員生物安全概念薄弱和技術(shù)操作不當(dāng)；生物安全柜和高壓滅菌容器的不正常使用或使用不當(dāng)；樣品傳遞、接受和使用、裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的打開(kāi)；勻漿器、組織研磨器、搖床、攪拌器和超聲處理器的使用；離心機(jī)內(nèi)裝有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂第35頁(yè)/共71頁(yè)引起實(shí)驗(yàn)室生物污染的原因很多很多人員生物安全概念薄弱和技術(shù)操生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全

避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露、向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。生物安全三個(gè)方面：

一指人類的健康安全；二指人類賴以生存的農(nóng)業(yè)生物安全；三指與人類生存有關(guān)的環(huán)境生物安全。第36頁(yè)/共71頁(yè)生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全第36頁(yè)/共71頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全三項(xiàng)技術(shù)措施樣品隔離技術(shù)（機(jī)械、氣幕)：防止傳染因子進(jìn)入環(huán)境接觸人體定向氣流技術(shù)（負(fù)壓系統(tǒng))：防止傳染因子擴(kuò)散消毒滅菌技術(shù)（物理、化學(xué))：滅活傳染因子第37頁(yè)/共71頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全三項(xiàng)技術(shù)措施第37頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室可以分為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

一級(jí)生物安全水平基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

二級(jí)生物安全水平防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

三級(jí)生物安全水平最高防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

四級(jí)生物安全水平根據(jù)操作不同危險(xiǎn)度等級(jí)微生物所需的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)特點(diǎn)、建筑構(gòu)造、防護(hù)設(shè)施、儀器、操作以及操作程序來(lái)決定實(shí)驗(yàn)室的生物安全水平。第38頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室可以分為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——一級(jí)生物安全水平第38頁(yè)/共實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障一級(jí)防護(hù)屏障生物安全柜和個(gè)人防護(hù)裝備等構(gòu)成的防護(hù)屏障。第39頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障一級(jí)防護(hù)屏障第39頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜高效空氣過(guò)濾器。第40頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜高效空氣過(guò)濾器。第40頁(yè)/共7第41頁(yè)/共71頁(yè)第41頁(yè)/共71頁(yè)第42頁(yè)/共71頁(yè)第42頁(yè)/共71頁(yè)第43頁(yè)/共71頁(yè)第43頁(yè)/共71頁(yè)44實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障二級(jí)防護(hù)屏障設(shè)施結(jié)構(gòu)和通風(fēng)系統(tǒng)等構(gòu)成的防護(hù)屏障?！昂兄泻小钡慕Y(jié)構(gòu)第44頁(yè)/共71頁(yè)44實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障二級(jí)防護(hù)屏障“盒中盒”的結(jié)構(gòu)第44實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)生物安全水平分級(jí)根據(jù)生物因子危害程度和采取的防護(hù)措施，將生物安全防護(hù)水平（biosafetylevel，BSL）分為4級(jí)（BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示）；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示。第45頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)生物安全水平分級(jí)第45頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的BSL實(shí)驗(yàn)室：保護(hù)工作人員和環(huán)境為主，也保護(hù)產(chǎn)品。安全是首要考慮因素。生物潔凈室：以保護(hù)產(chǎn)品（工作對(duì)象）為主。潔凈是首要考慮因素2.污染物的種類和來(lái)源BSL實(shí)驗(yàn)室：為目標(biāo)微生物。內(nèi)部產(chǎn)生。生物潔凈室：粉塵（可能的熱源）和微生物。外部進(jìn)入以及人的活動(dòng)產(chǎn)生。第46頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的2.污染物的種類和來(lái)源第4與一般生物潔凈室的區(qū)別3.空氣污染物處理方式BSL實(shí)驗(yàn)室：平面布局和氣流流向的作用,產(chǎn)生環(huán)節(jié)在一級(jí)屏障內(nèi)進(jìn)行個(gè)體防護(hù)。生物潔凈室：主要通過(guò)進(jìn)氣凈化減少活動(dòng)。4.潔、污概念BSL實(shí)驗(yàn)室：凡有目標(biāo)微生物即視為污；凡無(wú)目標(biāo)微生物即視為潔； 對(duì)各環(huán)節(jié)潔、污應(yīng)仔細(xì)分析。生物潔凈室：粉塵、微生物（特別是超標(biāo)者）和廢棄物均視為污。第47頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別3.空氣污染物處理方式4.潔、污概念第與一般生物潔凈室的區(qū)別5.排氣處理方式BSL實(shí)驗(yàn)室：不允許室內(nèi)→室外；排氣須凈化，不許回風(fēng)。 生物潔凈室：一般室內(nèi)→室外； 排氣可回風(fēng)。6.實(shí)驗(yàn)室軟、硬件的作用BSL實(shí)驗(yàn)室：對(duì)工作人員保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室軟件應(yīng)是決定性的；對(duì)環(huán)境保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室硬件應(yīng)是決定性的；生物潔凈室：均很重要，但硬件設(shè)施作用比較大。第48頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別5.排氣處理方式6.實(shí)驗(yàn)室軟、硬件的作與一般生物潔凈室的區(qū)別7.壓力遞增方向BSL實(shí)驗(yàn)室：緩沖室＜準(zhǔn)備室＜主實(shí)驗(yàn)室生物潔凈室：緩沖室＞準(zhǔn)備室＞主潔凈室第49頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別7.壓力遞增方向第49頁(yè)/共71頁(yè)

保護(hù)對(duì)象

操作區(qū)

壓力

氣體排

放方式

設(shè)備

結(jié)構(gòu)

設(shè)備

造價(jià)

生物安全柜

操作者、

樣品、環(huán)境

負(fù)壓

凈化后排放

復(fù)雜

較貴

潔凈工作臺(tái)

樣品

正壓

直接排放

簡(jiǎn)單

便宜

生物安全柜與潔凈工作臺(tái)的區(qū)別第50頁(yè)/共71頁(yè)保護(hù)對(duì)象操作區(qū)壓力氣體排放方式設(shè)備結(jié)構(gòu)設(shè)備BSL-1實(shí)驗(yàn)室1)實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉。2)實(shí)驗(yàn)室門口設(shè)掛衣裝置，個(gè)人便裝與工作服分開(kāi)。3)實(shí)驗(yàn)室各表面平整、易清潔、不滲水、耐腐蝕。4)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面防水，耐腐蝕、耐熱。5)櫥柜和實(shí)驗(yàn)臺(tái)牢固，保持一定距離以便于清潔。6)實(shí)驗(yàn)室可以利用自然通風(fēng)。如果采用機(jī)械通風(fēng)，應(yīng)避免交叉污染。第51頁(yè)/共71頁(yè)BSL-1實(shí)驗(yàn)室1)實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉。第51頁(yè)BSL-1實(shí)驗(yàn)室7)如有可開(kāi)啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。8)保證工作照明，避免不必要的反光和強(qiáng)光。9)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。10)若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應(yīng)在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，配備適當(dāng)?shù)呢?fù)壓排風(fēng)柜。11)應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置；應(yīng)有足夠的電力供應(yīng)。12)應(yīng)有防止節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物進(jìn)入的措施。第52頁(yè)/共71頁(yè)BSL-1實(shí)驗(yàn)室7)如有可開(kāi)啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。第52頁(yè)第53頁(yè)/共71頁(yè)第53頁(yè)/共71頁(yè)典型的一級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室第54頁(yè)/共71頁(yè)典型的一級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室第54頁(yè)/共71頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室1)滿足BSL-1的要求。2)實(shí)驗(yàn)室門可自動(dòng)關(guān)閉,門禁系統(tǒng)。3)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)配備洗眼裝置。4)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室或其所在的建筑內(nèi)配備高壓蒸汽滅菌器或其他適當(dāng)?shù)南緶缇O(shè)備。5)應(yīng)在操作病原微生物的實(shí)驗(yàn)間內(nèi)配備生物安全柜。6)應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)。第55頁(yè)/共71頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室1)滿足BSL-1的要求。第55頁(yè)/共71BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物危害警告標(biāo)志。第56頁(yè)/共71頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物危害警告標(biāo)志。第56頁(yè)/共71頁(yè)典型的二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室第57頁(yè)/共71頁(yè)典型的二級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室第57頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜生物安全柜的要求:顆粒經(jīng)HEPA過(guò)濾去除氣流為層流氣流有方向第58頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜生物安全柜的要求:第58頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜的分級(jí)I級(jí)生物安全柜：保護(hù)工作人員和環(huán)境II級(jí)生物安全柜：保護(hù)工作人員、環(huán)境和試樣（產(chǎn)品）III級(jí)生物安全柜：采用手套箱更嚴(yán)格地保護(hù)工作人員、環(huán)境和試樣（產(chǎn)品）ClassII生物安全柜第59頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜的分級(jí)I級(jí)生物安全柜：保護(hù)工作人員和環(huán)境Class①與其它操作區(qū)域相分離；②遠(yuǎn)離主要通道；③與氣道有一定距離；④與實(shí)驗(yàn)室入口保持一定距離。生物安全柜擺放位置第60頁(yè)/共71頁(yè)①與其它操作區(qū)域相分離；生物安全柜擺放位置第60頁(yè)/共7161第61頁(yè)/共71頁(yè)61第61頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜的使用干凈的物品理想的工作臺(tái)擺放被污染的區(qū)域廢棄物托盤垃圾袋第62頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜的使用干凈的物品理想的工作臺(tái)擺放被污染的區(qū)域廢棄物第63頁(yè)/共71頁(yè)第63頁(yè)/共71頁(yè)個(gè)人防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服面部及身體保護(hù)手套鞋（套）呼吸防護(hù)第64頁(yè)/共71頁(yè)個(gè)人防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服第64頁(yè)/共71頁(yè)【

尾聲

】謝謝！第65頁(yè)/共71頁(yè)【尾聲】謝謝！第65頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)二、質(zhì)量控制要點(diǎn)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第66頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第66頁(yè)/共71頁(yè)第67頁(yè)/共71頁(yè)第67頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備嚴(yán)格實(shí)行分區(qū)操作試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和核酸制備區(qū)核酸擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)實(shí)驗(yàn)人員的操作技能第68頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備第與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的BSL實(shí)驗(yàn)室：保護(hù)工作人員和環(huán)境為主，也保護(hù)產(chǎn)品。安全是首要考慮因素。生物潔凈室：以保護(hù)產(chǎn)品（工作對(duì)象）為主。潔凈是首要考慮因素2.污染物的種類和來(lái)源BSL實(shí)驗(yàn)室：為目標(biāo)微生物。內(nèi)部產(chǎn)生。生物潔凈室：粉塵（可能的熱源）和微生物。外部進(jìn)入以及人的活動(dòng)產(chǎn)生。第69頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的2.污染物的種類和來(lái)源第6第70頁(yè)/共71頁(yè)第70頁(yè)/共71頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物危害警告標(biāo)志。第71頁(yè)/共71頁(yè)BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物危害警告標(biāo)志。第71頁(yè)/共71頁(yè)會(huì)計(jì)學(xué)72核酸檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量控制第1頁(yè)/共71頁(yè)會(huì)計(jì)學(xué)1核酸檢測(cè)技術(shù)及質(zhì)量控制第1頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)二、質(zhì)量控制要點(diǎn)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第2頁(yè)/共71頁(yè)目錄一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第2頁(yè)/共71頁(yè)一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第3頁(yè)/共71頁(yè)一、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)操作要點(diǎn)第3頁(yè)/共71頁(yè)常用儀器設(shè)備第4頁(yè)/共71頁(yè)常用儀器設(shè)備第4頁(yè)/共71頁(yè)加樣器PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)四個(gè)試驗(yàn)區(qū)。第5頁(yè)/共71頁(yè)加樣器PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有4套連續(xù)可調(diào)加樣器，分別用于試劑準(zhǔn)備加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器多通道連續(xù)可調(diào)式移液器單道連續(xù)移液器單道移液管配合使用的移液器第6頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器第6頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的使用第7頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的使用第7頁(yè)/共71頁(yè)第8頁(yè)/共71頁(yè)第8頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式計(jì)量局廠家自較時(shí)間視使用頻率定（6個(gè)月-1年）第9頁(yè)/共71頁(yè)加樣器的校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式第9頁(yè)/共71頁(yè)加樣器-注意事項(xiàng)

根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。第10頁(yè)/共71頁(yè)加樣器-注意事項(xiàng)根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指不應(yīng)松開(kāi)按鈕，將吸液嘴壓掉后再將拇指松開(kāi)，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過(guò)猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過(guò)其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無(wú)吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置。加樣器-注意事項(xiàng)第11頁(yè)/共71頁(yè)吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后（一）高速（冷凍）離心機(jī)電機(jī)轉(zhuǎn)速最低轉(zhuǎn)速最高轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)頭消毒方式標(biāo)準(zhǔn)配件系統(tǒng)噪音第12頁(yè)/共71頁(yè)（一）高速（冷凍）離心機(jī)電機(jī)第12頁(yè)/共71頁(yè)高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使機(jī)器處于水平位置以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)。打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開(kāi)機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋。第13頁(yè)/共71頁(yè)高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線。開(kāi)機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭按裝是否牢固，機(jī)腔有無(wú)異物掉入。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)，離心機(jī)周圍30cm范圍內(nèi)不能有人和危險(xiǎn)物品。揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法第14頁(yè)/共71頁(yè)機(jī)體應(yīng)始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。在沒(méi)有相應(yīng)的防護(hù)措施時(shí)，不能離心有毒的、放射性的物質(zhì)或病原微生物。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)不可人為地打開(kāi)蓋子。如果轉(zhuǎn)頭和蓋子有可見(jiàn)的腐蝕或磨損的痕跡，則應(yīng)立即停止使用。使用的玻璃或塑料離心管應(yīng)能承受相應(yīng)的離心力并大小合適。非金屬轉(zhuǎn)頭不可用紫外照射。高速（冷凍）離心機(jī)-使用方法第15頁(yè)/共71頁(yè)易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。高速（冷凍）全自動(dòng)核酸提取儀第16頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第16頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第17頁(yè)/共71頁(yè)全自動(dòng)核酸提取儀第17頁(yè)/共71頁(yè)第18頁(yè)/共71頁(yè)第18頁(yè)/共71頁(yè)第19頁(yè)/共71頁(yè)第19頁(yè)/共71頁(yè)第20頁(yè)/共71頁(yè)第20頁(yè)/共71頁(yè)基于核酸的分子診斷技術(shù)第21頁(yè)/共71頁(yè)基于核酸的分子診斷技術(shù)第21頁(yè)/共71頁(yè)病毒顆粒DNARNAFQ-PCRRT-FQPCR裂解熒光信號(hào)檢測(cè)核酸提取熒光PCR檢測(cè)系統(tǒng)熒光定量PCR檢測(cè)加樣第22頁(yè)/共71頁(yè)病毒顆粒DNARNAFQ-PCRRT-FQPCR裂解熒光信病毒熒光定量PCR反應(yīng)內(nèi)容1份樣品的量DEPC

H2O2.875ulMasterMIX6.25ulRT-MIX0.125ul引物0.25ul探針0.25ul程序循環(huán)數(shù)溫度反應(yīng)時(shí)間115030min219515min3459515sec601min反應(yīng)體系配置反應(yīng)條件設(shè)置對(duì)照設(shè)置：陰性對(duì)照：滅菌雙蒸水代替標(biāo)本陽(yáng)性對(duì)照：提取好的陽(yáng)性核酸標(biāo)本第23頁(yè)/共71頁(yè)病毒熒光定量PCR反應(yīng)內(nèi)容1份樣品的量DEPC

H2O2.8典型熒光定量PCR結(jié)果

陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)增曲線陰性標(biāo)本擴(kuò)增曲線第24頁(yè)/共71頁(yè)典型熒光定量PCR結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)增曲線

二、質(zhì)量控制要點(diǎn)第25頁(yè)/共71頁(yè)二、質(zhì)量控制要點(diǎn)第25頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制涉及到整個(gè)基因檢測(cè)擴(kuò)增的所有階段，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，嚴(yán)禁各類交叉污染事故的發(fā)生。第26頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)的過(guò)程主要包括：標(biāo)本處理與核酸提取擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備核酸擴(kuò)增與產(chǎn)物分析測(cè)定后的結(jié)果報(bào)告第27頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)的過(guò)程主要包括：第PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備嚴(yán)格實(shí)行分區(qū)操作試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和核酸制備區(qū)核酸擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)實(shí)驗(yàn)人員的操作技能第28頁(yè)/共71頁(yè)P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)高質(zhì)量無(wú)污染無(wú)降解的核酸制備第理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字口訣”PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則第29頁(yè)/共71頁(yè)理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣標(biāo)本處理與核酸提取的質(zhì)量控制核酸提取試劑的選擇核酸擴(kuò)增試劑的選擇試劑的分裝保存試劑的配置對(duì)照的設(shè)立核酸擴(kuò)增儀器擴(kuò)增參數(shù)的設(shè)定第30頁(yè)/共71頁(yè)標(biāo)本處理與核酸提取的質(zhì)量控制核酸提取試劑的選擇第30頁(yè)/共7擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與分析熒光定量普通凝膠電泳毛細(xì)管電泳第31頁(yè)/共71頁(yè)擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與分析第31頁(yè)/共71頁(yè)污染的控制和預(yù)防常見(jiàn)污染的來(lái)源控制污染的措施消除污染的措施第32頁(yè)/共71頁(yè)污染的控制和預(yù)防常見(jiàn)污染的來(lái)源第32頁(yè)/共71頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第33頁(yè)/共71頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)室生物安全管理第33頁(yè)/共71頁(yè)為什么關(guān)注實(shí)驗(yàn)室生物安全？三起SARS疫情后期的實(shí)驗(yàn)室感染事件2003年9月8日：新加坡國(guó)立大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，在P3實(shí)驗(yàn)室同時(shí)開(kāi)展西尼羅病毒與SARS病毒的研究，一位27歲華人研究員感染；2003年12月6日：臺(tái)灣省國(guó)防大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所，一名47歲的中校研究員，在P3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清理SARS實(shí)驗(yàn)后的廢棄物時(shí)，未戴手套，因而感染；2004年4月22日：中國(guó)CDC病毒所，跨室開(kāi)展SARS病毒研究，并引發(fā)三代、9例病例、1例死亡；另有兩例“隱性”感染者。第34頁(yè)/共71頁(yè)為什么關(guān)注實(shí)驗(yàn)室生物安全？三起SARS疫情后期的實(shí)驗(yàn)室引起實(shí)驗(yàn)室生物污染的原因很多很多人員生物安全概念薄弱和技術(shù)操作不當(dāng)；生物安全柜和高壓滅菌容器的不正常使用或使用不當(dāng)；樣品傳遞、接受和使用、裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿的打開(kāi)；勻漿器、組織研磨器、搖床、攪拌器和超聲處理器的使用；離心機(jī)內(nèi)裝有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂第35頁(yè)/共71頁(yè)引起實(shí)驗(yàn)室生物污染的原因很多很多人員生物安全概念薄弱和技術(shù)操生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全

避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露、向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。生物安全三個(gè)方面：

一指人類的健康安全；二指人類賴以生存的農(nóng)業(yè)生物安全；三指與人類生存有關(guān)的環(huán)境生物安全。第36頁(yè)/共71頁(yè)生物安全的概念實(shí)驗(yàn)室生物安全第36頁(yè)/共71頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全三項(xiàng)技術(shù)措施樣品隔離技術(shù)（機(jī)械、氣幕)：防止傳染因子進(jìn)入環(huán)境接觸人體定向氣流技術(shù)（負(fù)壓系統(tǒng))：防止傳染因子擴(kuò)散消毒滅菌技術(shù)（物理、化學(xué))：滅活傳染因子第37頁(yè)/共71頁(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全三項(xiàng)技術(shù)措施第37頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室可以分為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

一級(jí)生物安全水平基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——

二級(jí)生物安全水平防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

三級(jí)生物安全水平最高防護(hù)實(shí)驗(yàn)室——

四級(jí)生物安全水平根據(jù)操作不同危險(xiǎn)度等級(jí)微生物所需的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)特點(diǎn)、建筑構(gòu)造、防護(hù)設(shè)施、儀器、操作以及操作程序來(lái)決定實(shí)驗(yàn)室的生物安全水平。第38頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室可以分為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室——一級(jí)生物安全水平第38頁(yè)/共實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障一級(jí)防護(hù)屏障生物安全柜和個(gè)人防護(hù)裝備等構(gòu)成的防護(hù)屏障。第39頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障一級(jí)防護(hù)屏障第39頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜高效空氣過(guò)濾器。第40頁(yè)/共71頁(yè)生物安全柜高效空氣過(guò)濾器。第40頁(yè)/共7第41頁(yè)/共71頁(yè)第41頁(yè)/共71頁(yè)第42頁(yè)/共71頁(yè)第42頁(yè)/共71頁(yè)第43頁(yè)/共71頁(yè)第43頁(yè)/共71頁(yè)115實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障二級(jí)防護(hù)屏障設(shè)施結(jié)構(gòu)和通風(fēng)系統(tǒng)等構(gòu)成的防護(hù)屏障?！昂兄泻小钡慕Y(jié)構(gòu)第44頁(yè)/共71頁(yè)44實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)屏障二級(jí)防護(hù)屏障“盒中盒”的結(jié)構(gòu)第44實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)生物安全水平分級(jí)根據(jù)生物因子危害程度和采取的防護(hù)措施，將生物安全防護(hù)水平（biosafetylevel，BSL）分為4級(jí)（BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示）；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示。第45頁(yè)/共71頁(yè)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)生物安全水平分級(jí)第45頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的BSL實(shí)驗(yàn)室：保護(hù)工作人員和環(huán)境為主，也保護(hù)產(chǎn)品。安全是首要考慮因素。生物潔凈室：以保護(hù)產(chǎn)品（工作對(duì)象）為主。潔凈是首要考慮因素2.污染物的種類和來(lái)源BSL實(shí)驗(yàn)室：為目標(biāo)微生物。內(nèi)部產(chǎn)生。生物潔凈室：粉塵（可能的熱源）和微生物。外部進(jìn)入以及人的活動(dòng)產(chǎn)生。第46頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別1.工作目的2.污染物的種類和來(lái)源第4與一般生物潔凈室的區(qū)別3.空氣污染物處理方式BSL實(shí)驗(yàn)室：平面布局和氣流流向的作用,產(chǎn)生環(huán)節(jié)在一級(jí)屏障內(nèi)進(jìn)行個(gè)體防護(hù)。生物潔凈室：主要通過(guò)進(jìn)氣凈化減少活動(dòng)。4.潔、污概念BSL實(shí)驗(yàn)室：凡有目標(biāo)微生物即視為污；凡無(wú)目標(biāo)微生物即視為潔； 對(duì)各環(huán)節(jié)潔、污應(yīng)仔細(xì)分析。生物潔凈室：粉塵、微生物（特別是超標(biāo)者）和廢棄物均視為污。第47頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別3.空氣污染物處理方式4.潔、污概念第與一般生物潔凈室的區(qū)別5.排氣處理方式BSL實(shí)驗(yàn)室：不允許室內(nèi)→室外；排氣須凈化，不許回風(fēng)。 生物潔凈室：一般室內(nèi)→室外； 排氣可回風(fēng)。6.實(shí)驗(yàn)室軟、硬件的作用BSL實(shí)驗(yàn)室：對(duì)工作人員保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室軟件應(yīng)是決定性的；對(duì)環(huán)境保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室硬件應(yīng)是決定性的；生物潔凈室：均很重要，但硬件設(shè)施作用比較大。第48頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別5.排氣處理方式6.實(shí)驗(yàn)室軟、硬件的作與一般生物潔凈室的區(qū)別7.壓力遞增方向BSL實(shí)驗(yàn)室：緩沖室＜準(zhǔn)備室＜主實(shí)驗(yàn)室生物潔凈室：緩沖室＞準(zhǔn)備室＞主潔凈室第49頁(yè)/共71頁(yè)與一般生物潔凈室的區(qū)別7.壓力遞增方向第49頁(yè)/共71頁(yè)

保護(hù)對(duì)象

操作區(qū)

壓力

氣體排

放方式

設(shè)備

結(jié)構(gòu)

設(shè)備

造價(jià)

生物安全柜

操作者、

樣品、環(huán)境

負(fù)壓

凈化后排放

復(fù)雜

較貴

潔凈工作臺(tái)

樣品

正壓

直接排放

簡(jiǎn)單

便宜

生物安全柜與潔凈工作臺(tái)的區(qū)別第50頁(yè)/共71頁(yè)保護(hù)對(duì)象操作區(qū)壓力氣體排放方式設(shè)備結(jié)構(gòu)設(shè)備BSL-1實(shí)驗(yàn)室1)實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉。2)實(shí)驗(yàn)室門口設(shè)掛衣裝置，個(gè)人便裝與工作服分開(kāi)。3)實(shí)驗(yàn)室各表面平整、易清潔、不滲水、耐腐蝕。4)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面防水，耐腐蝕、耐熱。5)櫥柜和實(shí)驗(yàn)臺(tái)牢固，保持一定距離以便于清潔。6)實(shí)驗(yàn)室可以利用自然通風(fēng)。如果采用機(jī)械通風(fēng)，應(yīng)避免交叉污染。第51頁(yè)/共71頁(yè)BSL-1實(shí)驗(yàn)室1)實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗并可鎖閉。第51頁(yè)BSL-1實(shí)驗(yàn)室7)如有可開(kāi)啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。8)保證工作照明，避免不必要的反光和強(qiáng)光。9)有適當(dāng)?shù)南驹O(shè)備。10)若操作有毒、刺激性、放射性揮發(fā)物質(zhì)，應(yīng)在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)上，配備適當(dāng)?shù)呢?fù)壓排風(fēng)柜。11)應(yīng)設(shè)應(yīng)急照明裝置；應(yīng)有足夠的電力供應(yīng)。12)應(yīng)有防止節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物進(jìn)入的措施。第52頁(yè)