生化檢測系統(tǒng)性能驗證課件完整版

為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》

二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；

目的：確定設備能達到所要求的性能指標；設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《1什么是性能評價？

自行研究或開發(fā)了一個檢測方法，為了使方法的檢測結果符合臨床要求，必須對方法的性能作詳細而全面的實驗，這時的實驗是對性能的評價。通常是生產廠家完成。什么是性能評價？自行研究或開發(fā)了一個檢測2什么是性能驗證？

對他人或廠商的評價資料中的幾個主要性能進行證實。

通常由實驗室自己完成。什么是性能驗證？對他人或廠商的評價資料中3性能驗證試驗

對配套系統(tǒng)，一般驗證下列指標：

―準確度(accuracy)---EP15-A―精密度(precision)---EP5-A2―線性范圍（linearrange)---EP-6―可報告范圍(reportablerange)---EP-6―參考區(qū)間(referenceinterval)---C28-A2

對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。性能驗證試驗對配套系統(tǒng)，一般驗證下列指標：4什么時候做性能驗證試驗？1.方法或系統(tǒng)首次在實驗室使用；

2.EQA或PT結果未通過，采取糾正措施后；

3.達到文件規(guī)定周期什么時候做性能驗證試驗？5做性能驗證時首先滿足的實驗條件儀器的維護保養(yǎng)儀器校準室內質控試劑、校準品（有效期、批號等）人員（SOP）

保證儀器在最佳狀態(tài)做性能驗證時首先滿足的實驗條件6一.精密度驗證實驗一.精密度驗證實驗7不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。*必須保留任何離群值和室內質控失控的記錄。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。檢驗時應同時至少測一個質控品。離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差?！夺t(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學實驗室質量和能力認在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。從CLIA’88允許誤差表中查閱評價的該項目的允許誤差范圍。功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。檢驗時應同時至少測一個質控品。測量精密度(measurementprecision)至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。基本概念

測量精密度(measurementprecision)

在規(guī)定條件下，對同一或相似被測對象重復測量得到測量示值或測得量值間的一致程度。

1.測量精密度通常由不精密度的量度以數(shù)字表達，如規(guī)定測量條件下的標準差、方差和變異系數(shù)。

2.規(guī)定的條件可以是測量的重復性條件、測量的中間精密度條件或測量的再現(xiàn)性條件。

3.測量精密度用于定義測量重復性、中間測量精密度和測量再現(xiàn)性。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂8基本概念測量重復性在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內對同一或相似被測對象重復測量。

1.在臨床化學上，即所謂的批內精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常重復性條件來代表基本不變的測量條件（被稱為重復性條件），產生的測量結果是最小變異。3.重復性信息可對故障排除目的有用處。

基本概念測量重復性9基本概念測量再現(xiàn)性：在包括了不同地點、不同操作者、不同測量系統(tǒng)的測量條件下對同一或相似被測對象重復測量的測量精密度。

1.在臨床化學上，即所謂的室間精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常再現(xiàn)性條件代表了最大改變的條件（被稱為再現(xiàn)性條件），產生于獨立實驗室間比較結果時遇到的測量結果變異，如發(fā)生在室間比對計劃中（例如，能力比對）。

基本概念測量再現(xiàn)性：10應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號、設備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。EQA的允許誤差進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。準確度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間的一致程度。在一段時間內（一般為連續(xù)20個工作日）對同一樣品（常為質控品），每天測定一次，每次測定雙份，由此計算出批間精密度。當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medicaldecisionlevels)左右。從能力比對試驗中獲得的參考物；得到直線回歸方程Y＝aX+b，樣品物濃度應盡量選擇該項目正常參考區(qū)間內的濃度。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;公式：（比較方法-實驗方法）實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；偏倚（bias）指測量結果的預期值與可接受值間的差異。將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。如沒有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度?；靖拍?.不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。

4.應在實際程度上給出改變或不改變條件的說明。應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號11基本概念中間精密度在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。

1.應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號、設備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。

2.在體外診斷醫(yī)療器械評價中，一般中間精密度條件代表醫(yī)療器械在一長時間段內的實際使用條件?；靖拍钪虚g精密度12文件依據(jù)CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》文件依據(jù)13實驗方法批內精密度在相同的測量條件下，在最短時間內（常是在同一測量批次內）對同一樣品測量20次，由此計算出批內精密度。實驗方法14實驗方法批間精密度在一段時間內（一般為連續(xù)20個工作日）對同一樣品（常為質控品），每天測定一次，每次測定雙份，由此計算出批間精密度。如果時間緊，也可改為測5日，每天分2批進行，每批重復測定2次，每次至少間隔2h，每個濃度每天能獲得4個數(shù)據(jù)。由此計算出總精密度。實驗方法批間精密度15實驗樣本的選擇1.實驗樣本要穩(wěn)定，其基質組成應盡可能與臨床樣本相似。一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清；

2.實驗樣本的濃度盡可能選擇與廠商聲明性能相近的濃度或接近該項目醫(yī)學決定水平的濃度。

3.通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。實驗樣本的選擇16樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關樣品濃度高時，雖然標準差的絕對值較大，但變異系數(shù)往往變小。所以評估精密度時，建議評估高低二個濃度的精密度。當二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關17樣本濃度的選擇2.所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medicaldecisionlevels)左右。

不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。如沒有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外再根據(jù)檢驗項目的性質在線性區(qū)間內選擇一個值。樣本濃度的選擇2.所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即18試劑和校準品的要求

在整個階段，盡可能使用相同條件，應使用同一種類同一批號的試劑和校準物，如有可能，只進行一次校準。使用不同批號試劑和多次校準都會增加檢驗結果的變異程度。試劑和校準品的要求在整個階段，盡可能使用相同條件，應使用同19質量控制

檢驗時應同時至少測一個質控品。當質控品結果超出規(guī)定的失控限，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗以取得實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。質量控制檢驗時應同時至少測一個質控品。20在正式實驗前操作者應熟練掌握1.操作程序

2.保養(yǎng)程序

3.樣本準備

4.校準及檢測程序

在正式實驗前操作者應熟練掌握1.操作程序21樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。不存在明顯的攜帶污染等。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。試劑、校準品（有效期、批號等）計算均值、標準差和變異系數(shù)。收集臨床檢測過程中的高值樣品分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。測量精密度(measurementprecision)發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；可采用與評價試劑配套的校準品。應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;數(shù)據(jù)收集

分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)，除補充由于質控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。數(shù)據(jù)收22數(shù)據(jù)收集

進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應不用此次試驗數(shù)據(jù)，檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。*必須保留任何離群值和室內質控失控的記錄。數(shù)據(jù)收集進行批內精密度評估實驗時，一次只23結果分析

計算均值、標準差和變異系數(shù)。從CLIA’88允許誤差表中查閱評價的該項目的允許誤差范圍。

結果分析24判斷標準批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。批間精密度—CV值要求低于1/3CLIA’88允許誤差。判斷標準批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’8825CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項目：

EQA的允許誤差試劑說明書提供CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項目：26二.正確度驗證實驗二.正確度驗證實驗27基本概念準確度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間的一致程度。正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。通常用統(tǒng)計量“偏倚”來表示。偏倚（bias）指測量結果的預期值與可接受值間的差異。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異?；靖拍顪蚀_度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間28基本概念誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差。總誤差（totalerror）指某實驗室用某方法在多次獨立檢驗中分析某樣品所得各個結果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內的最大值。包括隨機誤差和系統(tǒng)誤差，是不準確度的估計值?；靖拍钫`差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值29文件依據(jù)CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對精密度和準確度性能的核實指南》文件依據(jù)30實驗方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評測定具有溯源性的校準物質

實驗方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評31實驗程序

對權威機構提供的室間質控物進行檢測，檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。實驗程序對權威機構提供的室間質控物進行檢測，32定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質；2.從能力比對試驗中獲得的參考物；3.廠家提供的正確度確認物或質控物；4.實驗室室間質評物；5.由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質。定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人33檢驗時應同時至少測一個質控品。依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;目的：確定設備能達到所要求的性能指標；03范圍內，r2≥0.將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內對同一或相似被測對象重復測量。從能力比對試驗中獲得的參考物；臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差。已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質；誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差。二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。按照從低—高、高—低循環(huán)測定5遍，檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。實驗室內部各儀器比對實驗進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；若2例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于1個檢測值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受。實驗程序

選擇適合評價的檢驗方法最易獲得的材料。至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。實驗前充分混勻分析物，用實驗方法重復測定2次，將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。檢驗時應同時至少測一個質控品。實驗程序選擇適合評價的檢驗方34三.線性范圍及可報告范圍驗證實驗三.線性范圍及可報告范圍35基本概念線性范圍（linearrange)使實驗系統(tǒng)的最終分析結果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應低于允許誤差。線性（linearity）在給定的測量范圍內，使測定結果與樣本中分析物的量直接成比例的能力?；靖拍罹€性范圍（linearrange)使實驗系統(tǒng)的最終36基本概念分析測量范圍（analyticalmeasurementrange）是方法直接測量標本，而不需要任何的稀釋、濃縮或者其它預處理等過程下，測量結果總誤差符合要求的分析物濃度的范圍。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍?；靖拍罘治鰷y量范圍（analyticalmeasurem37文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評價》文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評38儀器要求

應有較好的測定精密度不存在明顯的攜帶污染等。對儀器應進行定期維護及校準，保證其處于正常狀態(tài)。儀器要求應有較好的測定精密度39試劑及校準品要求試劑應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。校準品可采用與評價試劑配套的校準品。校準品的使用應嚴格按照產品說明，儀器校準步驟與間隔應按照本室的標準操作程序進行。試劑及校準品要求試劑40―線性范圍（linearrange)---EP-6離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差。―精密度(precision)---EP5-A2不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。實驗室內部各儀器比對實驗CLSI（原NCCLS）頒布的EP9A文件《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估—批準指南》檢驗時應同時至少測一個質控品。不要使用對方法學有干擾的樣本。通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。關鍵在于——篩選“健康人群”保證儀器在最佳狀態(tài)進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；樣品類型的選擇為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。―線性范圍（linearrange)---EP-6樣品類41線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測過程中的高值樣品即濃度接近預期測定上限的患者血清（H）和低值樣品(L)，若收集不到低值樣品，可用生理鹽水或蒸餾水替代。

2.將H和L樣品按：1L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、1H關系各自配制(必要時可改變比例)混合，形成系列評價樣品。線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測過程中的高值樣品42線性范圍樣品測定

進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；進行線性范圍驗證時，應進行5個濃度水平的樣品測定，并在1個批次測量中完成實驗，每個樣品至少重復測定2次，測量次序為隨機；如果測定方法本身存在明顯的攜帶污染，應根據(jù)實際情況采取恰當措施盡量避免對測定結果的影響。線性范圍樣品測定進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水43線性范圍結果分析以預期值為橫坐標，以實測值為縱坐標進行線性回歸，得到直線回歸方程Y＝aX+b，a在0.97～1.03范圍內，r2≥0.95。

線性范圍結果分析以預期值為橫坐標，以實測值為縱坐標進行線性回44可報告范圍樣品測定

收集接近線性范圍上限的病人標本血清。實驗操作時，以生理鹽水或蒸餾水為稀釋介質，每個稀釋濃度檢測兩次，取平均值與理論值進行比較。當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。如沒有給出建議的稀釋度，則根據(jù)工作實際需要稀釋?？蓤蟾娣秶鷺悠窚y定收集接近線性范圍上限的病人標本血清。實45可報告范圍判斷指標及判斷標準判斷指標：R=檢測均值/預期值*100%判斷標準：80%≤R≤120%，則偏倚在允許誤差范圍之內。可報告范圍判斷指標及判斷標準判斷指標：R=檢測均值/預期值*46四.分析靈敏度驗證實驗四.分析靈敏度驗證實驗47基本概念檢測低限（LLD）指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測響應量對應的分析物量。功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度?？瞻紫蓿↙oB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結果。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量?；靖拍顧z測低限（LLD）指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測48文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進行靈敏度性能評價。文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進行靈敏度性能評價49功能靈敏度實驗程序將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，計算均值、標準差和變異系數(shù)，以不精密度（CV）≤20%時對應檢測限樣品具有的平均濃度即為功能靈敏度。功能靈敏度實驗程序將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同50五.抗干擾驗證實驗五.抗干擾驗證實驗51樣本選擇選取臨床混合血清1例。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應盡量選擇該項目正常參考區(qū)間內的濃度。樣本選擇選取臨床混合血清1例。52應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。目的：確定設備能達到所要求的性能指標；以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異?？傉`差（totalerror）指某實驗室用某方法在多次獨立檢驗中分析某樣品所得各個結果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內的最大值。試劑說明書提供將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，收集接近線性范圍上限的病人標本血清。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異?？瞻紫蓿↙oB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結果。當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，諸如可能是必需的小兒科或老年人的研究。CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評價》分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;每個樣本重復測定2次；不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。干擾物的確定根據(jù)臨床樣品的特點，實驗所選干擾物為：結合膽紅素、游離膽紅素、脂肪乳、維生素C(Vc)、血紅蛋白。應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。干53樣本制備

將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，按照從低—高、高—低循環(huán)測定5遍，計算每個濃度下的均值與未添加干擾物的樣品的相對偏差，并求取重復性的變異系數(shù)。樣本制備將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度54判斷標準

當相對偏差不超過±15%，重復性變異系數(shù)不超過10%時，可認為對應的干擾物濃度對測定結果無影響。判斷標準當相對偏差不超過±15%，55

六.參考區(qū)間驗證實驗六.參考區(qū)間驗證實驗56實驗目的:

驗證已知參考區(qū)間在本實驗室應用的可接受性。實驗目的:57實驗方法1.從健康人群中抽出20個參考個體（最好能夠覆蓋各個年齡段）;2.依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;3.發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;實驗方法58實驗方法4.如果20例參考個體中不超過1例（5％的結果）的檢測值在參考區(qū)間外，則已知的參考區(qū)間可以接受。若2例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于1個檢測值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受。若又有2個以上超出參考限，則就應該重新檢查所用的分析程序，考慮兩個樣本總體生物學特征上可能存在差異，并且考慮是否按照大規(guī)模研究指南建立自己的參考區(qū)間。實驗方法4.如果20例參考個體中不超過1例（5％的結果）的檢59實驗要點關鍵在于——篩選“健康人群”參考個體不應該是住院患者或者臨床病人，除非絕對需要。諸如可能是必需的小兒科或老年人的研究。實驗要點關鍵在于——篩選“健康人群”60七.實驗室內部各儀器比對實驗七.實驗室內部各儀器比對實驗61在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內對同一或相似被測對象重復測量。計算均值、標準差和變異系數(shù)。―線性范圍（linearrange)---EP-6當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)，除補充由于質控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。以比較方法結果為橫坐標，以實驗方法結果為縱坐標進行線性回歸。至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medicaldecisionlevels)左右。*必須保留任何離群值和室內質控失控的記錄。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。樣品濃度高時，雖然標準差的絕對值較大，但變異系數(shù)往往變小。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；通常是生產廠家完成。不要使用對方法學有干擾的樣本。CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》重復性信息可對故障排除目的有用處。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。文件依據(jù)CLSI（原NCCLS）頒布的EP9A文件《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估—批準指南》在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、62樣本準備1.在整個實驗中，保證需要比對的儀器處于良好的工作狀態(tài)，并在完整的質量控制之下進行；2.實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；每個樣本必須有足夠量以備每臺儀器做雙份測定。樣本準備1.在整個實驗中，保證需要比對的儀器處于良好的工作63樣本準備3.濃度應分布整個線性范圍，不要使用超出線性范圍的標本；盡可能使50%的實驗標本分析物的含量不在參考區(qū)間內，各個標本分析物含量越寬越好。不要使用對方法學有干擾的樣本。樣本準備3.濃度應分布整個線性范圍，不要使用超出線性范圍的64樣本測定

在不同的檢測系統(tǒng)每日測定8個樣本；每個樣本重復測定2次；2次按不同的測定順序進行測定；在2h內測定完畢，以確保分析物的穩(wěn)定；共測定5d。樣本測定在不同的檢測系統(tǒng)每日測定8個樣本；65數(shù)據(jù)統(tǒng)計

檢查每一方法內雙份測定值有無離群值，以4倍的各方法差值的均值為判斷限，所有差值都在限值內說明雙份測定結果符合要求；計算均值。以比較方法結果為橫坐標，以實驗方法結果為縱坐標進行線性回歸。從中判斷檢驗標本內分析物含量分布是否適當，一般要求r2≥0.95，認為范圍合適。若r2≤0.95應繼續(xù)做實驗擴大數(shù)據(jù)范圍。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計檢查每一方法內雙份測定值有無離群值，以4倍的各方法66結果分析及判斷標準結果分析計算相對偏差公式：（比較方法-實驗方法）比較方法X100%

判斷標準CV值要求低于1/2CLIA’88允許誤差，認為不同檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差或相對偏差屬臨床可接受水平。結果分析及判斷標準結果分析67謝謝謝謝68為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》

二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；

目的：確定設備能達到所要求的性能指標；設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《69一.精密度驗證實驗一.精密度驗證實驗70基本概念3.不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。

4.應在實際程度上給出改變或不改變條件的說明?；靖拍?.不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。71設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。六.從健康人群中抽出20個參考個體從健康人群中抽出20個參考個體―線性范圍（linearrange)---EP-6不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。得到直線回歸方程Y＝aX+b，不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。CV值要求低于1/2CLIA’88允許誤差，認為不同檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差或相對偏差屬臨床可接受水平。實驗樣本的濃度盡可能選擇與廠商聲明性能相近的濃度或接近該項目醫(yī)學決定水平的濃度。不要使用對方法學有干擾的樣本。應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。對權威機構提供的室間質控物進行檢測，功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。數(shù)據(jù)收集

分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)，除補充由于質控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。數(shù)據(jù)收72實驗程序

對權威機構提供的室間質控物進行檢測，檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。實驗程序對權威機構提供的室間質控物進行檢測，73樣品類型的選擇為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。樣品類型的選擇為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床74干擾物的確定根據(jù)臨床樣品的特點，實驗所選干擾物為：結合膽紅素、游離膽紅素、脂肪乳、維生素C(Vc)、血紅蛋白。干擾物的確定根據(jù)臨床樣品的特點，實驗所選干擾物為：結合膽紅素75不存在明顯的攜帶污染等。95應繼續(xù)做實驗擴大數(shù)據(jù)范圍。選擇適合評價的檢驗方法最易獲得的材料。對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。檢驗時應同時至少測一個質控品。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。得到直線回歸方程Y＝aX+b，收集接近線性范圍上限的病人標本血清。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常再現(xiàn)性條件代表了最大改變的條件（被稱為再現(xiàn)性條件），產生于獨立實驗室間比較結果時遇到的測量結果變異，如發(fā)生在室間比對計劃中（例如，能力比對）。不要使用對方法學有干擾的樣本。線性范圍及可報告范圍檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。得到直線回歸方程Y＝aX+b，以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。六.為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;實驗室內部各儀器比對實驗不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。

六.參考區(qū)間驗證實驗不存在明顯的攜帶污染等。六.參考區(qū)間驗76為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》

二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；

目的：確定設備能達到所要求的性能指標；設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。為什么要做性能驗證？《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《77什么是性能評價？

自行研究或開發(fā)了一個檢測方法，為了使方法的檢測結果符合臨床要求，必須對方法的性能作詳細而全面的實驗，這時的實驗是對性能的評價。通常是生產廠家完成。什么是性能評價？自行研究或開發(fā)了一個檢測78什么是性能驗證？

對他人或廠商的評價資料中的幾個主要性能進行證實。

通常由實驗室自己完成。什么是性能驗證？對他人或廠商的評價資料中79性能驗證試驗

對配套系統(tǒng)，一般驗證下列指標：

―準確度(accuracy)---EP15-A―精密度(precision)---EP5-A2―線性范圍（linearrange)---EP-6―可報告范圍(reportablerange)---EP-6―參考區(qū)間(referenceinterval)---C28-A2

對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。性能驗證試驗對配套系統(tǒng)，一般驗證下列指標：80什么時候做性能驗證試驗？1.方法或系統(tǒng)首次在實驗室使用；

2.EQA或PT結果未通過，采取糾正措施后；

3.達到文件規(guī)定周期什么時候做性能驗證試驗？81做性能驗證時首先滿足的實驗條件儀器的維護保養(yǎng)儀器校準室內質控試劑、校準品（有效期、批號等）人員（SOP）

保證儀器在最佳狀態(tài)做性能驗證時首先滿足的實驗條件82一.精密度驗證實驗一.精密度驗證實驗83不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。*必須保留任何離群值和室內質控失控的記錄。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。檢驗時應同時至少測一個質控品。離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差?！夺t(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》《ISOl5189—醫(yī)學實驗室質量和能力認在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。從CLIA’88允許誤差表中查閱評價的該項目的允許誤差范圍。功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。設備的性能是否合格，對檢驗結果的準確性起決定性的作用。至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。檢驗時應同時至少測一個質控品。測量精密度(measurementprecision)至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍?；靖拍?/p>

測量精密度(measurementprecision)

在規(guī)定條件下，對同一或相似被測對象重復測量得到測量示值或測得量值間的一致程度。

1.測量精密度通常由不精密度的量度以數(shù)字表達，如規(guī)定測量條件下的標準差、方差和變異系數(shù)。

2.規(guī)定的條件可以是測量的重復性條件、測量的中間精密度條件或測量的再現(xiàn)性條件。

3.測量精密度用于定義測量重復性、中間測量精密度和測量再現(xiàn)性。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂84基本概念測量重復性在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內對同一或相似被測對象重復測量。

1.在臨床化學上，即所謂的批內精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常重復性條件來代表基本不變的測量條件（被稱為重復性條件），產生的測量結果是最小變異。3.重復性信息可對故障排除目的有用處。

基本概念測量重復性85基本概念測量再現(xiàn)性：在包括了不同地點、不同操作者、不同測量系統(tǒng)的測量條件下對同一或相似被測對象重復測量的測量精密度。

1.在臨床化學上，即所謂的室間精密度。

2.在評估體外診斷醫(yī)療器械時，通常再現(xiàn)性條件代表了最大改變的條件（被稱為再現(xiàn)性條件），產生于獨立實驗室間比較結果時遇到的測量結果變異，如發(fā)生在室間比對計劃中（例如，能力比對）。

基本概念測量再現(xiàn)性：86應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號、設備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。EQA的允許誤差進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。準確度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間的一致程度。在一段時間內（一般為連續(xù)20個工作日）對同一樣品（常為質控品），每天測定一次，每次測定雙份，由此計算出批間精密度。當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medicaldecisionlevels)左右。從能力比對試驗中獲得的參考物；得到直線回歸方程Y＝aX+b，樣品物濃度應盡量選擇該項目正常參考區(qū)間內的濃度。分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;公式：（比較方法-實驗方法）實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；偏倚（bias）指測量結果的預期值與可接受值間的差異。將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。如沒有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度?；靖拍?.不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。

4.應在實際程度上給出改變或不改變條件的說明。應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號87基本概念中間精密度在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。

1.應在實際程度規(guī)定改變和未改變的條件，特別是如校準物、試劑批號、設備系統(tǒng)、操作者和環(huán)境條件等變量。

2.在體外診斷醫(yī)療器械評價中，一般中間精密度條件代表醫(yī)療器械在一長時間段內的實際使用條件?；靖拍钪虚g精密度88文件依據(jù)CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》文件依據(jù)89實驗方法批內精密度在相同的測量條件下，在最短時間內（常是在同一測量批次內）對同一樣品測量20次，由此計算出批內精密度。實驗方法90實驗方法批間精密度在一段時間內（一般為連續(xù)20個工作日）對同一樣品（常為質控品），每天測定一次，每次測定雙份，由此計算出批間精密度。如果時間緊，也可改為測5日，每天分2批進行，每批重復測定2次，每次至少間隔2h，每個濃度每天能獲得4個數(shù)據(jù)。由此計算出總精密度。實驗方法批間精密度91實驗樣本的選擇1.實驗樣本要穩(wěn)定，其基質組成應盡可能與臨床樣本相似。一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清；

2.實驗樣本的濃度盡可能選擇與廠商聲明性能相近的濃度或接近該項目醫(yī)學決定水平的濃度。

3.通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。實驗樣本的選擇92樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關樣品濃度高時，雖然標準差的絕對值較大，但變異系數(shù)往往變小。所以評估精密度時，建議評估高低二個濃度的精密度。當二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。樣本濃度的選擇1.精密度大小和樣品濃度有關93樣本濃度的選擇2.所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即至少有一個濃度在醫(yī)學決定水平(medicaldecisionlevels)左右。

不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。也不應選用靠近最低檢出限的樣品，此時所得的精密度往往偏大。如沒有醫(yī)學決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外再根據(jù)檢驗項目的性質在線性區(qū)間內選擇一個值。樣本濃度的選擇2.所選濃度應在測量范圍內有醫(yī)學意義的值，即94試劑和校準品的要求

在整個階段，盡可能使用相同條件，應使用同一種類同一批號的試劑和校準物，如有可能，只進行一次校準。使用不同批號試劑和多次校準都會增加檢驗結果的變異程度。試劑和校準品的要求在整個階段，盡可能使用相同條件，應使用同95質量控制

檢驗時應同時至少測一個質控品。當質控品結果超出規(guī)定的失控限，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗以取得實驗數(shù)據(jù)。要保存所有的質控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。質量控制檢驗時應同時至少測一個質控品。96在正式實驗前操作者應熟練掌握1.操作程序

2.保養(yǎng)程序

3.樣本準備

4.校準及檢測程序

在正式實驗前操作者應熟練掌握1.操作程序97樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。不存在明顯的攜帶污染等。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。試劑、校準品（有效期、批號等）計算均值、標準差和變異系數(shù)。收集臨床檢測過程中的高值樣品分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。CLSI（原NCCLS）頒布的EP5-A2文件《定量測量方法的精密度性能評價-批準指南第二版》檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。測量精密度(measurementprecision)發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；可采用與評價試劑配套的校準品。應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;數(shù)據(jù)收集

分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差。為了能收集到至少20個有效數(shù)據(jù)，除補充由于質控失控而增加的測試外，還應再增加由于離群值不用于精密度的計算所需增加的檢驗次數(shù)。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。數(shù)據(jù)收98數(shù)據(jù)收集

進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，當不接受數(shù)據(jù)超過2個，應懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應不用此次試驗數(shù)據(jù)，檢查問題和解決問題后重新開始新的評估實驗。*必須保留任何離群值和室內質控失控的記錄。數(shù)據(jù)收集進行批內精密度評估實驗時，一次只99結果分析

計算均值、標準差和變異系數(shù)。從CLIA’88允許誤差表中查閱評價的該項目的允許誤差范圍。

結果分析100判斷標準批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。批間精密度—CV值要求低于1/3CLIA’88允許誤差。判斷標準批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88101CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項目：

EQA的允許誤差試劑說明書提供CLIA’88允許誤差范圍不涉及的項目：102二.正確度驗證實驗二.正確度驗證實驗103基本概念準確度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間的一致程度。正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。通常用統(tǒng)計量“偏倚”來表示。偏倚（bias）指測量結果的預期值與可接受值間的差異。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異?；靖拍顪蚀_度（accuracy）指檢測結果與被測量真值之間104基本概念誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差?？傉`差（totalerror）指某實驗室用某方法在多次獨立檢驗中分析某樣品所得各個結果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內的最大值。包括隨機誤差和系統(tǒng)誤差，是不準確度的估計值?；靖拍钫`差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值105文件依據(jù)CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對精密度和準確度性能的核實指南》文件依據(jù)106實驗方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評測定具有溯源性的校準物質

實驗方法參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質評107實驗程序

對權威機構提供的室間質控物進行檢測，檢測結果與已知靶值和可接受限進行比較。實驗程序對權威機構提供的室間質控物進行檢測，108定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質；2.從能力比對試驗中獲得的參考物；3.廠家提供的正確度確認物或質控物；4.實驗室室間質評物；5.由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質。定值參考物來源1.已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人109檢驗時應同時至少測一個質控品。依照實驗室標準操作規(guī)程檢測樣本;目的：確定設備能達到所要求的性能指標；03范圍內，r2≥0.將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，在一組測量條件下的測量精密度，這些條件包括相同的測量程序、相同地點并且對相同或相似的被測對象在一長時間段內重復測量，但可包含其它相關條件的改變。不同測量系統(tǒng)可使用不同測量程序。在一組測量條件下的測量精密度，包括相同測量程序、相同操作者、相同測量系統(tǒng)、相同操作條件和地點，并且在短時間段內對同一或相似被測對象重復測量。從能力比對試驗中獲得的參考物；臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍。批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差。已用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人血清或其他一些未摻入成分的人物質；誤差（error）指對于真值或對于可接受的、預期真值或參考值的偏離，分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差。二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。按照從低—高、高—低循環(huán)測定5遍，檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。實驗室內部各儀器比對實驗進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；實驗時間為5天，按照操作規(guī)程收集至少40份新鮮患者標本；若2例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于1個檢測值超過已知參考限，則已知參考區(qū)間可以接受。實驗程序

選擇適合評價的檢驗方法最易獲得的材料。至少要求測定2個水平，選擇的水平應能代表方法的最低和最高測量范圍。實驗前充分混勻分析物，用實驗方法重復測定2次，將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。檢驗時應同時至少測一個質控品。實驗程序選擇適合評價的檢驗方110三.線性范圍及可報告范圍驗證實驗三.線性范圍及可報告范圍111基本概念線性范圍（linearrange)使實驗系統(tǒng)的最終分析結果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應低于允許誤差。線性（linearity）在給定的測量范圍內，使測定結果與樣本中分析物的量直接成比例的能力?；靖拍罹€性范圍（linearrange)使實驗系統(tǒng)的最終112基本概念分析測量范圍（analyticalmeasurementrange）是方法直接測量標本，而不需要任何的稀釋、濃縮或者其它預處理等過程下，測量結果總誤差符合要求的分析物濃度的范圍。臨床可報告范圍（clinicalreportablerange)是方法可采用對標本的稀釋、濃縮或者其他預處理用于擴展直接分析測量下的分析物數(shù)值的范圍?；靖拍罘治鰷y量范圍（analyticalmeasurem113文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評價》文件依據(jù)CLSI頒布的EP6-A文件《定量測量方法的線性評114儀器要求

應有較好的測定精密度不存在明顯的攜帶污染等。對儀器應進行定期維護及校準，保證其處于正常狀態(tài)。儀器要求應有較好的測定精密度115試劑及校準品要求試劑應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。校準品可采用與評價試劑配套的校準品。校準品的使用應嚴格按照產品說明，儀器校準步驟與間隔應按照本室的標準操作程序進行。試劑及校準品要求試劑116―線性范圍（linearrange)---EP-6離群值的標準：任何結果和總均值的差超過4個標準差。―精密度(precision)---EP5-A2不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。正確度（truness）指大批檢測結果得到的平均值與真值的一致程度。將檢測結果與說明書標示值或靶值進行比對，計算偏倚，以CLIA’88的1/2作為評價標準，偏倚小于CLIA’88的1/2，認為檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平。實驗室內部各儀器比對實驗CLSI（原NCCLS）頒布的EP9A文件《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估—批準指南》檢驗時應同時至少測一個質控品。不要使用對方法學有干擾的樣本。通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;通常選擇穩(wěn)定性好的、血清基質的質控物作為實驗樣品。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。關鍵在于——篩選“健康人群”保證儀器在最佳狀態(tài)進行批內精密度評估實驗時，一次只能有一個離群值，分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值(outliers)。二者均要求，設備在臨床應用之前必須要進行性能驗證；樣品類型的選擇為避免基質效應對結果的影響，選用的樣品應與臨床實驗樣品相似。不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣品，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。―線性范圍（linearrange)---EP-6樣品類117線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測過程中的高值樣品即濃度接近預期測定上限的患者血清（H）和低值樣品(L)，若收集不到低值樣品，可用生理鹽水或蒸餾水替代。

2.將H和L樣品按：1L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、1H關系各自配制(必要時可改變比例)混合，形成系列評價樣品。線性范圍樣品制備1.收集臨床檢測過程中的高值樣品118線性范圍樣品測定

進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水平的樣品測定，每個樣品重復測定2-4次；進行線性范圍驗證時，應進行5個濃度水平的樣品測定，并在1個批次測量中完成實驗，每個樣品至少重復測定2次，測量次序為隨機；如果測定方法本身存在明顯的攜帶污染，應根據(jù)實際情況采取恰當措施盡量避免對測定結果的影響。線性范圍樣品測定進行線性范圍確立時，應進行7-11個濃度水119線性范圍結果分析以預期值為橫坐標，以實測值為縱坐標進行線性回歸，得到直線回歸方程Y＝aX+b，a在0.97～1.03范圍內，r2≥0.95。

線性范圍結果分析以預期值為橫坐標，以實測值為縱坐標進行線性回120可報告范圍樣品測定

收集接近線性范圍上限的病人標本血清。實驗操作時，以生理鹽水或蒸餾水為稀釋介質，每個稀釋濃度檢測兩次，取平均值與理論值進行比較。當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該建議的稀釋度即可，不必驗證其它倍數(shù)。如沒有給出建議的稀釋度，則根據(jù)工作實際需要稀釋?？蓤蟾娣秶鷺悠窚y定收集接近線性范圍上限的病人標本血清。實121可報告范圍判斷指標及判斷標準判斷指標：R=檢測均值/預期值*100%判斷標準：80%≤R≤120%，則偏倚在允許誤差范圍之內。可報告范圍判斷指標及判斷標準判斷指標：R=檢測均值/預期值*122四.分析靈敏度驗證實驗四.分析靈敏度驗證實驗123基本概念檢測低限（LLD）指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測響應量對應的分析物量。功能靈敏度（FS)指檢測系統(tǒng)可定量報告分析物的最低濃度。空白限（LoB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結果。檢出低值（LoD)指在規(guī)定的可能性條件下可以檢出的樣本中分析物的最小量?；靖拍顧z測低限（LLD）指樣品單次檢測可以達到的非空白檢測124文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進行靈敏度性能評價。文件依據(jù)CLSI頒布的EP-17A文件進行靈敏度性能評價125功能靈敏度實驗程序將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同濃度的樣品連續(xù)測定20次，計算均值、標準差和變異系數(shù)，以不精密度（CV）≤20%時對應檢測限樣品具有的平均濃度即為功能靈敏度。功能靈敏度實驗程序將校準品或質控品稀釋后，在儀器上分別對不同126五.抗干擾驗證實驗五.抗干擾驗證實驗127樣本選擇選取臨床混合血清1例。不可采用溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣品。樣品物濃度應盡量選擇該項目正常參考區(qū)間內的濃度。樣本選擇選取臨床混合血清1例。128應注意試劑有效期及批號，不可采用過期試劑或不同批號的試劑。對非配套系統(tǒng)，驗證更為廣泛。發(fā)現(xiàn)離群值應棄用，并用新的參考個體代替，以確保測試結果不含離群值;批內精密度—CV值要求低于1/4CLIA’88允許誤差。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測量范圍。目的：確定設備能達到所要求的性能指標；以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。總誤差（totalerror）指某實驗室用某方法在多次獨立檢驗中分析某樣品所得各個結果值與靶值之差在一定置信區(qū)間內的最大值。試劑說明書提供將每一系列的干擾樣品根據(jù)實驗要求配制成4個不同濃度的樣本血清，收集接近線性范圍上限的病人標本血清。樣品物濃度應包括試劑廠商提供的試劑所能達到的線性范圍。以檢測計量單位或百分率表示，即平均值與參考值的差異。空白限（LoB)指在規(guī)定的可能性條件下，空白樣品被觀察到的最大檢測結果。當試劑盒說明書中廠商給出建議的稀釋度時，可直接驗證該