免疫學實驗質量控制

免疫學實驗質量控制第一頁，共63頁。學習要求掌握免疫學實驗質量控制的基本原則掌握評價某種免疫學試驗質量的指標

熟悉與質控有關的重要概念

了解質控的方法10/30/20222第二頁，共63頁。實驗室的科學管理方法，保證實驗質量的綜合性措施。質控內容：標本的采集、保存與運送；標本在實驗室內正確處理；防止分析過程中來自方法學方面的誤差；嚴格管理實驗材料及儀器設備等所采取的措施；用質控物質插入病人標本一起操作，然后用統(tǒng)計學的方法，對各項測定方法的變異作出客觀的估計，使誤差控制在“允許范圍”以內。各級管理人員具備質控的基本理論知識。概述10/30/20223第三頁，共63頁。

質量控制（qualitycontrol，QC）是利用現代科學管理的方法和技術檢測分析過程中的誤差，控制與分析有關的各個環(huán)節(jié)，確保實驗結果的準確可靠。也稱為實驗室質量保證。定義：概述10/30/20224第四頁，共63頁。質量控制的主要內容

全過程質量控制室內質量控制室間質量評價實驗室認可試劑盒的選擇和評價概述10/30/20225第五頁，共63頁。概述免疫學質控的有關概念全過程質量控制室內質量控制室間質量評價10/30/20226第六頁，共63頁。免疫學質控的有關概念一、免疫學試驗可信性指標二、評價某種免疫學試驗質量的指標

三、與質控有關的重要術語10/30/20227第七頁，共63頁。一、免疫學試驗可信性指標

免疫學試驗可信性（credibility）的考核指標（尺度）：

（一）精密度（precision）

（二）準確度（accuracy）（三）敏感性（sensitivity）

（四）特異性（specificity）10/30/20228第八頁，共63頁。精密度概念：在一定條件下進行多次測定時，所得測定結果之間的符合程度，通常表示測量結果中隨機誤差的大小。

（1）Reproducibility：不同操作者用同一方法對同一標本在不同時間內重復檢測結果的差別。（2）Repeatability：用同一方法對同一標本在同一時間重復檢測結果的差別。意義不涉及被測物質的真值，差別越小，方法精密度越高。10/30/20229第九頁，共63頁。準確度概念：表示測量結果與真值的一致程度，是測量結果中系統(tǒng)誤差與隨機誤差的綜合。

真值是絕對可靠的正確值，但大多數免疫學試驗所用的參考或對照標本中免疫物質的絕對值很少被確定，因此免疫學試驗的準確性只能估計。常用的估價方法（1）回收試驗（recoverystudies）（2）與參考實驗室的結果比較（3）與公認的標準方法比較（4）正常值范圍比較10/30/202210第十頁，共63頁。敏感性概念

指某種試驗檢出極低濃度免疫物質的能力。敏感的方法在標本的真實狀態(tài)為陽性時，應能給出陽性結果，如給出陰性結果，則為假陰性。真假陽性和陰性的判定

真陽性和假陰性的判定均有賴于臨床情況。確定敏感性方法（1）將已知含量免疫物質系列稀釋，觀察該技術所能檢出的最低含量。（2）用該法檢測確診的臨床病例。10/30/202211第十一頁，共63頁。特異性

概念特異性包含兩個含義，（1）標本的真實狀態(tài)為陰性時，該試驗應能給出陰性結果，如為陽性，即為假陽性。（2）該試驗無交叉反應。確定特異性的方法

對陽性結果用相應的免疫物質進行阻斷或抑制；用該試驗檢測正常人群與已知無關的病例。10/30/202212第十二頁，共63頁。診斷敏感性

概念指在患者中用此試驗得到陽性結果的百分率。某種試驗在患者和非患者中可能得出的結果—————————————————————————————分組陽性陰性合計—————————————————————————————患者TP（真陽性）FN（假陰性）TP+FN非患者FP（假陽性）TN（真陰性）FP+TN合計TP+FPFN+TNTP+FP+FN+TN—————————————————————————————在患者中得到的陽性結果為真陽性，得到的陰性結果為假陰性。二、評價某種免疫學試驗質量的指標TP+FN

×100%TP10/30/202213第十三頁，共63頁。診斷特異性概念非患者（正常人與無關疾病的患者）中用此試驗得到陰性結果的百分率。非患者所得陽性結果為假陽性，所得陰性結果為真陰性。診斷特異性計算方法

TNTN+FP理想試驗診斷特異性應為100%?！?00%10/30/202214第十四頁，共63頁。診斷指數概念評價某種試驗敏感性與特異性的綜合指標診斷效率（efficiencyofatest）概念某種試驗能準確區(qū)分患者和非患者的能力。陽性預測值（predictivevalueofapositivetest）概念指所有陽性結果的人中真正患者的百分率。陰性預測值predictivevalueofanegativetest概念指所有陰性結果的人中，非患者的百分率。正常上限upperlimitofnormalorcut-offpoint在用上述指標評價時，如何確定正常上限，有舉足輕重的影響。10/30/202215第十五頁，共63頁。真值

真值是在大多數情況下無法確切知道的數值。根據1976年國際臨床化學會（IFCC）公布的有關質控的規(guī)定，真值是指采用一組最可靠的參考方法測得的近似真實的數值。定值

是指標定的質控材料的已知值。三、與質控有關的重要術語10/30/202216第十六頁，共63頁。決定性方法

是指經過徹底研究未發(fā)現任何不精密和不準確因素的方法。在分析某被測物時是所有測定方法中具有最高準確度的方法。國際公認的決定性方法很少，并且其設備昂貴及技術操作復雜。參考方法

按照美國國家標準局的建議，參考方法是指精密度與準確度稍微低于決定性方法，其各種輕度干擾因素為已知的分析方法。

三、與質控有關的重要術語10/30/202217第十七頁，共63頁。

又稱醫(yī)學決定濃度，是指在診斷及治療工作時，對決定疾病診斷或治療起關鍵性作用的某一被測成分的濃度，是臨床上按照不同病情給予不同治療方案而確定的閾值。醫(yī)學決定水平定義：10/30/202218第十八頁，共63頁。

某一測定成分可有多個醫(yī)學決定水平。如血糖有四個決定水平．2.5mmol/L表示低于此值出現低血糖癥狀，6.6mmol/L表示空腹時確定糖尿病的水平，10mmol/L表示出現尿糖，16.5mmol/L以上出現高血糖昏迷．特點：10/30/202219第十九頁，共63頁。誤差

指測定結果與真實值的不符合性。（一）系統(tǒng)誤差

指一系列測定結果與真實值或定值存在同一傾向的偏離。是一種統(tǒng)計學誤差，往往是由恒定的原因引起，并在一定的條件下重復出現。這種誤差可以校正。例如天平砝碼、容量瓶、吸管的誤差屬此類。三、與質控有關的重要術語10/30/202220第二十頁，共63頁。（二）偶然誤差

又名隨機誤差，是不易測定的偏差，以偶然的和不可預料的方式出現。也是一種統(tǒng)計學誤差，相同的操作者在相同的條件下，相同的注意力，連續(xù)多次測定結果，其誤差的大小都不盡相同，并不出現相同的誤差。檢驗標本結果的誤差屬于此類。10/30/202221第二十一頁，共63頁。（三）允許誤差對允許誤差有二種不同的觀點，按照醫(yī)學決定性水平為根據，臨床和實驗室共同討論定出允許誤差。最常用的允許分析誤差，在該范圍內的分析誤差不會影響臨床使用。一般定為平均值的±1.96SD范圍以內，也就是在95%的可信限內。10/30/202222第二十二頁，共63頁。全過程質量控制

主要步驟

全面質量控制的內容

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分析前質量控制▼分析中質量控▼分析后質量控制10/30/202223第二十三頁，共63頁。全面質量控制的內容主要包括標本分析前的質量保證、分析中的質量控制和分析后的質量評估三個主要過程的質控。它們之間的實驗保證體系見圖4-1。

全面質量控制的內容10/30/202224第二十四頁，共63頁。

內容主要為：①人員的素質和穩(wěn)定性②實驗室的設置和工作環(huán)境③實驗儀器的質量保證④檢測方法的選擇和評價⑤試劑盒的選擇與評價⑥病人準備⑦標本的采集、處理和儲存⑧實驗室用水等（一）分析前質量控制10/30/202225第二十五頁，共63頁。標本的搜集和處理（舉例）免疫學試驗對標本的要求較嚴格。如細胞免疫功能測定（體外法）時標本必須是新鮮的淋巴細胞或白細胞；檢測補體的標本如在室溫或4℃保存，則因補體滅活而影響測定結果；用聚乙二醇沉淀法檢測循環(huán)免疫復合物時，標本反復凍融或血脂含量過高會造成假陽性。10/30/202226第二十六頁，共63頁。

內容主要包括：①標本的正確處理和應用②項目操作規(guī)程的建立③室內質控和結果分析④登記和填發(fā)報告等（二）分析中的質量控制10/30/202227第二十七頁，共63頁。

內容主要有：①運送實驗報告②室內質控的數據管理③參加室間質評④病人投訴調查⑤臨床信息反饋等（三）分析后的質量評估10/30/202228第二十八頁，共63頁。

圖4-1全面質量控制實驗保證體系分析后質量評估分析中質量控制

病人準備檢查病人申請檢驗標本采集標本運送標本處理人員素質工作環(huán)境實驗用水實驗室管理儀器質量保證方法選擇與評價試劑選擇與評價建立操作規(guī)程室內質控及分析標本分析測定臨床醫(yī)師反饋信息室內復查保留標本隨時復查運送報告病人投訴室間質評登記填發(fā)報告分析前質量保證分析中質量控制10/30/202229第二十九頁，共63頁。室間和室內的質量控制10/30/202230第三十頁，共63頁。

室內質控是由實驗室的工作人員采用一系列統(tǒng)計學的方法，連續(xù)地評價本實驗室測定工作的可靠程度。室內質控的目的是檢測、控制本實驗室測定工作的精密度，并檢測其準確度的改變，提高常規(guī)測定工作的批間、批內標本檢測結果的一致性，以確定檢驗報告是否可靠、能否發(fā)出的一項工作。室內質控的目的10/30/202231第三十一頁，共63頁。室內質控系統(tǒng)要求（一）確定分析方法1、可靠性：方法具有良好的特異性、靈敏度、穩(wěn)定性。2、實用性：快速、微量、技術要求不高、影響因素易控制。10/30/202232第三十二頁，共63頁。

實施質控需要一套完整的標準操作規(guī)程（standardoperationalprocedure，SOP）做保障。包括：儀器使用及維護的操作規(guī)程；試劑、質控品、標準品等使用的操作規(guī)程；分析檢驗項目的標準操作手冊等。

（二）建立標準化操作及流程

10/30/202233第三十三頁，共63頁。

對本實驗室的相關儀器如分光光度計、量具、自動生化分析儀以及其它測定儀器等要定期按要求進行檢定和校準如對自動化分析儀、分光光度計的摩爾吸收系數ε的定期校準。所有校準和檢定都應有時間、結果、變更和頻度的記錄和說明。（三）儀器的校準和校準驗證

10/30/202234第三十四頁，共63頁。器材的標定與選擇（舉例）實驗器材都必須定期核定。各種量器應定期檢查。有些廠家的血凝反應板，ELISA用聚苯乙烯反應板質量不穩(wěn)定，使用前應進行預測。10/30/202235第三十五頁，共63頁。使用對照與參考血清、參考細胞定量測定免疫物質含量時，必須用標準參考品制備標準曲線和進行質控。標準參考品最好用國際通用的，以便結果的比較。自制質控血清則應嚴格標定。（四）質控品的選擇

10/30/202236第三十六頁，共63頁。

為質控目的而制備的標本稱為質控品。質控品含有與測定標本同樣的基礎物質（通常為小牛血清）其分析物應具有參考值、病理值和醫(yī)學決定水平三種水平濃度。定義10/30/202237第三十七頁，共63頁。

①無傳染性。②具有”醫(yī)學決定水平“的臨界值血清，在定性試驗中確定試驗靈敏度。③經國際參考品標化的定值血清

質控品應至少具有以下的特征：10/30/202238第三十八頁，共63頁。為質控目的而分析測定的已知標本。分為三種：1、第一參考物質

為一種均勻穩(wěn)定的質控參考材料。其雜質含量已知，穩(wěn)定性良好，均一性經鑒定合格，用決定性方法或幾種不同類型高準確度的方法進行定值。應用第一參考物質常用以校對決定性方法，開發(fā)、比較和校對參考方法以及為第二參考物質的定值而使用。10/30/202239第三十九頁，共63頁。2、第二參考物質

此類參考物質包括純物質（通常用水溶液或有機溶劑溶液）和生物源性介質（如透析后血清）中含有參考物質成分的制品。純物質本身就是第一標準物質或具有被第一標準物標定數值的物質。用生物源性介質配制的所含各種被測成分須經參考方法定值。自制定值參考血清即屬此類，這種參考物質主要用于常規(guī)方法的標準化。10/30/202240第四十頁，共63頁。3、質控物質此類質控品也是用生物源性介質制成（如人或動物的血清），基本應用于常規(guī)室內或室間質量控制。它有定值與未定值二種，又分凍干與液體二種。定值時可用第一或第二參考物質為標準，采用參考方法或常規(guī)方法來測定。用于室內質控時盡量采用未定值質控血清（比較廉價），必要時為解決質控中的問題再采用定值的質控血清。10/30/202241第四十一頁，共63頁。根據質控品的物理性狀不同分為凍干質控品、液體質控品和混合血清等。根據有無測定值可分為定值（藍色標簽）質控品和非定值（紅色標簽）質控品。各實驗室可根據各自的情況選用以上一種質控品作為室內質控品．質控品的種類10/30/202242第四十二頁，共63頁。①嚴格按質控品說明書操作。

②凍干質控品的復溶要確保溶劑的質量。

③凍干質控品復溶的加量要準確一致。

④凍干質控品復溶應輕輕搖勻切忌劇烈震搖。

⑤質控品應按規(guī)定方法保存不用超期品。

⑥質控品要與標本同樣測定條件下測定。質控品的正確使用和保存

10/30/202243第四十三頁，共63頁。（五）質控品的使用1、靈敏度控制將臨界值血清插入常規(guī)檢測工作中，檢測實驗盒靈敏度是否達到規(guī)定要求。2、精密度控制使用臨界值血清，連續(xù)測定20次以上，得到平均值（）和標準差（S）作質控圖。10/30/202244第四十四頁，共63頁。（六）試劑質量試劑的質量對免疫學試驗的結果有重大影響。

嚴格按要求選擇使用國家藥監(jiān)局正式批準生產文號和衛(wèi)生部”批批檢“合格產品或同意進口文號的試劑。并對試劑品牌、規(guī)格、批號、效期作記錄，以備質量評價。試劑配置必須嚴格按要求進行，對pH、離子強度、細胞濃度等都需仔細標定。新配試劑必須用標準質控參考品核對后方可使用。10/30/202245第四十五頁，共63頁。二、常用免疫學統(tǒng)計質控圖用質控材料插入日常檢驗標本一起進行測定，將質控結果作圖，是質控中普遍采用的方法。以測出的結果為縱坐標，以日期為橫坐標，并以已知均值為中線，用平行橫線表示“允許誤差”的高限和低限，當結果的點子在“允許誤差”的范圍內，一般意味著分析測定的結果良好。若結果的點子落在“允許誤差”的范圍以外，就是結果有問題發(fā)生。10/30/202246第四十六頁，共63頁。

均數－標準差（-s）質控圖(Levey－Jennings質控圖)

是臨床最常用的質控圖，以監(jiān)測分析的精密度。均數－標準差（-S）質控圖根據前面確定的靶值（）和標準差繪制-s質控圖，得到均值線（）、警告限（±2s）和失控限（±3s）。與質控圖制作相同批號的控制血清，每天隨病人標本分析，結果點在圖上，直線連接。（1）方法:10/30/202247第四十七頁，共63頁。d均數+2S-2S+3S-3S正常分布10/30/202248第四十八頁，共63頁。正常分布規(guī)律：

①95%數據落在±2s內②不能有連續(xù)5次結果在同一側③不能有5次結果漸升或漸降④不能連續(xù)2個點落在±2s以外⑤不應該有落在±3s以外的點（2）結果分析：

10/30/202249第四十九頁，共63頁。趨勢變化漂移精密度變化均數－標準差質控圖-3S+3S+2S-2Sd均數漂移:準確度發(fā)生一次性向上或向下變化趨勢性變化:向上或向下的趨勢性變化精密度改變:指常規(guī)測定中出現日間差異較大的情況10/30/202250第五十頁，共63頁。

①漂移，提示存在系統(tǒng)誤差②趨勢性變化，說明試劑或儀器的性能已發(fā)生變化③精度變化，提示測定的偶然誤差較大，如儀器、試劑不穩(wěn)定等異常表現:10/30/202251第五十一頁，共63頁。（1)方法：要求在常規(guī)條件下，同時測定2份定值質控血清，并要求質控血清所含測定物濃度最好分別為醫(yī)學決定水平的上限（高值）或下限（低值），或者是分析方法測定范圍的上限和下限。將測定結果分別繪成2份不同濃度的－s質控圖，當有一份質控血清測定值處于質控圖上2s～3s界限內，發(fā)出“警報”信號時，即應采用其余各條規(guī)則對質控圖進行全面檢查，若符合其中一條，就應把該批分析測定的結果判為“失控”。2.Westgard多規(guī)則質控法10/30/202252第五十二頁，共63頁。

①12S警告規(guī)則：當2份質控血清中的任意1份測定值處于±2s～±3s界限內，為“警報”信號。

②12.5S規(guī)則：若有一個質控結果超過±2.5s提示存在隨機誤差。

③13S規(guī)則：當2份質控血清中的任意1份測定值超過±3s界限，為“失控”。提示存在隨機誤差。

④R4S規(guī)則：同一批中二個質控結果之差超出4s范圍，其中一個超出＋2s限值，另一個超出－2s限值，為“失控”，屬隨機誤差過大。（2）判斷規(guī)則：10/30/202253第五十三頁，共63頁。

⑤22S規(guī)則：同批兩個質控品結果同方向超出±2s限值，或同一質控品連續(xù)兩次質控結果超出±2s限值為“失控”，多由系統(tǒng)誤差造成。

⑥41S規(guī)則：當1份質控血清的測定結果連續(xù)4次超過＋1s或－1s界限，或2份質控血清的測定結果同時連續(xù)2次超過＋1s或－1s界限時，為“失控”，一般由系統(tǒng)誤差所至。

⑦7T規(guī)則：當7個連續(xù)的質控結果呈現向上或向下的趨勢，提示存在系統(tǒng)誤差。

⑧10規(guī)則：當1份質控血清測定結果連續(xù)10次偏于均值一側時，或2份質控血清的測定結果同時連續(xù)5次偏于一側時，為“失控”，是系統(tǒng)誤差所致。10/30/202254第五十四頁，共63頁。

操作者在測定質控時，如發(fā)現質控數據違背了質控規(guī)則，應填寫失控報告單，對失控結果要進行回顧、檢查、重復測定，或另取質控品分析，或檢查儀器、試劑和操作等，以糾正失控。失控后處理10/30/202255第五十五頁，共63頁。室間的質量評價

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