重大動(dòng)物疫病采樣監(jiān)測(cè)技術(shù)課件

重大動(dòng)物疫病采樣

監(jiān)測(cè)技術(shù)

中牟縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心席雙藝一、畜禽血液采集技術(shù)（一）、血液采集的要求：1、所有采血用具均應(yīng)事先消毒、干燥處理；2、采血部位要進(jìn)行剪毛、清拭并按常規(guī)進(jìn)行消毒。3、懷疑傳染病時(shí)，采血過程要防止到處流散，檢后的殘余血液及所用器皿要進(jìn)行消毒處理。4、需抗凝的要加入抗凝劑。5、需分離血清的血液，試管要靜置、斜放，便于血清晰出。6、注意安全。二、各種畜禽采樣方法及部位（一）、牛:多采用頸靜脈采血、尾靜脈采血。1、頸靜脈采血一般在頸靜脈溝的上1/3和中1/3交界處的頸靜脈內(nèi)。2、尾靜脈采血在尾根腹側(cè)中部。牛頸靜脈采血牛尾靜脈采血（二）、豬：多采用耳靜脈采血、前腔靜脈采血1、耳靜脈采血（適用于大豬）在耳下緣1/2處。2、前腔靜脈采血，胸淺窩內(nèi)，即在第一肋骨和胸骨柄結(jié)合處前方。豬耳靜脈采血豬前腔靜脈采血（三）、家禽：多采用雞翅內(nèi)側(cè)靜脈采血、雞心臟采血1、雞翅內(nèi)側(cè)腋靜脈，肉眼可見。2、雞心臟采血，雞仰臥保定，雞頭部朝向，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窩，右手持針，自胸骨上方凹窩斜向前下方心臟方向刺入，邊刺邊抽動(dòng)活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器，術(shù)畢，局部消毒。注意：此法采血后，多會(huì)引起雞只死亡，僅適用于淘汰雞的采血。雞翅靜脈采血雞翅靜脈采血雞心臟采血三、畜禽病料采集技術(shù)（一）、樣品采集的原則1、適時(shí)采樣。根據(jù)檢測(cè)要求及檢測(cè)對(duì)象和檢驗(yàn)項(xiàng)目的不同，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r(shí)機(jī)十分重要。樣品是有時(shí)間要求的，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定時(shí)間采樣，有臨床癥狀需要作病原分離的，樣品必須在病初的發(fā)熱期或癥狀典型時(shí)采樣，病死的動(dòng)物，應(yīng)立即采樣。2、合理采樣。根據(jù)診斷檢測(cè)的要求，須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病側(cè)重采樣。對(duì)未能確定為何種疫病的，應(yīng)全面采樣。3、典型采樣。選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應(yīng)兼顧采樣。4、無菌采樣。供病原學(xué)及血清學(xué)檢驗(yàn)的樣品，必須無菌操作采樣，采樣用具、容器均須無菌處理，尸體剖檢需采集樣品的，先采樣后檢查，以免人為污染樣品。5、適量采樣。采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測(cè)的需要，并留有余地，以備必要時(shí)復(fù)檢使用。6、樣品處理。采集的樣品應(yīng)一種樣品一個(gè)容器，立即密封，根據(jù)樣品的性狀檢驗(yàn)要求的不同，作暫時(shí)的冷藏、冷凍或其它處理。四、組織樣品的采集組織樣品一般由撲殺動(dòng)物或病死動(dòng)物解剖采集。從尸體采樣時(shí)，先剝?nèi)?dòng)物胸腹部皮膚，以無菌器械將腹腔打開，根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮蜕耙卟〉某醪皆\斷，無菌采集不同的組織。1、病毒檢驗(yàn)樣品。作病毒檢驗(yàn)的組織，必須以無菌技術(shù)采集，組織應(yīng)分別放入滅菌的容器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏容器立即送實(shí)驗(yàn)室。如果時(shí)間較長，可作凍結(jié)狀態(tài)運(yùn)送。2、細(xì)菌檢驗(yàn)樣品。供細(xì)菌檢驗(yàn)的組織樣品，應(yīng)新鮮并以無菌技術(shù)采集。如遇尸體已經(jīng)腐敗，某些疫病的致病菌仍可采集于長骨或肋骨，從骨髓中分離細(xì)菌。采集的所有組織分別放入滅菌的容器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏容器立即送實(shí)驗(yàn)室。豬解剖采樣糞便采集用品糞便采集用品六、畜禽疫病的樣品采集（一）、口蹄疫樣品的采集口蹄疫病毒在病畜的水皰皮內(nèi)及其淋巴液中含毒量最高。在水皰發(fā)展過程中，病毒進(jìn)入血流，分布到全身各種組織和體液。在發(fā)熱期血液內(nèi)的病毒含量最高，退熱后在奶、尿、口涎、淚、糞便等都含有一定量的病毒。1、組織樣品（1）、樣品的選擇：用于病毒分離、鑒定的樣品以發(fā)病動(dòng)物未破裂的水泡皮和水泡液為最好。對(duì)臨床健康但懷疑帶毒的動(dòng)物可在撲殺后采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品作為檢測(cè)材料。（2）、樣品的采集和保存：樣品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒劑消毒、擦拭)，剪取病畜的新鮮水泡皮3～5克放入滅菌小瓶中，加適量50％甘油／磷酸鹽緩沖液(pH7.4)，加蓋密封；也可采用無菌器具采集水泡液至少1毫升，裝入滅菌小瓶中(可加適量抗菌素)，加蓋密封。盡快冷凍保存。（3）、在無法采集水泡皮和水泡液時(shí)，可采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品3～5克裝入潔凈小瓶內(nèi)，加蓋密封盡快冷凍保存。樣品的包裝瓶上均要貼上標(biāo)簽，寫明采樣地點(diǎn)，動(dòng)物種類，編號(hào)，時(shí)間等。3、血清樣品采集懷疑曾有疫情發(fā)生的畜群，錯(cuò)過組織樣品采集時(shí)機(jī)時(shí)，可無菌操作采集動(dòng)物血液，每頭不少于10mL。無菌分離血清裝入滅菌小瓶中，加蓋密封后冷藏保存，通過檢測(cè)抗體，做出追溯性診斷。豬口蹄疫樣品采集羊(O—P液)樣品采集牛(O—P液)樣品采集牛(O—P液)樣品采集（二）、禽流感的樣品采集1、至少從5只瀕死禽采集樣品。樣品包括：泄殖腔拭子和氣管拭子(置于緩沖液中)各5個(gè)；氣管和肺的混樣5個(gè)，腸管及內(nèi)容物的混樣5個(gè)；肝、脾、腎和腦等組織樣品各5個(gè)。2、分別采集至少10個(gè)病雞的血樣。采集10只病禽的血樣，使用一次性采血器，心臟或翅靜脈采血，每只禽采血樣2ml～3ml，經(jīng)離心或自然析出血清后，將血清移到指形管中。封好口，貼好標(biāo)簽。不同禽只的血樣不能混合。（三）、豬瘟樣品的采集豬瘟病毒復(fù)制的主要部位是扁桃體，然后經(jīng)淋巴管進(jìn)入淋巴結(jié)，繼續(xù)增殖，隨即到達(dá)外周血液，從這時(shí)起病毒在脾、骨髓、內(nèi)臟淋巴結(jié)和小腸的淋巴結(jié)組織繁殖到高滴度。樣品：全血、骨髓、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、脾臟（四）、豬鏈球菌樣品采集致病性鏈球菌經(jīng)呼吸道或其它途徑（受損的皮膚和粘膜）進(jìn)入機(jī)體后，首先在入侵處繁殖，很快進(jìn)入淋巴管和淋巴結(jié)。繼之沖破淋巴屏障，沿淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散到血液中，引起菌血癥，最后導(dǎo)致各個(gè)實(shí)質(zhì)器官嚴(yán)