實(shí)驗(yàn)5-細(xì)菌的芽孢染色法課件

實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法1實(shí)驗(yàn)的目的要求學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法進(jìn)一步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征2細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造孢外壁芽孢衣皮層芽孢壁芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)芽孢核區(qū)

芽胞具有多層厚而致密的胞膜，由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、芽胞壁、皮質(zhì)、外膜、芽胞殼和芽胞外衣.3形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧(O2)條件下才能形成芽孢，而破傷風(fēng)芽孢桿菌則在無(wú)氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)形成芽胞，但蘇云金芽孢桿菌是例外。細(xì)菌芽孢的基本特性4細(xì)菌芽孢的基本特性芽孢對(duì)惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。有的芽胞可耐100℃沸水煮沸數(shù)小時(shí)。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。5芽胞抵抗力強(qiáng)的原因1.芽胞含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；2.芽胞具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；3.芽胞中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸（DPA），DPA與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽胞中各種酶的熱穩(wěn)定性。7細(xì)菌芽孢染色的意義芽孢又稱(chēng)內(nèi)生孢子，是某些細(xì)菌生長(zhǎng)到一定階段在菌體內(nèi)形成的休眠體，通常呈圓形或橢圓形。細(xì)菌能否形成芽孢以及芽孢的形狀、芽孢在芽孢囊內(nèi)的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。89細(xì)菌的芽孢具有厚而致密的壁不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色(芽孢呈無(wú)色透明狀)。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦染上后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。細(xì)菌芽孢染色原理10細(xì)菌芽孢染色原理所有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則：除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽孢著色，再使菌體脫色，而芽孢上的染料則難以滲出，故仍保留原有的顏色，然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。11材料菌種:蘇云金芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌染色劑：5%孔雀綠水溶液0.5%番紅水溶液儀器或其他用具：Eppendorf管Eppendorf管架載玻片顯微鏡電磁爐搪瓷燒杯12方法Schaeffer-Fulton氏染色法(P78)改良的Schaeffer-Fulton氏染色法13制片染色脫色復(fù)染鏡檢Schaeffer-Fulton氏染色法14制備菌懸液染色涂片固定脫色復(fù)染鏡檢改良的Schaeffer-Fulton氏染色法1516制片生理鹽水

1、滴生理鹽水

挑取少量菌苔與生理鹽水混勻均勻涂布或電吹風(fēng)吹干2、涂片滴半滴生理鹽水在載玻片中央

3、干燥室溫自然晾干17染色5%孔雀綠染液1、滴孔雀綠染液滴加數(shù)滴孔雀綠染液在菌膜上

2、加熱染色用木夾夾住載玻片一端，在微火上加熱至冒蒸汽開(kāi)始計(jì)時(shí)，維持5min沸騰：菌體或芽孢囊破裂；加熱不夠：芽孢難以著色。注意補(bǔ)充染液，以免涂片干涸18脫色待玻片冷卻后，水洗脫色不要直接沖菌膜19復(fù)染0.5%番紅水溶液1、滴番紅水溶液滴加數(shù)滴番紅染液在菌膜上，染色2min2、水洗不要直接沖菌膜20鏡檢或吸水紙吸干1、干燥或電吹風(fēng)吹干室溫自然晾干2、鏡檢顯微鏡操作油鏡使用21制備菌懸液生理鹽水

1、滴生理鹽水

挑取2-3環(huán)菌苔與生理鹽水混勻均勻2、制備菌懸液在EP管中滴2滴生理鹽水22染色5%孔雀綠染液1、滴加孔雀綠染液沸水浴加熱15-20min2、加熱染色在EP管中滴2-3滴孔雀綠染液23涂片固定經(jīng)孔雀綠染色細(xì)菌懸液1、滴菌懸液用接種環(huán)均勻涂布或電吹風(fēng)吹干2、涂片滴半滴菌懸液在載玻片中央