植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用課件

第二章細(xì)胞工程第一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二章細(xì)胞工程【知識(shí)目標(biāo)】①了解制備植物細(xì)胞及微生物細(xì)胞的原生質(zhì)體并進(jìn)行細(xì)胞融合的基本方法。②學(xué)習(xí)進(jìn)行動(dòng)植物細(xì)胞及組織的培養(yǎng)(péiyǎng)方法。③認(rèn)識(shí)單倍體植物的誘發(fā)及人工種子制備的基本要領(lǐng)。探討植物脫除病毒的途徑和檢測(cè)手段。④掌握利用動(dòng)物體細(xì)胞克隆哺乳動(dòng)物的基本做法及其重要意義。⑤領(lǐng)會(huì)干細(xì)胞芯康腦硨凸餉髑熬啊第二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三章細(xì)胞工程【技能目標(biāo)】①學(xué)會(huì)描述植物組織培養(yǎng)、原生質(zhì)體融合、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)及細(xì)胞融合的基本過程。②掌握(zhǎngwò)植物組織培養(yǎng)及快速繁殖的方法。第三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第一節(jié)細(xì)胞工程概述(ɡàishù)一、細(xì)胞工程的基本概念細(xì)胞工程就是在細(xì)胞水平研究、開發(fā)和利用各類細(xì)胞的工程。細(xì)胞工程是一種(yīzhǒnɡ)細(xì)胞水平上的遺傳工程第四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第一節(jié)細(xì)胞工程概述(ɡàishù)二、細(xì)胞工程基礎(chǔ)知識(shí)細(xì)胞(xìbāo)是細(xì)胞(xìbāo)工程操作的主要對(duì)象。生物界有兩大類細(xì)胞(xìbāo)：原核細(xì)胞(xìbāo)與真核細(xì)胞(xìbāo)。原核細(xì)胞(xìbāo)如：細(xì)菌、放線菌等。真核細(xì)胞(xìbāo)如：酵母、動(dòng)植物等。原核細(xì)胞(xìbāo)生長(zhǎng)迅速，無蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA易于人們進(jìn)行遺傳操作，是細(xì)胞(xìbāo)改造的良好材料。第五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第一節(jié)細(xì)胞工程概述(ɡàishù)三、細(xì)胞工程基本技術(shù)（一）無菌操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)行無菌室要求注意周圍環(huán)境的衛(wèi)生(wèishēng)整潔超凈工作臺(tái)是最基本的實(shí)驗(yàn)設(shè)備對(duì)生物材料進(jìn)行徹底的消毒和除菌是實(shí)驗(yàn)成功的前提第六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第一節(jié)細(xì)胞工程概述(ɡàishù)三、細(xì)胞工程基本技術(shù)（二）細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)是指動(dòng)物、植物和微生物細(xì)胞在體外無菌條件(tiáojiàn)下的保存和生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)步驟為：取材和除菌；配制細(xì)胞培養(yǎng)基，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌或除菌；培養(yǎng)室培養(yǎng)第七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第一節(jié)細(xì)胞工程概述(ɡàishù)三、細(xì)胞工程基本技術(shù)（三）

細(xì)胞融合技術(shù)1.制備(zhìbèi)原生質(zhì)體2.誘導(dǎo)細(xì)胞融合3.篩選雜合細(xì)胞第八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用一、植物組織培養(yǎng)（一）預(yù)備(yùbèi)階段1.選擇合適的外植體①大小要適宜。②同一植物不同部位的外植體，其細(xì)胞的分化能力、分化條件及分化類型有相當(dāng)大的差別。③植物胚與幼齡組織器官比會(huì)化組織、器官更容易去分化，產(chǎn)生大量的愈傷組織。④不同物種相同部位的外植體其細(xì)胞分化能力可能大不一樣。第九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用一、植物(zhíwù)組織培養(yǎng)2.外植體的消毒滅菌外植體→自來水多次漂洗→消毒劑處理→無菌水反復(fù)沖洗→無菌濾紙吸干。第十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用一、植物組織培養(yǎng)3.配制適宜(shìyí)的培養(yǎng)基

組織培養(yǎng)基通常都包括三大類組分：①含量豐富的基本成分如蔗糖或葡萄糖高達(dá)每升30克，以及氮、磷、鉀、鎂等；②微量的無機(jī)物，如：鐵、錳、硼酸等；③微量有機(jī)物，如激動(dòng)素、吲哚乙酸、肌醇等。各培養(yǎng)基中，吲哚乙酸和激動(dòng)素的變動(dòng)幅度很大，這主要因培養(yǎng)目的而異。第十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用一、植物組織培養(yǎng)（二）誘導(dǎo)去分化階段器官切段去分化，培養(yǎng)基中應(yīng)添加較高濃度的生長(zhǎng)素類激素誘導(dǎo)外植體去分化可以采用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)室中多層培養(yǎng)外植體表面除菌后，切成小片（段）插入或貼放培養(yǎng)基表面即可通常把它們置于人工(réngōng)照明條件下培養(yǎng)，以期得到綠色愈傷組織。第十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用一、植物組織培養(yǎng)（三）繼代增殖階段愈傷組織長(zhǎng)出后經(jīng)過(jīngguò)4~6周后（四）生根成芽階段胚狀體光照是本階段的必備外因（五）移栽成活階段第十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用二、植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生(cìshēng)代謝物的生產(chǎn)（一）懸浮細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)第十六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用二、植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生(cìshēng)代謝物的生產(chǎn)（二）固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)1.平床培養(yǎng)系統(tǒng)第十七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第十八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用二、植物(zhíwù)細(xì)胞培養(yǎng)和次生代謝物的生產(chǎn)（二）固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)2.立柱培養(yǎng)系統(tǒng)第十九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用二、植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生代謝物的生產(chǎn)（二）固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)2.立柱培養(yǎng)系統(tǒng)①要選用高產(chǎn)細(xì)胞株系。②在營(yíng)養(yǎng)液中加入目的產(chǎn)物的直接或近直接前體物質(zhì)，往往對(duì)增產(chǎn)目的產(chǎn)物有特效。③對(duì)各類細(xì)胞的培養(yǎng)都應(yīng)反復(fù)摸索碳源、氮源和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的配比，找出最佳方案。④適量光照及通氣(tōngqì)在多數(shù)情況下有利于產(chǎn)物的生成。第二十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用二、植物細(xì)胞培養(yǎng)和次生代謝物的生產(chǎn)（二）固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)以下簡(jiǎn)要介紹(jièshào)褐藻酸鈣固定植物細(xì)胞的技術(shù)路線：第二十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用三、植物細(xì)胞原生質(zhì)體制備與融合（一）原生質(zhì)體的制備(zhìbèi)1.取材與除菌2.酶解3.分離4.洗滌5.鑒定第二十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用三、植物細(xì)胞原生質(zhì)體制制備與融合(rónghé)（二）原生質(zhì)體的融合1.化學(xué)法誘導(dǎo)融合聚乙二醇（PEG）結(jié)合高鈣高PH誘導(dǎo)融合法2.物理法誘導(dǎo)融合平行電極法第二十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用三、植物細(xì)胞(xìbāo)原生質(zhì)體制制備與融合（二）原生質(zhì)體的融合融合處理后再生的細(xì)胞株將可能的類型：①完全的雜合植株②核質(zhì)異源的植株③融合細(xì)胞由雙方胞質(zhì)及一方核或再附加少量他方染色體或DNA片段構(gòu)成。④原生質(zhì)體融合后兩個(gè)細(xì)胞核尚未融合時(shí)就過早地被新出現(xiàn)的細(xì)胞壁分開。以后它們各自分裂生長(zhǎng)成嵌合植株。第二十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用三、植物細(xì)胞原生質(zhì)體制制備與融合（三）雜合體(hétǐ)的鑒別與篩選1.雜合細(xì)胞的顯微鏡鑒別2.互補(bǔ)法篩選雜合細(xì)胞3.采用細(xì)胞與分子生物學(xué)的方法鑒別雜合體4.根據(jù)融合處理后再生長(zhǎng)出的植株的形態(tài)特征進(jìn)行鑒別第二十六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用四、單倍體植物誘發(fā)與利用（一）花藥培養(yǎng)1.選取成熟度適中的花蕾或幼穗2.花藥預(yù)處理3.選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)(péiyǎng)基與培養(yǎng)(péiyǎng)條件（二）花粉培養(yǎng)培育單倍體植株第二十七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用四、單倍體植物誘發(fā)與利用（三）未授粉子房或胚珠的培養(yǎng)充滿希望的發(fā)展方向（四）雜交法獲單倍體植株(zhízhū)（五）單倍體培養(yǎng)物的加倍可用0.2%~0.4%秋水仙素處理24~48h第二十八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用五、人工種子的研制（一）人工種子的構(gòu)成(gòuchéng)及特點(diǎn)1.人工種皮2.人工胚乳3.胚狀體第二十九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用五、人工種子的研制突出(tūchū)的優(yōu)點(diǎn)：①可以不受環(huán)境因素制約②有利于保存該種系的優(yōu)良性狀；③成本更低，更適合于機(jī)械化田間播種；④可根據(jù)需要在人工胚乳中添加適量的營(yíng)養(yǎng)物、激素、農(nóng)藥、抗生素、除草劑等第三十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用五、人工種子的研制（二）人工種子的制備(zhìbèi)1.胚狀體的制備及其同步生長(zhǎng)（1）低溫法：（2）抑制劑法：（3）分離法：（4）通氣法：（5）滲透壓法：2.人工胚乳的制備

MS(或SH、White)培養(yǎng)基＋馬鈴薯淀粉水解物（1.5%）；SH培養(yǎng)基（1∕2濃度）＋麥芽糖（1.5%）3.配制包埋劑及包埋褐藻酸鈉第三十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用人工(réngōng)種子包埋示意圖第三十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用五、人工種子的研制（三）人工種子的貯存與萌發(fā)迄今為止尚未攻克的難關(guān)。一般(yībān)將人工種子保存在低溫（4~7℃）和干燥（相對(duì)濕度小于67%）條件下第三十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用六、植物脫病毒技術(shù)（一）植物脫病毒途徑1.物理學(xué)方法2.化學(xué)方法3.生物學(xué)方法基本(jīběn)流程4.綜合脫毒法第三十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第二節(jié)植物(zhíwù)細(xì)胞工程及其應(yīng)用六、植物(zhíwù)脫病毒技術(shù)（二）植物脫毒檢測(cè)1.外形觀察法2.電鏡觀察法3.免疫血清法第三十六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞工程從細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的層次，根據(jù)人類的需要，一方面深人探索、改造生物遺傳種性，另一方面應(yīng)用(yìngyòng)工程技術(shù)的手段，大量培養(yǎng)細(xì)胞、組織或動(dòng)物本身，以期收獲細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物以及可供利用的動(dòng)物第三十七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)（一）細(xì)胞培養(yǎng)法培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞一般步驟：①無菌取出目的細(xì)胞所在組織，以培養(yǎng)液漂洗干凈。②以鋒利無菌刀具(dāojù)割舍多余部分，切成小組織塊。③將小組織塊置解離液離散細(xì)胞（解離液含蛋白酶類，無鈣、鎂離子）。④低速離心洗滌細(xì)胞后，將目的細(xì)胞吸移至培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。第三十八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)1.微導(dǎo)管(dǎoguǎn)培養(yǎng)法第三十九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)2.微載體(zàitǐ)培養(yǎng)法（3）微膠囊培養(yǎng)法第四十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)（二）組織培養(yǎng)法①無菌操作(cāozuò)取出目的組織，以培養(yǎng)液漂洗。②以鋒利無菌刀具割舍多余部分，將該組織分切成1~2mm2小塊，移人培養(yǎng)瓶。③加人合適的培養(yǎng)基浸潤(rùn)組織,小心地將培養(yǎng)瓶平翻180°，擱置15~30min，以利組織塊的貼壁生長(zhǎng)。④翻回培養(yǎng)瓶，平臥靜置于37℃培養(yǎng)。第四十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)（三）培養(yǎng)物的傳代（四）無血清培養(yǎng)三大部分：①基礎(chǔ)(jīchǔ)培養(yǎng)基②基質(zhì)因子③生長(zhǎng)因子、激素和維生素第四十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用二、動(dòng)物細(xì)胞組織培養(yǎng)（五）培養(yǎng)物的長(zhǎng)期保存經(jīng)典傳代法冷凍保存法液氮保存法為：①將成熟培養(yǎng)物（細(xì)胞）與5％~10％的甘油或二甲(èrjiǎ)亞砜混勻，封裝于若干個(gè)安甌瓶中；②緩慢降溫（每分鐘1~3℃）至一30℃；③繼續(xù)降溫（每分鐘15~30℃／min）至一150℃；④轉(zhuǎn)移至液氮凍存,可無限期保存。(六)細(xì)胞組織培養(yǎng)污染的防治第四十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用三、動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合（一）病毒誘導(dǎo)融合（二）化學(xué)誘導(dǎo)融合PEG誘導(dǎo)融合（三）電激誘導(dǎo)融合第四十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第四十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用四、單克隆抗體(kàngtǐ)生產(chǎn)技術(shù)第四十六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用五、細(xì)胞核移植與動(dòng)物克隆（一）核移植1.異種核質(zhì)關(guān)系研究(yánjiū)2.脊椎動(dòng)物克隆——細(xì)胞核遺傳全能性研究第四十七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用五、細(xì)胞核移植與動(dòng)物克隆（二）體細(xì)胞克隆“多莉”綿羊是如何(rúhé)克隆誕生的呢？第四十八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用五、細(xì)胞核移植與動(dòng)物克隆（二）體細(xì)胞克隆意義①遺傳素質(zhì)完全一致的克隆動(dòng)物將更有利于開展對(duì)動(dòng)物（人）生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老和健康等機(jī)理的研究。②有利于大量培養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良的家畜。③經(jīng)轉(zhuǎn)基因的克隆哺乳動(dòng)物，將能為人類提供源源不斷(yuányuánbùduàn)的廉價(jià)的藥品、保健品以及較易被人體接受的移植器官。④科學(xué)家將很快地從目前的同種克隆技術(shù)推進(jìn)到異種克隆第四十九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用六、染色體轉(zhuǎn)移（一）微細(xì)胞介導(dǎo)法圖供體細(xì)胞→秋水仙素處理→低溫處理→細(xì)胞破碎(pòsuì)→高速離心→收集染色體第五十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用六、染色體轉(zhuǎn)移①直接用微注射針向胞內(nèi)注射染色體懸液。②將染色體與細(xì)胞(xìbāo)共培養(yǎng)，染色體被細(xì)胞(xìbāo)以胞吞的方式攝入。本法轉(zhuǎn)移成功率低。③將染色體與高濃度CaCl2混勻后滴加到受體細(xì)胞上，可提高成功率。④用卵磷脂與膽固醇混合液制成脂質(zhì)體，將染色體包裹其中，再經(jīng)聚乙二醇與受體細(xì)胞融合，達(dá)到轉(zhuǎn)移染色體的目的。第五十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用七、干細(xì)胞研究干細(xì)胞（stemcell）是動(dòng)物（包括人）胚胎及某些器官中具有自我復(fù)制和多向分化潛能的原始細(xì)胞，是重建、修復(fù)病損或衰老組織、器官功能的理想(lǐxiǎng)種子細(xì)胞。第五十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用七、干細(xì)胞研究三種類型：①全能性干細(xì)胞，即胚胎干細(xì)胞，是最原始的干細(xì)胞②多能性干細(xì)胞，發(fā)育潛能受到一定的限制。如：骨髓造血干細(xì)胞可分化成為至少12種血細(xì)胞，但一般不能分化出造血系統(tǒng)以外的其他(qítā)細(xì)胞。③專一性干細(xì)胞，這類干細(xì)胞只能分化成一種類型或功能密切相關(guān)的兩種類型的細(xì)胞，如上皮組織基底層的干細(xì)胞和肌肉中的成肌細(xì)胞等。第五十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用七、干細(xì)胞研究干細(xì)胞(xìbāo)具有以下顯著的特點(diǎn)：具有分裂成其他細(xì)胞(xìbāo)的可能性；具有無限增殖分裂的潛能；可連續(xù)分裂幾代，也可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)處于靜止?fàn)顟B(tài)；以對(duì)稱或不對(duì)稱兩種方式進(jìn)行生長(zhǎng)。第五十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用七、干細(xì)胞研究三個(gè)階段：①獲得干細(xì)胞系②建立干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型③將上述(shàngshù)干細(xì)胞或干細(xì)胞培育體系植入動(dòng)物或人的相應(yīng)器官或組織，考察其效果。第五十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程(gōngchéng)及其應(yīng)用七、干細(xì)胞研究?jī)?yōu)點(diǎn)：①低毒性（或無毒性），一次治療有效；②不需要完全了解疾病發(fā)病的確切機(jī)制；③用于自身干細(xì)胞移植，可避免(bìmiǎn)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。第五十六頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第五十七頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第五十八頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第四節(jié)微生物細(xì)胞工程一、原核細(xì)胞的原生質(zhì)體融合G+：①分別(fēnbié)培養(yǎng)帶遺傳標(biāo)志的雙親本菌株至指數(shù)生長(zhǎng)中期②分別(fēnbié)離心收集菌體，以高滲培養(yǎng)基制成菌懸液③混合雙親本，加入適量溶菌酶，作用20~30min；④高速離心后去上清液得原生質(zhì)體，用少量高滲培養(yǎng)基制成菌懸液；⑤加入10倍體積的聚乙二醇（40%）促使原生質(zhì)體凝集、融合；⑥數(shù)分鐘后，加入適量高滲培養(yǎng)基稀釋；⑦涂接于高滲選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。第五十九頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第四節(jié)微生物細(xì)胞工程一、原核細(xì)胞的原生質(zhì)體融合對(duì)G+而言，在加入溶菌酶數(shù)分鐘后，應(yīng)添加少量0.1mol／L的EDTA·Na2共同作用15~20min，則可使90%以上的革蘭氏陰性細(xì)菌(xìjūn)轉(zhuǎn)變?yōu)榭晒┘?xì)胞融合用的球狀體。第六十頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用第四節(jié)微生物細(xì)胞工程二、真菌的原生質(zhì)體融合真菌原生質(zhì)體融合的要點(diǎn)以聚乙二醇為融合劑，在特異的選擇培養(yǎng)基上篩選融合子。只有(zhǐyǒu)那些形成真正單倍重組體的融合子才能穩(wěn)定傳代。具有雜合雙倍體和異核體的融合子遺傳特性不穩(wěn)定，需經(jīng)多代考證和鑒定才能最后斷定是否為真正的雜合細(xì)胞。不少大型食用菌，如蘑菇、香菇、木耳、鳳尾菇和平菇等經(jīng)細(xì)胞融合獲得一些新的性狀，取得了相當(dāng)可觀的經(jīng)濟(jì)效益。福建省輕工業(yè)研究所通過細(xì)胞融合獲得了耐高溫等性狀的蘑菇新品種。第六十一頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用植物(zhíwù)組織培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怆x體無菌培養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)材料消毒(xiāodú)、接種的要求，初步掌握取材、培養(yǎng)材料滅菌和接種等操作技術(shù)。第六十二頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用植物(zhíwù)組織培養(yǎng)二、實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是植物細(xì)胞具有全能性。即使是已經(jīng)高度成熟和分化的細(xì)胞，也保持著恢復(fù)到分生狀態(tài)的能力。植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件是脫離母體并具有合適的生長(zhǎng)條件。植物離體培養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)是由培養(yǎng)基來提供的。在植物細(xì)胞脫分化和再分化的過程(guòchéng)中，植物激素的調(diào)控至關(guān)重要。生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的濃度和比例是控制植物離體培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)模式和器官發(fā)生的最重要的手段。第六十三頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用植物(zhíwù)組織培養(yǎng)三、實(shí)驗(yàn)(shíyàn)儀器超凈工作臺(tái)第六十四頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用植物(zhíwù)組織培養(yǎng)四、試劑與用品MS培養(yǎng)基、0.1%升汞、酒精、無菌水、組培瓶、培養(yǎng)皿、酒精燈、棉線繩、封口膜、鑷子(nièzi)、剪刀、解剖刀、脫脂棉、標(biāo)簽紙第六十五頁，共七十三頁。植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用植物(zhíwù)組織培養(yǎng)五、實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備2.接種前消毒3.取植物莖尖4.處理內(nèi)層莖尖5.將滅菌處理后的莖尖用鑷子小心地夾到墊有無菌濾紙的接種盤里，吸干水分，將升汞接觸的切口(qiēkǒu)切去一小段。6．準(zhǔn)備組培瓶