07第七章芳香胺類藥物的分析2課件

第二節(jié)

苯乙胺類藥物Phenethylamine第二節(jié)

苯乙胺類藥物Phenethylamine結(jié)構(gòu)(Structure)擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)構(gòu)中具有苯乙胺基本結(jié)構(gòu)腎上腺素(adrenaline)鹽酸克倫特羅(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)鹽酸麻黃堿(ephedrinehydrochloride)

R1

R2

R3HX結(jié)構(gòu)(Structure)擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)2化學(xué)性質(zhì)(feature)弱堿性：烴胺基側(cè)鏈，仲胺氮－弱堿性，游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；其鹽可溶于水酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結(jié)構(gòu)，與金屬離子絡(luò)合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。光學(xué)活性：手性碳原子，具有旋光性。苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基；紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析。化學(xué)性質(zhì)(feature)弱堿性：3鑒別試驗(yàn)(identification)與三氯化鐵反應(yīng)、與甲醛－硫酸反應(yīng)藥物三氯化鐵甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍(lán)色，紅色淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰紅，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍(lán)紫色，紅色棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色鑒別試驗(yàn)(identification)與三氯化鐵反應(yīng)、與4鑒別試驗(yàn)(identification)氧化反應(yīng)（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）腎上腺素碘或過氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色腎上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的紅棕色或紫色淡紅色溶液鑒別試驗(yàn)(identification)氧化反應(yīng)（酚羥基，5鑒別試驗(yàn)(identification)紫外特征吸收藥物溶劑濃度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸間羥胺水0.10272鹽酸異丙腎上腺素水0.052800.50鹽酸多巴胺0.5%硫酸0.03280鹽酸芬氟拉明0.1mol/L鹽酸0.25263,270鹽酸苯乙雙胍水0.012340.60鹽酸克倫特羅0.1mol/L鹽酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274鹽酸偽麻黃堿水0.50251,257,263紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進(jìn)行鑒別。鑒別試驗(yàn)(identification)紫外特征吸收藥物溶6鑒別試驗(yàn)(identification)與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)(Rimini試驗(yàn))

重酒石酸間羥胺水溶解亞硝基鐵氰化鈉試液丙酮數(shù)滴，碳酸氫鈉少量△紅紫色脂肪伯氨基的專屬反應(yīng)丙酮不含有甲醛重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基鑒別試驗(yàn)(identification)與亞硝基鐵氰化鈉反7鑒別試驗(yàn)(identification)雙縮脲反應(yīng) 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可顯雙縮脲特征反應(yīng)。

例：Chp2000，鑒別鹽酸麻黃堿 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉液1ml，即顯藍(lán)紫色，加乙醚1ml振搖、放置，乙醚層顯紫紅色，水層變?yōu)樗{(lán)色。鑒別試驗(yàn)(identification)雙縮脲反應(yīng)8特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)酮體檢查生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質(zhì)。藥物檢查的雜質(zhì)溶劑樣品濃度(mg/ml)測定波長(nm)

A腎上腺素腎上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得過0.05鹽酸去氧腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲腎上腺素去甲腎上腺酮水2.0310不得大于0.05鹽酸異丙腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.15鹽酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific9特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)TLC法檢查有關(guān)物質(zhì)例：鹽酸去氧腎上腺素、硫酸沙丁胺醇檢查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取上述溶液適量，加甲醇稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇－氯仿－濃氨溶液(80:5:15)為展開劑，展開后，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific10特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)雙胍的檢查（Chp2000版）

有關(guān)雙胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法（附錄ⅤA）試驗(yàn)，精密吸取上述溶液0.2ml，分別點(diǎn)于兩張色譜濾紙條(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白點(diǎn)于另一色譜濾紙條，樣點(diǎn)直徑均為0.5～1cm；照下行法，將上述色譜濾紙條同置展開室內(nèi)，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)為展開劑，展開至前沿距下端約7cm處，取出，晾干，用顯色劑（取10％鐵氰化鉀溶液1ml，加10％亞硝基鐵氰化鈉溶液與10％氫氧化鈉溶液各1ml，搖勻，放置15min，加水10ml與丙酮12ml，混勻）噴其中一張點(diǎn)樣紙條（有關(guān)雙胍顯紅色帶，Rf值約為0.1），參照此色譜帶，在另一張點(diǎn)樣及空白紙條上，剪取其相應(yīng)部分并向外延伸1cm，并分剪成碎條，精密吸取甲醇各20ml分別進(jìn)行萃取后，照分光光度法（附錄ⅣA），在232nm的波長處測定吸收度，不得過0.48。

特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific11含量測定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色譜法含量測定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法比色法12含量測定

(Assay)1、非水溶液滴定法－弱堿性

冰醋酸為溶劑 醋酸汞消除氫鹵酸的干擾 結(jié)晶紫為指示劑（鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇，也可電位法指示終點(diǎn)） 若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點(diǎn)硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結(jié)晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙?；栽诒姿崛芙鈽悠泛髴?yīng)放冷后再加醋酐。含量測定(Assay)1、非水溶液滴定法－弱堿性例：重酒石13含量測定

(Assay)2、溴量法

基本原理：測定方法：取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)50ml，再加鹽酸5ml,立即密塞，放置15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于3.395mg的C9H13NO2·HCl。含量測定(Assay)2、溴量法測定方法：取本品約0.1g14含量測定

(Assay)3、比色法

測定原理：注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應(yīng)加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。含量測定(Assay)3、比色法注意：由于偶合劑（N-(115比色法含量測定例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005） 【含量測定】對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸克侖特羅對(duì)照品適量，加鹽酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫?zé)岬穆确?0ml使溶解，用鹽酸溶液(9→100)振搖提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得。

測定法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加鹽酸溶液(9→100)5ml與0.1％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置3分鐘，各加0.5％氨基磺酸銨溶液1ml，混勻，時(shí)時(shí)振搖10分鐘，再各加0.1％鹽酸萘乙二胺溶液1ml,混勻，放置10分鐘，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄ⅣB），在500nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。比色法含量測定例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005）16含量測定

(Assay)4、提取酸堿滴定法

原理：溶解性－鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，游離堿不溶于水，溶于有機(jī)溶劑。

方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑提取，將提取液蒸干，殘?jiān)屑又行砸掖既芙?，用?biāo)準(zhǔn)酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量過量的標(biāo)準(zhǔn)酸滴定液，蒸去有機(jī)溶劑后，再用標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液回滴定）。

例：硫酸苯丙胺→加水溶解→加氫氧化鈉試液8ml→加氯化鈉使飽和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振搖→低溫蒸去乙醚→放冷至室溫→加甲基紅指示液2滴→用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。含量測定(Assay)4、提取酸堿滴定法17含量測定(Assay)5、熒光分光光度法

基本原理：腎上腺素含有的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，被弱氧化劑氧化，生成腎上腺素紅，發(fā)生轉(zhuǎn)位為N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚（THI）。(Tri-Hydroxyl-Indole-)本法還可用于測定微量兒茶酚胺類藥物。含量測定(Assay)5、熒光分光光度法本法還可用于測定微18含量測定(Assay)6、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性－可用于制劑常規(guī)分析，臨床藥物監(jiān)測和體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究。例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析色譜條件：色譜柱：ODS流動(dòng)相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液－甲醇(65:35)，用磷酸調(diào)pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min檢測波長：280nm測定方法：精密量取本品適量（約相當(dāng)于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀釋至刻度，搖勻，取2μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎腺素對(duì)照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。含量測定(Assay)6、高效液相色譜法19含量測定(Assay)6、高效液相色譜法

例1：HPLC-EChD法測定血漿中兒茶酚胺類藥物 色譜條件：色譜柱：ODS型鍵合相 流動(dòng)相：離子對(duì)試劑 檢測器：電化學(xué)檢測器 供試品溶液的制備：氧化鋁吸附－洗脫含量測定(Assay)6、高效液相色譜法20含量測定(Assay)7、衍生化氣相色譜法

例：鹽酸芬氟拉明(fenfluraminehydrochloride)由于結(jié)構(gòu)中的仲胺基極性極強(qiáng)，使得氣相色譜法測定值波動(dòng)較大，因此將樣品溶解后經(jīng)堿化乙酸乙酯提取，加入內(nèi)標(biāo)，提取液用三氟乙酸酐進(jìn)行酰化衍生化，將衍生化產(chǎn)物在5%SE-30的色譜柱上分析，用FID檢測器檢測。含量測定(Assay)7、衍生化氣相色譜法由于結(jié)構(gòu)中的仲胺21第三節(jié)芳氧丙醇胺類藥物典型藥物：氧烯洛爾(Oxprenolol,別名烯丙氧心胺，心得平，Tracosal,Trasacor,Trasieor)－β腎上腺素受體阻滯藥

鹽酸卡替洛爾(Carteololhydrochloride)－β受體阻滯藥

第三節(jié)芳氧丙醇胺類藥物典型藥物：22鑒別反應(yīng)(identification)化學(xué)鑒別氧烯洛爾：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高錳酸鉀溶液1ml，振搖數(shù)分鐘，高錳酸鉀顏色消褪，并產(chǎn)生棕色沉淀。鹽酸卡替洛爾：取本品約0.1g，加水5ml使溶解，加硫氰酸鉻銨試液5滴，即生成淡紅色沉淀。紫外吸收峰特征氧烯洛爾水溶液(40μg/ml):在275nm的波長處有最大吸收。鹽酸卡替洛爾(8μg/ml):在215nm與252nm的波長處有最大吸收。鑒別反應(yīng)(identification)化學(xué)鑒別紫外吸23鹽酸卡替洛爾的有關(guān)物質(zhì)檢查TLC法，自身對(duì)照法 檢查方法：取本品0.20g，加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。照薄層色譜法(附錄ⅤB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液備10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨溶液(50:20:1)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。鹽酸卡替洛爾的有關(guān)物質(zhì)檢查TLC法，自身對(duì)照法24含量測定

鹽酸卡替洛爾原料

取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸30ml，在水浴上加熱溶解，放冷，加醋酐70ml，照電位滴定法(附錄ⅦA)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于32.88mg的C16H24N2O3·HCl。

含量測定鹽酸卡替洛爾原料25含量測定鹽酸卡替洛爾滴眼液精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每1ml中約含鹽酸卡替洛爾16μg的溶液，照分光光度法(附錄ⅣA)，在252nm的波長處測定吸收度；另取鹽酸卡替洛爾對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含鹽酸卡替洛爾16μg的溶液，同法測定，計(jì)算，即得。含量測定鹽酸卡替洛爾滴眼液26含量測定人血漿中氧烯洛爾及其異構(gòu)體的分析

色譜條件：預(yù)柱：ODS填料，分析柱：手性O(shè)D-R柱（手性選擇劑為3,5-二甲苯氨基甲酸酯纖維素） 流動(dòng)相：NaClO4(0.45mol/L)-乙腈(70:30)的磷酸鹽緩沖溶液(pH6.0)

檢測波長：273nm

血漿處理方法：醋酸纖維膜透析→用預(yù)柱純化、富集→手性柱分離分析。含量測定人血漿中氧烯洛爾及其異構(gòu)體的分析27ThankYou!ThankYou!28第二節(jié)

苯乙胺類藥物Phenethylamine第二節(jié)

苯乙胺類藥物Phenethylamine結(jié)構(gòu)(Structure)擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)構(gòu)中具有苯乙胺基本結(jié)構(gòu)腎上腺素(adrenaline)鹽酸克倫特羅(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)鹽酸麻黃堿(ephedrinehydrochloride)

R1

R2

R3HX結(jié)構(gòu)(Structure)擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)30化學(xué)性質(zhì)(feature)弱堿性：烴胺基側(cè)鏈，仲胺氮－弱堿性，游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；其鹽可溶于水酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結(jié)構(gòu)，與金屬離子絡(luò)合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。光學(xué)活性：手性碳原子，具有旋光性。苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基；紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析?；瘜W(xué)性質(zhì)(feature)弱堿性：31鑒別試驗(yàn)(identification)與三氯化鐵反應(yīng)、與甲醛－硫酸反應(yīng)藥物三氯化鐵甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍(lán)色，紅色淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰紅，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍(lán)紫色，紅色棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色鑒別試驗(yàn)(identification)與三氯化鐵反應(yīng)、與32鑒別試驗(yàn)(identification)氧化反應(yīng)（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）腎上腺素碘或過氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色腎上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的紅棕色或紫色淡紅色溶液鑒別試驗(yàn)(identification)氧化反應(yīng)（酚羥基，33鑒別試驗(yàn)(identification)紫外特征吸收藥物溶劑濃度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸間羥胺水0.10272鹽酸異丙腎上腺素水0.052800.50鹽酸多巴胺0.5%硫酸0.03280鹽酸芬氟拉明0.1mol/L鹽酸0.25263,270鹽酸苯乙雙胍水0.012340.60鹽酸克倫特羅0.1mol/L鹽酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274鹽酸偽麻黃堿水0.50251,257,263紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進(jìn)行鑒別。鑒別試驗(yàn)(identification)紫外特征吸收藥物溶34鑒別試驗(yàn)(identification)與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)(Rimini試驗(yàn))

重酒石酸間羥胺水溶解亞硝基鐵氰化鈉試液丙酮數(shù)滴，碳酸氫鈉少量△紅紫色脂肪伯氨基的專屬反應(yīng)丙酮不含有甲醛重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基鑒別試驗(yàn)(identification)與亞硝基鐵氰化鈉反35鑒別試驗(yàn)(identification)雙縮脲反應(yīng) 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可顯雙縮脲特征反應(yīng)。

例：Chp2000，鑒別鹽酸麻黃堿 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉液1ml，即顯藍(lán)紫色，加乙醚1ml振搖、放置，乙醚層顯紫紅色，水層變?yōu)樗{(lán)色。鑒別試驗(yàn)(identification)雙縮脲反應(yīng)36特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)酮體檢查生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質(zhì)。藥物檢查的雜質(zhì)溶劑樣品濃度(mg/ml)測定波長(nm)

A腎上腺素腎上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得過0.05鹽酸去氧腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲腎上腺素去甲腎上腺酮水2.0310不得大于0.05鹽酸異丙腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.15鹽酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific37特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)TLC法檢查有關(guān)物質(zhì)例：鹽酸去氧腎上腺素、硫酸沙丁胺醇檢查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取上述溶液適量，加甲醇稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇－氯仿－濃氨溶液(80:5:15)為展開劑，展開后，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific38特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecificimpurities)鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)雙胍的檢查（Chp2000版）

有關(guān)雙胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法（附錄ⅤA）試驗(yàn)，精密吸取上述溶液0.2ml，分別點(diǎn)于兩張色譜濾紙條(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白點(diǎn)于另一色譜濾紙條，樣點(diǎn)直徑均為0.5～1cm；照下行法，將上述色譜濾紙條同置展開室內(nèi)，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)為展開劑，展開至前沿距下端約7cm處，取出，晾干，用顯色劑（取10％鐵氰化鉀溶液1ml，加10％亞硝基鐵氰化鈉溶液與10％氫氧化鈉溶液各1ml，搖勻，放置15min，加水10ml與丙酮12ml，混勻）噴其中一張點(diǎn)樣紙條（有關(guān)雙胍顯紅色帶，Rf值約為0.1），參照此色譜帶，在另一張點(diǎn)樣及空白紙條上，剪取其相應(yīng)部分并向外延伸1cm，并分剪成碎條，精密吸取甲醇各20ml分別進(jìn)行萃取后，照分光光度法（附錄ⅣA），在232nm的波長處測定吸收度，不得過0.48。

特殊雜質(zhì)檢查(Detectionofspecific39含量測定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色譜法含量測定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法比色法40含量測定

(Assay)1、非水溶液滴定法－弱堿性

冰醋酸為溶劑 醋酸汞消除氫鹵酸的干擾 結(jié)晶紫為指示劑（鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇，也可電位法指示終點(diǎn)） 若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點(diǎn)硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結(jié)晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解樣品后應(yīng)放冷后再加醋酐。含量測定(Assay)1、非水溶液滴定法－弱堿性例：重酒石41含量測定

(Assay)2、溴量法

基本原理：測定方法：取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)50ml，再加鹽酸5ml,立即密塞，放置15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于3.395mg的C9H13NO2·HCl。含量測定(Assay)2、溴量法測定方法：取本品約0.1g42含量測定

(Assay)3、比色法

測定原理：注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應(yīng)加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。含量測定(Assay)3、比色法注意：由于偶合劑（N-(143比色法含量測定例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005） 【含量測定】對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸克侖特羅對(duì)照品適量，加鹽酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供試品溶液的制備取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫?zé)岬穆确?0ml使溶解，用鹽酸溶液(9→100)振搖提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得。

測定法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加鹽酸溶液(9→100)5ml與0.1％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置3分鐘，各加0.5％氨基磺酸銨溶液1ml，混勻，時(shí)時(shí)振搖10分鐘，再各加0.1％鹽酸萘乙二胺溶液1ml,混勻，放置10分鐘，用鹽酸溶液(9→100)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄ⅣB），在500nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。比色法含量測定例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005）44含量測定

(Assay)4、提取酸堿滴定法

原理：溶解性－鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，游離堿不溶于水，溶于有機(jī)溶劑。

方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑提取，將提取液蒸干，殘?jiān)屑又行砸掖既芙?，用?biāo)準(zhǔn)酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量過量的標(biāo)準(zhǔn)酸滴定液，蒸去有機(jī)溶劑后，再用標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液回滴定）。

例：硫酸苯丙胺→加水溶解→加氫氧化鈉試液8ml→加氯化鈉使飽和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振搖→低溫蒸去乙醚→放冷至室溫→加甲基紅指示液2滴→用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。含量測定(Assay)4、提取酸堿滴定法45含量測定(Assay)5、熒光分光光度法

基本原理：腎上腺素含有的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，被弱氧化劑氧化，生成腎上腺素紅，發(fā)生轉(zhuǎn)位為N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚（THI）。(Tri-Hydroxyl-Indole-)本法還可用于測定微量兒茶酚胺類藥物。含量測定(Assay)5、熒光分光光度法本法還可用于測定微46含量測定(Assay)6、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性－可用于制劑常規(guī)分析，臨床藥物監(jiān)測和體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究。例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析色譜條件：色譜柱：ODS流動(dòng)相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液－甲醇(65:35)，用磷酸調(diào)pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min檢測波長：280nm測定方法：精密量取本品適量（約相當(dāng)于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀釋至刻度，搖勻，取2μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎腺素對(duì)照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。含量測定(Assay)6、高效液相色譜法47含量測定(Assay)6、高效液相色譜法

例1：HPLC-EChD法測定血漿中兒茶酚胺類藥物 色譜條件：色譜柱：ODS型鍵合相 流動(dòng)相：離子對(duì)試劑 檢測器：電化學(xué)檢測器 供試品溶液的制備：氧化鋁吸附－洗脫含量測定(Assay)6、高效液相色譜法48含量測定(Assay)7、衍生化氣相色譜法

例：鹽酸芬氟拉明(fenfluraminehydrochloride)由于結(jié)構(gòu)中的仲胺基極性極強(qiáng)，使得氣相色譜法測定值波動(dòng)較大，因此將樣品溶解后經(jīng)堿化乙酸乙酯提取，加入內(nèi)標(biāo)，提取液用三氟乙酸酐進(jìn)行?；苌?，將衍生化產(chǎn)物在5%SE-30的色譜柱上分析，用FID檢測器檢測。含量測定