釀酒分析與檢測(cè)課件

《釀酒分析與檢測(cè)》

第五章色譜分析指導(dǎo)教師：范文來(lái)江南大學(xué)生物工程學(xué)院《釀酒分析與檢測(cè)》

第五章色譜分析指導(dǎo)教師：范文來(lái)第五章釀酒分析與檢測(cè)

第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)三、色譜分離理論依據(jù)

第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡(jiǎn)介 二、甲醇測(cè)定（蒸餾酒、葡萄酒）三、乙醇測(cè)定（啤酒） 四、β-苯乙醇的測(cè)定（黃酒、白酒） 五、白酒主要風(fēng)味物質(zhì)測(cè)定

第五章釀酒分析與檢測(cè)

第一節(jié)色譜分析基本原理

第五章釀酒分析與檢測(cè)第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介 二、白酒中乳酸測(cè)定 三、葡萄酒中檸檬酸測(cè)定 四、葡萄酒中白藜蘆醇的測(cè)定 五、葡萄酒中糖分和有機(jī)酸測(cè)定第四節(jié)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析

一、氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀簡(jiǎn)介 二、GC–MS法測(cè)定氨基甲酸乙酯 三、GC–MS法測(cè)定白酒中塑化劑 四、GC–MS法定性分析白酒風(fēng)味物質(zhì)第五章釀酒分析與檢測(cè)第三節(jié)液相色譜分析 第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理色譜法（chromatography）最初是由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（俄文名Михаи?лСемёновичЦветь，英文名MikhailSemyonovichTsvet）首先提出并命名的。1906年茨維特用柱色譜實(shí)驗(yàn)裝置實(shí)現(xiàn)了多種物質(zhì)的分離并確立了色譜柱。圖5-1色譜柱分離原理示意圖第一節(jié)色譜分析基本原理

一、色譜法分離基本原理色譜法（ch

色譜法是基于混合組分通過(guò)互不相溶的兩相而達(dá)到分離的，即樣品溶解在流動(dòng)相（mobilephase）中，從裝填在柱子（column）中或涂漬在載體表面的固定相（stationaryphase）上通過(guò)，依據(jù)組分與固定相之間的相互作用力的不同，經(jīng)過(guò)充分的運(yùn)行時(shí)間，即被分離（如圖5-1所示）。

二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)樣品經(jīng)色譜分離檢測(cè)后（通常是電信號(hào)），以組分的濃度（或電信號(hào)）作縱坐標(biāo)，流出時(shí)間作橫坐標(biāo)得到的曲線稱為流出曲線，也稱色譜圖，如圖5-2所示。流出曲線突起的部分，稱為色譜峰（peak）。當(dāng)色譜柱后沒(méi)有組分進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)，在實(shí)驗(yàn)操作條件下，反映檢測(cè)器系統(tǒng)噪聲隨時(shí)間變化的線稱為基線（baseline）。穩(wěn)定的基線是一條直線（或當(dāng)有載氣通過(guò)檢測(cè)器時(shí)產(chǎn)生的噪聲信號(hào)是直線）。由各種因素所引起的基線起伏稱為基線噪聲，而基線隨時(shí)間定向的緩慢變化稱為基線漂移。圖5-2色譜圖二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)樣品經(jīng)色譜分離檢測(cè)后（通常是電信號(hào)），

二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)

死時(shí)間（hold-uptime，tM）：載氣流經(jīng)色譜柱的時(shí)間。死體積（hold-upvolume，VM）：在死時(shí)間內(nèi)流經(jīng)色譜柱載氣的體積。保留時(shí)間（retentiontime，tR）：tR=tM+tR′，組分從進(jìn)樣開始到出現(xiàn)最大濃度時(shí)的時(shí)間叫保留時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間（adjustedretention

time，tR′）：保留時(shí)間減去死時(shí)間等于調(diào)整保留時(shí)間，表示組分在固定相上滯留的時(shí)間，不同組分tM均相同，但tR′不同。

二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)

死時(shí)間（hold-uptime二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)保留體積（retentionvolume，VR）：在保留時(shí)間內(nèi)流經(jīng)色譜柱載氣的體積稱保留體積。相對(duì)保留值（r）：r2,1=t′R(2)/t′R(1)=V′R(2)/V′R(1)≥1，相對(duì)保留值也稱色譜柱的選擇性，r2,1越大，分離的越好，色譜柱選擇性越好。峰高（h）：峰的頂點(diǎn)到基線之間的距離稱之為峰高。半峰高（h?）：峰高h(yuǎn)的1/2處。峰底寬Y：由色譜峰的兩邊拐點(diǎn)做切線，與基線交點(diǎn)的距離。半峰高寬度Y?：色譜峰高一半處的峰寬。也稱為色譜峰半高寬度。二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)保留體積（retentionvolu二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)峰高與峰面積（A）是定量的指標(biāo)或參數(shù)；保留值是定性的指標(biāo)或參數(shù)；峰寬或半峰寬是衡量柱效的指標(biāo)或參數(shù)，如式5-1所示。峰面積A=h×Y?×1.065式51理論塔板數(shù)和有效塔板數(shù)：理論塔板數(shù)（N）和有效塔板數(shù)的區(qū)別是用保留值和調(diào)整保留值的關(guān)系，由于死體積中的保留時(shí)間與分配平衡無(wú)關(guān)，因此有效塔板數(shù)描述得更加準(zhǔn)確一些。理論塔板數(shù)或者有效塔板數(shù)是衡量色譜柱分離能力高低的重要指標(biāo)，買來(lái)一個(gè)色譜柱，一定先看它給出的柱效指標(biāo)，就是指N的大小，只有N比較大，對(duì)難分離的物質(zhì)才能夠給出滿意的結(jié)果。二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)峰高與峰面積（A）是定量的指標(biāo)或參數(shù)；二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)分離度R：分離度等于相鄰組分色譜峰保留值之差與色譜峰平均峰底之比。分離度R等于1時(shí)，兩個(gè)色譜峰得到基本分離；R大于等于1.5時(shí)，兩峰得到完全分離。在定量分析中，要對(duì)色譜峰進(jìn)行積分時(shí)，最少要達(dá)到R為1，如果達(dá)到R≥1.5，可以保證積分中基本沒(méi)有誤差。二、色譜流出曲線及術(shù)語(yǔ)分離度R：分離度等于相鄰組分色譜峰保留三、色譜分離理論依據(jù)色譜具有多種類型，根據(jù)色譜分離原理，可分為吸附色譜（adsorptionchromatography）、分配色譜（partitionchromatography）、離子交換色譜（ion-exchangechromatography）、凝膠色譜（gelchromatography）與親和色譜（affinitychromatography）等。吸附色譜是利用吸附劑對(duì)被分離物質(zhì)的吸附能力不同，用溶劑或氣體洗脫，以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。三、色譜分離理論依據(jù)色譜具有多種類型，根據(jù)色譜分離原理，可分三、色譜分離理論依據(jù)分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離。其中一個(gè)相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動(dòng)相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等。離子交換色譜是利用被分離物質(zhì)在離子交換樹脂上的離子交換勢(shì)不同而使組分分離。常用的有不同強(qiáng)度的陽(yáng)、陰離子交換樹脂，流動(dòng)相一般為水或含有有機(jī)溶劑的緩沖液。三、色譜分離理論依據(jù)分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分三、色譜分離理論依據(jù)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，又稱體積排阻色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同，以使組分分離。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據(jù)載體和試樣的性質(zhì)，選用水或有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。按照兩相物理狀態(tài)分類，色譜可分為：（1）流動(dòng)相為氣體、固定相為固體的，稱為氣固色譜（gas-solidchromatography）；（2）流動(dòng)相為氣體，固定相為液體的，稱為氣液色譜（gas-liquidchromatography）；三、色譜分離理論依據(jù)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，又稱體積排阻色譜三、色譜分離理論依據(jù)

（3）流動(dòng)相為液體、固定相為固體的，稱為液固色譜（liquid-solidchromatography）；（4）流動(dòng)相為液體、固定相為液體的，稱為液液色譜或液相色譜（liquid-liquidchromatography）；（5）流動(dòng)相為超臨界流體的，稱為超臨界流體色譜（supercriticalfluidchromatography）。三、色譜分離理論依據(jù)（3）流動(dòng)相為液體、固定相為固體三、色譜分離理論依據(jù)以氣相色譜（gaschromatography，GC）為例來(lái)說(shuō)明色譜分離的原理。（一）氣相色譜分離原理三、色譜分離理論依據(jù)以氣相色譜（gaschromatogr（一）氣相色譜分離原理氣相色譜分析的分離原理是基于不同物質(zhì)在兩相間具有不同的分配系數(shù)，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，試樣中的各組分就在兩相中進(jìn)行反復(fù)多次的分配，使得原來(lái)分配系數(shù)只有微小差異的各組分產(chǎn)生很大的分離效果，從而各組分彼此分離開來(lái)。（一）氣相色譜分離原理氣相色譜分析的分離原理是基于不同物質(zhì)在（一）氣相色譜分離原理通過(guò)塔板理論可以來(lái)解釋色譜過(guò)程中熱力學(xué)因素作用，將色譜分離過(guò)程比作蒸餾過(guò)程，引用了處理蒸餾過(guò)程的概念、理論和方法來(lái)處理色譜過(guò)程。把色譜柱比作一個(gè)分餾塔，色譜柱可由許多假想的塔板組成（即色譜柱可分成許多小段），在每一小段（塔板）內(nèi)，一部分空間為涂在擔(dān)體上的固定液，另一部分空間充滿著載氣（氣相），載氣占據(jù)的空間稱為板體積△V。當(dāng)欲分離的組分隨載氣進(jìn)入色譜柱后，就在兩相間進(jìn)行分配。（一）氣相色譜分離原理通過(guò)塔板理論可以來(lái)解釋色譜過(guò)程中熱力學(xué)（二）液相色譜原理液相色譜（LiquidChromatography，LC）保留值、塔板數(shù)、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致，塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致。（二）液相色譜原理液相色譜（LiquidChromatog（二）液相色譜原理液相色譜不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它非常適合分子量較大、難汽化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析，70%~80%的有機(jī)物采用LC方法分析。氣相色譜的流動(dòng)相載氣是色譜惰性的，不參與分配平衡過(guò)程，與樣品分子無(wú)親和作用，樣品分子只與固定相相互作用；而在液相色譜中流動(dòng)相液體也與固定相爭(zhēng)奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個(gè)因素。也可選用不同比例的兩種或兩種以上的液體作流動(dòng)相，增大分離的選擇性。液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時(shí)選擇余地大。（二）液相色譜原理液相色譜不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它（二）液相色譜原理液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法（normalphasechromatography，NPC）和反相色譜法（reversephasechromatography，RPC）。正相色譜法采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。此法常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。（二）液相色譜原理液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為（二）液相色譜原理反相色譜法一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右。隨著柱填料的快速發(fā)展，反相色譜法的應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大，現(xiàn)已應(yīng)用于某些無(wú)機(jī)樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過(guò)程的解離，常用緩沖液控制流動(dòng)相的pH。但需要注意的是，C18和C8使用的pH通常為2.5~7.5（2~8），太高的pH會(huì)使硅膠溶解，太低的pH會(huì)使鍵合的烷基脫落。

（二）液相色譜原理反相色譜法一般用非極性固定相（如C18、C第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡(jiǎn)介（一）氣相色譜分析儀基本組成氣相色譜儀主要包括五部分：氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)，現(xiàn)簡(jiǎn)要介紹如下。1、氣路系統(tǒng)氣相色譜儀具有一個(gè)讓載氣（carriergas）連續(xù)運(yùn)行、管路密閉的氣路系統(tǒng)。通過(guò)該系統(tǒng)，可以獲得純凈的、流速穩(wěn)定的載氣。它的氣密性、載氣流速的穩(wěn)定性以及測(cè)量流量的準(zhǔn)確性，對(duì)色譜結(jié)果均有很大的影響。第二節(jié)氣相色譜分析

一、氣相色譜儀簡(jiǎn)介（一）氣相色譜分析儀

1、氣路系統(tǒng)

常用的載氣有氮?dú)夂蜌錃?，也有用氦氣、氬氣和空氣。載氣的凈化，需經(jīng)過(guò)裝有活性炭或分子篩的凈化器，以除去載氣中的水、氧等不利的雜質(zhì)。流速的調(diào)節(jié)和穩(wěn)定是通過(guò)減壓閥、穩(wěn)壓閥和針形閥串聯(lián)使用后達(dá)到。一般載氣的變化程度<1%。氣相色譜的氣路系統(tǒng)簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是連接所有組成部分的管道。載體攜帶著樣品在氣路系統(tǒng)中流動(dòng)，經(jīng)過(guò)色譜柱時(shí)進(jìn)行分離，經(jīng)過(guò)檢測(cè)器時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，最終通過(guò)氣路系統(tǒng)流入廢液瓶中。

1、氣路系統(tǒng)

常用的載氣有氮?dú)夂蜌錃猓灿杏煤?、?、進(jìn)樣系統(tǒng)

進(jìn)樣系統(tǒng)的作用是將液體試樣在進(jìn)入色譜柱之前瞬間汽化，然后快速定量地轉(zhuǎn)入到色譜柱中。進(jìn)樣的大小、進(jìn)樣時(shí)間的長(zhǎng)短、試樣的汽化速度等都會(huì)影響色譜的分離效果和分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。氣相色譜分析儀的進(jìn)樣系統(tǒng)相對(duì)于液相色譜分析儀的進(jìn)樣系統(tǒng)來(lái)說(shuō)要重要得多，因?yàn)闅庀嗌V分析儀的進(jìn)樣系統(tǒng)承擔(dān)著將樣品進(jìn)行汽化的任務(wù)，汽化后樣品才可由載體氣體攜帶，不然樣品是無(wú)法進(jìn)入到氣相色譜分析儀內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的。隨著近年來(lái)氣相色譜分析儀的發(fā)展和功能的進(jìn)步，它的進(jìn)樣系統(tǒng)也發(fā)生了很大的變化，由手動(dòng)進(jìn)樣變?yōu)楝F(xiàn)在的自動(dòng)進(jìn)樣器。2、進(jìn)樣系統(tǒng)2、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)還包括汽化室。為了使樣品在汽化室中瞬間汽化而不分解，要求汽化室熱容量大，無(wú)催化效應(yīng)。為了盡量減少柱前譜峰變寬，汽化室的死體積應(yīng)盡可能小。2、進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)還包括汽化室。為了使樣品在汽化室中瞬間汽

3、色譜分離系統(tǒng)

氣相色譜分析儀色譜分離系統(tǒng)主要是指色譜柱（column），通常有填充柱（packedcolumn）和毛細(xì)管柱（capillarycolumn）兩大類。填充柱由不銹鋼或玻璃材料制成，內(nèi)裝固定相，一般內(nèi)徑為2~4mm，長(zhǎng)1~3m。填充柱的形狀有U型和螺旋型二種。毛細(xì)管柱又叫空心柱，分為涂壁、多孔層和涂載體空心柱?？招拿?xì)管柱材質(zhì)為玻璃或石英。內(nèi)徑一般為0.2~0.5mm，長(zhǎng)度30~100m，呈螺旋型。色譜柱的分離效果除與柱長(zhǎng)、柱徑和柱形有關(guān)外，還與所選用的固定相和柱填料的制備技術(shù)以及操作條件等許多因素有關(guān)。

3、色譜分離系統(tǒng)

氣相色譜分析儀色譜分離系統(tǒng)主要

4、檢測(cè)系統(tǒng)

氣相色譜分析儀的檢測(cè)系統(tǒng)一般指的就是檢測(cè)器（detector），氣相色譜分析儀的檢測(cè)器一般都連接色譜柱的出口。當(dāng)氣體樣品通過(guò)色譜柱，樣品中的所有組分分離后，各自流入到檢測(cè)器中進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)器是整個(gè)氣相色譜分析儀的心臟部位，它的功能就是把隨載氣流出色譜柱的各種組分進(jìn)行電量轉(zhuǎn)換，將組分轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，便于記錄測(cè)量和處理。4、檢測(cè)系統(tǒng)氣相色譜分析儀的檢測(cè)系統(tǒng)一般指的就是檢測(cè)器

4、檢測(cè)系統(tǒng)

根據(jù)檢測(cè)原理的差別，氣相色譜檢測(cè)器可分為濃度型和質(zhì)量型兩大類：濃度型檢測(cè)器測(cè)量的是載氣中組分濃度的瞬間變化，即檢測(cè)器的響應(yīng)值正比于組分的濃度。如熱導(dǎo)檢測(cè)器（thermalconductivitydetector，TCD）、電子捕獲檢測(cè)器（electroncapturedetector，ECD）；質(zhì)量型檢測(cè)器測(cè)量的是載氣中所攜帶的樣品進(jìn)入檢測(cè)器的速度變化，即檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)正比于單位時(shí)間內(nèi)組分進(jìn)入檢測(cè)器的質(zhì)量。如氫焰離子化檢測(cè)器（flameionizationdetector，F(xiàn)ID）和火焰光度檢測(cè)器（flamephotometricdetector，F(xiàn)PD）。熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）：氣流中樣品濃度發(fā)生變化，則從熱敏元件上所帶走的熱量也就不同，而改變熱敏元件的電阻值，由于熱敏元件為組成惠斯頓電橋之臂，只要橋路中任何一臂電阻發(fā)生變化，則整個(gè)線路就立即有信號(hào)輸出。熱敏元件一般為錸鎢絲組成，溫度系數(shù)為正，具有普遍適用的特點(diǎn)。

4、檢測(cè)系統(tǒng)

根據(jù)檢測(cè)原理的差別，氣相色譜檢測(cè)器可分

4、檢測(cè)系統(tǒng)電子捕獲檢測(cè)器（ECD）：β-射線與載氣分子作用產(chǎn)生慢電子，具有親電基團(tuán)的試樣分子能捕獲慢電子而變成負(fù)離子，這種負(fù)離子能與載氣受放射粒子所產(chǎn)生的正離子復(fù)合，從而改變檢測(cè)器的基流，使之減少，輸出信號(hào)。ECD只對(duì)具有親電基團(tuán)的樣品分子才有應(yīng)答，對(duì)水敏感，易受污染，載氣必須充分干燥，脫氧。對(duì)鹵素、硝基等負(fù)電性化合物選擇性極好?；鹧骐x子化檢測(cè)器（FID）：在氫氧焰的高溫作用下，許多分子均將分裂為碎片，并有自由基和激態(tài)分子產(chǎn)生，從而在氫焰中形成這些高能粒子所組成的高能區(qū)。當(dāng)有機(jī)分子入此高能區(qū)時(shí)，就會(huì)被電離，從而在外電路中輸出離子電流信號(hào)。FID靈敏度高，死體積小，應(yīng)答時(shí)間快，除載氣外還需引入空氣和氫氣，對(duì)永久性氣體和水無(wú)應(yīng)答。對(duì)有機(jī)化合物而言，能直接用于毛細(xì)管色譜分析。4、檢測(cè)系統(tǒng)電子捕獲檢測(cè)器（ECD）：β-射線與載氣分子

4、檢測(cè)系統(tǒng)

火焰光度檢測(cè)器（FPD）：燃燒著的氫焰中，當(dāng)有樣品進(jìn)入時(shí)，則氫焰的譜線和發(fā)光強(qiáng)度均發(fā)生變化，然后由光電倍增管將光度變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)。FPD對(duì)磷、硫化合物有很高的選擇性，適當(dāng)選擇光電倍增管前的濾光片將有助于提高選擇性，排除干擾，主要用于含磷、硫的有機(jī)化合物的分析。

4、檢測(cè)系統(tǒng)

火焰光度檢測(cè)器（FPD）：燃燒著的氫焰5、溫控系統(tǒng)

溫度在氣相色譜分析儀的檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中是一個(gè)非常重要的參數(shù)，直接影響色譜柱的選擇分離、檢測(cè)器的靈敏度和穩(wěn)定性?？刂茰囟戎饕菍?duì)色譜柱溫箱、汽化室、檢測(cè)室的溫度進(jìn)行控制。色譜柱是氣相色譜儀的分離系統(tǒng)，樣品中的各個(gè)組分在色譜柱中經(jīng)過(guò)反復(fù)多次分配后得到分離，從而達(dá)到分析的目的。色譜柱安裝在柱溫箱中。色譜柱需要在一定的溫度條件下工作，采用計(jì)算機(jī)對(duì)柱溫箱進(jìn)行溫度控制。5、溫控系統(tǒng)5、溫控系統(tǒng)柱溫箱的溫度控制方式有恒溫和程序升溫二種。對(duì)于沸點(diǎn)范圍很寬的混合物，一般采用程序升溫法進(jìn)行。程序升溫能在一個(gè)分析周期內(nèi)使柱溫隨時(shí)間由低溫向高溫作線性或非線性變化，以達(dá)到用最短時(shí)間獲得最佳分離的目的。對(duì)于一些成分復(fù)雜、沸程較寬的樣品，柱溫箱還可進(jìn)行多階程序升溫控制。程序設(shè)定后自動(dòng)運(yùn)行無(wú)需人工干預(yù)。5、溫控系統(tǒng)柱溫箱的溫度控制方式有恒溫和程序升溫二種。對(duì)于沸

一、氣相色譜儀簡(jiǎn)介

（二）氣相色譜分析儀的簡(jiǎn)要操作方法不同的GC儀器以及不同的檢測(cè)器其操作方法各異，但基本包括以下幾個(gè)步驟（具體的操作方法請(qǐng)參見相關(guān)儀器的操作手冊(cè)）。

1、檢查儀器狀況按順序打開氣體發(fā)生器開關(guān)或鋼瓶總閥、減壓閥以及凈化器上的空氣開關(guān)閥，然后打開GC和電腦的電源開關(guān)。載入或建立樣品檢測(cè)的方法，觀察GC特別是氣路系統(tǒng)是否正常工作，如進(jìn)樣口壓力、載氣流速等是否正常，否則要檢查設(shè)備的氣路系統(tǒng)是否有漏氣的現(xiàn)象。一、氣相色譜儀簡(jiǎn)介

（二）氣相色譜分析儀的簡(jiǎn)要操作方法不

（二）氣相色譜分析儀的簡(jiǎn)要操作方法

2、FID點(diǎn)火當(dāng)氫火焰溫度達(dá)到設(shè)定值后，按點(diǎn)火鍵點(diǎn)火。如按過(guò)點(diǎn)火鍵后，氫焰的基線有個(gè)大的跳動(dòng)并迅速回到零點(diǎn)走直線，說(shuō)明沒(méi)有點(diǎn)著火，需檢查原因。3、進(jìn)樣當(dāng)儀器運(yùn)行穩(wěn)定，基線平穩(wěn)后，可以進(jìn)行樣品進(jìn)樣。

（二）氣相色譜分析儀的簡(jiǎn)要操作方法

2、FID點(diǎn)火二、甲醇測(cè)定（蒸餾酒、葡萄酒）（一）葡萄酒甲醇測(cè)定參照國(guó)標(biāo)GB/T15038–2006中采用氣相色譜法測(cè)定葡萄酒中的甲醇設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)。1、基本原理將葡萄酒蒸餾后的樣品進(jìn)樣，在GC進(jìn)樣口被汽化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱，利用被測(cè)定的各組分在氣液兩相中具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的組分先后流出色譜柱，進(jìn)入FID，根據(jù)色譜柱上各組分峰的保留時(shí)間與標(biāo)樣對(duì)照進(jìn)行定性；利用峰面積或峰高，以內(nèi)標(biāo)法定量。二、甲醇測(cè)定（蒸餾酒、葡萄酒）（一）葡萄酒甲醇測(cè)定

2、儀器和設(shè)備

氣相測(cè)譜儀：配備氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）即GC–FID。毛細(xì)管柱：PEG20M毛細(xì)管色譜柱（柱長(zhǎng)30~60m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.2μm），或其他具有同等分析效果的色譜柱（如Wax柱或FFAP柱）。微量注射器：1μL。

2、儀器和設(shè)備

氣相測(cè)譜儀：配備氫火焰離子化檢測(cè)器（FI3、試劑和材料

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液乙醇溶液，10%vol，色譜純；。甲醇溶液，20mg/L，色譜純，作標(biāo)樣用。用色譜純乙醇溶液（10%vol）配制。

（2）內(nèi)標(biāo)4-甲基-2-戊醇溶液，20mg/L，色譜純，作內(nèi)標(biāo)用。用色譜純乙醇溶液（10%vol）配制。所有試劑置于4°C冰箱保存。3、試劑和材料

4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/min，分流比：約50:1，尾吹約20~30mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測(cè)器溫度：220°C；進(jìn)樣口溫度：220°C；升溫程序：起始溫度40°C，恒溫4min，以3.5°C/min程序升溫至200°C，繼續(xù)恒溫10min。載氣、氫氣、空氣的流速等色譜條件隨儀器而異，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)選擇最佳操作條件，以內(nèi)標(biāo)與酒樣中其他組分峰獲得完全分離為準(zhǔn)。4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/mi5、試驗(yàn)步驟（1）校正因子（f值）的測(cè)定吸取甲醇溶液1.00mL，移入100mL容量瓶中，然后加入內(nèi)標(biāo)4-甲基-2-戊醇溶液1.00mL，用乙醇溶液稀釋至刻度。上述溶液中甲醇和內(nèi)標(biāo)的濃度均為0.2mg/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用微量注射器進(jìn)樣，進(jìn)樣量隨儀器的靈敏度而定。記錄甲醇和內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間及其峰面積（或峰高），用其比值計(jì)算出甲醇的校正因子f。（2）試樣制備用100mL容量瓶準(zhǔn)確量取100mL樣品（液溫20°C）于500mL蒸餾瓶中，用50mL水分三次沖洗容量瓶，洗滌液并入蒸餾瓶中，加幾顆玻璃珠或沸石，連接冷凝器。以取樣用的原容量瓶作接收器（外加冰?。?。開啟冷卻水，緩慢加熱蒸餾。收集餾出液接近刻度，取下容量瓶，蓋塞。于20°C水浴中保溫30min，補(bǔ)加水至刻度，混勻，備用。5、試驗(yàn)步驟（1）校正因子（f值）的測(cè)定吸取甲醇溶液1.0

5、試驗(yàn)步驟

（3）樣品檢測(cè)吸取蒸餾后試樣10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)4-甲基-2-戊醇溶液0.10mL，混勻后，在與f值測(cè)定相同條件下進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間確定甲醇峰的位置，并測(cè)定甲醇與內(nèi)標(biāo)峰面積（或峰高），求出峰面積（或峰高）之比，計(jì)算出酒樣中甲醇含量。

5、試驗(yàn)步驟

（3）樣品檢測(cè)吸取蒸餾后試樣10.0mL6、結(jié)果計(jì)算甲醇的相對(duì)校正因子按式5-2計(jì)算。

樣品中甲醇的含量按式5-3計(jì)算

式中：x——樣品中甲醇的含量，單位為毫克每升（mg/L）。f——甲醇的校正因子。6、結(jié)果計(jì)算甲醇的相對(duì)校正因子按

6、結(jié)果計(jì)算

A1——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)內(nèi)標(biāo)峰面積（或峰高）。A2——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)甲醇峰面積（或峰高）。A3——試樣中甲醇峰面積（或峰高）。A4——添加于酒樣中內(nèi)標(biāo)峰面積（或峰高）。d1——內(nèi)標(biāo)物相對(duì)密度。d2——甲醇相對(duì)密度。I——內(nèi)標(biāo)物濃度（添加在酒樣中），單位：mg/L。所得結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

6、結(jié)果計(jì)算

A1——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)內(nèi)標(biāo)峰面積（或峰高）。

7、注意事項(xiàng)

在重復(fù)性條件下獲得的3次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。甲醇是易揮發(fā)的有毒化合物，會(huì)形成蒸汽被吸入呼吸道；皮膚可以吸入甲醇。因此，在試驗(yàn)過(guò)程中，全程做好防護(hù)，且試驗(yàn)在通風(fēng)櫥內(nèi)完成。

7、注意事項(xiàng)

在重復(fù)性條件下獲得的3次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值（二）白酒甲醇測(cè)定白酒是蒸餾酒，因此白酒甲醇測(cè)定時(shí)不需要像葡萄酒（或果酒、黃酒）等發(fā)酵酒先行蒸餾再進(jìn)行甲醇測(cè)定，白酒可以直接進(jìn)樣測(cè)定。參照國(guó)標(biāo)GB/T5009.48–2003采用氣相色譜法測(cè)定白酒中甲醇設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)。1、基本原理用填充柱直接進(jìn)樣，通過(guò)色譜柱將甲醇峰與其他峰分離，利用甲醇在氫火焰中的化學(xué)電離進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。（二）白酒甲醇測(cè)定白酒是蒸餾酒，因此白酒甲醇測(cè)定時(shí)不需要像葡

2、儀器與設(shè)備

GC2010氣相色譜儀：帶氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。微量進(jìn)樣注射器：1μL、50μL。

2、儀器與設(shè)備

GC2010氣相色譜儀：帶氫火焰

3、試劑與材料

（1）甲醇（色譜純）。（2）乙醇（色譜純）。（3）無(wú)甲醇的乙醇溶液取色譜純無(wú)水乙醇配制成60%vol的乙醇水溶液。取0.5μLGC–FID進(jìn)樣，無(wú)甲醇以及其他雜峰出現(xiàn)。（4）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稱取色譜純甲醇600mg，以少量水洗入100mL容量瓶中，并加水稀釋至刻度。（5）標(biāo)準(zhǔn)使用液吸取10.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL容量瓶中，加入無(wú)甲醇的60%vol乙醇溶液定容。所有試劑置于4°C冰箱保存。

3、試劑與材料

（1）甲醇（色譜純）。

4、色譜條件

色譜柱：2m×4mm，玻璃柱或不銹鋼柱；固定相：GDX–102，60~80目；載氣：氮?dú)猓惠d氣流速：40mL/min；氫氣流速：40mL/min；空氣流速：450mL/min；汽化室溫度：190°C；柱溫：170°C；檢測(cè)器溫度190°C；進(jìn)樣量為0.5μL。

4、色譜條件

色譜柱：2m×4mm，玻璃柱或不銹鋼5、試驗(yàn)步驟（1）定性分析以各組分保留時(shí)間定性，吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液和樣液各0.5μL，分別測(cè)得保留時(shí)間，試樣與標(biāo)準(zhǔn)出峰時(shí)間對(duì)照而定性。（2）定量進(jìn)0.5μL標(biāo)準(zhǔn)使用液，制得色譜圖，分別量取各組分峰高，進(jìn)0.5μL試樣，制得色譜圖，分別量取峰高，與標(biāo)準(zhǔn)峰高比較計(jì)算。5、試驗(yàn)步驟（1）定性分析以各組分保留時(shí)間定性，吸取標(biāo)準(zhǔn)使6、結(jié)果計(jì)算甲醇含量計(jì)算如式5-4所示：式中：x——試樣中甲醇的含量，單位為毫克每升（mg/L）。A——進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)中某組分的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）。h1——試樣中甲醇的峰高，單位為毫米（mm）。h2——標(biāo)準(zhǔn)中甲醇的峰高，單位為毫米（mm）。V1——試樣液進(jìn)樣量，單位為微升（μL）。V2——標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣量，單位為微升（μL）。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。6、結(jié)果計(jì)算甲醇含量計(jì)算如7、注意事項(xiàng)在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。甲醇測(cè)定的方法還包括化學(xué)比色法，國(guó)標(biāo)中對(duì)甲醇測(cè)定的另一種方法是品紅–亞硫酸比色法，即西弗試劑法。此法是將甲醇在磷酸酸性條件下，被高錳酸鉀氧化為甲醛，然后加入無(wú)色的品紅亞硫酸試劑，與甲醛作用生成紫色醌型色素，根據(jù)顏色的深淺來(lái)檢測(cè)白酒中甲醇含量。7、注意事項(xiàng)在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不

7、注意事項(xiàng)

本實(shí)驗(yàn)所使用的氣相色譜法是利用不同醇類在氫火焰中的化學(xué)電離進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，在樣品進(jìn)樣分析過(guò)程中未進(jìn)行任何處理，分離效果較好，誤差較小。但是與本實(shí)驗(yàn)所用的填充柱相比，毛細(xì)管柱具有較高的柱效，而且極大地縮短了樣品的分析時(shí)間，近年來(lái)被廣泛地用于白酒樣品的分析。在使用毛細(xì)管法測(cè)定甲醇時(shí)，通常采用極性柱如FFAP柱，色譜條件需要自行摸索。在采用FFAP等極性柱時(shí)，由于某些酒的成分比較復(fù)雜，可能會(huì)出現(xiàn)甲醇峰與其他化合物峰不能達(dá)到完全分離，此時(shí)，建議使用非極性柱進(jìn)行分析。

7、注意事項(xiàng)

本實(shí)驗(yàn)所使用的氣相色譜法是利用不同醇類在氫火

三、乙醇測(cè)定（啤酒）

（一）GC法檢測(cè)啤酒中乙醇

1、基本原理參照AOAC官方方法984.14中采用氣相色譜法測(cè)定啤酒中的乙醇設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)。試樣進(jìn)入氣相色譜（GC）儀中的色譜柱時(shí)，由于在氣固兩相中吸附系數(shù)不同，從而使得乙醇與其他組分得以分離，利用氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）進(jìn)行檢測(cè)，與標(biāo)樣對(duì)照，根據(jù)保留時(shí)間定性，利用內(nèi)標(biāo)法定量。三、乙醇測(cè)定（啤酒）

（一）GC法檢測(cè)啤酒中乙醇1

2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：配有FID檢測(cè)器。微量進(jìn)樣器：1μL。容量瓶：10mL、100mL。移液管：合適的容量。3、試劑與材料（1）乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜純，配制成3、4、5、6、7、8%vol水溶液，低溫保存。（2）正丙醇色譜純，作內(nèi)標(biāo)用。配制成5%vol水溶液，低溫保存。2、儀器與設(shè)備4、色譜條件

色譜柱（不銹鋼或玻璃）：填充柱1.8m×0.3cm；固定相：Chrornosorb103，80~100目；載氣：氮?dú)饣蚝?；流速?0mL/min；進(jìn)樣口溫度：175°C；檢測(cè)器溫度：250°C；柱溫：185°C恒溫；燃?xì)猓簹錃夂涂諝?。分析時(shí)間大約為2min，乙醇的洗脫時(shí)間為1min，正丙醇（內(nèi)標(biāo)）為1.6min。應(yīng)調(diào)節(jié)柱溫使保留時(shí)間盡量接近上述的時(shí)間。只測(cè)定色譜峰高已能夠滿足積分要求。如果可能的話可以對(duì)每個(gè)色譜峰進(jìn)行峰面積積分處理。每次進(jìn)樣至少要間隔3.5min。每天都要配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，方法為等量混合試劑（1）和試劑（2）。在分析啤酒之前，注入定量標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算乙醇和正丙醇的峰比值，每天測(cè)得的比值應(yīng)該是接近的。如果需要，可調(diào)節(jié)載氣流速以達(dá)到相同的比值。4、色譜條件

色譜柱（不銹鋼或玻璃）：填充柱1.8m×05、試驗(yàn)步驟(1)試樣測(cè)定用S&S560或相似的濾紙過(guò)濾已除氣的啤酒。用移液管吸取5mL樣品于10mL容量瓶中，再加入5mL正丙醇，蓋好塞，混勻。向氣相色譜儀中注入0.2μL，進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算出樣品中乙醇與正丙醇峰高比。啤酒的除氣方法：調(diào)節(jié)啤酒的溫度為15~20°C，然后把酒樣倒入一個(gè)大的三角燒瓶中，輕輕晃動(dòng)，直至無(wú)氣體從啤酒中逸出為止。也可以利用旋轉(zhuǎn)振蕩的方法將啤酒酒樣徹底、均一地除氣，具體操作如下：吸取10μL磷酸三丁酯（TBP）到500mL廣口帶檔板燒瓶中，將大約250mL預(yù)溫的樣品移入燒瓶中，使液面達(dá)到燒瓶標(biāo)記處，然后再加10μLTBP；用鋁箔包住燒瓶口，并在鋁箔中間打一個(gè)10mm洞，使鋁箔卷邊沿?zé)靠谙蛳路?；將燒瓶放在旋轉(zhuǎn)振蕩器上190r/min準(zhǔn)確振蕩12min。如有需要，可用干濾紙過(guò)濾，除去懸浮物，用表面玻璃蓋住漏斗，減少蒸發(fā)。除氣后，啤酒溫度應(yīng)保持在20°C左右。5、試驗(yàn)步驟(1)試樣測(cè)定用S&S560或相似的濾紙過(guò)濾已

（2）工作曲線繪制分別準(zhǔn)確吸取5mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.1）于6個(gè)10mL容量瓶中，再分別吸取5mL正丁醇內(nèi)標(biāo)液（3.2）于每個(gè)容量瓶中，蓋好塞，混勻?；旌暇鶆蚝螅谏鲜錾V條件下，分別進(jìn)樣0.2μL，進(jìn)行測(cè)定。每個(gè)濃度進(jìn)樣測(cè)定3次，記錄乙醇和正丙醇的色譜峰高（也可使用積分器計(jì)算峰面積），并計(jì)算每一濃度乙醇與正丙醇峰高比的平均值。取每種濃度乙醇與正丙醇峰高比的平均比值對(duì)濃度作圖，得到一條接近所有點(diǎn)的直線，計(jì)算出校正因子（f）。每天要重復(fù)分析測(cè)定5%vol的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。（2）工作曲線繪制分別準(zhǔn)確吸取5mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.6、結(jié)果計(jì)算（1）定性分析根據(jù)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分析結(jié)果，確定乙醇的保留時(shí)間。（2）定量分析測(cè)量啤酒樣品中乙醇和正丙醇的色譜峰的峰高，如式5-5所示：式中：He——乙醇峰高，cm。Hp——正丙醇峰高，cm。f——校正因子。6、結(jié)果計(jì)算（1）定性分析根據(jù)乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分析結(jié)果，確7、注意事項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中，比重計(jì)法是檢測(cè)啤酒中乙醇的含量的首選。雖然該法操作簡(jiǎn)便快速，但受酒中其他非乙醇成分的影響導(dǎo)致其抗干擾性差,因而結(jié)果的準(zhǔn)確度較差，只適用于乙醇的水溶液。氣相色譜（GC）法是精確測(cè)量酒精的方法，在啤酒、葡萄酒和果酒的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析中，GC法被列為乙醇測(cè)定的第二法。本實(shí)驗(yàn)采用美國(guó)釀造化學(xué)家協(xié)會(huì)（ASBC）制定的GC法測(cè)定啤酒中的乙醇，操作簡(jiǎn)單方便，利用內(nèi)標(biāo)法定量準(zhǔn)確度高。7、注意事項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中，比重計(jì)法是檢測(cè)啤酒中乙醇的含量

四、β-苯乙醇的測(cè)定（黃酒、白酒）

（一）GC法檢測(cè)白酒中β-苯乙醇

1、基本原理β-苯乙醇（β-phenethylalcohol），CAS號(hào)60-12-8，俗稱2-苯乙醇、β-苯基乙醇、2-苯基乙醇、芐基甲醇，化學(xué)式為C8H10O，分子量為122.17g/mol，是一種簡(jiǎn)單的芳香族伯醇；常溫下為無(wú)色液體，具有淡雅、細(xì)膩而持久的玫瑰花香氣，常溫常壓下1L水可溶解19g，易溶于醇、酯、醛等有機(jī)溶劑中；相對(duì)密度1.0202，沸點(diǎn)219.8°C（12mmHg），空氣中閾值12~24ng/L，水中閾值1000μg/L。β-苯乙醇是飲料酒中重要的高沸點(diǎn)香氣成分，其在黃酒、日本清酒、啤酒、白酒中均有不同的含量。在酒類評(píng)定中，β-苯乙醇是一個(gè)重要指標(biāo)：是稻米黃酒的特征性組分；也是豉香型白酒強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)；還是米香型白酒感官評(píng)定酒的主體香味成分。四、β-苯乙醇的測(cè)定（黃酒、白酒）

（一）GC法檢測(cè)白酒中

試樣被汽化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱，利用β-苯乙醇等被檢測(cè)組分在氣液兩相中具有不同的吸附系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離，分離后的組分先后流出色譜柱，進(jìn)入氫火焰離子化檢測(cè)器（FID），根據(jù)色譜圖上各組分峰的保留值與標(biāo)樣相對(duì)照進(jìn)行定性；利用峰面積，以內(nèi)標(biāo)法定量。試樣被汽化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱，利用β-苯乙醇等被檢測(cè)組2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。Milli-Q超純水系統(tǒng)：美國(guó)Millipore公司。色譜柱：DB–Wax柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.25mm）。容量瓶：10mL、100mL。移液管：合適的容量。微量注射器：10μL2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。3、試劑與材料（1）40%vol乙醇溶液吸取40mL乙醇（色譜純），加水稀釋至100mL，搖勻。（2）β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（20mL/L）吸取β-苯乙醇（色譜純）2mL，用40%vol的乙醇溶液定容至100mL。（3）乙酸正戊酯溶液（20mL/L）作內(nèi)標(biāo)用。吸取乙酸正戊酯（色譜純）2mL，用40%vol的乙醇溶液定容至100mL。3、試劑與材料（1）40%vol乙醇溶液吸取40mL4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為1.0mL/min，分流比：37:1，尾吹20mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測(cè)器溫度：250°C；進(jìn)樣器溫度：250°C；柱溫：起始溫度60°C，恒溫3min，以5°C/min程序升溫至150°C，繼續(xù)恒溫5min，然后以10°C/min程序升溫至230°C，恒溫5min。4、色譜條件載氣（高純氮）：流速為1.0mL/min，分流5、試驗(yàn)步驟（1）校正因子（f值）測(cè)定吸取20mL/L的β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mL，移入100mL容量瓶中，加入1.00mL的內(nèi)標(biāo)試劑（3），用試劑（1）稀釋至刻度。上述溶液中β-苯乙醇和內(nèi)標(biāo)的濃度均為0.2mL/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用10μL微量注射器取1μL進(jìn)樣。記錄β-苯乙醇和內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間及其峰面積，用其比值計(jì)算出β-苯乙醇的相對(duì)校正因子。（2）樣品測(cè)定用煮沸并冷卻至室溫的超純水將酒樣稀釋至酒精度40%vol，然后吸取稀釋酒樣10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液0.10mL，混勻后，在與f值測(cè)定相同的條件下進(jìn)樣。5、試驗(yàn)步驟（1）校正因子（f值）測(cè)定吸取20mL/L的6、結(jié)果計(jì)算（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分析結(jié)果，確定β-苯乙醇的保留時(shí)間。（2）校正因子校正因子如式5-6計(jì)算：式中：f——β-苯乙醇的相對(duì)校正因子。A1——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)內(nèi)標(biāo)的峰面積。A2——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)β-苯乙醇的峰面積。6、結(jié)果計(jì)算（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分析結(jié)

d——β-苯乙醇的相對(duì)密度。d1——內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)密度。（3）定量分析白酒樣品中的β-苯乙醇含量按下式計(jì)算：式5-7式中：x——樣品中β-苯乙醇的質(zhì)量濃度，單位為克每升（mg/L）。d——β-苯乙醇的相對(duì)密度。

f——β-苯乙醇的相對(duì)校正因子。A3——樣品中β-苯乙醇的峰面積。A4——添加于酒樣中內(nèi)標(biāo)的峰面積。I——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度（添加于酒樣中），單位：mg/L。所得結(jié)果應(yīng)表示至兩位小數(shù)。f——β-苯乙醇的相對(duì)校正因子。（二）GC法檢測(cè)黃酒中的β-苯乙醇1、原理對(duì)黃酒進(jìn)行液液微萃?。↙LME）前處理后，再進(jìn)行樣品檢測(cè)。采用DB–Wax毛細(xì)管柱分離，F(xiàn)ID檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。2、儀器與設(shè)備氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。色譜柱：DB–Wax柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.25mm）。Milli-Q超純水系統(tǒng)。容量瓶：10mL。移液管：合適的容量。微量注射器：10μL。（二）GC法檢測(cè)黃酒中的β-苯乙醇1、原理

3、試劑與材料

（1）乙酸乙酯色譜純。（2）乳酸色譜級(jí)。（3）無(wú)水乙醇色譜純。（4）4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮內(nèi)標(biāo)；色譜純。（5）β-苯乙醇色譜純。

3、試劑與材料

（1）乙酸乙酯色譜純。

4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為2mL/min，分流比：1:1；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為450mL/min；檢測(cè)器溫度：250°C；進(jìn)樣口溫度：250°C；進(jìn)樣量：1.00μL；柱溫：起始溫度150°C，恒溫3min，以10°C/min程序升溫至230°C，繼續(xù)恒溫2min。

4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為2mL/min，分流5、試驗(yàn)步驟（1）樣品測(cè)定取2mL黃酒樣品于離心管中，加入5μL內(nèi)標(biāo)4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮（用無(wú)水乙醇溶解，終濃度98.61mg/L）和1.5mL乙酸乙酯，充分混勻后靜置分層，然后用膠頭滴管將上清有機(jī)相轉(zhuǎn)移到1mL的小瓶中，取1μL在上述色譜條件下進(jìn)行GC–FID分析。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制準(zhǔn)確稱取β-苯乙醇0.0500g，用無(wú)水乙醇定容至10mL作儲(chǔ)備液用。臨用前，取0.2mL的儲(chǔ)備液加入到10mL的容量瓶中，用模擬黃酒定容，然后逐級(jí)稀釋配制成0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0mg/L系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取每個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL于離心管中，加入5μL內(nèi)標(biāo)4-(4-甲氧基苯基)-2-丁酮。5、試驗(yàn)步驟（1）樣品測(cè)定取2mL黃酒樣品于離心管中，加

模擬黃酒采用超純水配制，其中含有2.5g/L乳酸，10%vol乙醇，配制好的模擬酒用5g/L乳酸將pH調(diào)整到4.0。每個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液依照酒樣的相同處理方式進(jìn)行LLME后，再在上述色譜條件下，取1μL注入氣相色譜儀分別測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。模擬黃酒采用超純水配制，其中含有2.5g/L乳酸，10

6、結(jié)果計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分析結(jié)果，確定β-苯乙醇的保留時(shí)間。（2）定量分析測(cè)定黃酒樣品中β-苯乙醇色譜峰和內(nèi)標(biāo)物色譜峰的峰面積，根據(jù)它們的峰面積之比，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，按下式計(jì)算黃酒樣品中β-苯乙醇的含量：Y=Ax+B式58C=C0×Y式59式中：Y——樣品中β-苯乙醇與內(nèi)標(biāo)的濃度比。

6、結(jié)果計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分

X——β-苯乙醇與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比。C0——內(nèi)標(biāo)濃度，mg/L。C——樣品中β-苯乙醇濃度，mg/L。所得結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的3次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。X——β-苯乙醇與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比。

7、注意事項(xiàng)

上述白酒中β-苯乙醇的測(cè)定方法是范文來(lái)等人在國(guó)標(biāo)法的基礎(chǔ)上對(duì)色譜柱和氣相色譜條件等進(jìn)行改進(jìn)的方法。通常氣相色譜法采取直接進(jìn)樣的方式檢測(cè)酒樣。但是，黃酒中含有大量糖分、蛋白質(zhì)、脂肪、焦糖色素等不揮發(fā)性化合物，未經(jīng)前處理直接進(jìn)樣，樣品中的糖分等有機(jī)成分和色素將在進(jìn)樣口焦化，不但會(huì)污染襯管，導(dǎo)致色譜圖出現(xiàn)拖尾、鬼峰等現(xiàn)象，嚴(yán)重的會(huì)影響色譜柱的使用壽命。比較國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中檢測(cè)β-苯乙醇的方法，本實(shí)驗(yàn)采用LLME對(duì)黃酒樣品進(jìn)行前處理，避免了直接進(jìn)樣對(duì)色譜儀器造成污染，且樣品及有機(jī)溶劑用量小，對(duì)于大批量檢測(cè)更經(jīng)濟(jì)適用。因此，此方法適宜作為黃酒中的β-苯乙醇的常規(guī)檢測(cè)方法。

7、注意事項(xiàng)

上述白酒中β-苯乙醇的測(cè)定方法是范文來(lái)等人在五、白酒主要風(fēng)味物質(zhì)測(cè)定

1基本原理白酒微量成分眾多，性質(zhì)各異，其研究始于20世紀(jì)50年代，到目前為止，已經(jīng)在我國(guó)白酒中檢測(cè)到近千種成分，從極性的醇、脂肪酸到非極性的酯，從易揮發(fā)的乙醛到不易揮發(fā)的二元酸二乙酯；從含量g/L級(jí)的己酸乙酯、乙酸乙酯和乳酸乙酯，到含量?jī)H幾個(gè)μg/L級(jí)的土味素（geosmin）。五、白酒主要風(fēng)味物質(zhì)測(cè)定1基本原理

質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)的濃度范圍通常為μg/L或mg/L，而白酒中有些物質(zhì)的含量比高，為g/L，所以需要利用氫火焰離子檢測(cè)器（FID）來(lái)檢測(cè)含量較高的物質(zhì)。樣品被汽化后，隨同載氣進(jìn)入色譜柱，利用被測(cè)定的各組分在氣液兩相具有不同的分配系數(shù)，在柱內(nèi)形成遷移速度的差異而得到分離。分離后的各組分先后流出色譜柱，進(jìn)入氫火焰離子化檢測(cè)器，根據(jù)色譜圖上各組分峰的保留值與標(biāo)樣相對(duì)照進(jìn)行定性，利用峰面積（或峰高），以內(nèi)標(biāo)法定量。質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)的濃度范圍通常為μg/L或mg/L，而白酒中

2、儀器和材料

氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。毛細(xì)管色譜柱：FFAP毛細(xì)血管色譜柱（柱長(zhǎng)60m，內(nèi)徑0.25mm，涂層0.2μm），或其他具有同等分析效果的毛細(xì)管色譜柱（如Wax柱）。微量注射器：1μL。

2、儀器和材料

氣相色譜儀：備有氫火焰離子化檢測(cè)器（FI3、試劑和溶液

（1）乙醇溶液（60%vol）用乙醇（色譜純）加水配制。（2）待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品溶液（20mL/L）準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）2mL，用乙醇溶液（1）定容至100mL。（3）乙酸正戊酯溶液（20mL/L）內(nèi)標(biāo)，準(zhǔn)確吸取乙酸正戊酯（色譜純）2mL，用乙醇溶液（1）定容至100mL。3、試劑和溶液

（1）乙醇溶液（60%vol）用乙醇（色譜4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/min；分流比：為37:1；尾吹為20~30mL/min；氫氣：流速為40mL/min；空氣：流速為400mL/min；檢測(cè)器溫度：220°C；進(jìn)樣口溫度：220°C；程序升溫：起始溫度60°C，恒溫3min，以3.5℃/min程序升溫至180°C，繼續(xù)恒溫10min。4、色譜條件

載氣（高純氮）：流速為0.5~1.0mL/5、分析步驟

（1）校正因子（f值）測(cè)定吸取待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品化合物溶液（3.2）1.00mL，移入100mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.00mL，用乙醇溶液稀釋至刻度。上如標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)溶液的濃度均為0.2mL/L。待色譜儀基線穩(wěn)定后，用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣，進(jìn)樣量隨儀器的靈敏度而定。記錄標(biāo)準(zhǔn)品化合物和內(nèi)標(biāo)峰的保留時(shí)間及峰面積（或峰高），用其比值計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)校正因子。（2）樣品測(cè)定吸取樣品10.0mL于10mL容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液0.10mL，混勻后，在與f值測(cè)定相同條件下進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間確定標(biāo)準(zhǔn)品的位置，并測(cè)定待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品與內(nèi)標(biāo)峰面積（或峰高），求出峰面積（或峰高）之比，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品化合物的含量。5、分析步驟

（1）校正因子（f值）測(cè)定吸取待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品化6、結(jié)果計(jì)算

（1）校正因子計(jì)算校正因子采用如式5-10所示計(jì)算：式中：f——校正因子。A1——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)內(nèi)標(biāo)的峰面積（或峰高）。A2——標(biāo)樣f值測(cè)定時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積（或峰高）。d2——標(biāo)準(zhǔn)品化合物的相對(duì)密度。d1——內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)密度。6、結(jié)果計(jì)算

（1）校正因子計(jì)算校正因子采用如

（2）樣品中化合物含量樣品中化合物濃度采用如式5-11計(jì)算：式中：Ci——樣品中化合物的質(zhì)量濃度，單位為mg/L。F——化合物的相對(duì)校正因子。A3——樣品中化合物的峰面積（或峰高）。（2）樣品中化合物含量

A4——添加于酒樣中內(nèi)標(biāo)的峰面積（或峰高）。I——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度（添加于酒樣中），單位為mg/L。所得結(jié)果表示至兩位小數(shù)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立的絕對(duì)差值，不應(yīng)超過(guò)平均值的5%。A4——添加于酒樣中內(nèi)標(biāo)的峰面積（或峰高）。第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器等裝置的液體色譜儀稱為高效液相色譜儀（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）?，F(xiàn)代液相色譜儀的種類很多，根據(jù)其功能不同，可分為分析型、制備型和專用型。無(wú)論高效液相色譜儀在復(fù)雜程度以及各種部件的功能上有多大的區(qū)別，就其基本原理而言是相同的，一般由5部分組成，分別是輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。如圖5-3是高效液相色譜的基本結(jié)構(gòu)。圖5-3高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)第三節(jié)液相色譜分析

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介以液體為流動(dòng)相，

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

HPLC的高壓輸液系統(tǒng)包括儲(chǔ)液裝置、高壓輸液泵、輔助設(shè)備、梯度洗脫裝置等。進(jìn)樣系統(tǒng)是將樣品引入色譜柱的裝置，主要包括取樣、進(jìn)樣兩個(gè)部分。色譜柱是液相色譜儀中最重要的部件，主要由柱管及固定相填料組成。

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

HPLC的高壓輸液系統(tǒng)包括儲(chǔ)液裝置

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

高效液相色譜儀中的檢測(cè)器與氣相色譜儀中所用的檢測(cè)器一樣，主要用于檢測(cè)色譜分離過(guò)程中各組分的濃度變化，要求具有靈敏度高、噪聲低、線性范圍寬、重復(fù)性好、分析化合物種類多等特點(diǎn)。目前，應(yīng)用較多的檢測(cè)器主要包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器等。示差折光檢測(cè)器（RefractiveIndexDetector，RID）也稱為光折射檢測(cè)器，是基于連續(xù)測(cè)定色譜柱流出物光折射率的變化而實(shí)現(xiàn)測(cè)定樣品濃度，原則上，凡是與流動(dòng)相光折射系數(shù)有差別的樣品都可以測(cè)定，因此RID屬于通用性檢測(cè)器，但是，由于RID對(duì)于流動(dòng)相組成的任何變化都有明顯的響應(yīng)，不能用于梯度洗脫，另外，RID靈敏度低，不適合痕量組分分析。

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

高效液相色譜儀中的檢測(cè)器與氣相色譜

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

紫外檢測(cè)器（UltravioletDetector，UVD）是液相色譜分析中應(yīng)用最早而且最廣泛的檢測(cè)器之一，主要用于對(duì)紫外線有吸收組分的檢測(cè)。其特點(diǎn)是，使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、靈敏度高（檢測(cè)下限為0~10g/mL）、線性范圍寬、對(duì)溫度和流速變化不敏感、可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。熒光檢測(cè)器（FluorescenceDectector，F(xiàn)D）是利用某些物質(zhì)在紫外光激發(fā)后發(fā)射可見光的性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的一種檢測(cè)器，主要用于能產(chǎn)生熒光或其衍生物能發(fā)生熒光物質(zhì)的檢測(cè)。該類型檢測(cè)器靈敏度高，比紫外吸收檢測(cè)器高100倍，是常用的檢測(cè)器之一。這一檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測(cè)定，其靈敏度很高（檢測(cè)下限為10-14~10-12g/mL），痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測(cè)均可采用。

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

紫外檢測(cè)器（Ultraviolet

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

電子捕獲檢測(cè)器（ElectricalConductivityDetector，ECD）是離子色譜分析中使用最廣泛的檢測(cè)器。其工作原理為：用兩個(gè)相對(duì)點(diǎn)測(cè)量水溶液中離子型溶質(zhì)的電導(dǎo)率，根據(jù)電導(dǎo)率變化測(cè)定溶質(zhì)濃度。由于電導(dǎo)率隨溫度變化會(huì)發(fā)生改變，因此檢測(cè)時(shí)需保持恒溫，而且不能使用梯度洗脫。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（EvaporativeLightScatteringDetector，ELSD）是一種通用型檢測(cè)器，ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè)到，不受其官能團(tuán)的影響，但由于對(duì)紫外吸收組分檢測(cè)靈敏度低，主要用于糖類、高分子化合物、高級(jí)脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯、甾體類等化合物的檢測(cè)。

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

電子捕獲檢測(cè)器（Electrica

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

高效液相色譜的工作流程是：高壓輸液泵將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速（或壓力）輸送到分析體系，在色譜柱之前通過(guò)進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入，流動(dòng)相將樣品帶入到色譜柱，在色譜柱中各組分因在固定相中的分配系數(shù)和吸附力大小的不同而被分離，并以此隨流動(dòng)相流到檢測(cè)器，檢測(cè)到的信號(hào)送至數(shù)據(jù)系統(tǒng)記錄、處理或保存。

一、高效液相色譜儀簡(jiǎn)介

高效液相色譜的工作流程是：高壓輸液（二）高效液相色譜儀特點(diǎn)高效液相色譜可以根據(jù)所要分離的化合物性質(zhì)的不同，選擇不同分離機(jī)理的分離模式。常見的分離模式有液液分配色譜、液固吸附色譜、離子交換色譜、空間排阻色譜等。不論采用何種分離模式，一般來(lái)說(shuō)，高效液相色譜具有以下特點(diǎn)。（1）高壓液相色譜法以液體為流動(dòng)相（稱為載液），液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過(guò)色譜柱，必須對(duì)載液施加高壓。一般可達(dá)（150~350）×105Pa。（二）高效液相色譜儀特點(diǎn)高效液相色譜可以根據(jù)所要分離的化合物

（2）高速流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達(dá)10mL/min。高效液相色譜法所需的分析時(shí)間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于1h。（3）高效近年來(lái)研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。（4）高靈敏度高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測(cè)器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-11g。另外，用樣量小，一般幾個(gè)微升。（2）高速流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達(dá)1

（5）適應(yīng)范圍寬氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但是受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而高效液相色譜法只要求試樣能制成溶液，而不需要汽化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大（大于400以上）的有機(jī)物（這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的75%~80%）原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70%~80%。（5）適應(yīng)范圍寬氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色二、白酒中乳酸測(cè)定乳酸（lacticacid，CAS號(hào)50-21-5），又叫2-羥基丙酸（2-hydroxypropanoicacid），化學(xué)式為C3H6O3，分子量為90.08g/mol，無(wú)色透明的黏稠體，吸水性較強(qiáng)，可與乙醇、乙醚自由混合，不溶于氯仿；相對(duì)密度1.20~1.25，熔點(diǎn)53°C，沸點(diǎn)122°C（12mmHg）；乳酸具有D-型（CAS號(hào)10326-41-7）、L-型（CAS號(hào)79-33-4）以及等量D-型、L-型乳酸的混合物（稱DL-乳酸）這三種存在形式，其中D-型和L-型雖然兩者在光學(xué)結(jié)構(gòu)上有些差異，但是它們的理化性質(zhì)并無(wú)差別。乳酸是白酒中研究最早和研究頻次最高的有機(jī)酸，是白酒中重要的風(fēng)味物質(zhì)，是白酒中重要香氣物質(zhì)乳酸乙酯的前體物質(zhì)。乳酸在白酒中的含量較高，濃度通常在70.7~1816mg/L。二、白酒中乳酸測(cè)定乳酸（lacticacid，CAS號(hào)50（一）HPLC法測(cè)定白酒中乳酸

1、基本原理利用乳酸的紫外吸收特性，使用配備UVD的高效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。2、儀器與設(shè)備0.45μm水相微孔濾膜。電子分析天平。高效液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器（UVD）3、試劑與材料（1）超純水。（2）分析純磷酸二氫鉀。（一）HPLC法測(cè)定白酒中乳酸1、基本原理

（3）色譜級(jí)乳酸。（4）分析純磷酸。（5）磷酸二氫鉀水溶液，0.1mol/L（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5）。（6）標(biāo)準(zhǔn)乳酸溶液：乳酸，5g/L。4、HPLC條件在210nm處進(jìn)行吸光度測(cè)量。C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：磷酸二氫鉀（pH2.5），0.1mol/L；進(jìn)樣量：5μL；流速：1mL/min；柱溫：40°C。（3）色譜級(jí)乳酸。

5、試驗(yàn)步驟（1）樣品制備樣品用0.45μm水相微孔濾膜過(guò)濾，備用。（2）流動(dòng)相制備稱取13.609g磷酸二氫鉀，用超純水溶解，并定容至1L。取適量磷酸過(guò)0.45μ.濾膜，調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH至2.5。（3）色譜分析乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和制備好的樣品均是5μL進(jìn)樣，根據(jù)HPLC操作參數(shù)分別重復(fù)進(jìn)樣三次，確定乳酸的保留時(shí)間，并記錄不同濃度乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品中乳酸的色譜峰面積。5、試驗(yàn)步驟

6、結(jié)果計(jì)算（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確定乳酸的保留時(shí)間。（2）定量分析首先，測(cè)量一系列濃度梯度乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以乳酸濃度為縱坐標(biāo)，峰面積橫坐標(biāo)繪制乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；其次測(cè)量樣品中乳酸色譜峰的峰面積，利用所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。6、結(jié)果計(jì)算（二）UPLC法檢測(cè)白酒乳酸近年，隨著超高效液相色譜（UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC）技術(shù)的發(fā)展，不僅在分析速度、分離度和靈敏度方面明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的HPLC，在試劑的使用量方面，也大大地減少，降低了分析成本。UPLC同樣適合白酒中乳酸的檢測(cè)。下面介紹UPLC–PDAD檢測(cè)白酒中的乳酸。1、儀器與設(shè)備0.22μm有機(jī)針頭式濾器。超高效液色譜（如WatersUPLCH–Class）配有溶劑管理器，進(jìn)樣管理器，PDAD檢測(cè)器，數(shù)據(jù)處理軟件。（二）UPLC法檢測(cè)白酒乳酸近年，隨著超高效液相色譜（Ult

2、試劑

（1）超純水。（2）色譜級(jí)磷酸二氫鈉。（3）乳酸。（4）磷酸。（5）磷酸二氫鈉水溶液，3.1202g/L（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7）。（6）標(biāo)準(zhǔn)乳酸溶液：乳酸，5g/L。

2、試劑

（1）超純水。

3、UPLC條件

在210nm處進(jìn)行吸光度測(cè)量；T3柱（100mm×2.1mm，1.8μm），如WatersACQUITYUPLCHSST3；流動(dòng)相：磷酸二氫鈉（pH2.7），3.1202g/L；進(jìn)樣量：1μL；流速：0.25mL/min；柱溫：40°C。

3、UPLC條件

在210nm處進(jìn)行吸光度測(cè)量；T3柱（

4、試驗(yàn)步驟

（1）樣品制備首先，用超純水將白酒樣品稀釋至15%vol左右，用一次性注射器取1mL過(guò)0.22μm有機(jī)針頭式濾器。（2）流動(dòng)相制備準(zhǔn)確稱取3.1202g色譜級(jí)磷酸二氫鉀，用超純水溶解，并定容至1L。取適量磷酸過(guò)0.22μ.有機(jī)針頭式濾器，調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH至2.7。（3）UPLC分析標(biāo)準(zhǔn)乳酸溶液和制備好的樣品均是1μL進(jìn)樣，根據(jù)3描述的UPLC操作參數(shù)分別重復(fù)進(jìn)樣三次，確定乳酸的保留時(shí)間，并記錄不同濃度乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品中乳酸的色譜峰面積。

4、試驗(yàn)步驟

（1）樣品制備首先，用超純水將白酒樣

5、計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確定乳酸的保留時(shí)間。（2）定量分析首先，測(cè)量一系列濃度梯度乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以乳酸濃度為縱坐標(biāo)，峰面積為橫坐標(biāo)繪制乳酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；其次測(cè)量樣品中乳酸色譜峰的峰面積，利用所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線以外標(biāo)法定量。

5、計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)乳酸參考溶液色譜分析結(jié)果，確

6、注意事項(xiàng)

對(duì)于白酒中乳酸的檢測(cè)，除了高效液相色譜法和超高效液相色譜法，還有衍生化氣相色譜法、離子色譜法（IonChromatography，IC）等，但是最常用的還是HPLC法。不僅樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，操作也比較簡(jiǎn)單，但是隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，UPLC法高的分離度和靈敏度以及更短的分析時(shí)間，逐漸顯示出自身的優(yōu)勢(shì)，明顯優(yōu)于HPLC法。但是，在UPLC檢測(cè)過(guò)程中，乳酸和乙酸的色譜峰的保留時(shí)間接近，如果樣品的酒精度過(guò)高，會(huì)出現(xiàn)乳酸峰和乙酸峰相互重疊的現(xiàn)象，兩個(gè)色譜峰的分離度不好，不能完全分離，影響了乳酸的定量，因此需對(duì)酒樣進(jìn)行稀釋，一般酒精度低于30%vol，乳酸和乙酸的色譜峰可完全分離，滿足定量要求。

6、注意事項(xiàng)

對(duì)于白酒中乳酸的檢測(cè)，除了高效液相色譜法和超三、葡萄酒中檸檬酸測(cè)定檸檬酸（citricacid，CAS號(hào)77-92-9），又稱3-羧基-3-羥基戊二酸（3-carboxy-3-hydroxypentanedioicacid），無(wú)味，白色固態(tài)晶體，是一種弱酸，帶有三個(gè)羧基（–COOH），化學(xué)式為C6H8O7，分子量為192.12g/mol，熔點(diǎn)156°C（313°F;429K），沸點(diǎn)310°C（590°F;583K)，無(wú)水檸檬酸密度1.665g/cm3，一水合檸檬酸的密度為1.542g/cm3（18°C），易溶于水、乙醇、乙醚和乙酸乙酯，不溶于苯、三氯甲烷和甲苯等溶劑。三、葡萄酒中檸檬酸測(cè)定檸檬酸（citricacid，CAS

葡萄酒中的檸檬酸來(lái)自于葡萄，是葡萄酒中重要的有機(jī)酸，影響葡萄酒的口感、香氣和顏色。由于檸檬酸的來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，因此常使用檸檬酸來(lái)酸化高pH的葡萄酒。報(bào)道稱紅葡萄酒中檸檬酸含量0.17~1.32g/L，白葡萄酒中檸檬酸含量0.20~0.54g/L，甜葡萄酒中檸檬酸含量0.34~1.61g/L。葡萄酒中的檸檬酸來(lái)自于葡萄，是葡萄酒中重要的有機(jī)酸，影響葡

1、基本原理通過(guò)離子交換樹脂柱（ionexchangeresincolumn）提取葡萄酒中的有機(jī)酸，通過(guò)HPLC柱將酸分離，利用酸的紫外吸收特性進(jìn)行檢測(cè)。2、儀器與設(shè)備0.45μm纖維素過(guò)濾膜。C18固相萃取小柱，如SepPak–WatersAssoc。HPLC，配有10μL進(jìn)樣器，溫度控制設(shè)備，UVD檢測(cè)器，圖表記錄儀或者積分儀或計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)。1、基本原理

3、試劑

（1）超蒸餾水。（2）重新蒸餾過(guò)的甲醇。（3）檸檬酸。（4）硫酸（ρ20=1.84g/mL）。（5）硫酸溶液，0.0125mol/L。（6）標(biāo)準(zhǔn)檸檬酸溶液：檸檬酸，5g/L

3、試劑

（1）超蒸餾水。

4、HPLC操作參數(shù)

在210nm處進(jìn)行吸光度測(cè)量；含有強(qiáng)正離子（H+）交換樹脂的色譜柱（長(zhǎng)300mm，內(nèi)徑7.8nm，顆粒直徑9μm），如HPX–87HBIO–RAD；流動(dòng)相：硫酸溶液，0.0125mol/L；流速：0.6mL/min；溫度：60~65°C（可根據(jù)色譜柱樹脂的類型選擇）。

4、HPLC操作參數(shù)

在210nm處進(jìn)行吸光度測(cè)量；含有

5、試驗(yàn)步驟

（1）樣品制備首先，用10mL甲醇清洗C18固相萃取小柱，再用10mL水清洗。去除葡萄酒或者葡萄汁中氣體。過(guò)0.45μm纖維素過(guò)濾膜。吸取8mL過(guò)濾后的樣品通過(guò)C18小柱。丟棄前3mL流出液，并收集之后的5mL流出液（注意防止C18小柱變干）。（2）色譜分析10μL標(biāo)準(zhǔn)檸檬酸溶液和10μL制備的樣品，按照4描述的HPLC操作參數(shù)依次進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣三次，并記錄檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間，以及檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品中檸檬酸的色譜峰面積。

5、試驗(yàn)步驟

（1）樣品制備首先，用10mL甲醇清洗C

6、結(jié)果計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)檸檬酸參考溶液，確定檸檬酸的保留時(shí)間。（2）定量分析測(cè)量參考溶液和樣品中檸檬酸色譜峰的峰面積，以檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算三次檢測(cè)結(jié)果的平均值。

6、結(jié)果計(jì)算

（1）定性分析根據(jù)檸檬酸參考溶液，確定檸檬7、注意事項(xiàng)

葡萄酒中檸檬酸的檢測(cè)方法除了高效液相色譜法，還包括衍生化氣相色譜法、酶光譜（可見光）分析法、紙層析色譜法、電噴霧電離質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳法和電位滴定法。酶法主要用于葡萄酒中蘋果酸、乳酸、檸檬酸的檢測(cè)，主要基于酶耦合反應(yīng)，在酶（檸檬酸裂解酶、蘋果酸脫氫酶和乳酸脫氫）的作用下，催化有機(jī)酸的裂解和/或脫氫反應(yīng)，測(cè)量輔酶NADH或者NADPH吸光度的增加或者減少。該法特異性高，但是一次只能檢測(cè)一種有機(jī)酸，因此比較耗時(shí)。GC法雖然具有很高的靈敏度和選擇性，但是由于有機(jī)酸是不揮發(fā)的，因此需要硅烷化、酯化等衍生化步驟處理后才能進(jìn)行GC分析，前處理步驟繁瑣，對(duì)于批量樣品檢測(cè)，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、成本高。電泳法對(duì)于葡萄酒中有機(jī)酸的檢測(cè)，是在高效液相色譜法之后慢慢發(fā)展起來(lái)的，具有高分辨率、簡(jiǎn)單、自動(dòng)化、分析時(shí)間短、樣品和試劑的消耗少等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于HPLC法來(lái)說(shuō)，葡萄酒樣品的前處理操作簡(jiǎn)單。7、注意事項(xiàng)

葡萄酒中檸檬酸的檢測(cè)方法除了高效液相色譜法，還四、葡萄酒中白藜蘆醇的測(cè)定1、基本原理白藜蘆醇（resveratrol）屬于芪素類化合物（stilbenoid），CAS號(hào)501-36-0，分子式為C14H12O3，分子量228.25g/mol，帶輕微黃色的白色粉末，熔點(diǎn)261~263oC，沸點(diǎn)449~450oC，lgP3.139，難溶于水（溶解度0.03g/L），易溶于丙酮、乙醇（溶解度50g/L）、甲醇、乙酸乙酯、DMSO（溶解度16g/L）、乙醚、三氯甲烷等有機(jī)溶劑（溶解度從高到低），LD5023.2μmol/L（5.29g/L）。四、葡萄酒中白藜蘆醇的測(cè)定1、基本原理

白藜蘆醇有順、反兩種結(jié)構(gòu)，即順-白藜蘆醇和反-白藜蘆醇。順-白藜蘆醇在紫外光（350nm，甲醇溶液中）的作用下會(huì)發(fā)生光異構(gòu)化（photoisomerization），轉(zhuǎn)換為反-白藜蘆醇。反-白藜蘆醇反-白藜蘆醇白藜蘆醇有順、反兩種結(jié)構(gòu)，即順-白藜蘆醇和反-白藜蘆醇。順

白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，能降低血液黏度，抑制血小板凝聚和血管舒張（vasodilation），保持血液流動(dòng)；預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis）、冠心病、局部缺血性心臟?。╥schemicheartdisease）和高血膽固醇；抑制低密度脂蛋白的氧化，調(diào)節(jié)其代謝；防止脂肪過(guò)氧化，保護(hù)肝臟；有類似雌激素的功效，能治療乳腺癌和其他疾?。煌ㄟ^(guò)抑制蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶（protein-tyrosinekinase），防止癌癥的發(fā)生和發(fā)展，抑制腫瘤；能延緩老化。白藜蘆醇是一種天然的抗氧化劑，能降低血液黏度，抑制血小板凝

2、儀器與設(shè)備HPLC儀器，帶有二極管陣列紫外–可見光檢測(cè)。0.20μm過(guò)濾膜。3、試劑（1）超純水、色譜級(jí)乙腈、冰醋酸。（2）反-與順-白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)溶液反-白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0g/L）的配制：稱取10.0mg反-白藜蘆醇于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于–20°C冰箱中保存?zhèn)溆?。?白藜蘆醇通過(guò)反-白藜蘆醇在日光下照射獲得。2、儀器與設(shè)備

4、HPLC條件反相C18柱（250mm×4mm，5μm粒徑）；流動(dòng)相：溶劑A：冰醋酸水溶液，pH2.4；溶劑B：20%A+80%乙腈；0min，82%A，18%B；10min，82%A，18%B；17min，77