體內藥物分析方法介紹

體內藥物分析體內藥物分析是通過分析的手段了解藥物在體（包括實驗動物等機體體內藥物分析任務和對象的特點：1、被測定的藥物和代謝物的濃度或活性極低；2、樣品中存在各種直接或間接影響測定結果的物質，大多需要分離和凈化；3、樣品量少，尤其是連續(xù)測定時，很難再度獲得完全相同的樣品；4、工作量較大，隨著工作的深入開展，會成倍地甚或按指數(shù)級數(shù)增加；5、往往要求很快地提供結果，尤其在毒物檢測工作中；6、實驗室應有多種檢測手段，可進行多項分析工作；7、測定數(shù)據(jù)的處理和闡明有時不太容易。樣品的種類、采集和儲存（一）血樣：血漿(plasma和血清(serum是體內藥物分析最常（靶器管(whole在加肝素、枸櫞酸（二）(urine)：尿樣測定主要用于藥物劑量回收研究、藥物腎清除率和生物利用度等研（母體藥物較大，所以宜測定一定時間內尿中藥物的總量（如、124小時內的累計量，需記錄排出時間內多次取樣，排尿時間較難掌握（尤其是嬰兒，同時也具有不易采集完全的缺點。（三）(saliva)：唾液中的藥物濃度通常與血漿濃度相關。樣品易得，取樣無損害，尤易pH日分泌量1～1.5L，含有的主要電解質有Na+、K+、Cl-、HCO3-等，主要有機成分是粘液15分鐘，收集口內自然流出或經(jīng)舌在口內攪動后流出的混合唾液（吸管內吸附的少量唾液用稀釋液洗出，用2003000rpm離心15分鐘，小心吸（C）的方法刺激，在短時間內可得到大量唾液，但藥濃也可能會受到影響。（四）其它：乳汁、動物臟器組織勻漿等。二、樣品儲存和穩(wěn)定性考察：取樣后最好立即進行分析，冷藏(4℃)、冰凍(-20℃)有時也不能完全保證樣品不起變化。尿液是很好的細菌生長液，若需收集24或不能立即測定的，應置冰箱冷藏或加防腐劑（1%甲苯、過飽和氯仿）保存。分析樣品貯生什么問題；如何預防或校正不穩(wěn)定樣品的分析結果。測定前樣品的制備行分離、凈化、濃集、必要時尚需對待測組分進行化學改性，為測定創(chuàng)造良好條件。一、樣品的制備要考慮：藥物的理化性質、待測物的濃度范圍、藥物測定的目的、選用的生物體液和組織的類型、樣品制備與分析技術的關系。二、蛋白質的處理：是測定血漿、血清、全血及組織勻漿等樣品中藥物時的最先處理步驟。（一的蛋白質在氏于等電點的pH時形成不溶性鹽；反之，陽離子型沉淀劑（含鋅鹽、銅鹽）與（二(Aciddigestion)使藥物自蛋白結合處釋出，但常導致藥物的分解。（三(Proteolytic(SubtilisinCarlsberg)、因是在平穩(wěn)條件下進行的，可避免某些藥、在用HPLC時，無需再進行過多的凈化操作。缺點是不適用于一些在高pH時易水解的藥物。（一）溶液的pH調節(jié)：最佳pH選擇主要與藥物的pKapH與pKa相當pH值要高于pKa1～2pH1～290%”萃取出來，故在pH值偏高的情況下進行提取較好。（二）提取溶劑的極性：選好第一個提取溶劑可減少以后的凈化操作，在液-液提取中多采損失的不足。也有利用不同極性的混合溶劑來提取藥物和凈化脂肪酸類。（三提取技術：由于體液樣品量少且藥物含量低，一次分析的樣品數(shù)量較多。與常量和微量分析相比，提取時通常不采用反復提取的方法，多半進行一次（至多二次）pH“”，測定含量時則應精確（或峰面積（或峰面積（四）提取溶劑的蒸發(fā)：提取液常為數(shù)GCHPLC測定，需采取濃集辦法，常用真空蒸發(fā)（注意暴沸）或吹氮氣流使溶劑揮散。(Solid-phaseextraction法。C18化學鍵合硅膠。這種疏—濾（超濾）以及凝膠過濾方法等。以上方法也可用于藥物蛋白結合率的測定。六、導致待測物損失的因素（一）吸附：玻璃表面或橡膠塞會吸附藥物，特別是脂肪胺類（二（尤其件制備樣品，經(jīng)免引起藥物的部分分解、開環(huán)等情況發(fā)生，有的藥物尚需避光操作。（三時在蒸發(fā)除去過量衍生化試劑時，使得衍生物與溶劑形成共沸混合物而導致?lián)p失。（四遇到，但往往是某些樣品制備中藥物損失的一個因素。（五蒸發(fā)：有的是藥物本身的揮發(fā)性（如苯丙胺）（一(Plasticizers3-(2丁羥乙基)磷酸酯等，可使溶劑提取步驟中藥物分配系數(shù)變化、方法變異系數(shù)增大（5增至20。（二）脂肪酸及酯類：血樣中濃度約為350μg/m（10-3mol/，較待測藥物高102～103以上易被提入。常出現(xiàn)在色譜圖中。（三響不同實驗室間、各分析人員間的實驗結果。解決辦法是采用高純度溶劑（價貴使用前重新應用全玻璃儀器重蒸餾。其次是采用專屬的檢測方法。（四）化學衍生化帶來的雜質：由于試劑未經(jīng)純化致使色譜分析中往往呈現(xiàn)額外的雜質峰。（五蒸餾水純度不夠等。體內藥物分析方法的設計與評價一、分析方法的設定依據(jù)（一）重視并做好文獻總結、整理工作（二）的特性及體內存在狀況（三）明確測定的目的要求（四）實驗室條件。二、方法建立的一般實驗步驟（一求得濃度與測定響應值之間（如吸收度、色譜峰高或面積等）的關系，濃度線性范圍，最適測定濃度，檢測靈敏度，測定的最適條件、溫度、反應時間）等等。（二）以經(jīng)過純化處理過的空白樣品進行測定；（三回收率數(shù)據(jù)，檢驗生物樣品對測定有無干擾等。（四內實樣測定的步驟和方法作為對照測定，并以此來檢驗所建立的方法的實際可行性。（一(Accuracy(Recovery)數(shù)值間接反映測定的準確程度；也可通過與其他已建立的方法進行比較的辦法（參比方法100%當然好，但很難達到。重要的是每次測定要保持穩(wěn)定。（二）精密度(Precision)：測定結果與平均值的偏離程度。測定間偏差越小，對測定的要求也越高（花費大；濃度與RSDRSD在10受的。（三）靈敏度(Sensitivity)：“一種方法可以檢測出有關化合物的最小量”。常用最低檢測限(Limitofdetection,LOD)或最低檢測量(Limitofquantification;LOQ)來表示。LOD范圍在ng(10-9g)～10-18g。（四）(Specificityor（響應）（如色譜法的專屬性較吸收光度法為高）的方法或專屬性較強的方法進行。（五）不同方法測得結果的相關程度(Degreeofcorrelation)的比較：用一有相當專屬性和可靠性的方法與新建方法同量測定，以相關系數(shù)γ(Correlationcoefficient)表示相關程度。γ一般要求在0。95以上。要求、費用多少等等方面加以考慮。分析質量管理Quality及質量保證已成