分光光度法及分光光度計(jì)使用方法課件

分光光度法南方醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心內(nèi)容3分光光度法的原理1如何求被測組分的含量2分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)分光光度計(jì)的使用與注意事項(xiàng)43分光光度法概念：是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的一項(xiàng)技術(shù)。特點(diǎn)：靈敏度高、精確度高、操作簡便、快速。對于復(fù)雜的組分系統(tǒng)，無須分離即可檢測出其中所含的微量組分的特點(diǎn)。分光光度法的原理Lambert定律I0I入射光強(qiáng)度透過光強(qiáng)度LC液層厚度溶液濃度分光光度法的原理Beer定律I0I入射光強(qiáng)度透過光強(qiáng)度LC液層厚度溶液濃度分光光度法的原理Lambert-Beer定律＋＝如果同時(shí)考慮液層厚度和溶液濃度對光吸收的影響，將Lambert和Beer定律合并，描述物質(zhì)對單色光吸收強(qiáng)弱與液層厚度和待測物濃度的關(guān)系。分光光度法的原理如何求被測組分的含量1.利用標(biāo)準(zhǔn)管計(jì)算測定物的含量2.利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測定物含量3.利用標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法求出待測溶液的濃度4.利用消光系數(shù)法求出待測溶液的濃度利用標(biāo)準(zhǔn)管計(jì)算測定物的含量在相同條件下測定已知濃度（CS）標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度（AS），同時(shí)也測定末知濃度（CU）的吸光度（AU），利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測定物含量

先配制一系列濃度由小到大的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測出它們的吸光度。然后以各管吸光度（A）為縱坐標(biāo)，各管的濃度（C）為橫坐標(biāo)，在方格坐標(biāo)紙上作圖。若被測物質(zhì)對光的吸收符合光的吸收定律，則必然得到一條通過原點(diǎn)的直線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線，亦稱工作曲線。以后對末知濃度物質(zhì)測定時(shí)，無需再作標(biāo)準(zhǔn)管，據(jù)測定管吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可求得測定物的濃度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(濃度-吸光度曲線）0.20.80.40.6A

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345××××根據(jù)測定管吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可求得測定物的濃度。CV-1100型可見光分光光度計(jì)

0.000ATCFMODEPRINT0%T100%TA：吸光度T：透射比C：濃度F：斜率MODEATCF切換鍵PRINT確認(rèn)鍵0%T100%T校零、下降鍵校100、上升鍵V-1100分光光度計(jì)鍵盤控制的使用說明V-1100分光光度計(jì)操作步驟開機(jī)，預(yù)熱30分鐘。轉(zhuǎn)動波長旋鈕，調(diào)所需波長。按鍵切換到T檔。將黑體放入光路中，合上蓋，按鍵校零,T=000.0。開蓋，將參比液按空白液、標(biāo)準(zhǔn)液、待測液順序放入比色杯架上，拉動比色架拉桿，將空白液放入光路中，合上蓋，按鍵校T=100.0合上蓋，按鍵切換到A檔拉動拉桿，將標(biāo)準(zhǔn)、待測液依次放入光路中，即可讀取其吸光度A值。重復(fù)3次，記錄3組數(shù)據(jù)。讀數(shù)后，將黑體放入光路中，開蓋取出比色杯。將參比液倒回原試管中，清洗比色杯并倒扣在濾紙上晾干關(guān)機(jī)，蓋上防塵蓋，登記儀器使用登記本。MODE

0%MODE

100%V-1100分光光度計(jì)

使用注意事項(xiàng)注意防震、防潮、防光和防腐蝕。每臺儀器所配套的比色皿不能與其他儀器的比色皿單個(gè)調(diào)換。不可用手指或毛刷摩擦比色杯的透光面。盛裝參比液時(shí)，達(dá)到比色杯的3/4即可，不宜過多，以防溶液溢出。比色杯外壁如有液體，只能用濾紙沾去水份，再用擦鏡紙拭凈。注意比色杯的清潔，用后應(yīng)先用自來水沖洗，再用蒸餾水清洗。測試結(jié)束要及時(shí)登記，儀器有問題及時(shí)報(bào)告。操作練習(xí)實(shí)驗(yàn)材料試劑：CuSO4標(biāo)準(zhǔn)液（8mg/ml）

待測CuSO4溶液蒸餾水器材：加樣槍、刻度吸管、試管、試管架V-1100型可見光分光光度計(jì)操作練習(xí)步驟加入物BSU蒸餾水3ml——CuSO4標(biāo)準(zhǔn)液—3ml—CuSO4待測液——3ml分別取3支試管，做好標(biāo)記，按下表操作：以空白管B調(diào)零，在690nm處，讀取標(biāo)準(zhǔn)管S和待測管U吸光度A值，記錄3組數(shù)據(jù)，取平均A值，代入公式計(jì)算。數(shù)據(jù)處理表格測定管各管測定次數(shù)各管平