2020高中生物 專題1 1.1 DNA重組技術(shù)的基本工具教案

學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精PAGE27-學(xué)必求其心得，業(yè)必貴于專精1。1DNA重組技術(shù)的基本工具學(xué)習(xí)目標(biāo)：1。了解基因工程的概念、誕生及發(fā)展。2。掌握限制酶及DNA連接酶的種類及作用。（重、難點(diǎn))3。理解載體的種類及應(yīng)具備的條件.(難點(diǎn))一、基因工程及工具酶1．基因工程的概念(1)操作場所：生物體外。(2)操作技術(shù)：DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù).(3）操作結(jié)果：賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。(4)操作水平：DNA分子水平。2．基因工程的誕生與發(fā)展（連線)①DNA是遺傳物質(zhì)的證明②基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)③工具酶的發(fā)現(xiàn) A.基礎(chǔ)理論④遺傳密碼的破譯⑤DNA體外重組的實(shí)現(xiàn)⑥重組DNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功⑦PCR技術(shù)的發(fā)明 B.技術(shù)支持⑧DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立提示：①④⑧—A②③⑤⑥⑦—B3．限制性核酸內(nèi)切酶—-“分子手術(shù)刀”(1）來源：主要來自原核生物.(2)種類：約4000種。(3）特點(diǎn)：具有專一性，表現(xiàn)在兩個(gè)方面：①識(shí)別-—雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列。②切割——特定核苷酸序列中的特定位點(diǎn)。（4）作用:斷裂特定的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（5)結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。4．DNA連接酶——“分子縫合針”種類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體特點(diǎn)縫合黏性末端縫合黏性末端和平末端作用縫合雙鏈DNA片段,恢復(fù)兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵二、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”1．基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體—-“分子運(yùn)輸車"（1)種類①質(zhì)粒：常存在于原核細(xì)胞和酵母菌中，是一種分子質(zhì)量較小的、環(huán)狀的、裸露的DNA分子,獨(dú)立于擬核之外.②λ噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒等.（2)目的①將目的基因轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中去。②在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。（3）必備條件①在宿主細(xì)胞中保存下來并大量復(fù)制。②有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)。③有一定的標(biāo)記基因，便于篩選。④對(duì)受體細(xì)胞無害。2．重組DNA分子的模擬操作（1)材料用具：剪刀代表EcoR_Ⅰ，透明膠條代表DNA連接酶。（2）切割位點(diǎn)①分別從兩塊硬紙板上的一條DNA鏈上找出G—A-A-T—T-C序列，并選G-A之間作切口進(jìn)行“切割".②再從另一條鏈上互補(bǔ)的堿基之間尋找EcoRⅠ相應(yīng)的切口剪開.(3)操作結(jié)果：若操作正確，不同顏色的黏性末端應(yīng)能互補(bǔ)配對(duì)；否則,說明操作有誤。1．判斷對(duì)錯(cuò)（正確的打“√”，錯(cuò)誤的打“×”)（1)基因工程的原理是基因重組，不過在這里這種變異是定向的。 （）(2)DNA重組技術(shù)所需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶和載體. （）（3)DNA聚合酶也可以用作DNA重組技術(shù)的工具。 （）(4）限制酶在原來的原核細(xì)胞內(nèi)對(duì)細(xì)胞自身有害. (）(5)不同DNA分子用同一種限制酶切割形成的黏性末端相同。 (）（6)DNA連接酶既能連接黏性末端,又能連接平末端。 (）（7）載體的種類有質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等，其中動(dòng)植物病毒必須是DNA病毒. ()提示：(1）√（2)×載體是DNA重組技術(shù)所需的工具，不是工具酶.（3)×DNA重組技術(shù)的工具有限制酶、DNA連接酶和載體，沒有DNA聚合酶.（4）×限制酶在原來的原核細(xì)胞內(nèi)用于切割外源DNA,使之失效，從而保護(hù)自身。（5)√（6）×E·coliDNA連接酶不能連接平末端。（7）√2．下列哪項(xiàng)不是基因工程中經(jīng)常使用的運(yùn)載目的基因的載體（）A．細(xì)菌質(zhì)粒 B．λ噬菌體的衍生物C．細(xì)菌核區(qū)中的DNA D．動(dòng)植物病毒C［細(xì)菌核區(qū)中的DNA是大型環(huán)狀DNA，不宜做載體；常用載體為細(xì)菌質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物以及動(dòng)植物病毒等。]3．基因工程技術(shù)也稱為DNA重組技術(shù)，其實(shí)施必須具備的四個(gè)必要條件是（）A．目的基因限制酶載體受體細(xì)胞B．重組DNARNA聚合酶限制酶連接酶C．工具酶目的基因載體受體細(xì)胞D．模板DNAmRNA質(zhì)粒受體細(xì)胞C[基因工程是把供體生物的基因（目的基因）導(dǎo)入受體(細(xì)胞)，并使其成功表達(dá)，以使受體獲得新的遺傳特性的過程。因此該過程需要有目的基因、受體細(xì)胞及工具（工具酶和載體）。]基因工程的概念背景材料我國擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，就是通過精心設(shè)計(jì)，用“分子工具"構(gòu)建成的。培育抗蟲棉首先要在體外對(duì)含有抗蟲基因的DNA分子進(jìn)行“切割"、改造、修飾和“拼接”,然后導(dǎo)入棉花體細(xì)胞內(nèi)，并使重組DNA在細(xì)胞中表達(dá).[思考交流]1．填寫下表,理解基因工程的概念。手段通過體外________和________等技術(shù)，賦予生物以新的________目的按照人們的愿望,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的________和________設(shè)計(jì)和施工水平____________水平提示：DNA重組轉(zhuǎn)基因遺傳特性生物類型生物產(chǎn)品DNA分子2．不同生物的DNA能夠拼接成功的基礎(chǔ)是什么?提示：都由四種脫氧核苷酸組成，都具有規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。3．一種生物的基因能在另一種生物的細(xì)胞中成功表達(dá)的基礎(chǔ)是什么？提示：所有生物共用一套遺傳密碼。[歸納總結(jié)]1．基因工程的原理是基因重組自然狀態(tài)下基因重組有兩種情況：減數(shù)第一次分裂前期四分體的非姐妹染色單體間的交叉互換和減數(shù)第一次分裂后期非同源染色體的自由組合.基因工程突破了生殖隔離，實(shí)現(xiàn)了不同種生物間的基因重組。2．基因工程的理論基礎(chǔ)（1)拼接的基礎(chǔ)①基本組成單位相同:不同生物的DNA分子都是由脫氧核苷酸構(gòu)成的。②空間結(jié)構(gòu)相同：不同生物的DNA分子一般都是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長鏈形成的規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。③堿基配對(duì)方式相同：不同生物的DNA分子中兩條鏈之間的堿基配對(duì)方式均是A與T配對(duì)，G與C配對(duì)。(2）表達(dá)的基礎(chǔ)：生物界共用一套遺傳密碼,相同的遺傳信息在不同生物體內(nèi)可表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)。3．基因工程可以按照人們的意愿，定向改造生物的遺傳特性,從而產(chǎn)生定向的變異，并可實(shí)現(xiàn)不同物種間的基因交流，打破生殖隔離。應(yīng)與現(xiàn)代進(jìn)化論中的“變異是不定向的”“物種間存在生殖隔離"區(qū)分開來。1．科學(xué)家經(jīng)過多年的努力，創(chuàng)立了一種新興生物技術(shù)—-基因工程。實(shí)施該工程的最終目的是（）A．定向提取生物體的DNA分子B．定向地對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”C．在生物體外對(duì)DNA分子進(jìn)行改造D．定向地改造生物的遺傳性狀D［該題的關(guān)鍵詞是“最終目的”，A、B、C三項(xiàng)都是基因工程的技術(shù)手段，這些手段的目的是定向改造生物的遺傳性狀，故選D項(xiàng)。]2．下列敘述符合基因工程概念的是()A．在細(xì)胞內(nèi)將DNA進(jìn)行重組，賦予生物新的遺傳特性B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒上后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C．用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D．自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上B[基因工程是在生物體外將DNA進(jìn)行重組,賦予生物以新的遺傳特性,A錯(cuò)誤；B項(xiàng)符合基因工程的概念；C項(xiàng)屬于誘變育種;D項(xiàng)外源基因?qū)爰?xì)菌不是人為操作的，不屬于基因工程的范疇。]基因工程的工具酶背景材料［思考交流]1．DNA分子中磷酸與脫氧核糖是如何連接的？該化學(xué)鍵的名稱是什么？提示：DNA分子中磷酸與脫氧核糖交替連接。其中同一核苷酸內(nèi)部磷酸與脫氧核糖的5號(hào)碳相連,相鄰兩核苷酸之間磷酸與3號(hào)碳相連。連接形成的化學(xué)鍵叫磷酸二酯鍵。2．限制酶的作用特點(diǎn)是什么？所識(shí)別的序列有何特點(diǎn)?作用后的結(jié)果有哪兩種形式？提示:(1)一種限制酶只能識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并在特點(diǎn)的位點(diǎn)上切割DNA分子。(2)限制酶所識(shí)別的序列一般都具有反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的特點(diǎn)。（3）黏性末端和平末端.3．DNA連接酶的作用是什么？提示：將具有相同或互補(bǔ)黏性末端以及具有平末端的DNA片段之間的磷酸二酯鍵連接起來“縫合"成新的DNA分子。［歸納總結(jié)]1．限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶）(1）來源主要從原核生物中分離純化而來。（2)特點(diǎn)①具有專一性，表現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：a．能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定的核苷酸序列；b．切割特定序列中的特定位點(diǎn).②大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸組成，但也有少數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列由4、5或8個(gè)核苷酸組成。(3）識(shí)別序列的特點(diǎn)呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱，無論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線（如圖），中心軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向、對(duì)稱、重復(fù)排列的。如以中心線為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱；為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。中軸線（4)作用結(jié)果：限制酶切割DNA產(chǎn)生的DNA末端有黏性末端和平末端兩種形式.①黏性末端是限制性核酸內(nèi)切酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)形成的,如圖所示：②平末端是限制性核酸內(nèi)切酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開時(shí)形成的，如圖所示:特別提醒：1限制酶是一類酶而不是一種酶。2限制酶作用于磷酸二酯鍵，而不是氫鍵。3不同種類的限制酶識(shí)別的序列與切割的位點(diǎn)不同,這與酶的專一性是一致的。4在切割含目的基因的DNA分子時(shí)，需用限制酶切割2次，產(chǎn)生4個(gè)末端。只有這樣，才能使目的基因的兩端都有可連接的末端。5限制酶的識(shí)別序列與被作用的DNA序列是不同的。前者一般由6個(gè)核苷酸組成，少數(shù)由4、5或8個(gè)核苷酸組成；后者是雙鏈序列.6判斷兩個(gè)末端是否為同一種限制酶切割產(chǎn)生的方法：將其中一個(gè)末端旋轉(zhuǎn)180°，若與另一個(gè)完全相同，則說明這兩個(gè)末端是由同一種限制酶切割產(chǎn)生的。2．DNA連接酶（1)作用：將切下來的DNA片段拼接成新的DNA分子。(如圖)DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,不是在單個(gè)核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。(2）DNA連接酶的種類和特點(diǎn)種類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源大腸桿菌T4噬菌體特點(diǎn)只能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端,但連接平末端之間的效率較低（3)DNA連接酶與DNA聚合酶的比較項(xiàng)目DNA連接酶DNA聚合酶作用實(shí)質(zhì)都是催化形成磷酸二酯鍵是否需要模板不需要需要連接DNA鏈雙鏈單鏈作用過程在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵將單個(gè)核苷酸加到已存在的核酸片段的3′端的羥基上，形成磷酸二酯鍵作用結(jié)果將兩個(gè)DNA片段連接成重組DNA分子合成新的DNA分子特別提醒：DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口連接起來，因此DNA連接酶不需要模板.兩個(gè)DNA片段要具有互補(bǔ)的黏性末端才能通過DNA連接酶拼接起來；平末端只能用T4DNA連接酶連接。(4)DNA連接酶與限制性核酸內(nèi)切酶的比較①區(qū)別作用應(yīng)用限制性核酸內(nèi)切酶使特定部位的磷酸二酯鍵斷裂用于提取目的基因和切割載體DNA連接酶在DNA片段之間重新形成磷酸二酯鍵用于目的基因和載體的連接②聯(lián)系1．下表所示為常用的限制酶及其識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，由此推斷以下說法，正確的是(）注:Y＝C或T，R＝A或G。A．限制酶切割后不一定形成黏性末端B．限制酶的切割位點(diǎn)一定在識(shí)別序列的內(nèi)部C．不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端D．一種限制酶一定只能識(shí)別一種核苷酸序列A[由表中信息可知，HindⅡ能識(shí)別4種不同的核苷酸序列;Sau3AⅠ酶的切割位點(diǎn)在識(shí)別序列的外部；BamHⅠ酶與Sau3AⅠ酶切割后能形成相同的黏性末端；SmaⅠ酶切割后產(chǎn)生的是平末端。]2．下列有關(guān)DNA連接酶的敘述，正確的是（）A．T4DNA連接酶只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間連接起來B．E·coliDNA連接酶能將雙鏈DNA片段平末端之間進(jìn)行連接C．DNA連接酶能恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵D．DNA連接酶可連接DNA雙鏈的氫鍵，使雙鏈延伸C［DNA連接酶能使兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,從而將它們連接起來。E·coliDNA連接酶只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間連接起來，不能將雙鏈DNA片段平末端之間進(jìn)行連接。T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。]基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”背景材料下圖為大腸桿菌及質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)模式圖：[思考交流]1．a(chǎn)代表的物質(zhì)和質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)都是________，都能進(jìn)行自我復(fù)制。提示：DNA2．若某目的基因切割末端為，則與之相連的質(zhì)粒上至少有一段核苷酸序列為________。該質(zhì)粒DNA分子的切割末端為________，可使用DNA連接酶把質(zhì)粒和目的基因連接在一起.提示：3．氨芐青霉素抗性基因，能控制某物質(zhì)的合成,該物質(zhì)能抵抗氨芐青霉素，使含有該基因的生物能在含氨芐青霉素的環(huán)境中存活。氨芐青霉素抗性基因在質(zhì)粒DNA上稱為________，其作用是____________________。提示：標(biāo)記基因供重組DNA的鑒定和選擇[歸納總結(jié)]1．載體的作用(1)作為運(yùn)載工具，將目的基因運(yùn)送到受體細(xì)胞中去。(2）在宿主（寄主）細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制和穩(wěn)定保存.2．作為載體必須具備的條件（1）載體DNA必須有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便目的基因插入.(2）能夠在受體細(xì)胞中保留下來，且載體DNA必須具備自我復(fù)制能力，或能夠整合到受體細(xì)胞染色體DNA上，并隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制。(3）載體必須帶有特殊的標(biāo)記基因,以便重組后進(jìn)行重組DNA的鑒定和篩選。常用的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、熒光蛋白基因等。(4)對(duì)受體細(xì)胞無害,不影響受體細(xì)胞正常的生命活動(dòng)。3．常用種類種類用途質(zhì)粒將外源基因載入大腸桿菌等受體細(xì)胞λ噬菌體的衍生物植物病毒將外源基因載入植物細(xì)胞動(dòng)物病毒將外源基因載入動(dòng)物細(xì)胞特別提醒：1基因工程中的載體與細(xì)胞膜上物質(zhì)運(yùn)輸?shù)妮d體不同，前者的實(shí)質(zhì)是DNA分子，能將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,后者是蛋白質(zhì)，與細(xì)胞膜的選擇透過性有關(guān)。2一般來說，天然載體不能同時(shí)滿足上述條件，要對(duì)其進(jìn)行人工改造才可以使用。1．質(zhì)粒是基因工程中最常用的目的基因運(yùn)載工具。下列有關(guān)敘述正確的是(）A．質(zhì)粒是只存在于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能自主復(fù)制的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子B．在所有的質(zhì)粒上總能找到一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)C．?dāng)y帶目的基因的重組質(zhì)粒只有整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上才會(huì)隨后者的復(fù)制而復(fù)制D．質(zhì)粒上的抗性基因常作為標(biāo)記基因供重組DNA的鑒定和選擇[答案]D2．下列有關(guān)基因工程的工具的敘述，正確的是(）A．基因工程的載體都是質(zhì)粒B．限制酶和其他酶一樣具有專一性，只能識(shí)別特定的核苷酸序列C．λ噬菌體的衍生物可以作為動(dòng)物基因工程的載體D．天然質(zhì)粒均可以直接用作載體將目的基因送入受體細(xì)胞B[基因工程中最常用的載體是質(zhì)粒，此外還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等；λ噬菌體的衍生物不可作為動(dòng)物基因工程的載體；天然質(zhì)粒往往不能直接作為載體，要根據(jù)不同的目的和需求進(jìn)行人工改造。］[課堂小結(jié)］知識(shí)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建核心語句歸納1.基因工程突破了生殖隔離,實(shí)現(xiàn)了不同種生物間的基因重組。2．不同生物基因能拼接在一起的理論基礎(chǔ)是，DNA分子都是由4種脫氧核苷酸構(gòu)成的規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu).3．外源DNA能在受體細(xì)胞表達(dá)的理論基礎(chǔ)是密碼子的通用性。4．DNA重組技術(shù)的基本工具有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和使基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體。5．限制性核酸內(nèi)切酶可識(shí)別雙鏈DNA分子特定的核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)上切割。6．DNA連接酶根據(jù)來源不同可分為E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶.E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端，而T4DNA連接酶既能連接黏性末端也能連接平末端。7．在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。1．下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是(）A．質(zhì)粒是廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀細(xì)胞器B．質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能自主復(fù)制的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子C．質(zhì)粒只有在侵入受體細(xì)胞后才能復(fù)制D．細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過程一定是在受體細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行的B[質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的小型雙鏈環(huán)狀DNA分子.質(zhì)粒在受體細(xì)胞和自身細(xì)胞內(nèi)均能自我復(fù)制。]2．下列關(guān)于DNA連接酶作用的敘述，正確的是（)A．將單個(gè)核苷酸加到某個(gè)DNA片段的末端,形成磷酸二酯鍵B．將斷開的2個(gè)DNA片段的骨架連接起來，重新形成磷酸二酯鍵C．連接2條DNA鏈上堿基之間的氫鍵D．只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端連接起來,而不能將兩者之間的平末端進(jìn)行連接B[DNA連接酶和DNA聚合酶都是催化2個(gè)脫氧核苷酸分子之間形成磷酸二酯鍵。但DNA連接酶是在2個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,將2個(gè)DNA片段連接成重組DNA分子；DNA聚合酶是將單個(gè)的核苷酸分子加到已存在的核酸片段上形成磷酸二酯鍵，合成新的DNA分子。]3．現(xiàn)有一長度為1000個(gè)堿基對(duì)(bp）的DNA分子，用限制酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是1000bp，用KpnⅠ單獨(dú)酶切后得到400bp和600bp兩種長度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同時(shí)酶切后得到200bp和600bp兩種長度的DNA分子。如圖所示，該DNA分子的酶切圖譜正確的是（）D［該DNA分子用限制酶EcoRⅠ切割后長度不變，可知該DNA分子為環(huán)狀結(jié)構(gòu),根據(jù)EcoRⅠ、KpnⅠ的作用特點(diǎn)，可知酶切圖譜為D項(xiàng)所示.］4．目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于____________________________。（2)pBR322分子中有單個(gè)EcoRⅠ限制酶作用位點(diǎn)，EcoRⅠ只能識(shí)別序列-GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基