環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗證課件

環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗證

耳輪第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測第三部分：設備清潔本章內容：

我們已經走得太遠，以至于忘記了為什么而出發(fā)。

黎巴嫩紀伯倫（1883～1931）心得：表面擦拭手工噴霧蒸汽熏蒸（熱過程）干霧消毒、滅菌（冷處理）房間消毒的方法一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。在越來越“以人為本”和“環(huán)境保護”的今天，應該格外關注“甲醛”和“臭氧”等氣體消毒劑的不良影響。熏蒸熏蒸（fumigating）滅菌概念：這一標準于1980起收錄于USP

，如今已為世界各國普遍接受和采用。在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學毒劑由固態(tài)或液態(tài)迅速轉成氣態(tài)滲透到生物體內，使生物致死。熏蒸有助于降低潔凈區(qū)內死角的微生物污染。

熏蒸消毒：

消毒滅菌時間：

12小時接觸時間（通常推薦）。排氣、通風時間：

24小時。一個漫長過程。甲醛熏蒸：殺菌徹底，廣譜可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。對霉菌也有極強的殺滅作用。無殘留，是一種無污染的消毒劑。臭氧是氣體滅菌，能迅速彌漫到整個滅菌空間，滅菌無死角。

臭氧滅菌3.1.7.4注意事項

(1)臭氧對人有毒，國家規(guī)定大氣中允許濃度為

0.2mg/m3。

(2)臭氧為強氧化劑，對多種物品有損壞，濃度越高對物品損害越重，可使銅片出現(xiàn)綠色銹斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、斷裂，使織物漂白褪色等。使用時應注意。

(3)多種因素可影響臭氧的殺菌作用，包括溫度、相對濕度、有機物、pH、水的渾濁度、水的色度等。使用時應加以控制。

臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術規(guī)范2002（4）酸類：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。（5）氧化劑：作用于細菌酶系統(tǒng)。如0.2-0.5%過氧乙酸、高錳酸鉀、過氧化氫和臭氧等。（6）表面活性劑：作用于細菌質膜，主要用于表面消毒、浸潤消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新潔爾滅、0.05-0.1%杜滅芬、0.1-0.2%洗必泰。消毒劑：過氧化氫和過氧乙酸消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)介紹一種消毒劑和消毒方式干霧：小液滴會反彈不會破碎。大液滴破碎而濕滑表面。生產7.5μm的液滴像氣體性質

反彈離開表面不濕潤接觸的表面空間分布均勻，符合布朗運動原理。干霧系統(tǒng)潔凈區(qū)生物負荷研究（風險分析）潔凈區(qū)操作人員行為的規(guī)范規(guī)范潔凈區(qū)操作人員的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的！潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持細菌數(shù)：在細菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)=細菌數(shù)+真菌數(shù)微生物總數(shù)細菌、真菌培養(yǎng)基：細菌培養(yǎng)基上生長的真菌如何計數(shù)？真菌培養(yǎng)基上生長的細菌如何計數(shù)？微生物計數(shù)的困惑

！定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上生長的包括真菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時間：1、細菌：30～35℃5天。

2、細菌：30～35℃2天；霉菌或酵母菌：20～25℃3天?？偤醚跷⑸飻?shù)（TAMC）：1、TAMC時，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長，應該被作為TAMC計數(shù)的一部分。2、TYMC時，如果細菌被發(fā)現(xiàn)生長，應該被作為TYMC計數(shù)的一部分。3、當TYMC由于細菌的生長而超過了可接受標準，應當使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。計數(shù)原則：潔凈室環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的選擇？

（關鍵區(qū)域使用培養(yǎng)基的特殊要求）潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標準（GMP2011版）《中國藥典》2010年版二部

附錄XIXQ“藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則”用于環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應進行100%的預培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結果。附錄B:B.3培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標準執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期的標記。

GB/T16293-2010/GB/T16293-20101、TSA用于細菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時間：30～35℃

不少于2天。2、SDA用于霉菌和酵母菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時間：20～25℃不少于5天。環(huán)境測試培養(yǎng)基：3、用戶認可并驗證了的培養(yǎng)基。以上摘自：GB/T16293-2010GB/T16294-2010環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇環(huán)境監(jiān)測中常忽視的兩個方面：（1）API的殘留（2）消毒劑/殺孢子劑的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素抗菌素藥物活性成分API

消毒劑/殺孢子劑常見的化學消毒劑：1、酚類2、醛類3、過氧化氫類4、季胺鹽類化合物5、以上混合物（1）選擇性低下，營養(yǎng)全面（2）含有中和劑（3）“無菌”平板培養(yǎng)基2、忽視培養(yǎng)基的選擇營養(yǎng)瓊脂胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基的選擇參見：“中國藥典”2010年版附錄109頁附錄XIJ表1：“常見干擾物中和劑或滅活方法”中和劑的使用：青霉素酶（β-內酰胺酶）

可以有效的水解β-內酰胺類抗生素。

包括：

-青霉素G-氨基青霉素類，如氨芐西林、阿莫西林、匹氨西等

-羧基青霉素類，如羧芐西林、替卡西林等

-脲基青霉素類，如呋芐西林、美洛西林等

-頭孢Ⅰ、Ⅱ酶（1）：青霉素酶頭孢菌素酶

可以有效水解頭孢類抗生素Ⅲ及以上的頭孢類抗生素。

包括：頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松等。

酶（2）：頭孢菌素酶抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-80

能夠消除六氯酚和含汞類消毒劑的影響。2、卵磷脂能夠消除洗必泰類消毒劑的影響。3、卵磷脂、吐溫-80

能夠消除季胺類化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響。

無菌平板培養(yǎng)基（預灌裝無菌培養(yǎng)基）理想的環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、A級、B級、C級潔凈區(qū)直接使用2、室溫儲存3、有效期長4、無菌包裝、包裝完整5、特制平板6、培養(yǎng)基灌裝量大無菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點：55mm接觸平板（RodacPlate）

ReplicateOrganismDetectionandCounting

GMP2011和EUGMP:-平板尺寸：15X55mm-取樣單位面積：25cm2

接觸板的取樣面積：24～30cm2

USP〈1116〉

潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物評估

取樣面積：不小于20cm2

。取樣方法：

采樣時培養(yǎng)基表面應與采樣點接觸不少于10s，向整個接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運動，裝置有接觸并拿開后，要加蓋并盡快用適當?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。ISO14698潔凈室及其相關控制環(huán)境目前各類官方的指導原則中，很少有對潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測方法提出要求的。目前各類官方的指導原則中，各種微生物只有生長在如下兩種固體表面上的測試方法：瓊脂培養(yǎng)基和濾膜，才能夠得到確認。潔凈環(huán)境微生物檢測：方法確認培養(yǎng)基就是微生物檢驗員的“分析儀器”。培養(yǎng)基的質量控制相當于“培養(yǎng)基驗證”。培養(yǎng)基=“分析儀器”TSATSA+吐溫80+卵磷脂TSA+酶關鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基：第三部分：設備清潔第一百四十三條清潔方法應當經過驗證，證實其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗證應當綜合考慮設備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應的取樣回收率、殘留物的性質和限度、殘留物檢驗方法的靈敏度等因素。GMP2011年版：一、FDA對設備清潔“警告信”匯總二、清潔驗證的關注點

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗證？

4、日常監(jiān)控如何實施？1、沒有定期對設備和器具進行清潔與維護，有可能造成污染，并對藥品的安全性、鑒別特性、濃度/效價、質量和純度造成影響。FDA關于設備潔凈“警告信”統(tǒng)計：2、生產中所用的設備（包括器具）的清潔維護沒有建立完善的規(guī)程。FDA關于設備潔凈“警告信”統(tǒng)計：3、沒有保存藥品生產中所用設備的維護、清潔、消毒和檢查記錄，無設備清潔、維護使用的記錄，包括日期及使用時間。FDA關于設備潔凈“警告信”統(tǒng)計：寫好要做的做好所寫的記好所做的“GMP”口號：二、清潔驗證的關注點

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗證？

4、日常監(jiān)控如何實施？活性成分殘留輔料殘留物（非水溶性）清潔劑和溶劑殘留生物細胞及代謝物殘留微生物潤滑油殘留物分類：制劑殘留關注點：二、清潔驗證的關注點

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗證？

4、日常監(jiān)控如何實施？1、實際的2、可以被驗證的3、可實現(xiàn)的4、能夠經得起科學推敲的限度和可接受標準制定原則：PDA技術報告：1998增刊52卷第6號1、目檢（肉眼檢測）2、化學檢驗3、微生物檢驗限度規(guī)格制定的三個層面：原則：目檢不得有可見殘留。是直觀、定性、簡單評估清潔的方式經驗數(shù)據(jù)：目見能發(fā)現(xiàn)最低的殘留物限度是1～4μg/cm2這是換品種生產時設備清潔的最低標準！1、肉眼檢測限度：該種方法不適用于高效、低劑量的產品。1)殘留物濃度限度：10X10-6(百萬分之十)2)生物活性度：正常治療劑量的1/10003)殘留溶劑限度標準2、化學檢驗—殘留物限度的確定10X10-6/百萬分之十/10ppm含義：上批產品殘留在設備里的物質全部溶解到下批產品中的濃度限度≤10X10-6

檢測：最終沖洗水中殘留物的濃度限度

≤10X10-6（1）殘留物濃度限度正常治療劑量的1/1000含義：最低日治療劑量（MTDD）的1/1000檢測：

MTDD=

每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)允許殘留物總量（μg/cm2

）=

MTDDX最小生產批量X1000

單個制劑質量X每日最多使用制劑數(shù)X設備內表面積（2）生物活性度（安全系數(shù)）：

可用于清洗的化學溶劑(三級溶劑)在下批生產中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.5%。（3）殘留溶劑限度標準：特殊產品，如致敏性產品（青霉素、頭孢類）或高活性產品在使用最好的檢測手段的前提下，不應被檢出。實際上意味著對于這類產品需要采用專用生產設施。特殊產品的限度：二、清潔驗證的關注點

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗證？

4、日常監(jiān)控如何實施？分析方法、取樣方法、以及殘留限度的關系取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收率或其它取樣工具的回收率。必須對以上因素的關聯(lián)性的進行評價。設備清洗的正確評價：專屬的方法只能檢測到其關心的殘留物，其他的殘留物不會被檢測到?；钚猿煞謱俚那鍧嵭Ч麢z測方法，可能只能檢測到單一的活性成分殘留物。制劑生產的清潔驗證都要用專屬的測試方法進行檢測。

（1）專屬性的分析方法非專屬的方法將能夠檢測到許多不同的殘留物。非專屬的方法可以用于原料藥生產的早期階段，或者作為日