藥物分析第八章課件

藥物分析第八章對氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析內(nèi)容一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二、鑒別試驗三、特殊雜質(zhì)與檢查四、含量測定對氨基苯甲酸酯類局麻藥物：酯鍵

酰苯胺類局麻藥物：酰胺鍵1.結(jié)構(gòu)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（1）對氨基苯甲酸酯類苯佐卡因（Benzocaine）

鹽酸普魯卡因（ProcaineHydrochloride）

鹽酸氯普魯卡因（ChloroprocaineHydrochloride）

鹽酸丁卡因（TetracaineHydrochloride）鹽酸利多卡因lidocainehydrochloride鹽酸羅哌卡因ropivacainehydrochloride鹽酸布比卡因bupivacainehydrochloride（2）酰苯胺類1）芳伯氨基特性對氨基苯甲酸酯類藥物芳伯氨基：重氮化-偶合反應(yīng)；“芳香第一胺類”芳醛縮合成Schiff堿反應(yīng)；易氧化變色。酰苯胺類藥物:不易水解，通常不顯芳伯氨基特性反應(yīng)。2.理化性質(zhì)鹽酸普魯卡因：猩紅色苯佐卡因：→橙紅色3）弱堿性脂烴胺側(cè)鏈均為叔胺氮原子（除苯佐卡因外）， 具有：有機(jī)弱堿性

存在形式：鹽酸鹽

改善水溶性、穩(wěn)定性游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑；4）與重金屬離子反應(yīng)特性酰苯胺類藥物：

酰胺基上氫解離，酰胺氮原子與過渡金屬銅離子或鈷離子配位，生成有色的配位化合物沉淀，可溶于三氯甲烷。酰胺-烴胺氮原子與金屬離子配位顯色5）吸收光譜特性UVIR6）其他特性基于對氨基苯甲酸酯和酰苯胺類藥物分子結(jié)構(gòu)特點，其游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑，其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。芳伯氨基苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸普魯卡因胺本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）

NaNO2/HCl堿性β-萘酚有色偶氮染料（橙黃到猩紅色）二、鑒別試驗（一）重氮化-偶合反應(yīng)

芳伯氨基和潛在芳伯氨基芳香第一胺類鑒別試驗取供試品約50mg，加稀鹽酸1ml,必要時緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。鹽酸普魯卡因猩紅色潛在芳伯氨基:鹽酸或硫酸加熱水解→NaNO2/HCl→堿性β-萘酚→有色偶氮染料（紅色）對乙酰氨基酚：取本品約0.1g，加稀鹽酸5ml，置水浴中加熱40分鐘，放冷；取0.5ml，滴加亞硝酸鈉試液5滴，搖勻，用水3ml稀釋后，加堿性β-萘酚試液2ml，振搖，即顯紅色。區(qū)別鹽酸丁卡因與芳伯氨基藥物區(qū)別

乳白色沉淀與銅和鈷離子反應(yīng)硫酸銅/碳酸鈉試液→藍(lán)紫色配合物→顯黃色（溶于三氯甲烷）（二）與金屬離子反應(yīng)酰芳胺-烴胺氮原子與金屬離子絡(luò)合顯色鹽酸利多卡因氯化鈷/酸性溶液→亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀↓2.與汞離子反應(yīng)黃色紅色或橙黃色酰芳胺類：鹽酸利多卡因硝酸汞/硝酸，煮沸對氨基苯甲酸酯類：苯佐卡因硝酸汞/硝酸，煮沸取本品約0.1g，加水2ml溶解后，加10％氫氧化鈉溶液1ml，即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗铮焕^續(xù)加熱，產(chǎn)生的蒸氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。鹽酸普魯卡因ChP（2015）苯佐卡因ChP（2015）取本品約0.1g，加氫氧化鈉試液5ml，煮沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。硫氰酸鹽鹽酸丁卡因丁卡因硫氰酸鹽mp.131℃取本品約0.1g，加5％醋酸鈉溶液10ml溶解后，加25％硫氰酸銨溶液1ml，即出白色結(jié)晶；濾過，結(jié)晶用水洗滌，在80℃干燥，依法測定（附錄ⅥC），熔點約為131℃。（五）吸收光譜特征取本品，精密稱定，按干燥品計算，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1ml中約含0.40mg的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在263nm與271nm的波長處有最大吸收；其吸光度分別為0.530.58與0.430.48。鹽酸布比卡因UV（ChP2015）鹽酸普魯卡因IR（氯化鉀壓片）峰位（cm-1）歸屬3315,3200νNH2（伯胺）2585νN+-H（胺基）1692νC=O（酯羰基）1645δN-H（胺基）1604,

1520νC=C（苯環(huán)）1271,1170,1115νC-O（酯基）水解特性對氨基苯甲酸酯類藥物中酯鍵，易水解:三、特殊雜質(zhì)檢查影響藥物水解的因素：光、熱或堿性條件苯佐卡因、鹽酸普魯卡因?qū)Π被郊姿幔≒ABA）

鹽酸氯普魯卡因

4-氨基-2-氯苯甲酸

鹽酸丁卡因?qū)Χ“被郊姿幔˙ABA）

形成特殊雜質(zhì)（一）鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查雜質(zhì)來源：水解產(chǎn)生對氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇

對氨基苯甲酸的化學(xué)變化：

結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃，療效下降，毒性增加原料藥及注射用滅菌粉末中雜質(zhì)限量：0.5%注射液中雜質(zhì)限量：

1.2%檢查方法HPLC雜質(zhì)對照品法流動相：0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇（68∶32）

檢測波長：279nm固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠系統(tǒng)適用性試驗理論板數(shù)按對氨基苯甲酸峰計算不低于2000

鹽酸普魯卡因峰和對氨基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于2.0外標(biāo)法以峰面積計算（二）鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)的檢查鹽酸氯普魯卡因易水解生成：4-氨基-2-氯苯甲酸降解產(chǎn)物USP34-NF29：HPLC原料藥中雜質(zhì)限量：

0.625%注射液中雜質(zhì)限量：

3.0%鹽酸氯普魯卡因注射液中光照前存在的雜質(zhì)及其質(zhì)譜圖鹽酸氯普魯卡因注射液經(jīng)光照后產(chǎn)生的雜質(zhì)及其質(zhì)譜圖（三）鹽酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查雜質(zhì)來源：水解產(chǎn)生檢查方法：HPLC雜質(zhì)對照品法鹽酸利多卡因lidocainehydrochloride（四）鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查長效酰胺類局麻藥術(shù)后鎮(zhèn)痛R-心臟毒性較大S-鹽酸羅哌卡因?qū)τ丑w臨床應(yīng)用鹽酸羅哌卡因ropivacainehydrochloride毛細(xì)管電泳方法：USP34-NF29規(guī)定：供試品中R-鹽酸羅哌卡因的限量不得超過0.5%背景電解質(zhì)溶液：H3PO4

（pH2.93.1

）

運行緩沖液：背景緩沖液+2,6-二-O-甲基-β-環(huán)糊精系統(tǒng)適用性溶液：S-鹽酸羅哌卡因及R-鹽酸羅哌卡因標(biāo)準(zhǔn)品1.分析溶液配制供試品溶液：S-鹽酸羅哌卡因樣品

供試品稀釋溶液

鹽酸羅哌卡因光學(xué)雜質(zhì)的HPCE檢查A.光學(xué)異構(gòu)體RS分離系統(tǒng)適用性測試圖；B.添加1.0%R雜質(zhì)的供試品檢測圖石英毛細(xì)管柱：50μm×72cm電泳條件系統(tǒng)溫度：30℃

施加電壓：500V/s的速度最后穩(wěn)定至375V/cm

電流：40～45μA檢測波長：206nm系統(tǒng)適用性試驗R-及S-鹽酸羅哌卡因的相對遷移時間分別約為0.96和1.0分離度（R）不少于3.7分析時間約為30分鐘供試品稀釋溶液的電泳分析：

信噪比不小于10容量分析法色譜法分光光度法亞硝酸鈉滴定法非水溶液滴定法四、含量測定Spectro-photometrysodiumnitritemethodnon-aqueoustitrimetryvolumetricanalysischromatography（一）亞硝酸鈉滴定法1.基本原理具芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基的藥物芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點。2.測定的主要條件＝注意事項（1）加入適量KBr加速反應(yīng)KBr為催化劑在鹽酸存在下，重氮化反應(yīng)的機(jī)制為：NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2O∵K1≈300K2加入KBr，可增大被測溶液中NO+的濃度，所以能加快重氮化反應(yīng)速度。（2）酸的種類及其濃度在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為：HBr＞HCl＞H2SO4

＞HNO3鹽酸：1︰2.5～6

加入過量鹽酸：1）重氮化反應(yīng)速度加快；2）重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定；3）防止生成偶氮氨基化合物，而影響測定結(jié)果酸度加大，反應(yīng)向左進(jìn)行，故可防止偶氮氨基化合物的生成。若酸度過大，又可阻礙芳伯氨基的游離，反而影響重氮化反應(yīng)速度。在太濃的鹽酸中還可使亞硝酸分解。芳胺類藥物與酸的摩爾比為1︰2.56。

（3）反應(yīng)溫度重氮化反應(yīng)的速度與溫度成正比，但是生成的重氮鹽又隨溫度升高而加速分解。一般地，溫度每升高10℃，重氮化反應(yīng)速度加快2.5倍，但同時重氮鹽分解的速度亦相應(yīng)地加速2倍；所以滴定一般在低溫下進(jìn)行。由于低溫時反應(yīng)太慢，經(jīng)試驗，可在室溫（1030℃）下進(jìn)行，其中15℃以下結(jié)果較準(zhǔn)確。（4）滴定速度

先快后慢滴定管尖端插入液面下2/3處，滴定液一次大部分放下，然后將滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再緩緩滴定

。尤其是在近終點時，因尚未反應(yīng)的芳伯氨基藥物的濃度極稀，須在最后一滴加入后，攪拌15分鐘，再確定終點是否真正到達(dá)。

3.指示終點的方法（1）永停滴定法ChP（2015）E和E′為兩個惰性鉑（Pt）電極，G為電流計，R與電流計臨界阻尼電阻值近似，R1為2k可調(diào)電阻，R2電阻值為60～70，B為1.5V干電池用作重氮化法的終點指示時，先將電極插入供試品的鹽酸溶液中，調(diào)節(jié)R1使加在電極上的電壓約為50mV。滴定過程中，觀察滴定過程中電流計指針的變化。終點前，溶液中無亞硝酸，線路無電流通過，電流計指針指零；終點時溶液中有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反應(yīng)，線路中遂有電流通過，此時電流計指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點。（2）電位法USP（3）外指示劑法

KI—淀粉糊劑或試紙2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O（4）內(nèi)指示劑法中性紅不可逆指示劑4.滴定法

鹽酸普魯卡因ChP（2015）取本品約0.6g，精密稱定，照永停滴定法（附錄ⅦA），在15～25℃，用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。（二）非水溶液滴定法本類藥物中的分子結(jié)構(gòu)含有弱堿性氮原子，具弱堿性。溶劑：冰醋酸與醋酐溶液滴定劑：高氯酸（0.1mol/L）指示滴定終點方法：電位法加入適量醋酐的作用

在冰醋酸與醋酐溶液中，醋酐解離生成的醋酐合乙酰氧離子比醋酐合質(zhì)子的酸性還強(qiáng)，有利于布比卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突躍敏銳。鹽酸布比卡因的含量測定取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸20ml與醋酐20ml溶解后，照電位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于32.49mg的C18H28N2OHCl。鹽酸布比卡因非水滴定法反應(yīng)過程如下：鹽酸丁卡因的含量測定ChP2015采用乙醇作為溶劑的非水溶液酸堿滴定法取本品約0.25g，精密稱定，加乙醇50ml振搖使溶解，加0.01mol/L鹽酸溶液5ml，搖勻，照電位滴定法，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，兩個突躍點體積的差作為滴定體積。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于30.08mg的C15H24N2O2HCl。（三）紫外分光光度法紫外分光光度法測定注射用鹽酸丁卡因的含量

（ChP2015）取本品10瓶，分別加水溶解，并分別定量轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供