2010998疫苗研發(fā)技術(shù)

..新型冠狀病毒疫苗及其治療特效藥摘要：疫苗在疾病預(yù)防中的地位日益重要,對(duì)疫苗質(zhì)量的要求也日益提高。近年來,在傳統(tǒng)和新型疫苗的制備中,應(yīng)用先進(jìn)的分離純化技術(shù)是提高疫苗效力降低副反應(yīng)的有效手段。綜述了我國疫苗制品研發(fā)過程、疫苗市場(chǎng)與疫苗生產(chǎn)企業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀,指出了我國疫苗產(chǎn)業(yè)的市場(chǎng)前景與發(fā)展方向。研究目的新型冠狀病毒概述一種類SARS病毒〔以下均簡稱為SSARS與SARS〔非典型性肺炎病毒屬同一家族,是一種新型冠狀病毒。冠狀病毒屬巢狀病毒目,冠狀病毒科,主要分為α,β、γ三個(gè)屬,α,β屬僅對(duì)哺乳動(dòng)物致病,γ屬主要引起鳥類感染,人類冠狀病毒主要通過直接接觸分泌物或經(jīng)氣溶膠、飛沫傳播。也有證據(jù)表明可經(jīng)糞口途徑傳播。病例概況20XX初,一名沙特籍60歲男子在荷蘭死亡。20XX9月,英國衛(wèi)生防護(hù)局向世界衛(wèi)生組織報(bào)告,一名在英國就醫(yī)的卡塔爾男子患有急性呼吸道感染。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn),病人攜帶一種新型冠狀病毒。研究人員對(duì)比從年初沙特死者肺部組織提取的病毒樣本和卡塔爾男子的病毒樣本,發(fā)現(xiàn)兩種病毒相似度達(dá)99.5%。20XX9月24日,世界衛(wèi)生組織給予證實(shí)。過去3個(gè)月曾在中東發(fā)現(xiàn)了一系列患有嚴(yán)重呼吸道疾病的病例,但還沒有證據(jù)顯示這些病例是由新型病毒引起。20XX9月25日,丹麥發(fā)現(xiàn)5名疑似感染新型冠狀病毒患者。登塞大學(xué)醫(yī)院院長延斯·彼得·斯蒂森說："世界衛(wèi)生組織日前發(fā)出了發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒的警告,這種病毒和SARS病毒同屬一個(gè)家族。為此,我們正在對(duì)這5名患者進(jìn)行病毒測(cè)試,預(yù)計(jì)26日下午可獲得測(cè)試結(jié)果。"研究目的此次研究的主要目的為研制出新型冠狀病毒的抗病毒疫苗以及治療特效藥以抑制病毒的傳播以及可能造成的類似SARS病毒全球范圍內(nèi)的大疫情。SSARS疫苗研發(fā)方案〔Ⅰ小鼠細(xì)胞培養(yǎng)疫苗實(shí)驗(yàn)階段細(xì)胞培養(yǎng)疫苗有細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗和細(xì)胞培養(yǎng)活疫苗兩類,前者多以強(qiáng)毒毒株培養(yǎng)增殖制造,后者則用弱毒毒株增殖生產(chǎn),兩者的制造程序既有相同之處,又有區(qū)別。由于病毒不同與疫苗性質(zhì)不同,所采用的細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)方法也有所不同。種毒與毒種繼代用于制苗用的種毒應(yīng)經(jīng)毒力、最小免疫量、安全性、無菌檢定合格,通常為凍干品,由國家指定的苗毒種保藏部門檢定分發(fā)。領(lǐng)取的種毒應(yīng)按規(guī)定在細(xì)胞繼代培養(yǎng)適應(yīng)后用作毒種,制苗用毒種應(yīng)按規(guī)定控制在一定代數(shù)以內(nèi),或?yàn)闈穸径痉N,或?yàn)閮龈啥痉N。細(xì)胞制備制造疫苗用的細(xì)胞大體為原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞兩類,根據(jù)病毒種類、疫苗性質(zhì)與工藝流程選擇不同的細(xì)胞。選擇的依據(jù)包括：病毒的適應(yīng)性高、毒價(jià)高、細(xì)胞來源方便、制備簡單、生命力強(qiáng)。如脊髓灰質(zhì)炎活疫苗選擇vero細(xì)胞；狂犬病弱毒細(xì)胞適應(yīng)疫苗采取BHK21細(xì)胞增殖病毒豬瘟兔化弱毒牛睪丸細(xì)胞疫苗采用犢牛睪丸原代細(xì)胞等。培養(yǎng)細(xì)胞和增殖病毒用的營養(yǎng)液又稱培養(yǎng)液,通常分為細(xì)胞培養(yǎng)用的生長液和病毒增殖用的維持液,兩者不同的之處通常只是生長液內(nèi)含有5%-10%的血清；維持液血清濃度為2%-5%。不同細(xì)胞所需的營養(yǎng)成分和生長條件不盡相同。目前常用的細(xì)胞培養(yǎng)方法為靜止培養(yǎng)和轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),至于微載體培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)在我國尚處于試驗(yàn)之中。接毒與收獲病毒接種培養(yǎng)有同步與異步之分,前者在細(xì)胞分裝同時(shí)或不久接種毒種,進(jìn)行培養(yǎng),如貓、犬傳染性腸炎疫苗<細(xì)小病毒>；后者在細(xì)胞形成單層后接種毒種,如流行性乙型腦炎細(xì)胞培養(yǎng)疫苗。通常在細(xì)胞形成單層后傾去培養(yǎng)液,按1%-2%量接種毒種,經(jīng)吸附后加入維持液繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),待出現(xiàn)70%-85%以上細(xì)胞病變時(shí)即可收獲。病毒培養(yǎng)液收獲時(shí)間和方法依疫苗性質(zhì)而定,可將培養(yǎng)瓶凍融數(shù)次后收集；或加入EDTA-胰蛋白酶液消化分散收??；或在病毒增殖培養(yǎng)過程中可收獲5-7次毒液,細(xì)胞毒液經(jīng)無菌檢驗(yàn)、毒價(jià)測(cè)定合格后供配苗用。病毒在易感動(dòng)物體內(nèi)可大量增殖,但在各器官組織、部位中增殖病毒的量卻有很大的差異,利用病毒增殖迅速、含毒量高的組織制造的疫苗稱為組織疫苗<tissuevaccine>。動(dòng)物組織疫苗包括動(dòng)物組織滅活疫苗和動(dòng)物組織弱毒活苗兩類,前者多數(shù)由強(qiáng)毒株制造,如豬瘟結(jié)晶紫疫苗、狂犬病羊腦組織疫苗；后者均以弱毒株生產(chǎn),如豬瘟兔化弱毒乳兔組織疫苗、牛瘟兔化弱毒組織疫苗等。動(dòng)物選擇動(dòng)物質(zhì)量直接影響到組織疫苗的質(zhì)量,特別是對(duì)疫苗的安全性和效力有著決定性的作用,動(dòng)物必須符合下列標(biāo)準(zhǔn)：<1>應(yīng)該是清潔級(jí)<二級(jí)>以上的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,即無規(guī)定的人獸共患性病原體動(dòng)物；<2>應(yīng)是對(duì)所接種病毒易感性高的動(dòng)物,即在品種、年齡和體重方面合乎要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。種毒與接種種毒既可用抗原性優(yōu)良、致死力強(qiáng)的自然毒株臟器組織毒或強(qiáng)毒株增殖培養(yǎng)物,也可用弱毒株組織毒種。無論何種種毒都須經(jīng)純粹、抗原性和免疫原性檢查合格后使用。接種途徑依病毒性質(zhì)和目的而異,例如豬瘟結(jié)晶紫苗,采取豬肌肉注射血液毒種；牛瘟兔化弱毒疫苗,以兔耳靜脈注射脾淋毒種；狂犬病疫苗,用兔腦毒種接種綿羊腦內(nèi)途徑感染。幾種動(dòng)物常用的接種途徑如下：1.腦內(nèi)注射：顱前后中線5mm平行線與瞳孔橫線交叉處。2.靜脈注射：家兔由耳靜脈注入；雞自翅下肢靜脈注入。3.肌肉注射：選擇腿部、胸部、臀部等肌肉豐滿處注射。4.皮下注射：家兔和豚鼠可選擇在腹部或后腿內(nèi)注射。5.腹腔注射：家兔與豚鼠可選腹股溝處刺入腹腔?！踩^察與收獲動(dòng)物在接種感染后應(yīng)每天觀察和檢查規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo),指標(biāo)或項(xiàng)目因不同病毒而異。常規(guī)觀察、檢查的項(xiàng)目如食欲、精神和活動(dòng)狀態(tài)、體溫、糞便、尿和血液變化等。根據(jù)觀察的征象和檢查的結(jié)果選出符合要求的發(fā)病動(dòng)物按規(guī)定方式剖殺,采取收集含毒量高的器官組織。如豬瘟結(jié)晶紫疫苗采取發(fā)病豬的血液制備；兔出血癥組織滅活疫苗采集病兔肝臟生產(chǎn)；狂犬病疫苗利用發(fā)病羊的羊腦組織制造。制苗1．組織滅活疫苗采取收獲的組織經(jīng)無菌檢驗(yàn)及毒價(jià)測(cè)定合格后,按規(guī)定比例加入平衡液和滅活劑〔甲醛、酚、結(jié)晶紫等制成勻漿,然后按不同病毒的滅活溫度、時(shí)間進(jìn)行滅活。如狂犬病疫苗配制按腦組織1:4加入含有甘油及1%酚蒸餾水,于360.5C滅活7天制成；豬瘟結(jié)晶紫疫苗配制,按血毒4份,結(jié)晶紫甘油溶液1份混合,于37C~38C滅活6~8天。2.弱毒組織疫苗在無菌操作下剔除臟器上的脂肪與結(jié)締組織等,稱重后剪碎,加入適最保護(hù)劑制成勻漿,然后濾過扣除殘?jiān)?再按濾液中的實(shí)際組織量計(jì)算稀釋倍數(shù),加入余量保護(hù)劑和青鏈霉素500~1000U<g/ml>,充分搖勻后置0~4C冷暗處處理一定時(shí)間后作無菌檢驗(yàn)與毒價(jià)測(cè)定。合格者進(jìn)行分裝,冷凍真空干燥制成凍干疫苗。疫苗檢定,測(cè)定有效性和安全性臨床前研究、臨床研究、生產(chǎn)、經(jīng)營方案臨床前及臨床研究表1臨床試驗(yàn)進(jìn)度表臨床試驗(yàn)臨床前研究向SFDA提出研發(fā)中新藥申請(qǐng)Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期向SFDA提出新藥申請(qǐng)SFDAⅣ期所需時(shí)間〔年3.5向FDA提出研發(fā)中新藥申請(qǐng)123向FDA提出新藥申請(qǐng)2.5共12SFDA要求的附加的上市后試驗(yàn)試驗(yàn)人群實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物試驗(yàn)向FDA提出研發(fā)中新藥申請(qǐng)20～80例健康志愿者100～300例病患志愿者1000～3000例病患試驗(yàn)者向FDA提出新藥申請(qǐng)過程審核/批準(zhǔn)SFDA要求的附加的上市后試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康脑u(píng)定藥物安全性和生物活性向FDA提出研發(fā)中新藥申請(qǐng)確定藥物安全性和劑量評(píng)估藥物有效性,尋找副作用驗(yàn)證藥物有效性,監(jiān)控長期使用的不良反應(yīng)向FDA提出新藥申請(qǐng)成功率5000種化合物被評(píng)估向FDA提出研發(fā)中新藥申請(qǐng)5種進(jìn)入臨床試驗(yàn)向FDA提出新藥申請(qǐng)1種被批準(zhǔn)新藥開發(fā)階段如下：臨床前試驗(yàn)：由制藥公司進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物研究,以觀察化合物針對(duì)目標(biāo)疾病的生物活性,同時(shí)對(duì)化合物進(jìn)行安全性評(píng)估。這些試驗(yàn)大概需要3.5年的時(shí)間。研發(fā)中新藥申請(qǐng)〔InvestigationalNewApplication,IND：在臨床前試驗(yàn)完成后,公司要向FDA提請(qǐng)一份IND,之后才能開始進(jìn)行藥物的人體試驗(yàn)。如果30天內(nèi)FDA沒有發(fā)出不予批準(zhǔn)的申明,此IND即為有效。提出的IND需包括以下內(nèi)容：先期的試驗(yàn)結(jié)果,后續(xù)研究的方式、地點(diǎn)以及研究對(duì)象；化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)；在體內(nèi)的作用機(jī)制；動(dòng)物研究中發(fā)現(xiàn)的任何毒副作用以及化合物的生產(chǎn)工藝。另外,IND必須得到制度審核部門〔theInstitutionalReviewBoard的審核和批準(zhǔn)。同時(shí),后續(xù)的臨床研究需至少每年向FDA提交一份進(jìn)展報(bào)告并得到準(zhǔn)許。臨床試驗(yàn),Ⅰ期：此階段大概需要1年時(shí)間,由20～80例正常健康志愿者參加。這些試驗(yàn)研究了藥物的安全性方面,包括安全劑量范圍。此階段的研究同時(shí)確定了藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄、以及藥物的作用持續(xù)時(shí)間等項(xiàng)目。臨床試驗(yàn),Ⅱ期：此階段需要約100到300名志愿患者參與進(jìn)行一些控制研究,以評(píng)價(jià)藥物的療效。這個(gè)階段大約需要2年時(shí)間。臨床研究,Ⅲ期：此階段持續(xù)約3年時(shí)間,通常需要診所和醫(yī)院的1000～300名患者參與。醫(yī)師通過對(duì)病患的監(jiān)測(cè)以確定療效和不良反應(yīng)?！捕?cè)申請(qǐng)新藥〔化學(xué)藥注冊(cè)的過程以下介紹新藥物注冊(cè)公司的注冊(cè)流程,方法及注意事項(xiàng)。一、報(bào)省局所有研究工作完成<有合格的樣品、完整原始記錄>,帶一套資料報(bào)往省局。其中應(yīng)注意：1.上海注冊(cè)公司申請(qǐng)表要認(rèn)真填寫,是否屬于非處方藥、是否減免臨床。版本應(yīng)是最新的〔最新的版本很快就會(huì)出來,可在SDA網(wǎng)上下載。

2、現(xiàn)受理權(quán)已下放到省局,5日內(nèi)公司注冊(cè)處人員告知你資料是否被退審,若沒,說明已受理。二、現(xiàn)場(chǎng)考核、抽樣現(xiàn)場(chǎng)考核〔準(zhǔn)備好樣品、原始記錄〔含檢驗(yàn)記錄,批生產(chǎn)記錄、剪刀,膠衣、"信封"等,抽樣〔仿制藥連續(xù)三批；新藥一批后,將藥品抽樣單、已封好的藥品、一套資料報(bào)往省所,跟蹤藥品檢驗(yàn)進(jìn)度,交納藥檢費(fèi),寄三份檢驗(yàn)報(bào)告往國家局〔省所辦理。三、拿回省局初審的材料

申請(qǐng)表、現(xiàn)場(chǎng)考核表、省局審查意見表、省局受理通知書

申請(qǐng)表的電子版需由省局的專用郵箱發(fā)往SDA。四、報(bào)國家局審評(píng)中心該類申報(bào)資料國家局共需要2套完整的及1套第一部分,每套資料需要單獨(dú)裝袋。1、第一套為原件〔全部紅章,化學(xué)原料藥特別注意結(jié)構(gòu)確證的圖譜必須要由試驗(yàn)單位加蓋紅章。資料按下列順序放置：

藥品注冊(cè)申請(qǐng)表〔2份

現(xiàn)場(chǎng)考核表〔1份

省局審查意見表〔1份

受理通知書

軟盤1份〔可以進(jìn)行網(wǎng)上提交

申報(bào)資料1套

2、第二套為原件〔全部紅章,化學(xué)原料藥結(jié)構(gòu)確證的圖譜可不加蓋紅章。資料按下列順序放置：

藥品注冊(cè)申請(qǐng)表〔1份

現(xiàn)場(chǎng)考核表〔1份

省局審查意見表〔1份

受理通知書

申報(bào)資料1套

3、第三套為復(fù)印件

資料按下列順序放置：

藥品注冊(cè)申請(qǐng)表〔1份

現(xiàn)場(chǎng)考核表〔1份

省局審查意見表〔1份

受理通知書

申報(bào)資料的第一部分1套五、審評(píng)1、在的網(wǎng)站上通過企業(yè)名稱、受理號(hào)、受理日期跟蹤藥品的審評(píng)進(jìn)度?！踩缬醒a(bǔ)充資料,再對(duì)其補(bǔ)充。2、按CDE的要求制作藥品說明書、標(biāo)簽、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)！〔注：這階段要非常注意,不危害給藥品上市會(huì)造成很大的麻煩。包裝最好是多報(bào)幾種規(guī)格,其可以在網(wǎng)上提交！。六、轉(zhuǎn)注冊(cè)司制作生產(chǎn)批件、臨床批件或退審！圖4新藥〔中藥注冊(cè)的過程圖5新藥申報(bào)流程圖6新藥加快申報(bào)流程圖7新藥生產(chǎn)注冊(cè)流程向中檢所報(bào)送制備標(biāo)準(zhǔn)品的原材料及有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究資料申請(qǐng)人提出生產(chǎn)申請(qǐng)向中檢所報(bào)送制備標(biāo)準(zhǔn)品的原材料及有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究資料申請(qǐng)人提出生產(chǎn)申請(qǐng)不受理不受理不受理通知書及理由省級(jí)藥監(jiān)局形式審查不受理通知書及理由省級(jí)藥監(jiān)局形式審查藥檢所進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合60日省級(jí)藥監(jiān)局5日內(nèi)組織30日內(nèi)完成對(duì)藥物臨床試驗(yàn)情況及原始資料進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)核查,抽取3批樣品通知藥檢所進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合。藥檢所進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合60日省級(jí)藥監(jiān)局5日內(nèi)組織30日內(nèi)完成對(duì)藥物臨床試驗(yàn)情況及原始資料進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)核查,抽取3批樣品通知藥檢所進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合。受理審評(píng)符合規(guī)定4個(gè)月內(nèi)一次性補(bǔ)充資料需補(bǔ)充資料藥品審評(píng)中心技術(shù)審評(píng)審評(píng)符合規(guī)定4個(gè)月內(nèi)一次性補(bǔ)充資料需補(bǔ)充資料藥品審評(píng)中心技術(shù)審評(píng)150日藥審中心對(duì)補(bǔ)充資料進(jìn)行審評(píng)藥審中心對(duì)補(bǔ)充資料進(jìn)行審評(píng)50日通知申請(qǐng)人向藥品認(rèn)證中心申請(qǐng)生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查通知申請(qǐng)人向藥品認(rèn)證中心申請(qǐng)生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢查動(dòng)態(tài)抽取1批樣品動(dòng)態(tài)抽取1批樣品現(xiàn)場(chǎng)檢查報(bào)告10日6個(gè)月內(nèi)申請(qǐng)現(xiàn)場(chǎng)檢查現(xiàn)場(chǎng)檢查報(bào)告10日6個(gè)月內(nèi)申請(qǐng)現(xiàn)場(chǎng)檢查藥審中心依據(jù)審評(píng)意見、現(xiàn)場(chǎng)檢查報(bào)告及藥品檢驗(yàn)報(bào)告形成綜合意見國家