肺癌中MET基因D1228V突變與MET抑制劑獲得性耐藥相關(guān)

AcquiredMETD1228VmutationandresistancetoMET

inhibitioninlungcancerCancerDiscovDecember2016IF:19.783背景MET基因突變和擴(kuò)增是EGFR抑制劑原發(fā)或獲得性耐藥的機(jī)制之一，TKI耐藥的患者可能會(huì)從EGFR抑制劑聯(lián)合MET抑制劑克唑替尼治療中受益。MET基因的致癌突變是肺癌的一個(gè)亞型，同時(shí)MET基因也是非小細(xì)胞肺癌藥物開(kāi)發(fā)的候選原癌基因。MET抑制劑有兩類，1型抑制劑優(yōu)先結(jié)合MET的活性構(gòu)象，如克唑替尼；II型抑制劑結(jié)合非活性構(gòu)象，如卡博替尼，11型抑制劑能夠抑制更多的激酶靶點(diǎn)；各種MET抑制劑的有效性，使其應(yīng)用于靶向治療，但影響藥物敏感和耐藥的特定分子因素尚不明確。摘要1例同時(shí)具有EGFR突變和MET擴(kuò)增的肺腺癌患者，厄洛替尼治療后進(jìn)展，MET抑制劑savolitinib聯(lián)合EGFR抑制劑osimertinib治療后緩解顯著。但仍發(fā)生了耐藥，一個(gè)新的MET基因激酶區(qū)突變D1228V被檢測(cè)發(fā)現(xiàn)。體外研究發(fā)現(xiàn)MET基因D1228V突變通過(guò)破壞藥物結(jié)合誘導(dǎo)I型MET抑制劑耐藥，而對(duì)II型MET抑制劑仍然具有敏感性。基于這些發(fā)現(xiàn)，患者繼續(xù)接受了厄洛替尼聯(lián)合II型MET抑制劑卡博替尼治療，得到了顯著緩解。意義:?多種結(jié)構(gòu)不同的MET抑制劑正在開(kāi)發(fā)用于非小細(xì)胞肺癌的治療，明確這些藥物的耐藥機(jī)制是非常重要的。?MET基因D1228V獲得性突變介導(dǎo)I型MET抑制劑耐藥，而非II型MET抑制劑，對(duì)MET抑制劑的臨床應(yīng)用具有一定的提示。CasereportAh"?p 耳 口 3 I" * *ll?lb A ?rlfrllnlb &nB■1IniIb .rbaO?I-b■ *Q￡*■■IP n- a. 3 y3 E1.14li4b eabaxata Ii患者信息：30歲，女性，無(wú)吸煙史，支氣管鏡活檢診斷為肺腺癌，且具有EGFR基因19號(hào)外顯子缺失；治療史：阿法替尼，4周后掃描發(fā)現(xiàn)肺部腫塊緩慢生長(zhǎng)；同步放化療，左頸部淋巴結(jié)腫大，活檢顯示復(fù)發(fā)性肺腺癌，影像學(xué)提示骨轉(zhuǎn)移；3?厄洛替尼，疾病繼續(xù)進(jìn)展，NGS檢測(cè)復(fù)發(fā)標(biāo)本，確認(rèn)具有EGFR基因19外顯子缺失和高水平的MET擴(kuò)增；入組I期臨床試驗(yàn)METTKIsavolitinib聯(lián)合EGFRTKIosimertinib治療，顯著的臨床緩解，4周后，頸部淋巴結(jié)幾乎完全消失；36周后出現(xiàn)新的肺結(jié)節(jié)，確認(rèn)疾病進(jìn)展，肺結(jié)節(jié)手術(shù)切除，疾病進(jìn)一步進(jìn)展；NGS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)新發(fā)突變MET基因D1228V突變；EGFRTKI厄洛替尼聯(lián)合METTKI卡博替尼，4周后掃描顯示顯著緩解,治療5個(gè)月仍然獲益。36weeks42weeks36weeks42weeks4weeksBaseline?NGS檢測(cè)頸部淋巴結(jié)標(biāo)本，確認(rèn)具有EGFR基因19外顯子缺失和高水平的MET擴(kuò)增，MET擴(kuò)增可能是其耐藥的原因。入組I期臨床試驗(yàn)METTKIsavolitinib聯(lián)合EGFRTKIosimertinib治療，4周后，頸部淋巴結(jié)幾乎完全消失。36周后出現(xiàn)新的肺結(jié)節(jié)，確認(rèn)疾病進(jìn)展，肺結(jié)節(jié)手術(shù)切除，疾病進(jìn)一步進(jìn)展；NGS檢測(cè)手術(shù)標(biāo)本發(fā)現(xiàn)新發(fā)突變MET基因D1228V突變，可能與藥物耐藥相關(guān)。Savolitinib聯(lián)合Osimertinib治療過(guò)程中血漿cfDNA基因突變情況10010N/D0S.121S202410010N/D0S.121S20242&323640?METD1228V?EGFRex19delEGFRT79QMt^10000在治療初，血漿中含有高水平的EGFR基因exonl9del，治療開(kāi)始后快速下降，12周后檢測(cè)不到，36周（疾病進(jìn)展時(shí)）再一次檢測(cè)到EGFR基因exon19del；血漿中MET基因D1228V突變?cè)诩膊∵M(jìn)展時(shí)與EGFR基因exon19del同時(shí)出現(xiàn)；?血漿中MET和EGFR基因突變水平隨著疾病的進(jìn)一步進(jìn)展持續(xù)升高。

?EGFRTKI厄洛替尼聯(lián)合METTKI卡博替尼治療，疾病癥狀迅速改善,4周后顯著緩解，治療5個(gè)月繼續(xù)獲益。蛋白模型預(yù)測(cè)I型和II型MET抑制劑在藥物結(jié)合中的差異Savolitinib為I型MET抑制劑，結(jié)合MET激酶的活性構(gòu)象;依賴與MET活化環(huán)上的Tyrl230形成的n-n相互作用(A)；METAspl228和LyslllO殘基是維持活化環(huán)所必須的，通過(guò)靜電相互作

用促進(jìn)與Savolitinib的結(jié)合；?METD1228V突變打斷了連接Aspl228和LyslllO的鹽橋，導(dǎo)致活化環(huán)重新定位，并喪失了MET與Savolitinib之間的n-n相互作用(B)?？ú┨婺釣镮I型MET抑制劑，結(jié)合MET激酶的非活性構(gòu)象；不依賴Tyrl230的作用(C)；METD1228V突變不影響與藥物的結(jié)合(D)。體外研究證實(shí)METD1228V導(dǎo)致I型MET抑制劑耐藥在293T細(xì)胞中表達(dá)野生型MET或D1228V突變型METM在293T細(xì)胞中表達(dá)野生型MET或D1228V突變型METM口-Tubulintot-METSavolitinibCriaotmibINC2&0 :-p-MET(￥1234)tot-METp-MET(Y1234)□^TubulinI型和II型MET抑制劑能夠抑制野生型MET自磷酸化；I型MET抑制劑savolitinib，克唑替尼和INC280對(duì)D1228V突變型MET無(wú)效，均不能抑制突變型MET磷酸化;

?II型MET抑制劑卡博替尼，MGCD265和merestinib能夠有效的抑制突變型MET磷酸化。在Ba/F3細(xì)胞中表達(dá)野生型TPR-MET或D1228V突變型TPR-MET融合蛋白?TPR-METWTBa/F3細(xì)胞對(duì)savolitinib或卡博替尼高度敏感；?TPR-METD1228VBa/F3細(xì)胞對(duì)savolitinib沒(méi)有反應(yīng)，但是對(duì)卡博替尼仍保持敏感性。在EGFR突變且EGFRTKI敏感的PC9細(xì)胞中表達(dá)野生型TPR-MET或D1228V突變型TPR-MET融合蛋白?TPR-METWTPC9細(xì)胞對(duì)吉非替尼聯(lián)合savolitinib或卡博替尼均敏感;

?TPR-METD1228VPC9細(xì)胞僅對(duì)吉非替尼聯(lián)合卡博替尼敏感。EGFR和MET信號(hào)通路分析D ETPR-MET^7TPR-METD122flVPC9 PC9q￡+l?q￡+l?希屮為QQspla30520完全抑制EGFR和MET的磷酸化及MAPK/ERK信號(hào)；?在TPR-METD1228VPC9細(xì)胞中，吉非替尼聯(lián)合savolitinib不能抑制MET磷酸化，導(dǎo)致持續(xù)的MAPK/ERK信號(hào)，但吉非替尼聯(lián)合卡博替尼仍然保持敏感，能夠抑制EGFR和MET的磷酸化及下游的MAPK/ERK信號(hào)。討論〈MET激酶區(qū)突變導(dǎo)致I型MET抑制劑耐藥，而非II型MET抑制劑，提示這兩類藥物在肺癌的應(yīng)用中具有潛在的價(jià)值，對(duì)