專題九-生物技術(shù)實(shí)踐

專題(zhuāntí)九--生物技術(shù)實(shí)踐第一頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理纖維素+染料→紅色復(fù)合物〔纖維素+〕+剛果紅染料→培養(yǎng)基中出現(xiàn)(chūxiàn)以纖維素分解菌為中心的 剛果紅纖維素酶透明(tòumíng)圈〔2〕實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣 選擇培養(yǎng)

↓挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 將樣品涂布到鑒別

的培養(yǎng)基上纖維素分解菌梯度稀釋第二頁(yè)，共61頁(yè)。二、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用(yìngyòng)1.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌種及控制條件的比較制作內(nèi)容比較項(xiàng)目果酒果醋腐乳泡菜菌種

控制條件O2的有無(wú)

有氧

無(wú)氧最適溫度18~25℃

15~18℃

酵母菌醋酸(cùsuān)菌毛霉乳酸菌無(wú)氧無(wú)氧30~35℃常溫(chángwēn)第三頁(yè)，共61頁(yè)。2.果酒、果醋、腐乳和泡菜制作過(guò)程比較及亞硝酸鹽含量(hánliàng)的檢測(cè)果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量制作原理果酒：

果醋：多種微生物發(fā)酵乳酸菌無(wú)氧呼吸在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料無(wú)氧呼吸(hūxī)有氧呼吸(hūxī)第四頁(yè)，共61頁(yè)。第五頁(yè)，共61頁(yè)。果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量操作提示

的選擇與處理；防止

被污染；控制好發(fā)酵條件控制好；防止雜菌污染

的選擇；腌制的條件；測(cè)定的操作材料(cáiliào)發(fā)酵液材料(cáiliào)的用量泡菜壇亞硝酸鹽含量(hánliàng)第六頁(yè)，共61頁(yè)。三、植物有效成分的提取(tíqǔ)1.植物芳香油三種提取(tíqǔ)方法的比較提取方法

實(shí)驗(yàn)原理

方法步驟

適用范圍

水蒸氣蒸餾

（1）水蒸氣蒸餾（2）分離油層（3）除水過(guò)濾

適用于提取

、

等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油

玫瑰油薄荷油利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的植物(zhíwù)芳香油攜帶出來(lái)第七頁(yè)，共61頁(yè)。壓榨法

（1）石灰水浸泡、漂洗（2）壓榨、過(guò)濾、靜置（3）再次過(guò)濾適用于

、

等易焦糊原料的提取有機(jī)溶劑萃取

（1）粉碎、干燥（2）萃取、過(guò)濾（3）濃縮適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小，能充分浸泡在有機(jī)溶液中柑橘(gānjú)檸檬(nínɡm(xù)énɡ)通過(guò)機(jī)械(jīxiè)加壓，壓榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中，蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油第八頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕玫瑰精油的提取實(shí)驗(yàn)流程鮮玫瑰花+清水〔1∶4〕→→油水混合 物別離油層 玫瑰油?！?〕橘皮精油的提取實(shí)驗(yàn)流程橘皮→漂洗→→→靜置→再 次過(guò)濾→橘皮油?！?〕提取胡蘿卜素(húluóbosù)的實(shí)驗(yàn)流程胡蘿卜→→枯燥→→過(guò)濾→→胡蘿卜素(húluóbosù)。水蒸氣蒸餾(zhēngliú)參加(cānjiā)NaCl參加無(wú)水Na2SO4除水過(guò)濾石灰水浸泡壓榨過(guò)濾粉碎萃取濃縮第九頁(yè)，共61頁(yè)。四、植物組織培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)和血紅蛋白的提取和別離1.植物(zhíwù)的組織培養(yǎng)技術(shù)〔1〕菊花(júhuā)的組織培養(yǎng)原理：植物細(xì)胞的 根本過(guò)程：離體的組織或細(xì)胞→→幼苗→ 影響因素：營(yíng)養(yǎng)、、、等實(shí)驗(yàn)操作：制備培養(yǎng)基→→→→ → 全能性愈傷組織移栽pH溫度光照外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培〔2〕月季的花藥培養(yǎng)花粉發(fā)育經(jīng)歷了小孢子

時(shí)期、單核期、雙核期等階段四分體第十頁(yè)，共61頁(yè)。影響花藥培養(yǎng)的因素：選擇的、的組成、親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的預(yù)處理以及等實(shí)驗(yàn)(shíyàn)操作：材料的選取→→→ 材料(cáiliào)培養(yǎng)基低溫(dīwēn)接種密度消毒接種培養(yǎng)2.血紅蛋白的提取和別離凝膠色譜法：根據(jù)別離蛋白質(zhì)電泳：在電場(chǎng)作用下，帶電粒子發(fā)生遷移的過(guò)程。利用了待別離樣品中各種分子，相對(duì)分子質(zhì)量的大小帶電性質(zhì)的差異第十一頁(yè)，共61頁(yè)。以及分子本身的的不同，使帶電(dàidiàn)分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而使樣品中各種分子別離大小(dàxiǎo)、形狀樣品(yàngpǐn)處理：通過(guò)紅細(xì)胞的洗滌、、 等操作收集到血紅蛋白溶液粗提?。和ㄟ^(guò)去除血紅蛋白溶液中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)〔3〕實(shí)驗(yàn)操作步驟血紅蛋白的釋放別離血紅蛋白溶液透析法純化：通過(guò)

去除相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)純度鑒定：用

進(jìn)行樣品純度鑒定凝膠色譜法SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳第十二頁(yè)，共61頁(yè)?？键c(diǎn)一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用〔1〕營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。〔2〕培養(yǎng)基類型①按培養(yǎng)基物理性質(zhì)可分為固體(gùtǐ)培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩種，其中固體(gùtǐ)培養(yǎng)基用于菌種別離、鑒定、菌落計(jì)數(shù)等。而液體培養(yǎng)基常用于科研或工業(yè)生產(chǎn)等。②按培養(yǎng)基的功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。第十三頁(yè)，共61頁(yè)。③按照(ànzhào)人們對(duì)培養(yǎng)基中成分的了解程度可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩種。說(shuō)明代謝類型不同的微生物，對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分的要求不同，如自養(yǎng)型微生物可以利用無(wú)機(jī)碳源，而異養(yǎng)型微生物那么必須利用有機(jī)碳源。不管代謝類型如何，微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求都包括碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子五類?！?〕實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒(zhuóshāo)滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌；常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒。對(duì)不同的對(duì)象需采用不同的消毒或滅菌方法。第十四頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕在微生物培養(yǎng)時(shí)，獲得純潔培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)(wàilái)雜菌入侵。無(wú)菌技術(shù)圍繞著如何防止雜菌的污染展開(kāi)，主要包括四方面的內(nèi)容：①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為防止周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防止已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。第十五頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕利用不同的菌體的菌落特征不同別離菌種，常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種：①平板劃線法是同一(tóngyī)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的外表，以形成標(biāo)準(zhǔn)菌落。②稀釋涂布平板法那么是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的外表，進(jìn)行培養(yǎng)，以形成標(biāo)準(zhǔn)菌落?！?〕選擇培養(yǎng)，利用不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)需要的不同或?qū)Νh(huán)境要求的不同，將不同微生物分開(kāi)。第十六頁(yè)，共61頁(yè)。測(cè)定土壤中的細(xì)菌數(shù)，一般選用104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行(jìnxíng)平板培養(yǎng)，測(cè)定放線菌一般選用104和105倍的稀釋液進(jìn)行(jìnxíng)平板培養(yǎng)，測(cè)定真菌一般用102、103和104倍的稀釋液進(jìn)行(jìnxíng)平板培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每一濃度至少涂布3個(gè)平板，以增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力和準(zhǔn)確性。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基外表生長(zhǎng)的菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品大約含有多少個(gè)活菌?！?〕方法：稀釋涂布平板法——統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)第十七頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕計(jì)數(shù)規(guī)那么①計(jì)算方法：每克樣品中的菌落數(shù)=〔C÷V〕×MC代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時(shí)所用(suǒyònɡ)稀釋液的體積〔mL〕M代表稀釋倍數(shù)②設(shè)置對(duì)照：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)假設(shè)某兩個(gè)或多個(gè)稀釋(xīshì)濃度下獲得的菌落數(shù)均符合條件時(shí)，要看兩者菌落數(shù)的比值，假設(shè)小于2，那么取兩者的平均值；假設(shè)大于2，那么取較小值第十八頁(yè)，共61頁(yè)。苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如以以下圖所示，①為土壤樣品。以下相關(guān)表達(dá)錯(cuò)誤的選項(xiàng)是 〔 〕A.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)參加(cānjiā)苯酚作為碳源B.如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法C.假設(shè)圖中④為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，那么其中應(yīng)以苯酚作為惟一碳源第十九頁(yè)，共61頁(yè)。D.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落解析用苯酚作為選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)基的特殊的碳源，也是微生物的能源物質(zhì)，所以會(huì)影響其生長(zhǎng)。測(cè)定培養(yǎng)液中細(xì)菌數(shù)目多用稀釋涂布平板法。假設(shè)④為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，那么④應(yīng)含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚作為惟一碳源。使用稀釋涂布平板法或平板劃線法都可以在⑥上獲得單菌落。答案C考點(diǎn)二果酒、果醋、腐乳、泡菜制作的本卷須知1.果酒、果醋制作的本卷須知〔1〕材料的選擇與處理選擇新鮮的葡萄，榨汁前應(yīng)先沖洗，再除去枝梗，以防止去除(qùchú)枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的時(shí)機(jī)。第二十頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕防止發(fā)酵液被污染需要從發(fā)酵制作的過(guò)程進(jìn)行全面的考慮，因?yàn)椴僮鞯拿恳徊蕉伎赡芑烊腚s菌。為防止雜菌污染：榨汁機(jī)要洗凈并晾干，發(fā)酵裝置要洗凈并用70%的酒精(jiǔjīng)消毒；假設(shè)用簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置，每隔一定時(shí)間排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開(kāi)瓶蓋等?！?〕控制發(fā)酵條件果酒果醋溫度20℃左右，最適合繁殖；18～25℃，酒精發(fā)酵30～35℃，最適合生長(zhǎng)氧氣前期通O2，然后控制無(wú)O2

氧氣充足其他時(shí)間：10～12天；pH:5.0～6.0時(shí)間：約7～8天第二十一頁(yè)，共61頁(yè)。〔1〕影響腐乳品質(zhì)的條件：水、鹽、酒、溫度、發(fā)酵時(shí)間等。①水的控制：含水量約70%，用含水量過(guò)高的豆腐制腐乳，不易成形。②鹽的控制：鹽濃度過(guò)高，會(huì)影響腐乳的口味，濃度過(guò)低，腐乳易腐敗變質(zhì)。③酒的控制：酒精含量(hánliàng)一般控制在12%左右。酒精含量(hánliàng)過(guò)高，使腐乳成熟期延長(zhǎng)。酒精含量(hánliàng)過(guò)低，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗。④溫度的控制：溫度為15～18℃,適合毛霉生長(zhǎng)。發(fā)酵時(shí)間易控制在6個(gè)月左右。第二十二頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕防止雜菌污染①用來(lái)腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。加放鹵湯后，要用膠條將瓶口密封(mìfēng)。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰，防止瓶口被污染?！?〕泡菜壇的選擇：選擇氣密性好的泡菜壇。用水封閉壇口使壇內(nèi)與壇外空氣隔絕，這是最簡(jiǎn)易的造成(zàochénɡ)無(wú)氧環(huán)境的方法。這樣，壇內(nèi)可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌進(jìn)行乳酸發(fā)酵。如不封閉，那么會(huì)有許多需氧菌生長(zhǎng)，蔬菜會(huì)腐爛。第二十三頁(yè)，共61頁(yè)。〔2〕腌制條件(tiáojiàn)的控制：腌制過(guò)程中要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。發(fā)酵時(shí)間受到溫度的影響：18～20℃，腌制15天左右。溫度高，時(shí)間短一些。溫度過(guò)高、食鹽用量缺乏10%、腌制時(shí)間過(guò)短，都容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。圖甲是果醋發(fā)酵(fājiào)裝置。發(fā)酵(fājiào)初期不通氣，溶液中有氣泡產(chǎn)生；中期可以聞到酒香；后期接種醋酸菌，適當(dāng)升高溫度并通氣，酒香逐漸變成醋香。圖乙中能表示整個(gè)發(fā)酵(fājiào)過(guò)程培養(yǎng)液pH變化的曲線是〔〕第二十四頁(yè)，共61頁(yè)。A.① B.② C.③ D.④解析果醋制作的根本過(guò)程是挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→獲得果醋。在酒精發(fā)酵過(guò)程中，產(chǎn)生的CO2溶于水后形成(xíngchéng)碳酸〔酸性較弱〕，pH會(huì)下降，但不會(huì)急劇下降；當(dāng)接入醋酸菌后，在有氧第二十五頁(yè)，共61頁(yè)。會(huì)下降，但不會(huì)急劇下降；當(dāng)接入醋酸菌后，在有氧的情況下，醋酸菌能將乙醇變成乙醛，再將乙醛變成醋酸，酸性物質(zhì)持續(xù)增加，pH持續(xù)下降，4條曲線中曲線②是比較(bǐjiào)符合pH變化的。答案B〔09·浙江自選模塊〕下面是有關(guān)(yǒuguān)食醋和泡菜制作的實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)完成以下問(wèn)題：〔1〕食醋可用大米為原料經(jīng)三步發(fā)酵來(lái)制作：第一步：大米經(jīng)蒸熟、冷卻后參加淀粉酶，將原料中的淀粉分解成〔填中間產(chǎn)物〕，然后進(jìn)一步分解成葡萄糖，這一過(guò)程可用〔填淀粉指示劑〕來(lái)檢測(cè)，因?yàn)樵撛噭┯龅矸鄢仕{(lán)色，遇上述中間產(chǎn)物呈紅色。第二十六頁(yè)，共61頁(yè)。第二步：用菌將葡萄糖轉(zhuǎn)化成乙醇，這一發(fā)酵(fājiào)過(guò)程中，玻璃發(fā)酵(fājiào)瓶不應(yīng)完全密閉的主要原因是 。第三步：用菌將乙醇轉(zhuǎn)化成乙酸，這一過(guò)程 氧氣。〔2〕泡菜發(fā)酵(fājiào)過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生多種酸，其中主要是 ，還有少量的亞硝酸。對(duì)亞硝酸鹽的定量測(cè)定可以用 法，因?yàn)閬喯跛猁}與對(duì)氨基苯磺酸的反響產(chǎn)物能與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)成 色化合物。進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，還要取等量水進(jìn)行同樣的測(cè)定，目的是 。第二十七頁(yè)，共61頁(yè)?？键c(diǎn)三植物(zhíwù)的組織培養(yǎng)技術(shù)植物(zhíwù)組織培養(yǎng)的原理是細(xì)胞的全能性。不同細(xì)胞的全能性不一樣。生物體的所有細(xì)胞全能性大小比較如下：①受精卵>生殖細(xì)胞>體細(xì)胞；②體細(xì)胞中：幼嫩植物(zhíwù)組織〔如芽尖〕>成熟組織細(xì)胞。答案(dáàn)〔1〕糊精碘液酵母發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量CO2，使瓶?jī)?nèi)壓力升高而可能引起爆裂醋酸桿需要消耗〔2〕乳酸〔或有機(jī)酸〕〔光電〕比色紫紅作為對(duì)照第二十八頁(yè)，共61頁(yè)。植物組織培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)技術(shù)相同點(diǎn)理論依據(jù)植物細(xì)胞的全能性基本過(guò)程外植體愈傷組織叢芽生根→移栽；無(wú)菌技術(shù)及接種操作基本相同影響因素選材、營(yíng)養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等不同點(diǎn)選材體細(xì)胞生殖細(xì)胞（精子）脫分化(fēnhuà)再分化(fēnhuà)誘導(dǎo)(yòudǎo)第二十九頁(yè)，共61頁(yè)。3.植物組織培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)、微生物培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)和無(wú)土栽培技術(shù)(jìshù)比較植物組織培養(yǎng)技術(shù)微生物培養(yǎng)技術(shù)無(wú)土栽培技術(shù)概念在無(wú)菌條件下，將離體的植物體器官或組織接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，最終發(fā)育成完整植株在無(wú)菌條件下，在適宜的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件下對(duì)微生物的培養(yǎng)將植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中所需各種礦質(zhì)元素按一定比例配成營(yíng)養(yǎng)液，并利用這種營(yíng)養(yǎng)液栽培植物第三十頁(yè)，共61頁(yè)。培養(yǎng)基成分水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、有機(jī)添加物和植物激素等水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等水、必需礦質(zhì)元素特殊操作要求嚴(yán)格控制無(wú)菌操作，在培養(yǎng)過(guò)程中要更換培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例嚴(yán)格控制無(wú)菌操作，整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程無(wú)需更換培養(yǎng)基適宜的環(huán)境條件，基質(zhì)墊底并固定幼苗，不需要保證無(wú)菌條件第三十一頁(yè)，共61頁(yè)。請(qǐng)答復(fù)以下有關(guān)植物組織培養(yǎng)的幾個(gè)問(wèn)題。〔1〕離體植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)常用的一種培養(yǎng)基是 ，其主要成分(chéngfèn)包括大量元素和。培養(yǎng)中常用的兩種植物激素是和，兩者使用時(shí)的、、等，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果?！?〕植物組織培養(yǎng)的一般步驟為?！?〕以以下圖為植物組織培養(yǎng)的局部過(guò)程。

①過(guò)程是，②過(guò)程是，A是?！?〕植物組織培養(yǎng)過(guò)程中還需要維持一定的外界條件，一是要有適宜的，二是。離體的器官、組織(zǔzhī)或細(xì)胞①②A植物體第三十二頁(yè)，共61頁(yè)。解析MS培養(yǎng)基包括大量元素N、P、K、Ca、Mg、S和微量元素、有機(jī)物和植物激素〔生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素〕。使用激素時(shí)要特別注意激素的濃度、使用順序、用量的比例，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育(fāyù)方向。答案〔1〕MS培養(yǎng)基微量元素生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素濃度使用的先后順序用量的比例〔2〕制備MS固體培養(yǎng)基、外植體消毒、接種、培養(yǎng)、移栽、栽培〔3〕脫分化再分化愈傷組織〔4〕溫度和pH等無(wú)菌〔環(huán)境〕第三十三頁(yè)，共61頁(yè)。〔09·山東卷〕人參是一種名貴中藥材，其有效成分主要是人參皂苷。利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)人參皂苷的大致流程如下：請(qǐng)答復(fù)：〔1〕配制(pèizhì)誘導(dǎo)愈傷組織的固體培養(yǎng)基，分裝后要進(jìn)行。接種前，要對(duì)人參根進(jìn)行?！?〕用于離體培養(yǎng)的根切塊，叫做。培養(yǎng)幾天后發(fā)現(xiàn)少數(shù)培養(yǎng)基被污染，假設(shè)是有顏色的絨毛狀菌落，屬于污染；假設(shè)是有光澤的黏液狀菌落，屬于污染。第三十四頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕用少量酶處理愈傷組織，獲取單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)，在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，可有效提高人參皂苷合成量?！?〕人參皂苷易溶于水溶性〔親水性〕有機(jī)溶液，從培養(yǎng)物干粉中提取人參皂苷宜選用方法，操作(cāozuò)時(shí)應(yīng)采用加熱。解析〔1〕滅菌是指用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)的方法，殺死物體(wùtǐ)內(nèi)外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體(wùtǐ)外表或內(nèi)部一局部對(duì)人體有害的微生物。在組織培養(yǎng)過(guò)程中要防止雜菌的污染，需要對(duì)固體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，對(duì)人參根進(jìn)行消毒。第三十五頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕用于離體培養(yǎng)的離體的植物組織或器官〔或切塊〕稱為外植體。單個(gè)或少數(shù)微生物細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見(jiàn)、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。我們可以根據(jù)菌落的特征判斷微生物的種類。霉菌的菌落較大，肉眼可見(jiàn)許多毛狀物，呈棕色、青色等，細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤(rùn)、黏稠(niánchóu)，有光澤?！?〕果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細(xì)胞壁和胞間層，使愈傷組織別離?！?〕人參皂苷溶于水溶性有機(jī)溶劑，可以用萃取法從培養(yǎng)物干粉中提取。萃取時(shí)要采用水浴加熱，這是因?yàn)橛袡C(jī)溶劑都是易燃物，用明火加熱容易引起燃燒、爆炸。答案〔1〕滅菌消毒〔2〕外植體真菌〔霉菌〕細(xì)菌〔3〕果膠〔4〕萃取水浴第三十六頁(yè)，共61頁(yè)。例1以下對(duì)生物技術(shù)在實(shí)踐中應(yīng)用的表達(dá)，錯(cuò)誤的選項(xiàng)是 〔 〕A.在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色B.普通洗衣粉只是缺少酶，不會(huì)污染環(huán)境的一種方法解析果酒的制作(zhìzuò)離不開(kāi)酵母菌，酵母菌在20℃左右的環(huán)境中最適合代謝和繁殖；果醋的制作(zhìzuò)需要醋酸菌，醋酸菌的最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃；普通洗衣粉雖然沒(méi)有酶，但含有一定量的磷，所以使用較多時(shí)也會(huì)污染環(huán)境。B第三十七頁(yè)，共61頁(yè)。錯(cuò)因分析此題錯(cuò)因主要是對(duì)各種現(xiàn)代生物技術(shù)的原理的識(shí)記不到位，所以，熟記不同(bùtónɡ)技術(shù)的原理、操作程序等是解此類試題的關(guān)鍵。例2請(qǐng)分析答復(fù)以下有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐方面的問(wèn)題：〔1〕微生物培養(yǎng)基一般都含有：水和無(wú)機(jī)鹽以及(yǐjí) 。〔2〕在微生物接種過(guò)程中，試管口需要通過(guò)酒精燈火焰12次，其目的是 ?！?〕別離分解尿素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程包括：土壤取樣、梯度稀釋、樣品涂布到培養(yǎng)基上、挑選 ?！?〕在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，往往需要使用植物激素啟動(dòng)細(xì)胞分裂，人為地控制細(xì)胞的 。第三十八頁(yè)，共61頁(yè)。〔5〕通過(guò)電泳別離提純蛋白質(zhì)時(shí)，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素是蛋白質(zhì)分子的帶電性質(zhì)、分子大小及 ?！?〕根據(jù)果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用的系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果答復(fù)(dáfù)以下問(wèn)題：①能正確表示pH對(duì)果膠酶活性影響的曲線是。②在原材料有限的情況下，能正確表示相同時(shí)間內(nèi)果膠酶的用量對(duì)果汁產(chǎn)量影響的曲線是。第三十九頁(yè)，共61頁(yè)。解析培養(yǎng)基的成分一般(yībān)包括四大局部：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽。微生物接種的過(guò)程中一定要注意無(wú)菌操作，在酒精燈火焰旁的操作就是滅菌。在別離微生物時(shí)是運(yùn)用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，能夠生長(zhǎng)形成菌落的就是所需要的微生物。組織培養(yǎng)需要把得到的外植體通過(guò)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化才會(huì)形成新植物。電泳法別離蛋白質(zhì)時(shí)影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素是蛋白質(zhì)分子的帶電性質(zhì)、分子大小以及帶電荷量、分子形狀。溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)降低酶的活性，酶的催化作用具有一個(gè)最適溫度。由于原材料是有限的，因此相同時(shí)間內(nèi)果膠酶的用量對(duì)果汁產(chǎn)量影響有一個(gè)最大值。第四十頁(yè)，共61頁(yè)。方法點(diǎn)評(píng)此題綜合考查生物技術(shù)實(shí)踐多個(gè)專題內(nèi)容，綜合性強(qiáng)，比較根底(gēndǐ)。針對(duì)高考，復(fù)習(xí)根底(gēndǐ)知識(shí)理解生物技術(shù)實(shí)踐的根本過(guò)程，強(qiáng)化要點(diǎn)的記憶，是獲得高分的最好方法。答案〔1〕碳源和氮源〔2〕滅菌〔3〕選擇菌落〔4〕脫分化、再分化〔5〕帶電荷量、分子(fēnzǐ)形狀〔6〕①乙②丙第四十一頁(yè)，共61頁(yè)。1.〔09·海南卷〕請(qǐng)答復(fù)以下與實(shí)驗(yàn)室提取芳香油有關(guān)的問(wèn)題：〔1〕植物芳香油的提取可采用的方法有壓榨法、 和 ?！?〕芳香油溶解性的特點(diǎn)是不溶于 ，易溶于 ，因此可用 作為提取劑來(lái)提取芳香油?！?〕橘子果實(shí)含有芳香油，通?？捎米鳛椴牧咸崛》枷阌停姨崛r(shí)往往選用新鮮的材料，理由是 ?！?〕對(duì)材料壓榨后可得到糊狀液體，為除去其中(qízhōng)的固體物獲得乳狀液可采用的方法是 。第四十二頁(yè)，共61頁(yè)。〔5〕得到的乳狀液參加氯化鈉并放置一段時(shí)間后，芳香油將分布(fēnbù)于液體的 層，原因是 。參加氯化鈉的作用是?！?〕從乳狀液中別離得到的芳香油中要參加無(wú)水硫酸鈉，此劑的作用是 。答案〔1〕蒸餾法萃取法〔2〕水有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑〔3〕橘子皮芳香油含量較高〔4〕過(guò)濾〔5〕上油層的密度(mìdù)比水層小增加水層密度(mìdù)，使油和水分層〔6〕吸收芳香油中殘留的水分第四十三頁(yè)，共61頁(yè)。2.〔09·遼寧、寧夏卷〕〔1〕在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)(shíyàn)材料?！?〕在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行〔消毒、滅菌〕；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能。〔3〕假設(shè)用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、屢次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的。第四十四頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕通常，對(duì)獲得(huòdé)的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、 大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的。〔5〕培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是 。〔6〕假設(shè)用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用(shǐyòng)過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。解析〔1〕影響微生物培養(yǎng)的因素除了營(yíng)養(yǎng)條件外，外界條件主要包括溫度、酸堿度和滲透壓等。由于大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇(xuǎnzé)、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，所以常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。第四十五頁(yè)，共61頁(yè)。〔2〕對(duì)于培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進(jìn)行滅菌，對(duì)操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和用酒精消毒，靜止空氣中的細(xì)菌在用紫外線照射后能夠使蛋白質(zhì)變性，并損傷DNA結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌死亡?！?〕樣品的稀釋直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落的數(shù)目，實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得的菌落數(shù)在30~300之間?！?〕菌落的特征是判斷微生物的種類的重要依據(jù)。對(duì)獲得的純菌可以依據(jù)菌落的特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步檢測(cè)。〔5〕要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜(shìyí)的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，假設(shè)發(fā)現(xiàn)有菌落說(shuō)明培養(yǎng)基已被污染。第四十六頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)滅菌后才能丟棄，防止培養(yǎng)的微生物擴(kuò)散到環(huán)境中，造成危害。答案〔1〕溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短〔2〕滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)〔3〕比例適宜〔4〕鑒別〔或分類〕〔5〕將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置(fàngzhì)適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生〔6〕滅菌第四十七頁(yè)，共61頁(yè)。3.〔09·上海卷〕答復(fù)以下有關(guān)植物組織培養(yǎng)的問(wèn)題?！?〕用于植物組織培養(yǎng)的植物材料稱為?！?〕組織培養(yǎng)中的細(xì)胞，從分化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槲捶只癄顟B(tài)的過(guò)程稱為?！?〕在再分化階段所用培養(yǎng)基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐漸改變(gǎibiàn)培養(yǎng)基中這兩種植物激素的濃度比，未分化細(xì)胞群的變化情況如以以下圖所示。據(jù)圖指出兩種激素的不同濃度比與形成芽、根、愈傷組織的關(guān)系：第四十八頁(yè)，共61頁(yè)。①當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比等于1時(shí)， ；② ；③ ?！?〕假設(shè)植物激素Y是生長(zhǎng)素，在植物組織培養(yǎng)中其主要作用是；那么植物激素X的名稱是?！?〕生產(chǎn)上用試管苗保存(bǎocún)植物優(yōu)良性狀，其原因是 。解析〔1〕植物組織培養(yǎng)時(shí)所取材料稱為外植體?！?〕讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)(yòudǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程，稱為脫分化?！?〕據(jù)圖可得當(dāng)激素X與激素Y的濃度比為1時(shí)，未分第四十九頁(yè)，共61頁(yè)?；募?xì)胞群形成愈傷組織；當(dāng)激素X與激素Y的濃度比大于1時(shí)，未分化的細(xì)胞群分化形成芽；當(dāng)激素X與激素Y的濃度比小于1時(shí)，未分化的細(xì)胞群分化形成根?！?〕生長(zhǎng)素的作用是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂(fēnliè)和分化；植物激素X能促進(jìn)細(xì)胞分裂(fēnliè)，是細(xì)胞分裂(fēnliè)素?！?〕試管苗為無(wú)性繁殖系，能夠保持親本的一切性狀，不發(fā)生性狀別離。答案〔1〕外植體〔2〕去分化〔脫分化〕〔3〕①未分化細(xì)胞群經(jīng)分裂(fēnliè)形成愈傷組織②當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比大于1時(shí)，未分化細(xì)胞群分化形成芽③當(dāng)植物激素X與植物激素Y的濃度比小于1時(shí)，未分化細(xì)胞群分化形成根第五十頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)〔伸長(zhǎng)〕、分裂和分化細(xì)胞分裂素〔5〕組織培養(yǎng)形成試管苗的過(guò)程屬于無(wú)性生殖，后代不發(fā)生性狀(xìngzhuàng)別離 素的性質(zhì)，答復(fù)以下問(wèn)題。 〔1〕胡蘿卜素是色的結(jié)晶。從胡蘿卜中提 取胡蘿卜素時(shí)，常用(chánɡyònɡ)作為溶劑，原因是 ?！?〕從胡蘿卜中提取胡蘿卜素常用(chánɡyònɡ)的方法是法。 用這種方法提取胡蘿卜素的主要步驟是：粉碎、干 燥、、、。第五十一頁(yè)，共61頁(yè)。〔3〕在胡蘿卜顆粒的加熱過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格將和 控制在一定范圍內(nèi)，原因是?！?〕提取的胡蘿卜素可通過(guò)法進(jìn)行鑒定，在鑒定過(guò)程中需要用對(duì)照。〔5〕一般情況下，提取胡蘿卜素時(shí)，提取效率(xiàolǜ)與原料顆粒的含水量成比。解析〔1〕胡蘿卜素的顏色(yánsè)是橘〔橙〕黃色，胡蘿卜素是脂類物質(zhì)，根據(jù)相似相溶原理，易溶于親脂性有機(jī)溶劑?！?〕提取胡蘿卜素常用萃取方法，步驟：胡蘿卜→粉碎→枯燥→萃取→過(guò)濾→濃縮→胡蘿卜素。〔3〕胡蘿卜顆粒在加熱過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格將溫度和時(shí)間控制在一定范圍內(nèi)，防止胡蘿卜素因溫度過(guò)高和時(shí)第五十二頁(yè)，共61頁(yè)。間過(guò)長(zhǎng)而導(dǎo)致分解?！?〕提取到的胡蘿卜素通過(guò)紙層析法鑒定，該過(guò)程需要用標(biāo)準(zhǔn)樣品作為對(duì)照?！?〕一般(yībān)情況下，提取胡蘿卜素時(shí)，提取效率與原料顆粒含水量成反比。答案〔1〕橘〔橙〕黃親脂性有機(jī)溶劑〔或有機(jī)溶劑〕胡蘿卜素是脂類物質(zhì)〔2〕萃取萃取過(guò)濾濃縮〔3〕溫度時(shí)間溫度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解〔4〕紙層析標(biāo)準(zhǔn)樣品〔5〕反第五十三頁(yè)，共61頁(yè)。5.葡萄汁、葡萄酒都具有一定的保健養(yǎng)生成效，隨著人們生活水平的提高，我國(guó)葡萄汁、葡萄酒的需求量逐年增長(zhǎng)。請(qǐng)答復(fù)：〔1〕葡萄可用來(lái)制作葡萄汁、葡萄酒，為減少(jiǎnshǎo)資源浪費(fèi)，提高產(chǎn)品的附加值，可對(duì)葡萄做怎樣的處理？?！?〕制作葡萄酒時(shí)，為防止發(fā)酵液被污染，應(yīng)采取的措施是；在制作過(guò)程中，一般將溫度控制在18～25℃，原因是?！?〕為研究發(fā)酵罐中酵母菌的生長(zhǎng)狀況，常要取樣統(tǒng)計(jì)分析，并測(cè)定pH，判斷取樣先后順序的主要依據(jù)是。第五十四頁(yè)，共61頁(yè)?！?〕葡萄梗的主要成分為木質(zhì)素、纖維素和半纖維素，但是酵母菌無(wú)法直接利用，原因是其 。請(qǐng)你提出一種解決該問(wèn)題的方法