環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證教學(xué)課件

環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證1環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證2

我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。

黎巴嫩紀(jì)伯倫（1883～1931）心得：我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)3第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒4表面擦拭手工噴霧蒸汽熏蒸（熱過(guò)程）干霧消毒、滅菌（冷處理）房間消毒的方法表面擦拭房間消毒的方法5一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。在越來(lái)越“以人為本”和“環(huán)境保護(hù)”的今天，應(yīng)該格外關(guān)注“甲醛”和“臭氧”等氣體消毒劑的不良影響。熏蒸一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。熏蒸6熏蒸（fumigating）滅菌概念：這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP

，如今已為世界各國(guó)普遍接受和采用。在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)毒劑由固態(tài)或液態(tài)迅速轉(zhuǎn)成氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。熏蒸有助于降低潔凈區(qū)內(nèi)死角的微生物污染。

熏蒸消毒：

熏蒸（fumigating）滅菌概念：熏蒸消毒：

7消毒滅菌時(shí)間：

12小時(shí)接觸時(shí)間（通常推薦）。排氣、通風(fēng)時(shí)間：

24小時(shí)。一個(gè)漫長(zhǎng)過(guò)程。甲醛熏蒸：消毒滅菌時(shí)間：甲醛熏蒸：8概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌和病毒。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。注意事項(xiàng)

(5)甲醛有致癌作用，不宜用于室內(nèi)空氣消毒。甲醛熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)9殺菌徹底，廣譜可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。無(wú)殘留，是一種無(wú)污染的消毒劑。臭氧是氣體滅菌，能迅速?gòu)浡秸麄€(gè)滅菌空間，滅菌無(wú)死角。

臭氧滅菌殺菌徹底，廣譜臭氧滅菌10

空氣消毒：用于無(wú)人的情況下，室

內(nèi)空氣的消毒。衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范200211注意事項(xiàng)

(1)臭氧對(duì)人有毒，國(guó)家規(guī)定大氣中允許濃度為

0.2mg/m3。

(2)臭氧為強(qiáng)氧化劑，對(duì)多種物品有損壞，濃度越高對(duì)物品損害越重，可使銅片出現(xiàn)綠色銹斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、斷裂，使織物漂白褪色等。使用時(shí)應(yīng)注意。

(3)多種因素可影響臭氧的殺菌作用，包括溫度、相對(duì)濕度、有機(jī)物、pH、水的渾濁度、水的色度等。使用時(shí)應(yīng)加以控制。

臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002注意事項(xiàng)臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范200212常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：1）醇類(lèi)：使蛋白質(zhì)變性。如75%酒精用于皮膚和容器表面消毒；10%丙二醇用于熏蒸消毒。（2）酚類(lèi)：損害細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。如苯酚一般使用濃度為0.5-3%，甲苯酚為2-5%。（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；2%戊二醛用于熏蒸消毒。常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：13（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。（5）氧化劑：作用于細(xì)菌酶系統(tǒng)。如0.2-0.5%過(guò)氧乙酸、高錳酸鉀、過(guò)氧化氫和臭氧等。（6）表面活性劑：作用于細(xì)菌質(zhì)膜，主要用于表面消毒、浸潤(rùn)消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新潔爾滅、0.05-0.1%杜滅芬、0.1-0.2%洗必泰。（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。14消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)介紹一種消毒劑和消毒方式消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸介紹一種消毒劑和消毒方式15干霧：小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。大液滴破碎而濕滑表面。干霧：小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。大液滴破碎而濕滑表面。16限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸用于霉菌和酵母菌取樣。（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。反彈離開(kāi)表面使用的記錄，包括日期及使用時(shí)間。（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；作為T(mén)AMC計(jì)數(shù)的一部分。概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌和病毒。3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果?？臻g分布均勻，符合布朗運(yùn)動(dòng)原理。原則：目檢不得有可見(jiàn)殘留。不濕潤(rùn)接觸的表面1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被取樣面積：不小于20cm2。大液滴破碎而濕滑表面。第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。生產(chǎn)7.5μm的液滴像氣體性質(zhì)

反彈離開(kāi)表面不濕潤(rùn)接觸的表面空間分布均勻，符合布朗運(yùn)動(dòng)原理。干霧系統(tǒng)限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：生產(chǎn)7.5μm的液滴干霧系統(tǒng)17潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）潔凈區(qū)操作人員行為的規(guī)范規(guī)范潔凈區(qū)操作人員的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的！潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持18第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)19細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)微生物總數(shù)細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)20細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：中國(guó)藥典歐洲藥典細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂30～35℃3天TSA30～35℃5天霉菌、酵母菌玫瑰紅鈉瓊脂23～28℃5天SDA20～25℃5天酵母菌酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂23～28℃5天/細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：中國(guó)藥典歐洲藥典細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂TSA霉菌、酵21采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。GB/T16293-2010GB/T16294-2010采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在322細(xì)菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的真菌如何計(jì)數(shù)？真菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌如何計(jì)數(shù)？微生物計(jì)數(shù)的困惑

！細(xì)菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的真菌如何計(jì)數(shù)？微生物計(jì)數(shù)的困惑！23定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的包括真菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：1、細(xì)菌：30～35℃5天。

2、細(xì)菌：30～35℃2天；霉菌或酵母菌：20～25℃3天?？偤醚跷⑸飻?shù)（TAMC）：定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上總好氧微生物數(shù)（TA24定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的包括細(xì)菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：20～25℃5天。酵母菌和霉菌總數(shù)（TYMC）：定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上酵母菌和霉菌總數(shù)（T251、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被作為T(mén)AMC計(jì)數(shù)的一部分。2、TYMC時(shí)，如果細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被作為T(mén)YMC計(jì)數(shù)的一部分。3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。計(jì)數(shù)原則：1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被計(jì)數(shù)原則：261、殘留物如何確定？非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。3、分析方法如何驗(yàn)證？用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。允許殘留物總量（μg/cm2）=參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)MTDD=每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)臭氧是氣體滅菌，能迅速?gòu)浡秸麄€(gè)滅菌空間，采樣時(shí)培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)，裝置有接觸并拿開(kāi)后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。能夠消除洗必泰類(lèi)消毒劑的影響。潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評(píng)價(jià)。驗(yàn)證項(xiàng)目包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、耐用性、檢測(cè)限和定量限。潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的選擇？

（關(guān)鍵區(qū)域使用培養(yǎng)基的特殊要求）1、殘留物如何確定？潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的選擇？

（關(guān)鍵區(qū)27潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2011版）潔凈度級(jí)別浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu/4小時(shí)表面微生物接觸（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A級(jí)1111B級(jí)10555C級(jí)1005025－D級(jí)20010050－潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)浮游菌沉降菌（90mm）表面微生28CHP2010CHP201029《中國(guó)藥典》2010年版二部

附錄XIXQ“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果?！吨袊?guó)藥典》2010年版二部30附錄B:B.3培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期的標(biāo)記。

GB/T16293-2010/GB/T16293-2010附錄B:GB/T16293-2010/GB/T162311、TSA用于細(xì)菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：30～35℃

不少于2天。2、SDA用于霉菌和酵母菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：20～25℃不少于5天。環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：1、TSA環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：323、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。以上摘自：GB/T16293-2010GB/T16294-2010環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：3、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：331、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇環(huán)境監(jiān)測(cè)中常忽視的兩個(gè)方面：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素環(huán)境監(jiān)測(cè)中常忽視的兩個(gè)方面：34（1）API的殘留（2）消毒劑/殺孢子劑的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素（1）API的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素35抗菌素藥物活性成分API抗菌素API36非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000黎巴嫩紀(jì)伯倫（1883～1931）1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被反彈離開(kāi)表面1、殘留物如何確定？用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)允許殘留物總量（μg/cm2）=大液滴破碎而濕滑表面。標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評(píng)價(jià)。MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。

消毒劑/殺孢子劑常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：1、酚類(lèi)2、醛類(lèi)3、過(guò)氧化氫類(lèi)4、季胺鹽類(lèi)化合物5、以上混合物非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的37（1）選擇性低下，營(yíng)養(yǎng)全面（2）含有中和劑（3）“無(wú)菌”平板培養(yǎng)基2、忽視培養(yǎng)基的選擇（1）選擇性低下，營(yíng)養(yǎng)全面2、忽視培養(yǎng)基的選擇38營(yíng)養(yǎng)瓊脂胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基的選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的選擇39參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)附錄XIJ表1：“常見(jiàn)干擾物中和劑或滅活方法”中和劑的使用：參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)中和劑的使用：40青霉素酶（β-內(nèi)酰胺酶）

可以有效的水解β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。

包括：

-青霉素G-氨基青霉素類(lèi)，如氨芐西林、阿莫西林、匹氨西等

-羧基青霉素類(lèi)，如羧芐西林、替卡西林等

-脲基青霉素類(lèi)，如呋芐西林、美洛西林等

-頭孢Ⅰ、Ⅱ酶（1）：青霉素酶青霉素酶（β-內(nèi)酰胺酶）酶（1）：青霉素酶41頭孢菌素酶

可以有效水解頭孢類(lèi)抗生素Ⅲ及以上的頭孢類(lèi)抗生素。

包括：頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松等。

酶（2）：頭孢菌素酶頭孢菌素酶酶（2）：頭孢菌素酶42抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-80

能夠消除六氯酚和含汞類(lèi)消毒劑的影響。2、卵磷脂能夠消除洗必泰類(lèi)消毒劑的影響。3、卵磷脂、吐溫-80

能夠消除季胺類(lèi)化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響。

抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-8043無(wú)菌平板培養(yǎng)基（預(yù)灌裝無(wú)菌培養(yǎng)基）理想的環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：無(wú)菌平板培養(yǎng)基理想的環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：441、A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)潔凈區(qū)直接使用2、室溫儲(chǔ)存3、有效期長(zhǎng)4、無(wú)菌包裝、包裝完整5、特制平板6、培養(yǎng)基灌裝量大無(wú)菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：1、A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)潔凈區(qū)直接使用無(wú)菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：4555mm接觸平板（RodacPlate）

ReplicateOrganismDetectionandCounting

GMP2011和EUGMP:-平板尺寸：15X55mm-取樣單位面積：25cm2

55mm接觸平板（RodacPlate）Repli46潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)（3）“無(wú)菌”平板培養(yǎng)基4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002內(nèi)空氣的消毒。2%戊二醛用于熏蒸消毒。輔料殘留物（非水溶性）3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)干霧消毒、滅菌（冷處理）內(nèi)空氣的消毒。小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。5%過(guò)氧乙酸、高錳酸鉀、過(guò)氧化氫和臭氧等?？偤醚跷⑸飻?shù)（TAMC）：微生物樣品的檢測(cè)和分析：API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）接觸板的取樣面積：24～30cm2

USP〈1116〉

潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物評(píng)估

潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)接觸板的取樣面積：24～30c47取樣面積：不小于20cm2

。取樣方法：

采樣時(shí)培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)，裝置有接觸并拿開(kāi)后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。ISO14698潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境取樣面積：不小于20cm2。ISO14698潔凈室及其48目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，很少有對(duì)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)方法提出要求的。目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，各種微生物只有生長(zhǎng)在如下兩種固體表面上的測(cè)試方法：瓊脂培養(yǎng)基和濾膜，才能夠得到確認(rèn)。潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，很少有對(duì)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)方法提出49培養(yǎng)基就是微生物檢驗(yàn)員的“分析儀器”。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制相當(dāng)于“培養(yǎng)基驗(yàn)證”。培養(yǎng)基=“分析儀器”培養(yǎng)基就是微生物檢驗(yàn)員的“分析儀器”。培養(yǎng)基=50TSATSA+吐溫80+卵磷脂TSA+酶關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基：TSA關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基：51第三部分：設(shè)備清潔第三部分：設(shè)備清潔52第一百四十三條清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。GMP2011年版：第一百四十三條GMP2011年版：53一、FDA對(duì)設(shè)備清潔“警告信”匯總二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？一、FDA對(duì)設(shè)備清潔“警告信”匯總541、沒(méi)有定期對(duì)設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)，有可能造成污染，并對(duì)藥品的安全性、鑒別特性、濃度/效價(jià)、質(zhì)量和純度造成影響。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：1、沒(méi)有定期對(duì)設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)，F(xiàn)DA關(guān)于設(shè)備潔凈“552、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維護(hù)沒(méi)有建立完善的規(guī)程。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：2、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“56微生物樣品的檢測(cè)和分析：（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。反應(yīng)物殘留、中間產(chǎn)物殘留、過(guò)濾介質(zhì)殘留-定性檢測(cè)，染色、鑒別污染菌是否是控制菌。可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）≤10X10-6專(zhuān)屬的方法只能檢測(cè)到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測(cè)到。我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）PDA技術(shù)報(bào)告：1998增刊52卷第6號(hào)3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。可以有效的水解β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)-定性檢測(cè)，染色、鑒別污染菌是否是控制菌。3、沒(méi)有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)、清潔、消毒和檢查記錄，無(wú)設(shè)備清潔、維護(hù)使用的記錄，包括日期及使用時(shí)間。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：微生物樣品的檢測(cè)和分析：3、沒(méi)有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)57寫(xiě)好要做的做好所寫(xiě)的記好所做的“GMP”口號(hào)：寫(xiě)好要做的“GMP”口號(hào)：58二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)59活性成分殘留輔料殘留物（非水溶性）清潔劑和溶劑殘留生物細(xì)胞及代謝物殘留微生物潤(rùn)滑油殘留物分類(lèi)：活性成分殘留殘留物分類(lèi)：60制劑殘留關(guān)注點(diǎn)：

殘留關(guān)注

通則

制劑API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）

微生物、清潔劑、潤(rùn)滑劑。

原料藥反應(yīng)物殘留、中間產(chǎn)物殘留、過(guò)濾介質(zhì)殘留

中藥溶解度最小、顏色最深

生物制劑細(xì)胞、代謝產(chǎn)物制劑殘留關(guān)注點(diǎn)：殘留關(guān)注通則61二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)621、實(shí)際的2、可以被驗(yàn)證的3、可實(shí)現(xiàn)的4、能夠經(jīng)得起科學(xué)推敲的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報(bào)告：1998增刊52卷第6號(hào)1、實(shí)際的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報(bào)告：1998631、目檢（肉眼檢測(cè)）2、化學(xué)檢驗(yàn)3、微生物檢驗(yàn)限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：1、目檢（肉眼檢測(cè)）限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：64原則：目檢不得有可見(jiàn)殘留。是直觀、定性、簡(jiǎn)單評(píng)估清潔的方式經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)：目見(jiàn)能發(fā)現(xiàn)最低的殘留物限度是1～4μg/cm2這是換品種生產(chǎn)時(shí)設(shè)備清潔的最低標(biāo)準(zhǔn)！1、肉眼檢測(cè)限度：該種方法不適用于高效、低劑量的產(chǎn)品。原則：目檢不得有可見(jiàn)殘留。1、肉眼檢測(cè)限度：該種方法不適用于651)殘留物濃度限度：10X10-6(百萬(wàn)分之十)2)生物活性度：正常治療劑量的1/10003)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)2、化學(xué)檢驗(yàn)—?dú)埩粑锵薅鹊拇_定1)殘留物濃度限度：10X10-6(百萬(wàn)分之十)2、6610X10-6/百萬(wàn)分之十/10ppm含義：上批產(chǎn)品殘留在設(shè)備里的物質(zhì)全部溶解到下批產(chǎn)品中的濃度限度≤10X10-6

檢測(cè)：最終沖洗水中殘留物的濃度限度

≤10X10-6（1）殘留物濃度限度10X10-6/百萬(wàn)分之十/10ppm（1）殘留物濃度限67正常治療劑量的1/1000含義：最低日治療劑量（MTDD）的1/1000檢測(cè)：

MTDD=

每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)允許殘留物總量（μg/cm2

）=

MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000

單個(gè)制劑質(zhì)量X每日最多使用制劑數(shù)X設(shè)備內(nèi)表面積（2）生物活性度（安全系數(shù)）：正常治療劑量的1/1000（2）生物活性度（安全系數(shù)）：68

可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.5%。（3）殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)：可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的69特殊產(chǎn)品，如致敏性產(chǎn)品（青霉素、頭孢類(lèi)）或高活性產(chǎn)品在使用最好的檢測(cè)手段的前提下，不應(yīng)被檢出。實(shí)際上意味著對(duì)于這類(lèi)產(chǎn)品需要采用專(zhuān)用生產(chǎn)設(shè)施。特殊產(chǎn)品的限度：特殊產(chǎn)品，如致敏性產(chǎn)品（青霉素、頭孢類(lèi)）或高活性產(chǎn)品在使用最70二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)71分析方法、取樣方法、以及殘留限度的關(guān)系取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收率或其它取樣工具的回收率。必須對(duì)以上因素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評(píng)價(jià)。設(shè)備清洗的正確評(píng)價(jià)：分析方法、取樣方法、以及殘留限度的關(guān)系設(shè)備清洗的正確評(píng)價(jià)：72專(zhuān)屬的方法只能檢測(cè)到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測(cè)到?；钚猿煞謱?zhuān)屬的清潔效果檢測(cè)方法，可能只能檢測(cè)到單一的活性成分殘留物。制劑生產(chǎn)的清潔驗(yàn)證都要用專(zhuān)屬的測(cè)試方法進(jìn)行檢測(cè)。

（1）專(zhuān)屬性的分析方法專(zhuān)屬的方法只能檢測(cè)到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測(cè)到73非專(zhuān)屬的方法將能夠檢測(cè)到許多不同的殘留物。非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。非專(zhuān)屬方法的主要優(yōu)點(diǎn)是這類(lèi)方法非常容易實(shí)施、具備高的靈敏度、不需要繁瑣的樣品制備。（2）非專(zhuān)屬性的分析方法非專(zhuān)屬的方法將能夠檢測(cè)到許多不同的殘留物。（2）非專(zhuān)屬性的分74專(zhuān)屬性分析方法VS非專(zhuān)屬性分析方法專(zhuān)屬性分析方法非專(zhuān)屬性分析方法近紅外分光光度法高效液相色譜法紅外光譜法原子吸收光譜儀毛細(xì)管電泳儀酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法總有機(jī)碳測(cè)定儀pH計(jì)滴定法電導(dǎo)重量分析法專(zhuān)屬性分析方法VS非專(zhuān)屬性分析方法專(zhuān)屬性分析方法非專(zhuān)屬性75檢驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。驗(yàn)證項(xiàng)目包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、耐用性、檢測(cè)限和定量限。方法學(xué)驗(yàn)證：檢驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法學(xué)驗(yàn)證：76（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；反彈離開(kāi)表面允許殘留物總量（μg/cm2）=4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。實(shí)際上意味著對(duì)于這類(lèi)產(chǎn)品需要采用專(zhuān)用生產(chǎn)設(shè)施。潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）干霧消毒、滅菌（冷處理）含義：上批產(chǎn)品殘留在設(shè)備里的物質(zhì)全第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：30～35℃不少于2天。API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）允許殘留物總量（μg/cm2）=（3）“無(wú)菌”平板培養(yǎng)基潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)能夠消除季胺類(lèi)化合物（苯扎溴銨、苯扎（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；專(zhuān)屬的方法只能檢測(cè)到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測(cè)到。取樣：無(wú)菌棉簽、無(wú)菌平板培養(yǎng)基或沖洗水。檢測(cè)

-定量檢測(cè)，建立警戒線和行動(dòng)線；

-定性檢測(cè)，染色、鑒別污染菌是否是控制菌。無(wú)菌制劑應(yīng)當(dāng)關(guān)注細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)。微生物樣品的檢測(cè)和分析：（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-577二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)78自動(dòng)清洗程序半自動(dòng)化清潔手工清潔清潔效果日常確認(rèn)自動(dòng)清洗程序清潔效果日常確認(rèn)79環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證80環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證環(huán)境消毒監(jiān)測(cè)與驗(yàn)證81

我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。

黎巴嫩紀(jì)伯倫（1883～1931）心得：我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)82第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒83表面擦拭手工噴霧蒸汽熏蒸（熱過(guò)程）干霧消毒、滅菌（冷處理）房間消毒的方法表面擦拭房間消毒的方法84一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。在越來(lái)越“以人為本”和“環(huán)境保護(hù)”的今天，應(yīng)該格外關(guān)注“甲醛”和“臭氧”等氣體消毒劑的不良影響。熏蒸一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。熏蒸85熏蒸（fumigating）滅菌概念：這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP

，如今已為世界各國(guó)普遍接受和采用。在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)毒劑由固態(tài)或液態(tài)迅速轉(zhuǎn)成氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。熏蒸有助于降低潔凈區(qū)內(nèi)死角的微生物污染。

熏蒸消毒：

熏蒸（fumigating）滅菌概念：熏蒸消毒：

86消毒滅菌時(shí)間：

12小時(shí)接觸時(shí)間（通常推薦）。排氣、通風(fēng)時(shí)間：

24小時(shí)。一個(gè)漫長(zhǎng)過(guò)程。甲醛熏蒸：消毒滅菌時(shí)間：甲醛熏蒸：87概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌和病毒。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。注意事項(xiàng)

(5)甲醛有致癌作用，不宜用于室內(nèi)空氣消毒。甲醛熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)88殺菌徹底，廣譜可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。無(wú)殘留，是一種無(wú)污染的消毒劑。臭氧是氣體滅菌，能迅速?gòu)浡秸麄€(gè)滅菌空間，滅菌無(wú)死角。

臭氧滅菌殺菌徹底，廣譜臭氧滅菌89

空氣消毒：用于無(wú)人的情況下，室

內(nèi)空氣的消毒。衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范200290注意事項(xiàng)

(1)臭氧對(duì)人有毒，國(guó)家規(guī)定大氣中允許濃度為

0.2mg/m3。

(2)臭氧為強(qiáng)氧化劑，對(duì)多種物品有損壞，濃度越高對(duì)物品損害越重，可使銅片出現(xiàn)綠色銹斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、斷裂，使織物漂白褪色等。使用時(shí)應(yīng)注意。

(3)多種因素可影響臭氧的殺菌作用，包括溫度、相對(duì)濕度、有機(jī)物、pH、水的渾濁度、水的色度等。使用時(shí)應(yīng)加以控制。

臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002注意事項(xiàng)臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范200291常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：1）醇類(lèi)：使蛋白質(zhì)變性。如75%酒精用于皮膚和容器表面消毒；10%丙二醇用于熏蒸消毒。（2）酚類(lèi)：損害細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。如苯酚一般使用濃度為0.5-3%，甲苯酚為2-5%。（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；2%戊二醛用于熏蒸消毒。常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：92（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。（5）氧化劑：作用于細(xì)菌酶系統(tǒng)。如0.2-0.5%過(guò)氧乙酸、高錳酸鉀、過(guò)氧化氫和臭氧等。（6）表面活性劑：作用于細(xì)菌質(zhì)膜，主要用于表面消毒、浸潤(rùn)消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新潔爾滅、0.05-0.1%杜滅芬、0.1-0.2%洗必泰。（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。93消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)介紹一種消毒劑和消毒方式消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸介紹一種消毒劑和消毒方式94干霧：小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。大液滴破碎而濕滑表面。干霧：小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。大液滴破碎而濕滑表面。95限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：消毒劑：過(guò)氧化氫和過(guò)氧乙酸用于霉菌和酵母菌取樣。（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。反彈離開(kāi)表面使用的記錄，包括日期及使用時(shí)間。（3）醛類(lèi)：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時(shí)；作為T(mén)AMC計(jì)數(shù)的一部分。概述：甲醛是一種滅菌劑，對(duì)所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌和病毒。3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果?？臻g分布均勻，符合布朗運(yùn)動(dòng)原理。原則：目檢不得有可見(jiàn)殘留。不濕潤(rùn)接觸的表面1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被取樣面積：不小于20cm2。大液滴破碎而濕滑表面。第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。生產(chǎn)7.5μm的液滴像氣體性質(zhì)

反彈離開(kāi)表面不濕潤(rùn)接觸的表面空間分布均勻，符合布朗運(yùn)動(dòng)原理。干霧系統(tǒng)限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：生產(chǎn)7.5μm的液滴干霧系統(tǒng)96潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）潔凈區(qū)操作人員行為的規(guī)范規(guī)范潔凈區(qū)操作人員的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的！潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持97第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)98細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)微生物總數(shù)細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)99細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：中國(guó)藥典歐洲藥典細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂30～35℃3天TSA30～35℃5天霉菌、酵母菌玫瑰紅鈉瓊脂23～28℃5天SDA20～25℃5天酵母菌酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂23～28℃5天/細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：中國(guó)藥典歐洲藥典細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂TSA霉菌、酵100采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。GB/T16293-2010GB/T16294-2010采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在3101細(xì)菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的真菌如何計(jì)數(shù)？真菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌如何計(jì)數(shù)？微生物計(jì)數(shù)的困惑

！細(xì)菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的真菌如何計(jì)數(shù)？微生物計(jì)數(shù)的困惑！102定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的包括真菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：1、細(xì)菌：30～35℃5天。

2、細(xì)菌：30～35℃2天；霉菌或酵母菌：20～25℃3天?？偤醚跷⑸飻?shù)（TAMC）：定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上總好氧微生物數(shù)（TA103定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的包括細(xì)菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：20～25℃5天。酵母菌和霉菌總數(shù)（TYMC）：定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上酵母菌和霉菌總數(shù)（T1041、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被作為T(mén)AMC計(jì)數(shù)的一部分。2、TYMC時(shí)，如果細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被作為T(mén)YMC計(jì)數(shù)的一部分。3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。計(jì)數(shù)原則：1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被計(jì)數(shù)原則：1051、殘留物如何確定？非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。3、分析方法如何驗(yàn)證？用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。允許殘留物總量（μg/cm2）=參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)MTDD=每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)臭氧是氣體滅菌，能迅速?gòu)浡秸麄€(gè)滅菌空間，采樣時(shí)培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)，裝置有接觸并拿開(kāi)后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。能夠消除洗必泰類(lèi)消毒劑的影響。潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評(píng)價(jià)。驗(yàn)證項(xiàng)目包括專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、耐用性、檢測(cè)限和定量限。潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的選擇？

（關(guān)鍵區(qū)域使用培養(yǎng)基的特殊要求）1、殘留物如何確定？潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的選擇？

（關(guān)鍵區(qū)106潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2011版）潔凈度級(jí)別浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu/4小時(shí)表面微生物接觸（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A級(jí)1111B級(jí)10555C級(jí)1005025－D級(jí)20010050－潔凈區(qū)微生物監(jiān)測(cè)的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)浮游菌沉降菌（90mm）表面微生107CHP2010CHP2010108《中國(guó)藥典》2010年版二部

附錄XIXQ“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。《中國(guó)藥典》2010年版二部109附錄B:B.3培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期的標(biāo)記。

GB/T16293-2010/GB/T16293-2010附錄B:GB/T16293-2010/GB/T1621101、TSA用于細(xì)菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：30～35℃

不少于2天。2、SDA用于霉菌和酵母菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：20～25℃不少于5天。環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：1、TSA環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：1113、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。以上摘自：GB/T16293-2010GB/T16294-2010環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：3、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：1121、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇環(huán)境監(jiān)測(cè)中常忽視的兩個(gè)方面：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素環(huán)境監(jiān)測(cè)中常忽視的兩個(gè)方面：113（1）API的殘留（2）消毒劑/殺孢子劑的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素（1）API的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素114抗菌素藥物活性成分API抗菌素API115非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000黎巴嫩紀(jì)伯倫（1883～1931）1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)，應(yīng)該被反彈離開(kāi)表面1、殘留物如何確定？用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)允許殘留物總量（μg/cm2）=大液滴破碎而濕滑表面。標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果。素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評(píng)價(jià)。MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。

消毒劑/殺孢子劑常見(jiàn)的化學(xué)消毒劑：1、酚類(lèi)2、醛類(lèi)3、過(guò)氧化氫類(lèi)4、季胺鹽類(lèi)化合物5、以上混合物非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的116（1）選擇性低下，營(yíng)養(yǎng)全面（2）含有中和劑（3）“無(wú)菌”平板培養(yǎng)基2、忽視培養(yǎng)基的選擇（1）選擇性低下，營(yíng)養(yǎng)全面2、忽視培養(yǎng)基的選擇117營(yíng)養(yǎng)瓊脂胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基的選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的選擇118參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)附錄XIJ表1：“常見(jiàn)干擾物中和劑或滅活方法”中和劑的使用：參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)中和劑的使用：119青霉素酶（β-內(nèi)酰胺酶）

可以有效的水解β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。

包括：

-青霉素G-氨基青霉素類(lèi)，如氨芐西林、阿莫西林、匹氨西等

-羧基青霉素類(lèi)，如羧芐西林、替卡西林等

-脲基青霉素類(lèi)，如呋芐西林、美洛西林等

-頭孢Ⅰ、Ⅱ酶（1）：青霉素酶青霉素酶（β-內(nèi)酰胺酶）酶（1）：青霉素酶120頭孢菌素酶

可以有效水解頭孢類(lèi)抗生素Ⅲ及以上的頭孢類(lèi)抗生素。

包括：頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松等。

酶（2）：頭孢菌素酶頭孢菌素酶酶（2）：頭孢菌素酶121抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-80

能夠消除六氯酚和含汞類(lèi)消毒劑的影響。2、卵磷脂能夠消除洗必泰類(lèi)消毒劑的影響。3、卵磷脂、吐溫-80

能夠消除季胺類(lèi)化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響。

抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-80122無(wú)菌平板培養(yǎng)基（預(yù)灌裝無(wú)菌培養(yǎng)基）理想的環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：無(wú)菌平板培養(yǎng)基理想的環(huán)境測(cè)試培養(yǎng)基：1231、A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)潔凈區(qū)直接使用2、室溫儲(chǔ)存3、有效期長(zhǎng)4、無(wú)菌包裝、包裝完整5、特制平板6、培養(yǎng)基灌裝量大無(wú)菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：1、A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)潔凈區(qū)直接使用無(wú)菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：12455mm接觸平板（RodacPlate）

ReplicateOrganismDetectionandCounting

GMP2011和EUGMP:-平板尺寸：15X55mm-取樣單位面積：25cm2

55mm接觸平板（RodacPlate）Repli125潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)（3）“無(wú)菌”平板培養(yǎng)基4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002內(nèi)空氣的消毒。2%戊二醛用于熏蒸消毒。輔料殘留物（非水溶性）3)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.非專(zhuān)屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。參見(jiàn)：“中國(guó)藥典”2010年版附錄109頁(yè)干霧消毒、滅菌（冷處理）內(nèi)空氣的消毒。小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。5%過(guò)氧乙酸、高錳酸鉀、過(guò)氧化氫和臭氧等。總好氧微生物數(shù)（TAMC）：微生物樣品的檢測(cè)和分析：API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）接觸板的取樣面積：24～30cm2

USP〈1116〉

潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物評(píng)估

潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)接觸板的取樣面積：24～30c126取樣面積：不小于20cm2

。取樣方法：

采樣時(shí)培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)，裝置有接觸并拿開(kāi)后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。ISO14698潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境取樣面積：不小于20cm2。ISO14698潔凈室及其127目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，很少有對(duì)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)方法提出要求的。目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，各種微生物只有生長(zhǎng)在如下兩種固體表面上的測(cè)試方法：瓊脂培養(yǎng)基和濾膜，才能夠得到確認(rèn)。潔凈環(huán)境微生物檢測(cè)：方法確認(rèn)目前各類(lèi)官方的指導(dǎo)原則中，很少有對(duì)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)方法提出128培養(yǎng)基就是微生物檢驗(yàn)員的“分析儀器”。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制相當(dāng)于“培養(yǎng)基驗(yàn)證”。培養(yǎng)基=“分析儀器”培養(yǎng)基就是微生物檢驗(yàn)員的“分析儀器”。培養(yǎng)基=129TSATSA+吐溫80+卵磷脂TSA+酶關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基：TSA關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基：130第三部分：設(shè)備清潔第三部分：設(shè)備清潔131第一百四十三條清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。GMP2011年版：第一百四十三條GMP2011年版：132一、FDA對(duì)設(shè)備清潔“警告信”匯總二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？一、FDA對(duì)設(shè)備清潔“警告信”匯總1331、沒(méi)有定期對(duì)設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)，有可能造成污染，并對(duì)藥品的安全性、鑒別特性、濃度/效價(jià)、質(zhì)量和純度造成影響。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：1、沒(méi)有定期對(duì)設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)，F(xiàn)DA關(guān)于設(shè)備潔凈“1342、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維護(hù)沒(méi)有建立完善的規(guī)程。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：2、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“135微生物樣品的檢測(cè)和分析：（4）酸類(lèi)：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。反應(yīng)物殘留、中間產(chǎn)物殘留、過(guò)濾介質(zhì)殘留-定性檢測(cè)，染色、鑒別污染菌是否是控制菌?？捎糜谇逑吹幕瘜W(xué)溶劑(三級(jí)溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）≤10X10-6專(zhuān)屬的方法只能檢測(cè)到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測(cè)到。我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）PDA技術(shù)報(bào)告：1998增刊52卷第6號(hào)3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長(zhǎng)而超過(guò)了可接受對(duì)霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。適用范圍：可用于對(duì)濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。可以有效的水解β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素。微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)-定性檢測(cè)，染色、鑒別污染菌是否是控制菌。3、沒(méi)有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)、清潔、消毒和檢查記錄，無(wú)設(shè)備清潔、維護(hù)使用的記錄，包括日期及使用時(shí)間。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：微生物樣品的檢測(cè)和分析：3、沒(méi)有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)136寫(xiě)好要做的做好所寫(xiě)的記好所做的“GMP”口號(hào)：寫(xiě)好要做的“GMP”口號(hào)：137二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)138活性成分殘留輔料殘留物（非水溶性）清潔劑和溶劑殘留生物細(xì)胞及代謝物殘留微生物潤(rùn)滑油殘留物分類(lèi)：活性成分殘留殘留物分類(lèi)：139制劑殘留關(guān)注點(diǎn)：

殘留關(guān)注

通則

制劑API、過(guò)濾介質(zhì)殘留（如果有）

微生物、清潔劑、潤(rùn)滑劑。

原料藥反應(yīng)物殘留、中間產(chǎn)物殘留、過(guò)濾介質(zhì)殘留

中藥溶解度最小、顏色最深

生物制劑細(xì)胞、代謝產(chǎn)物制劑殘留關(guān)注點(diǎn)：殘留關(guān)注通則140二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)1411、實(shí)際的2、可以被驗(yàn)證的3、可實(shí)現(xiàn)的4、能夠經(jīng)得起科學(xué)推敲的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報(bào)告：1998增刊52卷第6號(hào)1、實(shí)際的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報(bào)告：19981421、目檢（肉眼檢測(cè)）2、化學(xué)檢驗(yàn)3、微生物檢驗(yàn)限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：1、目檢（肉眼檢測(cè)）限度規(guī)格制定