病毒總論課件

病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件1病毒學(xué)總論病毒學(xué)總論2思考題什么是病毒？病毒區(qū)于細(xì)菌、真菌的特征是什么？感染病毒的分離增殖方式有哪幾種？病毒感染的檢測方法有哪幾種？病毒感染的防治措施是什么？思考題什么是病毒？3病毒與病毒學(xué)病毒（Virus）是一種體積小，非細(xì)胞形態(tài)的微生物,其基因組只含有一種類型的核酸(DNA或RNA)。病毒體內(nèi)缺乏產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng),只能寄生在活細(xì)胞內(nèi),依靠宿主細(xì)胞提供原料和酶系統(tǒng),以復(fù)制方式進(jìn)行增殖。

病毒學(xué)（Virology）就是研究病毒的本質(zhì)、病毒與宿主相互作用和規(guī)律的一門生命科學(xué)。病毒與病毒學(xué)病毒（Virus）是一種體積小，非細(xì)胞形4病毒的重要性

1多70%急性傳染2高發(fā)病率高死亡率高一生200次3新不斷出現(xiàn)新的疾病老年性癡呆與朊病毒瘋牛病4致畸5轉(zhuǎn)化腫瘤

HPVHSV—子宮頸癌HBV—肝

EBV—鼻咽癌6無藥無特效治療藥物病毒的重要性5主要內(nèi)容病毒的基本性狀病毒的感染與免疫病毒感染的檢測與防治主要內(nèi)容病毒的基本性狀6病毒的基本性狀病毒的大小與形態(tài)病毒的結(jié)構(gòu)（核酸與蛋白質(zhì)）病毒的培養(yǎng)與增殖病毒的遺傳與變異病毒的分類病毒的基本性狀病毒的大小與形態(tài)7特性病毒細(xì)菌真菌濾菌器+

±—結(jié)構(gòu)非細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞細(xì)胞壁—++核酸類型DNA或RNADNA＋RNADNA＋RNA人工培養(yǎng)—++增殖方式復(fù)制二分裂有性或無性抗生素—++干擾素+——特性病毒細(xì)菌真菌濾菌器+±—結(jié)構(gòu)非細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)8一、病毒的大小與形態(tài)一、病毒的大小與形態(tài)9病毒總論課件10病毒粒子（virion）完整的成熟病毒顆粒，具有典型的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并具有感染性。測量單位為納米（nm,為1/1000m）<50

nm小型病毒50nm-150nm中等大小病毒（大多數(shù)）>150nm大型病毒（最大300nm）多數(shù)病毒呈球形或近似球形，桿狀，絲狀，少數(shù)可為子彈狀、磚塊狀，噬菌體可呈蝌蚪狀。病毒粒子（virion）完整的成熟病毒顆粒，具有典型的11微生物的大小比較葡萄球菌(1000nm）牛痘病毒300×250nmABCDEFG立克次體450nm衣原體390nmA、大腸桿菌噬菌體(65×95nm)B、腺病毒(70nm)C、脊髓灰質(zhì)炎病毒(30nm)D、乙腦病毒(40nm)E、蛋白分子(10nm)F、流感病毒(100nm)G、煙草花葉病毒微生物的大小比較葡萄球菌牛痘病毒ABCDEFG立克次體衣原12CaliciVirusCaliciVirus13病毒總論課件14HIVHIV15RhinovirusRhinovirus16VSV:VesicularstomatitisvirusVSV:Vesicularstomatitisviru17病毒總論課件18病毒總論課件19BacteriophageT4BacteriophageT420EbolaVirusEbolaVirus21二、病毒的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)核心

Viralcore衣殼

Capsid輔助結(jié)構(gòu)包膜

Envelope其他病毒體

Virion核衣殼

Nucleocapsid二、病毒的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)22病毒體結(jié)構(gòu)模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包膜粒子病毒體結(jié)構(gòu)模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包23病毒總論課件24病毒核心//核酸（viralcore）多樣性DNA

dsDNA

ssDNA

dsRNARNA

ssRNA

±

分節(jié)段RNA

±線狀、環(huán)狀大小懸殊復(fù)制方式多樣存在形式多樣病毒核心//核酸（viralcore）多樣性DNA25病毒總論課件26病毒總論課件27病毒核酸的功能功能病毒遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

決定病毒的種屬特異性:克隆和表達(dá)決定病毒的感染性：完整則有;編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白大型病毒的核酸分子量相對(duì)大，能編碼病毒的全部結(jié)構(gòu)蛋白和病毒復(fù)制所需的許多酶小病毒的核酸分子小，可能不編碼這些酶，因此復(fù)制時(shí)要宿主細(xì)胞提供病毒核酸的功能功能28病毒核酸的特性具有感染性將提純的病毒核酸（如腸道病毒RNA）如轉(zhuǎn)至活細(xì)胞內(nèi)，即可啟動(dòng)病毒復(fù)制而感染細(xì)胞，并從可感染細(xì)胞中獲得子代完整病毒顆粒。逆轉(zhuǎn)錄性一些病毒顆粒中含逆轉(zhuǎn)錄酶，可以將病毒RNA逆轉(zhuǎn)成DNA；純化裸露的＋RNA具有感染性？？純化裸露的—RNA則不具感染性？？病毒核酸的特性具有感染性29病毒總論課件30Verycondensedgenomes有內(nèi)含子，ORF間有重疊

OverlappinggenesUsingdifferentreadingframesreadingbothstrandsVerycondensedgenomes31病毒蛋白質(zhì)——由病毒核酸編碼結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的成分

衣殼蛋白

包膜蛋白

基質(zhì)蛋白——連接衣殼蛋白與包膜蛋白的部分，有跨膜及錨定功能區(qū)非結(jié)構(gòu)蛋白病毒內(nèi)——酶感染細(xì)胞內(nèi)——特殊作用蛋白病毒蛋白質(zhì)——由病毒核酸編碼結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的成分32病毒衣殼（viralcapsid）核心外的蛋白質(zhì)由殼微粒（capsomere）組成；它是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，多肽分子是它的化學(xué)亞單位。功能保護(hù)病毒核酸，免受核酸酶的破壞參與病毒感染細(xì)胞的過程病毒表面蛋白+宿主細(xì)胞膜受體

具有抗原性病毒衣殼（viralcapsid）核心外的蛋白質(zhì)33核殼粒的排列方式螺旋對(duì)稱型（helicalsymmetry）20面體立體對(duì)稱型（icosahedralsymmetry）復(fù)合對(duì)稱型（complexsymmetry）核殼粒的排列方式螺旋對(duì)稱型（helicalsymmetry34病毒總論課件35五鄰體六鄰體五鄰體六鄰體36六鄰體五鄰體纖突頂球六鄰體五鄰體纖突頂球37RNA/DNA殼粒RNA/DNA殼粒38病毒總論課件39病毒包膜（viralenvelope）是包繞在病毒核衣殼外面的脂質(zhì)雙層膜主要成分是蛋白質(zhì)、多糖及脂類，常以糖蛋白或脂蛋白形式存在蛋白質(zhì)是由病毒基因編碼，多糖、脂類來自宿主細(xì)胞膜、核膜或空泡膜病毒包膜（viralenvelope）是包繞在病毒核衣殼外40包膜特性與功能有包膜的病毒以“出芽”（budding）方式釋放時(shí)獲得包膜子粒（peplomere）或刺突（spike）賦予病毒特殊功能，如血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）包膜病毒對(duì)脂溶劑（如乙醚、氯仿）敏感，能被消除包膜而失活（？？）——鑒定；它還與病毒的入侵途徑相關(guān)（有－呼吸道；無－抗膽汁，腸道）。包膜特性與功能有包膜的病毒以“出芽”（budding）方式釋41包膜功能維護(hù)病毒體結(jié)構(gòu)的完整性具有介導(dǎo)與宿主細(xì)胞膜親和及融合的性能具有病毒抗原的特異性（刺突）毒素樣作用，包膜脂蛋白使機(jī)體發(fā)熱、血壓降低、全身中毒包膜功能維護(hù)病毒體結(jié)構(gòu)的完整性42須觸（觸須樣纖維）

無包膜的病毒可有其他的特殊結(jié)構(gòu)（如腺病毒）：在核衣殼的頂角上長出12根細(xì)長的須觸，形狀似大頭針；功能：可凝集、毒害敏感細(xì)胞。須觸（觸須樣纖維）43病毒粒子的觀察方法電子顯微鏡（Electronmicroscopy）Resolutionproblem:EMresolutionis5nm-anatomisabout0.2-0.3nmdiameter,analphahelixmotifis1nMdiameter,DNAis2nmindiameter.X線晶體衍射（Xraycrystallography）超過濾法

超速離心法病毒粒子的觀察方法電子顯微鏡（Electronmicros44XraycrystallographyXraycrystallography45三、病毒的培養(yǎng)與增殖CultureandReplicationofViruses三、病毒的培養(yǎng)與增殖CultureandReplicat46病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物（Animals）雞胚（Embryonatedeggs）組織培養(yǎng)（Organandtissueculture）

Organculture

胚胎

Embryoculture

Cellculture:原代細(xì)胞傳代細(xì)胞 雙倍體細(xì)胞病毒的培養(yǎng)方式動(dòng)物（Animals）47病毒總論課件48病毒總論課件49常用的培養(yǎng)細(xì)胞常用的培養(yǎng)細(xì)胞50細(xì)胞病變(Cytopathiceffect,CPE)包涵體（InclusionBodies）病毒在培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞病變(Cytopathiceffect,CPE)病毒51正常BHK-21正常BHK-2152CPE//

BHK-21CPE//BHK-2153狂犬病毒包涵體——內(nèi)基小體（Negribody）狂犬病毒包涵體——內(nèi)基小體（Negribody）54巨細(xì)胞病毒包涵體巨細(xì)胞病毒包涵體55病毒數(shù)量和感染性測定1、蝕斑試驗(yàn)2、ID50

或TCID50病毒感染雞胚、動(dòng)物或細(xì)胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑（CPE)；蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體增殖形成的，即為一個(gè)蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。病毒數(shù)量和感染性測定1、蝕斑試驗(yàn)2、ID50或TCID556病毒的增殖活細(xì)胞敏感細(xì)胞復(fù)制(replication)：以病毒基因?yàn)槟０?藉DNA多聚酶或RNA多聚酶及其它因素的作用,指令細(xì)胞停止合成細(xì)胞的蛋白質(zhì)與核酸，轉(zhuǎn)為復(fù)制病毒的基因組，轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯出相應(yīng)的病毒蛋白，最終釋放出子代病毒。病毒的增殖活細(xì)胞57病毒復(fù)制周期復(fù)制周期（replicationcycle）吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配與釋放病毒本身沒有獨(dú)立的蛋白合成酶系統(tǒng)，必須借助宿主細(xì)胞的蛋白合成體系合成病毒蛋白病毒復(fù)制周期時(shí)間因病毒而異腺病毒25h小RNA病毒6-8h流感病毒15-30h病毒復(fù)制周期復(fù)制周期（replicationcycle）58吸附:①靜電結(jié)合:非特異，可逆的；０～３７℃，Na+、Mg+、Ca+等有關(guān);②受體結(jié)合:病毒表面接觸蛋白+易感細(xì)胞受體特異,不可逆;３７℃,化學(xué)反應(yīng)。

eg.犬類不感染麻疹,而人不感染犬瘟病毒*一種細(xì)胞上不可能具有全部病毒受體，只有細(xì)胞表面存在該病毒受體時(shí)，才能發(fā)生感染。*

阻止吸附是目前預(yù)防病毒感染的重要研究課題之一。消除細(xì)胞表面受體阻止病毒與受體接觸，或特異抗體吸附:59穿入（Penetration）吞飲（pinocytoticvacuole）無包膜病毒被宿主細(xì)胞吞噬，進(jìn)入胞內(nèi)融合（fusion)有包膜病毒的包膜與宿主細(xì)胞膜直接融合，病毒核衣殼進(jìn)入細(xì)胞直接穿入穿入（Penetration）吞飲（pinocytotic60脫殼:

在溶酶體酶作用下脫殼,釋放基因組核酸。脫殼:61HIVHIV62influenzavirusinfluenzavirus63生物合成（Biosynthesis）早期蛋白合成階段轉(zhuǎn)錄、翻譯而產(chǎn)生病毒生物合成中必需的酶類及某些抑制或阻斷細(xì)胞核酸和蛋白質(zhì)合成的非結(jié)構(gòu)蛋白晚期蛋白合成階段復(fù)制病毒核酸，轉(zhuǎn)錄、翻譯而產(chǎn)生病毒的結(jié)構(gòu)蛋白隱蔽期生物合成階段用電鏡方法在細(xì)胞查不到完整病毒，用血清學(xué)方法也測不到病毒抗原各病毒隱蔽期長短不一，如Poliovirus為3～4小時(shí)，而Adenovirus為16～18小時(shí)。生物合成（Biosynthesis）早期蛋白合成階段64裝配（Assembly）無包膜病毒先形成空心衣殼，核酸從衣殼裂隙進(jìn)入形成核衣殼有包膜病毒核衣殼與細(xì)胞的膜系統(tǒng)（漿膜或核膜）結(jié)合形成包膜包膜的蛋白質(zhì)（包括糖蛋白）是由病毒基因組編碼，故具有病毒的特異性和抗原性裝配的部位除痘病毒外，DNA病毒均在細(xì)胞核內(nèi)裝配RNA病毒與痘病毒則在細(xì)胞漿內(nèi)裝配裝配（Assembly）無包膜病毒65釋放（release）無包膜病毒均以破胞方式釋放有包膜的病毒以出芽方式釋放到細(xì)胞外通常細(xì)胞不死亡，仍能繼續(xù)分裂增殖釋放（release）無包膜病毒66病毒總論課件67病毒總論課件68dsDNA病毒復(fù)制示意圖dsDNA病毒復(fù)制示意圖69dsDNAvirusReplicationViralgenomeTranscriptionEarlymRNATranslationEarlyproteins(enzymes)Semi-conservativetranscriptionTranscriptionLatemRNATranslationLateproteins(structuralproteins)AssemblyReleaseExamplesVacciniavirusHSVAdenovirusPolymavirusdsDNAvirusReplicationViralg70+ssRNA病毒復(fù)制示意圖+ssRNA病毒復(fù)制示意圖71+ssRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制示意圖+ssRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制示意圖72ADSORPTIONbuddingHIV復(fù)制過程ADSORPTIONbuddingHIV復(fù)制過程73皰疹病毒的復(fù)制過程皰疹病毒的復(fù)制過程74病毒總論課件75病毒增殖異常缺陷病毒（Defectivevirus）頓挫感染（Abortiveinfection）干擾現(xiàn)象（Interference）病毒增殖異常缺陷病毒（Defectivevirus）76缺陷病毒（defectivevirus）：病毒遺傳變異的突變或基因工程操作，使病毒基因不完整或基因位點(diǎn)改變，影響了病毒復(fù)制或成熟的一個(gè)或幾個(gè)基因功能，不能復(fù)制出完整的具有感染性的病毒顆粒。天然缺陷病毒：腺病毒相關(guān)病毒（缺陷病毒）與腺病毒（輔助病毒）丁型肝炎病毒（缺陷病毒）與乙型肝炎病毒（輔助病毒)缺陷干擾顆粒（defectiveinterferingparticles,DIP)

缺陷病毒不能復(fù)制，但卻能干擾同種成熟病毒體進(jìn)入細(xì)胞。缺陷病毒（defectivevirus）：病毒遺傳變異77干擾現(xiàn)象interference——當(dāng)兩種病毒同時(shí)感染同一細(xì)胞時(shí)，可發(fā)生一種病毒的增殖抑制了另一種病毒增殖的現(xiàn)象。產(chǎn)生原因——干擾素interferon，IFN——第一種病毒改變了宿主細(xì)胞表面受體結(jié)構(gòu)或細(xì)胞代謝途徑；或抑制第二種病毒mRNA的轉(zhuǎn)譯?！毕莞蓴_病毒（DIP）干擾輔助病毒的復(fù)制意義指導(dǎo)使用聯(lián)合疫苗干擾現(xiàn)象interference78輔助病毒helpervirus

——能提供給缺陷病毒所需要的因子（主要是酶、蛋白質(zhì)）的病毒。

缺陷病毒+輔助病毒——增殖頓挫感染（流產(chǎn)性感染）：有些細(xì)胞不能為病毒復(fù)制提供必須物質(zhì)，不能復(fù)制出具有傳染性的病原體，這種感染過程為流產(chǎn)性感染；這種細(xì)胞為非容許細(xì)胞（non-permissivecell）。容許性細(xì)胞非容許性細(xì)胞輔助病毒helpervirus——能提供給缺陷病毒所需要79頓挫感染（Abortiveinfection）原因宿主細(xì)胞不能提供病毒復(fù)制所需的酶、能量或成份病毒雖被復(fù)制，但不能裝配釋放Eg.

人腺病毒在人胚腎細(xì)胞可復(fù)制，在猴腎細(xì)胞則不能復(fù)制頓挫感染（Abortiveinfection）原因80理化因素對(duì)病毒的影響滅活（Inactivation）病毒受理化因素作用后，失去感染性滅活病毒仍保留某些特性，如抗原性、紅細(xì)胞吸附、細(xì)胞融合等理化因素對(duì)病毒的影響滅活（Inactivation）81物理因素溫度病毒耐冷不耐熱。-70oC長期保存。凍融可殺死病毒60oC30min或100oC數(shù)秒即可殺死病毒，但HBV需100oC10min方可殺死有包膜病毒比無包膜病毒對(duì)熱更敏感pH多數(shù)在pH5~9范圍穩(wěn)定腸道病毒耐酸（pH3~5）射線和UVX線、射線可將病毒核酸致死性斷裂，從而殺死病毒UV：使核苷酸形成二聚體（T—U），抑制病毒復(fù)制，但可光復(fù)活，不宜用來制備疫苗物理因素溫度82化學(xué)因素脂溶劑：乙醚、氯仿、去氧膽酸鹽有包膜病毒敏感。無包膜病毒無作用（如腸道病毒）乙醚試驗(yàn)可鑒別病毒有無包膜消毒劑：過氧乙酸、甲醛、戊二醛、鹵素殺死大多數(shù)病毒，但病毒對(duì)消毒劑抵抗力比細(xì)菌強(qiáng)，尤其是無包膜病毒常用甲醛來制備滅活疫苗其他抗生素：對(duì)病毒無作用中草藥：有一定作用化學(xué)因素脂溶劑：乙醚、氯仿、去氧膽酸鹽83四、病毒的遺傳與變異傳統(tǒng)遺傳學(xué)分子遺傳學(xué)四、病毒的遺傳與變異傳統(tǒng)遺傳學(xué)84病毒的變異現(xiàn)象感染性變異（毒力、空斑、抵抗力變異）條件致死株：減毒活疫苗（脊灰）抗原性變異耐藥性變異宿主范圍變異機(jī)制基因突變////基因重組病毒的變異現(xiàn)象85基因突變（Mutation)——基因組中堿基序列發(fā)生改變，點(diǎn)突變和缺失性突變。

自發(fā)或誘導(dǎo)發(fā)生;環(huán)境僅起選擇作用而非誘導(dǎo)作用。基因突變（Mutation)——基因組中堿基序列發(fā)生改變，點(diǎn)86頻率：10-6-10-8，理化因素可以改變突變率有醫(yī)學(xué)意義的突變株mutant條件致死性突變株（conditional-lethalmutant）是指在某種條件下能夠增殖、而在另種條件下不能增殖的病毒株。溫度敏感性突變株（temperature-sensitivemutant，ts）就是典型的條件致死性突變株。ts是生產(chǎn)疫苗的理想毒株

——28～35℃可以復(fù)制，37～40℃不能復(fù)制——脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗頻率：10-6-10-8，理化因素可以改變突變率87——宿主范圍突變株（host-rangemutant，hr）狂犬病疫苗（固定毒株）——耐藥突變株（drug-resistantmutant）——抗原性突變株——變異株//突變株variant能穩(wěn)定地存在，可在相應(yīng)的宿主或細(xì)胞中傳代與存活。——宿主范圍突變株（host-rangemutant，hr88基因重組（Recombination)可發(fā)生于兩活病毒之間、一活病毒與另一滅活病毒之間，也可發(fā)生于兩種滅活病毒之間，甚至發(fā)生在病毒基因組與宿主染色體間。基因重組（Recombination)可發(fā)生于兩活病毒之間、89不分節(jié)段基因組病毒的重組核酸內(nèi)切酶和連接酶的作用，使兩種病毒核酸分子發(fā)生斷裂和交叉連接，導(dǎo)致其序列重新排列。分節(jié)段RNA病毒基因組的重組是不同親代病毒產(chǎn)生的后代核酸各個(gè)分子間交換，即子代核酸節(jié)段隨機(jī)分配構(gòu)成重組的子代病毒，從而使子代基因組發(fā)生改變，亦稱重配（reassortment），發(fā)生頻率高；如流感病毒。不分節(jié)段基因組病毒的重組90病毒總論課件91A、重組與重配（基因間相互作用）1、重組recombinationA、重組與重配（基因間相互作用）1、重組recombinat922、重配reassortment2、重配reassortment93B、基因整合：病毒進(jìn)入細(xì)胞后，核酸整合，不產(chǎn)生子代病毒。C、裝配異常

A、未裝進(jìn)核酸的空殼

B、裝進(jìn)宿主細(xì)胞的核酸B、基因整合：病毒進(jìn)入細(xì)胞后，核酸整合，不產(chǎn)94基因復(fù)活交叉復(fù)活多重復(fù)活基因復(fù)活交叉復(fù)活95交叉復(fù)活（Crossingreactivation）活病毒與滅活病毒間，也稱Markerrescue流感A2株與滅活A(yù)1株共同培養(yǎng)，可得到有A1抗原性的A2毒株多重復(fù)活（Multiplicityreactivation）滅活病毒間，兩種或兩種以上同種病毒感染同一細(xì)胞時(shí)，經(jīng)過基因重組出現(xiàn)有活的、感染性子代病毒。交叉復(fù)活（Crossingreactivation）96基因產(chǎn)物的相互作用互補(bǔ)作用（Complementation）病毒基因組與細(xì)胞染色體DNA整合（integration）表型混合（Phenotypicmixing）基因產(chǎn)物的相互作用互補(bǔ)作用（Complementation）97表型混合兩株病毒共同or混合感染時(shí)，裝配過程發(fā)生錯(cuò)誤而交換蛋白衣殼，不換核酸，從而導(dǎo)致發(fā)生一些生物學(xué)特征改變。主要表現(xiàn)為耐藥性、抗原性等改變，基因并未改變，改變的生物學(xué)性狀不能遺傳表型混合兩株病毒共同or混合感染時(shí)，裝配過程發(fā)生錯(cuò)誤而交換蛋98病毒總論課件99virusAvirusBphenotypemixing

virusAvirusBvirusAvirusBphenotypevirusA100分子遺傳學(xué)病毒基因組分析病毒核苷酸測序：基因結(jié)構(gòu)：ORF基因功能：表位：變異、耐藥、研究手段：點(diǎn)突變、缺失、置換、敲出、比對(duì)

病毒保護(hù)性抗原表位的確定病毒抗原高變區(qū)分析毒力相關(guān)基因編碼區(qū)分析耐藥性變異分析作用于病毒蛋白質(zhì)的某些細(xì)胞蛋白的研究分子遺傳學(xué)病毒基因組分析101

病毒基因組學(xué)

微生物基因組學(xué)(Genomics)是利用全基因組DNA序列研究微生物基因及其功能的學(xué)科。近年來，由于DNA測序自動(dòng)化與信息技術(shù)的飛躍發(fā)展，用1～2月時(shí)間就可完成一種微生物的全基因組序列測定。自1995年美國首次將第一個(gè)原核細(xì)菌—流感嗜血桿菌的全基因組序列公布以來，目前（截止到2002年4月4日）至少已有75種病原菌的全基因組測序已告完成，另有超過20多種病原菌的全基因組測序正在進(jìn)行，數(shù)以萬計(jì)的病原菌基因?qū)⒈昏b定出來。病毒基因組學(xué)102

病毒的核酸是決定病毒的感染性、復(fù)制特性、遺傳性的基礎(chǔ)。隨著病毒基因克隆、序列分析及基因表達(dá)等技術(shù)的應(yīng)用，目前幾乎對(duì)所有病毒科的代表病毒進(jìn)行了基因克隆與核苷酸測序。

病毒基因的序列對(duì)于了解可能編碼的病毒蛋白的數(shù)量和性質(zhì)、病毒基因復(fù)制和表達(dá)的調(diào)控機(jī)制具有重要意義。病毒的核酸是決定病毒的感染性、復(fù)制特性103

從DNA序列數(shù)據(jù)庫查詢HBVDNA序列：NCBI

NationalCenterforBiotechnologyInformationEMBLEuropeanMolecularBiologyLaboratory）DDBJDNADataBankofJapan從DNA序列數(shù)據(jù)庫查詢HBVDNA序列：104

微生物基因組序列測定的意義

獲得微生物全基因組序列是認(rèn)識(shí)微生物完整生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。完整的基因組序列資料有助于更精確地研究微生物的形態(tài)發(fā)生、生長代謝、遺傳變異，鑒定有關(guān)的毒力及致病基因、抗微生物藥物作用的靶位，為研制和發(fā)展特異的診斷試劑和疫苗提供參考。微生物基因組序列測定的意義105五、病毒的分類

（ClassificationofViruses）五、病毒的分類

（Classificationof106根據(jù)生物學(xué)和理化學(xué)特性分類，按科（family）（亞科subfamily）、屬（genus）、種（species）分類1995年國際病毒分類委員會(huì)將動(dòng)植物病毒4000余種分為71科、11亞科、164屬根據(jù)組織親嗜性分類對(duì)臨床有實(shí)際意義根據(jù)生物學(xué)和理化學(xué)特性分類，按科（family）（亞科sub107微生物的命名法細(xì)菌：拉丁雙名法屬在前，第一個(gè)字母大寫，種在后，小寫。均斜體StaphylococcusaureusEscherichiacoli病毒科（family）、亞科（subfamily）、屬（genus）斜體，第一個(gè)字母大寫Herpesviridae，Enterovirus種（species）不大寫，不任何，如poliovirus微生物的命名法細(xì)菌：拉丁雙名法108生物學(xué)分類原則

（BasisofClassification）核酸類型和結(jié)構(gòu)（RNA/DNA,ds/ss,linear/circular,fragment/no-fragment)病毒體形狀和大小病毒體形態(tài)結(jié)構(gòu)對(duì)脂溶劑敏感性生物學(xué)分類原則（BasisofClassificati109DNAviruses1、dsDNA,Presence

ofanenvelopePoxviridae（痘病毒科）Herpesviridae（皰疹病毒科）2、dsDNA,

absenceofanenvelopeAdenoviridae（腺病毒科）

Paproavairidae（乳多空病毒科）3、ssDNA,

absence

ofanenvelopeParaoviridae（細(xì)小病毒科）

DNAviruses1、dsDNA,Presenceo110dsRNA，fragments，absenceenvelopeReoviridae（呼腸病毒科）

Birnaviridae（雙RNA病毒科）-ssRNA,nofragment,Presenceenvelope

Paramyxoviridae（副粘病毒科）

Rhabdoviridae（彈狀病毒科）-ssRNA，fragments，PresenceenvelopeOrthomyxoviridae（正粘病毒科）

Bunyaviridae（布尼亞病毒科）

Arenaviridae（沙粒病毒科）+ssRNA,nofragments,absenceenvelope

Picornaviridae（小RNA病毒科）

Caliciviridae（杯狀病毒科）

Astroviridae（星狀病毒科）+ssRNA,nofragments,presenceenvelope

Coronaviridae（冠狀病毒科）

Flaviviridae（黃病毒科）Togaviridae（披膜病毒科）RNAVirusesdsRNA，fragments，absenceenvelo111DNAandRNAViruses嗜肝DNA病毒科（Hepadnasviridae）逆轉(zhuǎn)錄病毒科//RNA（Retroviridae）DNAandRNAViruses嗜肝DNA病毒科（He112

亞病毒（subvirus）是近年來發(fā)現(xiàn)的比一般病毒更小的傳染因子。包括類病毒（viroid）擬病毒（virusoid）朊病毒（virino）亞病毒（subvirus）113

類病毒（Viroids）1971年,美國Diener等在研究馬鈴薯紡錘形塊疾病時(shí)報(bào)道并命名。類病毒的大小僅為最小病毒的1／20左右。由單股環(huán)狀RNA組成，桿狀結(jié)構(gòu)，無蛋白衣殼。對(duì)核酸酶敏感，對(duì)熱、有機(jī)溶劑抵抗。致病機(jī)制可能是由于RNA分子直接干擾宿主細(xì)胞的核酸代謝。類病毒主要使植物致病，尤其引起馬鈴薯、柑橘、椰子、啤酒花等多種重要經(jīng)濟(jì)植物的嚴(yán)重病害。類病毒（Viroids）114類病毒的特征很小(200-400nt)，桿狀

RNA

分子，有二級(jí)結(jié)構(gòu)無衣殼或包膜在核內(nèi)增殖，嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生

多與植物疾病相關(guān)類病毒的特征很小(200-400nt)，桿狀RNA分子115擬病毒

是在研究類病毒過程中發(fā)現(xiàn)的一種引起苜宿等植物病毒的亞病毒。擬病毒是300～400個(gè)核苷酸，有高度二級(jí)結(jié)構(gòu)的單股環(huán)狀RNA分子。擬病毒在二級(jí)結(jié)構(gòu)上與類病毒相似，且與許多類病毒有序列同源性。擬病毒116

朊病毒1982年美國Prusiner首先報(bào)道羊瘙癢病是由一種分子量為3．0X104的蛋白質(zhì)感染因子引起的。阮病毒也稱蛋白侵染子（prion），對(duì)蛋白酶、氨基酸化學(xué)修飾劑、蛋白質(zhì)變性劑敏感，而對(duì)核酸酶、核著酸修飾劑和核酸變性劑等有抵抗，這顯示阮病毒是蛋白質(zhì)成分而不是核酸。阮病毒蛋白質(zhì)（PrP）的分子量為27000～30000，是構(gòu)成阮病毒的基本單位。其本身無感染性，由3個(gè)PrP分子構(gòu)成的朊病毒單體則有極強(qiáng)的感染性。朊病毒117

朊病毒引起的疾病除羊病癢病外，人的克雅病、庫魯病和格斯綜合征可能是阮病毒引起的。另外，人類慢性退化性功能紊亂疾病，如老年癡呆、多發(fā)性硬化癥等也可能與阮病毒有關(guān)。但是，近來有人應(yīng)用高度靈敏檢測方法，發(fā)現(xiàn)阮病毒中仍含有微量核酸，因而這種所謂阮病毒的組成和結(jié)構(gòu)值得進(jìn)一步研究。朊病毒引起的疾病除羊病癢病外，118衛(wèi)星病毒（satellites）多數(shù)與植物病毒有關(guān)有兩類：一類可編碼自身衣殼蛋白；另一類為衛(wèi)星病毒RNA分子需輔助病毒才能復(fù)制衛(wèi)星病毒（satellites）多數(shù)與植物病毒有關(guān)119病毒的感染與免疫病毒性感染抗病毒免疫病毒的感染與免疫病毒性感染120病毒性感染病毒感染的致病機(jī)制病毒感染的傳播方式病毒感染的類型病毒性感染病毒感染的致病機(jī)制121病毒感染的致病機(jī)制細(xì)胞水平上的致病機(jī)理對(duì)機(jī)體的免疫病理反應(yīng)病毒感染的致病機(jī)制細(xì)胞水平上的致病機(jī)理122（一）細(xì)胞水平上病毒感染的致病機(jī)理

1、殺細(xì)胞效應(yīng):病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制完畢，可在很短時(shí)間內(nèi)一次釋放大量子代病毒，致使細(xì)胞破裂死亡。機(jī)理是:

A、阻斷宿主細(xì)胞大分子物質(zhì)的生物合成，使細(xì)胞新陳代謝功能紊亂；如DNA、RNA、蛋白質(zhì)等；（一）細(xì)胞水平上病毒感染的致病機(jī)理123a、干擾蛋白質(zhì)合成的起始。如脊灰病毒感染細(xì)胞后，裂解mRNA帽結(jié)合蛋白，使其不能發(fā)揮啟始蛋白轉(zhuǎn)譯的作用。

b、病毒mRNA比宿主細(xì)胞mRNA轉(zhuǎn)譯效力更強(qiáng)，競爭性的抑制了宿主細(xì)胞mRNA的轉(zhuǎn)譯。

B、影響細(xì)胞的溶酶體：病毒感染細(xì)胞后，溶酶體被破壞，細(xì)胞自溶。a、干擾蛋白質(zhì)合成的起始。如脊灰病毒感染細(xì)胞124

C、病毒物質(zhì)的直接毒性作用——衣殼致細(xì)胞病變

D、細(xì)胞器的改變——非特異損傷；細(xì)胞核、細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體損傷

C、病毒物質(zhì)的直接毒性作用1252、穩(wěn)定狀態(tài)感染

——某些病毒進(jìn)入細(xì)胞后能夠復(fù)制，卻不引起細(xì)胞裂解、死亡性的感染；此多見于

？？類型的病毒。

——以細(xì)胞膜的改變?yōu)樘卣鳎篈、細(xì)胞融合：由于病毒酶或感染細(xì)胞所釋放的溶酶體酶作用于細(xì)胞表面，導(dǎo)致感染細(xì)胞與鄰近的細(xì)胞融合；借此病毒擴(kuò)散至未感染的細(xì)胞。（麻疹V）B、細(xì)胞表面出現(xiàn)病毒基因編碼的新抗原，引起自身免疫反應(yīng)：——鑲嵌在宿主細(xì)胞膜上的病毒抗原蛋白，釋放信號(hào)成分——病毒致細(xì)胞癌變后，病毒核酸發(fā)生整合而共表達(dá)2、穩(wěn)定狀態(tài)感染1263、包涵體形成

——在被病毒感染的細(xì)胞內(nèi)所存在的、與正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同的、新生的、可著色的斑塊結(jié)構(gòu)?！湓诩?xì)胞中的位置因病毒種類而異：

eg.核內(nèi)－皰疹V、質(zhì)內(nèi)－痘V、核和質(zhì)－麻疹V。包涵體的本質(zhì)是：

病毒顆粒的聚集體病毒積聚的過剩衣殼蛋白病毒感染引起的細(xì)胞反應(yīng)物3、包涵體形成1274、

病毒基因的整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化——某些（？？）病毒在感染中可將核酸整合到宿主細(xì)胞的染色體基因組中；同時(shí)引起被整合細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，增殖變快，失去細(xì)胞間接觸抑制；病毒增殖？

V－Pr.亦可。

良性轉(zhuǎn)化：少數(shù)病毒促進(jìn)細(xì)胞DNA的合成，促進(jìn)細(xì)胞增生

惡性轉(zhuǎn)化：如整合部位或附近有抑癌基因或癌基因存在，則細(xì)胞可發(fā)生與腫瘤有關(guān)的變化。病毒總論課件1285、細(xì)胞凋亡病毒感染——細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)——激活凋

亡基因——細(xì)胞核濃縮、DNA降解——凋亡5、細(xì)胞凋亡129(二)病毒感染機(jī)體的免疫病理反應(yīng)

1．體液免疫病理作用

A、許多病毒能誘發(fā)細(xì)胞表面出現(xiàn)新抗原，與其相應(yīng)抗體結(jié)合，在補(bǔ)體參與下，引起細(xì)胞的破壞；為Ⅱ型超敏反應(yīng)；B、抗體介導(dǎo)損傷的另一機(jī)制是抗原抗體復(fù)合物沉積在一定部位時(shí)，激活補(bǔ)體，吸引中型粒細(xì)胞引起局部組織損傷，即Ⅲ型超敏反應(yīng)。(二)病毒感染機(jī)體的免疫病理反應(yīng)1302．細(xì)胞免疫病理作用

——細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）能殺傷帶有病毒抗原的靶細(xì)胞，造成組織細(xì)胞壞死，屬于Ⅳ型超敏反應(yīng)。3．抑制宿主免疫功能——與病毒侵犯免疫細(xì)胞有關(guān)，如HIV對(duì)CD4＋T細(xì)胞的結(jié)合和侵入。

2．細(xì)胞免疫病理作用131病毒感染的傳播傳播方式傳播途徑病毒感染的傳播傳播方式1321、病毒感染的傳播方式

水平傳播horizontaltransmission：

空氣傳播——咳嗽、交談、打噴嚏等

糞—口傳播—腸道排泄V污染食物水

皮膚及黏膜傳播——唾液（單皰、腮）

滲出液（疣患者破損處）經(jīng)血傳播——HBVHCVHIV

節(jié)肢動(dòng)物叮咬—乙腦出血熱登革

垂直傳播Verticaltransmission：——病毒由母體（胎盤、產(chǎn)道）傳給胎兒1、病毒感染的傳播方式1332、病毒感染的傳播途徑

——據(jù)病毒侵入門戶不同，不同病毒可從不同的途徑進(jìn)入宿主，又從宿主體內(nèi)排出；

——一般的途徑有：呼吸道、消化道、創(chuàng)傷感染、接觸感染、血液傳播、性傳播、節(jié)肢動(dòng)物媒介等。

——一種病毒可以一種或多種途徑侵入宿主機(jī)體。2、病毒感染的傳播途徑134病毒總論課件135病毒感染的類型向外播散病毒、

機(jī)體獲得特異性免疫

急性感染、持續(xù)性感染

隱性感染顯性感染隱性感染和顯性感染病毒感染的類型向外播散病毒、急性感染、隱性感染顯性136慢性感染：

病程長病毒可檢出V,如HBV、HCV潛伏感染：可反復(fù)激活，急性發(fā)作；病毒只有在急性發(fā)作時(shí)才被檢出；如HSV、ZVZ慢發(fā)病毒感染：潛伏期長，發(fā)病后為亞急性進(jìn)行性直至死亡，HIV，狂犬病，朊粒持續(xù)性感染急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥，麻疹的SSPE慢性感染：病程長病毒可檢出V,如HBV、HCV潛伏感137感染過程與結(jié)局病毒在宿主體內(nèi)的感染過程是指病毒入侵部位、病毒增殖的組織與細(xì)胞、或進(jìn)入血循環(huán)及最終增殖并引起靶器官病變的過程。感染按部位分為局部感染和全身性感染；可引起宿主感染發(fā)病，甚至死亡，亦可出現(xiàn)隱性感染或頓挫感染，或被清除體外。感染過程與結(jié)局取決于病毒與宿主間相互的作用。感染過程與結(jié)局病毒在宿主體內(nèi)的感染過程是指病毒138A、非特異性免疫

B、特異性免疫

C、前兩者的協(xié)同作用抗病毒免疫免疫A、非特異性免疫抗病毒免疫免疫139一、非特異性免疫

遺傳因素宿主年齡和生理狀態(tài)

屏障作用

NK細(xì)胞作用病毒抑制物

炎癥反應(yīng)

干擾素：獲得性非特異性免疫一、非特異性免疫

遺傳因素140干擾素定義：由病毒或其他干擾素生劑刺激機(jī)體細(xì)胞所產(chǎn)生的一種具有抗病毒免疫調(diào)節(jié)和抑制腫瘤生長的糖蛋白；分子量小、熱穩(wěn)定性好、可被蛋白酶降解、有抗原性

種類：種類

產(chǎn)生細(xì)胞

抗病毒

抗腫瘤

免疫調(diào)節(jié)

人白細(xì)胞

強(qiáng) 弱 弱

人成纖維細(xì)胞

強(qiáng)

弱

弱

T細(xì)胞

弱 強(qiáng)強(qiáng) 干擾素定義：由病毒或其他干擾素生劑刺激機(jī)體細(xì)胞所產(chǎn)生的 種141生物學(xué)活性:①抗病毒作用:

IFN作用具有種屬特異性；抗病毒蛋白作用廣譜；干擾素產(chǎn)生早。②免疫調(diào)節(jié)作用:活化NK細(xì)胞,Tc細(xì)胞。③抗腫留作用:抑制細(xì)胞分裂。生物學(xué)活性:142抗病毒意義：抗病毒特點(diǎn)種的特異性、間接性、廣譜性抗病毒機(jī)理：不直接作用于病毒，而作用于宿主細(xì)胞基因，合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白合成?！鞍准っ?、2`-5`腺嘌呤核苷合成酶、磷酸二脂酶

早期中斷病毒復(fù)制，阻止病毒擴(kuò)散抗病毒意義：抗病毒特點(diǎn)種的143二、特異性免疫按種類：IgG（過胎盤）IgM（大）IgA（泌粘）

TD、TC、NK、M中和抗體：定義、機(jī)理和免疫球蛋白的類型細(xì)胞免疫：體液免疫：起預(yù)防而非治療作用、對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒無效按功能：中和抗體、補(bǔ)體結(jié)合抗體、血凝抑制抗體抗病毒免疫的主要成分二、特異性免疫按種類：IgG（過胎盤）IgM（大）IgA144

抗體時(shí)相

中和作用

殺傷機(jī)理

通過胎盤

IgM

出現(xiàn)早,消失快

較強(qiáng)

CDC

不能

IgG

出現(xiàn)遲,消失慢

強(qiáng)

ADCC

能

S-IgA

存在粘膜中

局部中和

不能

145抗病毒免疫的持續(xù)時(shí)間因病毒的種類而異有病毒血癥的全身性病毒感染：痊愈后獲得牢固的免疫力，且持時(shí)較長；天花V只有單一血清型的病毒感染：病后有牢固的免疫力，持時(shí)長；乙型腦炎V易發(fā)生抗原變異的病毒感染：病后機(jī)僅產(chǎn)生短暫的免疫力；流感V抗病毒免疫的持續(xù)時(shí)間因病毒的種類而異146病毒感染的檢測與防治病毒感染的檢測與防治147病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法148一、病毒感染的檢查方法

（一）

標(biāo)本的采集與送檢——檢查成敗的關(guān)鍵1.標(biāo)本采集:發(fā)病初期或急性期；部位;2.標(biāo)本處理:無菌操作，抗生素＋50％甘油鹽水，低溫保存；3.冷藏送檢:1～2小時(shí)送檢;-70℃保存;4.血清學(xué)檢查應(yīng)采雙份標(biāo)本。一、病毒感染的檢查方法149常見分離病毒標(biāo)本的選擇病毒咽拭子糞便血液腦脊液唾液組織柯薩奇A和B組+++心單純皰疹病毒+腦膜腮腺炎病毒+++流感病毒+輪狀病毒+HAV+HIV+精液常見分離病毒標(biāo)本的選擇病毒咽拭子糞便血液腦脊液唾液組織150

（二）病毒的分離培養(yǎng)與鑒定●分離培養(yǎng)

動(dòng)物接種:最原始,易感動(dòng)物的選擇；

雞胚接種:多種病毒敏感，取材方便細(xì)胞培養(yǎng):最主要;包括器官培養(yǎng)、移植培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)（原代

和次代細(xì)胞，二倍體細(xì)胞株和傳代細(xì)胞系）（二）病毒的分離培養(yǎng)與鑒定151

152常用于病毒分離的細(xì)胞細(xì)胞種類可分離的病毒

原代細(xì)胞非洲綠猴腎細(xì)胞人單核細(xì)胞人胚腎、肺細(xì)胞恒河猴獼猴腎細(xì)胞HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒HIV、HTLV、HHV-6腮腺炎病毒、腺病毒ECHO、脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇A、B組、RSV

二倍體細(xì)胞株人胚肺成纖維細(xì)胞株

WI-38、MRC—5CMV、VZV、鼻病毒腮腺炎病毒、腺病毒

傳代細(xì)胞系

HelaHep-2Vero

柯薩奇A、B組、RSV腺病毒、RSVHSV、RSV、風(fēng)疹病毒、輪狀病毒、麻疹病毒常用于病毒分離的細(xì)胞細(xì)胞種類可分離的病毒153

●病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定

增殖指標(biāo):細(xì)胞變化;紅細(xì)胞吸附;細(xì)胞代謝改變；干擾現(xiàn)象；免疫熒光法檢測病毒數(shù)量與感染性的測定：

蝕斑測定（CPE）

TCID50的測定●病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定154

（三）病毒感染的快速診斷●形態(tài)學(xué)檢查光鏡檢查電鏡檢查：直接檢查；免疫電鏡檢查●檢測病毒抗原免疫學(xué)檢測：免疫熒光，ELISA，RIA（三）病毒感染的快速診斷155ELISAforHIVantibodyMicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivityELISAforHIVantibodyMicropla156病毒總論課件157

●病毒核酸檢測技術(shù)

PCR

斑點(diǎn)分子雜交(dot-blot)

Southern印跡(DNA),

Northern印跡(RNA,mRNA),

原位分子雜交,

微板核酸雜交(chip)●病毒核酸檢測技術(shù)158病毒總論課件159病毒總論課件160病毒總論課件161病毒總論課件162基因芯片（microarraychip）基因芯片（microarraychip）163理想標(biāo)記物應(yīng)具備的條件1．敏感性高

2.容易標(biāo)記

3.標(biāo)記后不影響序列特異性和雜交溫度4．雜交信號(hào)檢測方便

5.標(biāo)記物穩(wěn)定易保存，對(duì)環(huán)境污染小理想標(biāo)記物應(yīng)具備的條件1．敏感性高164檢測結(jié)果判定感染病毒的臨床意義必須結(jié)合流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、病毒種類及機(jī)體的病理變化作綜合分析，才能判定?。z測結(jié)果判定感染病毒的臨床意義必須結(jié)合流行165二、病毒感染的防治原則對(duì)病毒性疾病預(yù)防的三大措施：

控制傳染源、切斷傳播途徑、保護(hù)易感人群?！靡呙缱魅斯ぶ鲃?dòng)免疫，對(duì)于預(yù)防病毒感染有重要意義。二、病毒感染的防治原則對(duì)病毒性疾病預(yù)防的三大措施：166免疫預(yù)防藥物防治針對(duì)性防治免疫預(yù)防針對(duì)性防治167（一）免疫預(yù)防●人工主動(dòng)免疫1、滅活疫苗:核酸滅活,抗原性存在;2、減毒活疫苗:自然或人工篩選低毒的變異株;——潛在風(fēng)險(xiǎn)有：回復(fù)毒力、并發(fā)癥、活化潛伏病毒、引起持續(xù)感染

（一）免疫預(yù)防168病毒總論課件169

3、亞單位疫苗:純化包膜或衣殼上蛋白亞單位;4、多肽疫苗:如提取HBVHBsAg的多肽成分;基因工程制備HBsAg。●人工被動(dòng)免疫

免疫血清,胎球,丙球,TF等。

170理想病毒疫苗的要求

1、有效：2、安全：

死疫苗：防止外源性污染病毒混入其中。

滅活病毒：必須徹底。

活疫苗：毒株必須是弱毒株。3、價(jià)廉：低價(jià)、方便。

理想病毒疫苗的要求1、有效：171病毒總論課件172現(xiàn)代疫苗學(xué)發(fā)展策略①將病原微生物基因克隆到合適的載體，再導(dǎo)入適宜的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)中和性免疫原遺傳信息；②選擇缺失基因的減毒病原體載體，插入一些外源基因，當(dāng)這些活載體疫苗進(jìn)行流產(chǎn)性復(fù)制時(shí)，表達(dá)出的抗原暴露于宿主免疫系統(tǒng)；③預(yù)防多種疾病、接種次數(shù)少的多價(jià)聯(lián)合疫苗；④利用質(zhì)粒DNA誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的核酸疫苗；⑤疫苗的免疫增強(qiáng)物及對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)；⑥特定免疫原或免疫調(diào)節(jié)提呈的新型微載體系統(tǒng)?，F(xiàn)代疫苗學(xué)發(fā)展策略①將病原微生物基因克隆到合適的載體，再173（二）藥物防治金剛烷胺,阿糖腺苷,無環(huán)鳥苷,羥丙氧甲基鳥嘌呤疊氮脫氧胸苷(AZT),

干擾素干擾素誘生劑,中草藥（二）藥物防治174抗病毒藥物類型化學(xué)藥物基因制劑天然藥物抗病毒藥物類型化學(xué)藥物175抗病毒化學(xué)藥物的作用機(jī)制阻斷病毒脫殼阻斷病毒核酸合成

核苷類似物（nucleosideanalogue）、核苷酸類似物（nucleotideanalogue）和非核苷類似物主要應(yīng)用于皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒阻斷病毒蛋白質(zhì)合成阻斷病毒釋放抗病毒化學(xué)藥物的作用機(jī)制阻斷病毒脫殼176抗病毒化學(xué)藥物作用的靶位點(diǎn)作用靶點(diǎn)藥物復(fù)制早期由病毒DNA或RNA聚合酶介導(dǎo)的核酸合成病毒前體蛋白切割病毒mRNA翻譯蛋白病毒釋放金剛烷胺甲基金剛烷胺無環(huán)鳥苷丙氧鳥苷脫氧鳥苷penciclovirfamciclovircidofovir阿糖腺苷idoxuridine3氟胸腺嘧啶甲酸磷霉素AZTddIddCd4T3TCnevirapine病毒唑拉米夫啶賽科納瓦英迪納瓦瑞托納瓦耐菲納瓦干擾素fomiversinZanamiviroseltamivir抗病毒化學(xué)藥物作用的靶位點(diǎn)作用靶點(diǎn)藥物177阻斷病毒核酸合成的藥物核苷類似物（nucleosideanalogue）核苷酸類似物（nucleotideanalogue）非核苷類似物主要應(yīng)用于皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒阻斷病毒核酸合成的藥物核苷類似物（nucleoside178阻斷病毒核酸合成的藥物靶病毒分子結(jié)構(gòu)藥物皰疹病毒

逆轉(zhuǎn)錄病毒其他病毒核苷類似物非核苷類似物核苷類似物核苷酸類似物非核苷類似物核苷類似物物無環(huán)鳥苷丙氧鳥苷cidofovir阿糖腺苷碘苷三氟胸苷甲酸磷霉素AZTddIddCd4T3TCAdefovirNevirapinedelavirdineefavirenz病毒唑阻斷病毒核酸合成的藥物靶病毒分子結(jié)構(gòu)藥物皰疹病毒核苷類似179謝謝觀賞！2020/11/5180謝謝觀賞！2020/11/5180病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件病毒總論P(yáng)PT課件181病毒學(xué)總論病毒學(xué)總論182思考題什么是病毒？病毒區(qū)于細(xì)菌、真菌的特征是什么？感染病毒的分離增殖方式有哪幾種？病毒感染的檢測方法有哪幾種？病毒感染的防治措施是什么？思考題什么是病毒？183病毒與病毒學(xué)病毒（Virus）是一種體積小，非細(xì)胞形態(tài)的微生物,其基因組只含有一種類型的核酸(DNA或RNA)。病毒體內(nèi)缺乏產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng),只能寄生在活細(xì)胞內(nèi),依靠宿主細(xì)胞提供原料和酶系統(tǒng),以復(fù)制方式進(jìn)行增殖。

病毒學(xué)（Virology）就是研究病毒的本質(zhì)、病毒與宿主相互作用和規(guī)律的一門生命科學(xué)。病毒與病毒學(xué)病毒（Virus）是一種體積小，非細(xì)胞形184病毒的重要性

1多70%急性傳染2高發(fā)病率高死亡率高一生200次3新不斷出現(xiàn)新的疾病老年性癡呆與朊病毒瘋牛病4致畸5轉(zhuǎn)化腫瘤

HPVHSV—子宮頸癌HBV—肝

EBV—鼻咽癌6無藥無特效治療藥物病毒的重要性185主要內(nèi)容病毒的基本性狀病毒的感染與免疫病毒感染的檢測與防治主要內(nèi)容病毒的基本性狀186病毒的基本性狀病毒的大小與形態(tài)病毒的結(jié)構(gòu)（核酸與蛋白質(zhì)）病毒的培養(yǎng)與增殖病毒的遺傳與變異病毒的分類病毒的基本性狀病毒的大小與形態(tài)187特性病毒細(xì)菌真菌濾菌器+

±—結(jié)構(gòu)非細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞細(xì)胞壁—++核酸類型DNA或RNADNA＋RNADNA＋RNA人工培養(yǎng)—++增殖方式復(fù)制二分裂有性或無性抗生素—++干擾素+——特性病毒細(xì)菌真菌濾菌器+±—結(jié)構(gòu)非細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)188一、病毒的大小與形態(tài)一、病毒的大小與形態(tài)189病毒總論課件190病毒粒子（virion）完整的成熟病毒顆粒，具有典型的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并具有感染性。測量單位為納米（nm,為1/1000m）<50

nm小型病毒50nm-150nm中等大小病毒（大多數(shù)）>150nm大型病毒（最大300nm）多數(shù)病毒呈球形或近似球形，桿狀，絲狀，少數(shù)可為子彈狀、磚塊狀，噬菌體可呈蝌蚪狀。病毒粒子（virion）完整的成熟病毒顆粒，具有典型的191微生物的大小比較葡萄球菌(1000nm）牛痘病毒300×250nmABCDEFG立克次體450nm衣原體390nmA、大腸桿菌噬菌體(65×95nm)B、腺病毒(70nm)C、脊髓灰質(zhì)炎病毒(30nm)D、乙腦病毒(40nm)E、蛋白分子(10nm)F、流感病毒(100nm)G、煙草花葉病毒微生物的大小比較葡萄球菌牛痘病毒ABCDEFG立克次體衣原192CaliciVirusCaliciVirus193病毒總論課件194HIVHIV195RhinovirusRhinovirus196VSV:VesicularstomatitisvirusVSV:Vesicularstomatitisviru197病毒總論課件198病毒總論課件199BacteriophageT4BacteriophageT4200EbolaVirusEbolaVirus201二、病毒的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)核心

Viralcore衣殼

Capsid輔助結(jié)構(gòu)包膜

Envelope其他病毒體

Virion核衣殼

Nucleocapsid二、病毒的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)202病毒體結(jié)構(gòu)模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包膜粒子病毒體結(jié)構(gòu)模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包203病毒總論課件204病毒核心//核酸（viralcore）多樣性DNA

dsDNA

ssDNA

dsRNARNA

ssRNA

±

分節(jié)段RNA

±線狀、環(huán)狀大小懸殊復(fù)制方式多樣存在形式多樣病毒核心//核酸（viralcore）多樣性DNA205病毒總論課件206病毒總論課件207病毒核酸的功能功能病毒遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)

決定病毒的種屬特異性:克隆和表達(dá)決定病毒的感染性：完整則有;編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白大型病毒的核酸分子量相對(duì)大，能編碼病毒的全部結(jié)構(gòu)蛋白和病毒復(fù)制所需的許多酶小病毒的核酸分子小，可能不編碼這些酶，因此復(fù)制時(shí)要宿主細(xì)胞提供病毒核酸的功能功能208病毒核酸的特性具有感染性將提純的病毒核酸（如腸道病毒RNA）如轉(zhuǎn)至活細(xì)胞內(nèi)，即可啟動(dòng)病毒復(fù)制而感染細(xì)胞，并從可感染細(xì)胞中獲得子代完整病毒顆粒。逆轉(zhuǎn)錄性一些病毒顆粒中含逆轉(zhuǎn)錄酶，可以將病毒RNA逆轉(zhuǎn)成DNA；純化裸露的＋RNA具有感染性？？純化裸露的—RNA則不具感染性？？病毒核酸的特性具有感染性209病毒總論課件210Verycondensedgenomes有內(nèi)含子，ORF間有重疊

OverlappinggenesUsingdifferentreadingframesreadingbothstrandsVeryco