微生物發(fā)酵-青霉素類抗生素

--青霉素類抗生素微生物發(fā)酵一

抗生素的概述二

青霉素的制備抗生素概述1.定義2.作用3.來(lái)源4.分類5.作用機(jī)制抗生素概述1.定義：是某些細(xì)菌、放線菌、真菌等微生物的次級(jí)

代謝產(chǎn)物，或用化學(xué)方法合成的相同化合物或結(jié)

構(gòu)類似物，在低濃度下對(duì)各種病原性微生物或腫

瘤細(xì)胞有強(qiáng)力殺滅作用或有其他藥理作用的藥物。返回抗生素概述2.作用：

抗細(xì)菌感染治療腫瘤抗病原蟲(chóng)免疫抑制劑刺激植物生長(zhǎng)3.來(lái)源：生物合成（發(fā)酵）化學(xué)合成（全合成和半合成）返回抗生素概述4.分類：青霉素類

氨芐青霉素

鄰氯青霉素RNA合成抑制喹諾酮類利福霉素類核酸合成抑制細(xì)胞膜抑制多粘菌素

BDNA合成抑制磷霉素頭孢菌素類頭霉素類大環(huán)內(nèi)酯類

麥迪霉素

紅霉素氯霉素蛋白質(zhì)合成抑制細(xì)胞壁合成抑制四環(huán)素類氨基糖苷類

返回抗生素概述5.作用機(jī)制：抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成（β-內(nèi)酰胺類、磷霉素、萬(wàn)古霉素。）抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成（四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素類。）抑制細(xì)菌DNA合成（利福平。）抑制細(xì)菌RNA合成（放線菌素。）損傷細(xì)菌細(xì)胞膜（兩性霉素B、粘菌素、氨基糖苷類。）青霉素的制備一：青霉素的背景二：青霉素的性質(zhì)三：青霉素的生產(chǎn)工藝過(guò)程四：青霉素的應(yīng)用青霉素的背景青霉素(Penicillin)又被稱為盤(pán)尼西林，它是人類發(fā)明的第一種抗生素，也是全球銷量最大的抗生素。青霉素是一種高效、低毒、臨床應(yīng)用廣泛的重要抗生素。它的研制成功大大增強(qiáng)了人類抵抗細(xì)菌性感染的能力，帶動(dòng)了抗生素家族的誕生。1953年，我國(guó)第一批青霉素的誕生揭開(kāi)了我國(guó)生產(chǎn)抗生素的歷史;到2001年，我國(guó)青霉素的產(chǎn)量已經(jīng)占據(jù)了全球的60%的市場(chǎng)份額，目前我國(guó)是全球最大的青霉素生產(chǎn)國(guó)家。青霉素類抗生素青霉素的發(fā)現(xiàn)1928年，英國(guó)細(xì)菌學(xué)家Fleming發(fā)現(xiàn)污染在培養(yǎng)葡萄球菌的雙蝶上的一株霉菌能殺死周圍的葡萄球菌。他將此霉菌分離純化后得到的菌株鑒定為青霉，并將這菌產(chǎn)生的抗生物質(zhì)命名為青霉素。1940年，英英國(guó)Florey和Chain進(jìn)一一步研究究此菌，，并從培培養(yǎng)液中中制出了了干燥的的青霉素素制品。。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)和臨床床試驗(yàn)證證明，它它毒性很很小，并并對(duì)一些些革蘭氏氏陽(yáng)性菌菌所引起起的許多多疾病有有卓越療療效。青霉素類類抗生素素青霉素G青青霉素X青青霉素V來(lái)源：霉霉菌屬的的青霉菌菌發(fā)酵液液中提取取，天然然青霉素素有5種種G、V、N、、K、X、其中中PG的的活性最最高、產(chǎn)產(chǎn)量最高高。青霉素N青青霉霉素K青霉素理理化性質(zhì)質(zhì)酸性一般的羧羧酸Pka4-6PGPka2.7臨床用其其鈉鹽、、鉀鹽或或普魯卡卡因鹽，，增強(qiáng)水水溶性。。粉針針劑劑，，有有效效期期2年年臨床床用用粉粉針針劑劑，，現(xiàn)現(xiàn)用用現(xiàn)現(xiàn)配配不穩(wěn)穩(wěn)定定性性β––內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺環(huán)環(huán)是是青青霉霉素素中中最最不不穩(wěn)穩(wěn)定定的的部部分分，，原原因因是是1、、四四元元環(huán)環(huán)和和五五元元環(huán)環(huán)稠稠合合，，環(huán)環(huán)的的張張力力大大2、、兩兩個(gè)個(gè)環(huán)環(huán)不不在在同同一一平平面面，，青青霉霉素素結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)中中ββ-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺環(huán)環(huán)中中羰羰基基和和氮氮原原子子的的孤孤對(duì)對(duì)電電子子不不能能共共軛軛，，易易受受到到親親核核性性或或親親電電性性試試劑劑的的進(jìn)進(jìn)攻攻，，使使ββ-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺環(huán)環(huán)破破裂裂。。β-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺環(huán)環(huán)對(duì)對(duì)水水、、光光、、熱熱、、酸酸、、堿堿、、酶酶、、醇、、胺胺不不穩(wěn)穩(wěn)定定，，ββ-環(huán)環(huán)開(kāi)開(kāi)裂裂、、活活性性降降低低或或消消失失對(duì)堿堿或或酶酶(ββ-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺酶酶)不不穩(wěn)穩(wěn)定定，，水水解解對(duì)稀稀酸酸不不穩(wěn)穩(wěn)定定，，發(fā)發(fā)生生重重排排；；PH=4青霉二酸青霉醛青霉胺-CO2對(duì)羰基親核反應(yīng)分解重排對(duì)強(qiáng)強(qiáng)酸酸不不穩(wěn)穩(wěn)定定，，發(fā)發(fā)生生重重排排PH=2orHgCl2

青霉酸+青霉醛酸

△青霉醛aβ-環(huán)開(kāi)裂,-CO2abb青霉霉素素生生產(chǎn)產(chǎn)工工藝藝過(guò)過(guò)程程菌種種→種子子制制備備→發(fā)酵酵→發(fā)酵酵液液預(yù)預(yù)處處理理→提取取及及精精制制→成品品包包裝裝菌種種介介紹紹：：青霉霉是是產(chǎn)產(chǎn)生生青青霉霉素素的的重重要要菌菌種種。。廣廣泛泛分分布布于于空空氣氣、、土土壤壤和和各各種種物物上上，，常常生生長(zhǎng)長(zhǎng)在在腐腐爛爛的的柑柑桔桔皮皮上上呈呈青青綠綠色色。。目目前前已已發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)幾幾百百種種，，其其中中產(chǎn)產(chǎn)黃黃青青霉霉(Penicillumchrysogenum)、、點(diǎn)點(diǎn)青青霉霉(Penicillumnototum)等等都都能能大大量量產(chǎn)產(chǎn)生生青青霉霉素素種子子制制備備：：種種子子制制備備是是指指孢孢子子接接入入種種子子罐罐后后，，在在罐罐中中繁繁殖殖成成大大量量菌菌絲絲的的過(guò)過(guò)程程，，其其目目的的是是使使孢孢子子發(fā)發(fā)芽芽、、繁繁殖殖和和獲獲得得足足夠夠數(shù)數(shù)量量的的菌菌絲絲，，以以便便接接種種到到發(fā)發(fā)酵酵罐罐當(dāng)當(dāng)中中去去。。種種子子制制備備所所使使用用的的培培養(yǎng)養(yǎng)基基及及其其它它工工藝藝條條件件，，都都要要有有利利于于孢孢子子發(fā)發(fā)芽芽和和菌菌絲絲繁繁殖殖。。青霉素素生產(chǎn)產(chǎn)工藝藝過(guò)程程發(fā)酵條條件下下的生生長(zhǎng)過(guò)過(guò)程第1期期：分分生孢孢子萌萌發(fā)，，形成成芽管管，原原生質(zhì)質(zhì)未分分化化，，具有有小泡泡。第第2期：：菌絲絲繁殖殖，原原生質(zhì)質(zhì)體具具有嗜嗜堿性性，類類脂肪肪小顆顆粒。。第3期期：形形成脂脂肪包包涵體體，機(jī)機(jī)理貯貯藏物物，沒(méi)沒(méi)有空空泡，，嗜堿堿性很很強(qiáng)。。第第4期期：脂脂肪包包涵體體形成成小滴滴并減減少，，中小小空泡泡，原原生質(zhì)質(zhì)體嗜嗜堿性性減弱弱，開(kāi)開(kāi)始產(chǎn)產(chǎn)生抗抗生素素。第5期期：形形成大大空泡泡，有有中性性染色色大顆顆粒，，菌絲絲呈桶桶狀，，脂肪肪包涵涵體消消失，，青霉霉素產(chǎn)產(chǎn)量最最高。。第第6期期：出出現(xiàn)個(gè)個(gè)別自自溶細(xì)細(xì)胞，，細(xì)胞胞內(nèi)無(wú)無(wú)顆粒粒，仍仍然桶桶狀。。釋放放游離離氨，，pH上升升。第第7期：：菌絲絲完全全自溶溶，僅僅有空空細(xì)胞胞壁。。1－4期為為菌絲絲生長(zhǎng)長(zhǎng)期，，3期期的菌菌體適適宜為為種子子。4－－5期期為生生產(chǎn)期期，生生產(chǎn)能能力最最強(qiáng)，，通過(guò)過(guò)工程程措施施，延延長(zhǎng)此此期，，獲得得高產(chǎn)產(chǎn)。在在第第六期期到來(lái)來(lái)之前前結(jié)束束發(fā)酵酵。青霉素素的發(fā)發(fā)酵發(fā)酵中中滅菌菌發(fā)酵工工藝控控制：：1.基基質(zhì)濃濃度2.溫溫度3.培培養(yǎng)基基成分分的控控制4.pH值值、溶溶氧5.菌菌絲濃濃度等等6.泡泡沫的的控制制發(fā)酵中中滅菌菌青霉霉素素屬屬于于ββ-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺類類抗抗生生素素，，其其ββ-內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺環(huán)環(huán)極極易易破破壞壞而而失失效效，，所所以以不不可可以以高高壓壓滅滅菌菌了了，，否否則則將將導(dǎo)導(dǎo)致致完完全全失失效效。。一般般制制備備青青霉霉素素是是采采用用無(wú)無(wú)菌菌操操作作法法、、冷冷凍凍干干燥燥技技術(shù)術(shù)（（真真空空條條件件下下使使冰冰直直接接升升華華，，得得以以除除去去水水分分））制制備備的的。。發(fā)酵酵工工藝藝控控制制1.基基質(zhì)質(zhì)濃濃度度：在分分批批發(fā)發(fā)酵酵中中，，常常常常因因?yàn)闉榍扒捌谄诨|(zhì)質(zhì)量量濃濃度度過(guò)過(guò)高高，，對(duì)對(duì)生生物物合合成成酶酶系系產(chǎn)產(chǎn)生生阻阻遏遏或或?qū)?duì)菌菌絲絲生生長(zhǎng)長(zhǎng)產(chǎn)產(chǎn)生生抑抑制制（（如如葡葡萄萄糖糖和和錢(qián)錢(qián)的的阻阻遏遏或或抑抑制制,苯苯乙乙酸酸的的生生長(zhǎng)長(zhǎng)抑抑制制））,而而后后期期基基質(zhì)質(zhì)濃濃度度低低限限制制了了菌菌絲絲生生長(zhǎng)長(zhǎng)和和產(chǎn)產(chǎn)物物合合成成。。所以以，，在在青青霉霉素素發(fā)發(fā)酵酵中中通通常常采采用用補(bǔ)補(bǔ)料料分分批批操操作作法法，，以以維維持持一一定定的的最最適適濃濃度度。。發(fā)酵酵工工藝藝控控制制2.溫溫度度：青霉霉素素發(fā)發(fā)酵酵的的最最適適溫溫度度隨隨所所用用菌菌株株的的不不同同可可能能稍稍有有差差別別,但但一一般般認(rèn)認(rèn)為為應(yīng)應(yīng)在在25°°C左左右右。。溫溫度度過(guò)過(guò)高高將將明明顯顯降降低低發(fā)發(fā)酵酵產(chǎn)產(chǎn)率率,同同時(shí)時(shí)增增加加葡葡萄萄糖糖的的維維持持消消耗耗,降降低低葡葡萄萄糖糖至至青青霉霉素素的的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化率率。。對(duì)對(duì)菌菌絲絲生生長(zhǎng)長(zhǎng)和和青青霉霉素素合合成成來(lái)來(lái)說(shuō)說(shuō),最最適適溫溫度度不不是是一一樣樣的的,一一般般前前者者略略高高于于后后者者,故故有有的的發(fā)發(fā)酵酵過(guò)過(guò)程程在在菌菌絲絲生生長(zhǎng)長(zhǎng)階階段段采采用用較較高高的的溫溫度度，，以以縮縮短短生生長(zhǎng)長(zhǎng)時(shí)時(shí)間間,到到達(dá)達(dá)生生產(chǎn)產(chǎn)階階段段后后便便適適當(dāng)當(dāng)降降低低溫溫度度,以以利利于于青青霉霉素素的的合合成成。。發(fā)酵酵工工藝藝控控制制3.培培養(yǎng)養(yǎng)基基成成分分的的控控制制:A.碳源源--發(fā)酵酵中中常常用用乳乳酸酸或或葡葡萄萄糖糖，，也也可可采采用用葡葡萄萄糖糖母母液液、、糖糖蜜蜜等等。。其其中中乳乳糖糖最最為為便便宜宜，，但但因因貨貨源源較較少少，，很很多多國(guó)國(guó)家家采采用用葡葡萄萄糖糖代代替替。。但但當(dāng)當(dāng)葡葡萄萄糖糖濃濃度度超超過(guò)過(guò)一一定定限限度度時(shí)時(shí)，，會(huì)會(huì)過(guò)過(guò)分分加加速速菌菌體體的的呼呼吸吸，，以以至至培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中的的溶溶解解氧氧不不能能滿滿足足需需要要，，使使一一些些中中間間代代謝謝物物不不能能完完全全氧氧化化而而積積累累在在菌菌體體或或培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中，，導(dǎo)導(dǎo)致致pH下下降降，，影影響響某某些些酶酶的的活活性性，，從從而而抑抑制制微微生生物物的的生生長(zhǎng)長(zhǎng)河河產(chǎn)產(chǎn)物物的的合合成成。發(fā)酵酵工工藝藝控控制制B.氮源源-主要要有有機(jī)機(jī)氮氮源源為為玉玉米米漿漿、、棉棉籽籽餅餅粉粉、、花花生生餅餅粉粉、、酵酵母母粉粉、、蛋蛋白白胨胨等等。。玉玉米米漿漿為為較較理理想想的的氮氮源源，，含含固固體體量量少少，，有有利利于于通通氣氣及及氧氧的的傳傳遞遞，，因因而而利利用用率率較較高高。。固固體體有有機(jī)機(jī)氮氮源源原原料料一一般般需需粉粉碎碎至至200目目以以下下的的細(xì)細(xì)度度。。有有機(jī)機(jī)氮氮源源還還可可以以提提供供一一部部分分有有機(jī)機(jī)磷磷，，供供菌菌體體生生長(zhǎng)長(zhǎng)。。無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)氮氮如如硝硝酸酸鹽鹽、、尿尿素素、、硫硫酸酸銨銨等等可可適適量量使使用用。。發(fā)酵酵工工藝藝控控制制C.無(wú)機(jī)機(jī)鹽鹽-碳酸酸鈣鈣用用來(lái)來(lái)中中和和發(fā)發(fā)酵酵過(guò)過(guò)程程中中產(chǎn)產(chǎn)生生的的雜雜酸酸，，并并控控制制發(fā)發(fā)酵酵液液的的pH值值，，為為菌菌體體提提供供營(yíng)營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)的的無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)磷磷源源一一般般采采用用磷磷酸酸二二氫氫鉀鉀。。另另外外加加入入硫硫代代硫硫酸酸鈉鈉或或硫硫酸酸鈉鈉以以提提供供青青霉霉素素分分子子中中所所需需的的硫硫。。由由于于現(xiàn)現(xiàn)在在還還有有一一些些工工廠廠采采用用鐵鐵罐罐發(fā)發(fā)酵酵，，在在發(fā)發(fā)酵酵過(guò)過(guò)程程中中鐵鐵離離子子便便逐逐漸漸進(jìn)進(jìn)入入發(fā)發(fā)酵酵液液。。發(fā)發(fā)酵酵時(shí)時(shí)間間愈愈長(zhǎng)長(zhǎng)，，則則鐵鐵離離子子愈愈多多。。鐵鐵離離子子在在50μμg/ml以以上上便便會(huì)會(huì)影影響響青青霉霉素素的的合合成成。。采采用用鐵鐵絡(luò)絡(luò)合合劑劑以以抑抑制制鐵鐵離離子子的的影影響響，，但但實(shí)實(shí)際際對(duì)對(duì)青青霉霉素素產(chǎn)產(chǎn)量量并并無(wú)無(wú)改改進(jìn)進(jìn)。。所所以以青青霉霉素素的的發(fā)發(fā)酵酵罐罐采采用用不不銹銹鋼鋼制制造造為為宜宜，，其其他他重重金金屬屬離離子子如如銅銅、、汞汞、、鋅鋅等等能能催催化化青青霉霉素素的的分分解解反反應(yīng)應(yīng)。。發(fā)酵工工藝控控制D.前體-添加加苯乙乙酸或或者苯苯乙酰酰胺，，可以以借酰?；D(zhuǎn)轉(zhuǎn)移的的作用用，將將苯乙乙酸轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入青青霉素素分子子，提提高青青霉素素G的的生產(chǎn)產(chǎn)強(qiáng)度度，。。因此此前體體的加加入成成為青青霉素素發(fā)酵酵的關(guān)關(guān)鍵問(wèn)問(wèn)題之之一。。但苯苯乙酸酸對(duì)發(fā)發(fā)酵有有影響響，一一般以以苯乙乙酰胺胺較好好。也也有人人采用用苯乙乙酸月月桂醇醇酯，，其優(yōu)優(yōu)點(diǎn)是是在發(fā)發(fā)酵中中月桂桂醇酯酯水解解，苯苯乙酸酸結(jié)合合進(jìn)青青霉素素成品品。而而月桂桂酸作作為細(xì)細(xì)菌營(yíng)營(yíng)養(yǎng)劑劑及發(fā)發(fā)酵液液消沫沫劑，，且其其毒性性比苯苯乙酸酸小，，但價(jià)價(jià)格較較貴。。前體體要在在發(fā)酵酵開(kāi)始始20h后后加入入，并并在整整個(gè)發(fā)發(fā)酵過(guò)過(guò)程中中控制制在50μμg/ml左右右。前前體用用量大大于0.1%時(shí)時(shí)，青青霉素素的生生物合合成均均下降降。所所以一一般發(fā)發(fā)酵液液中前前體濃濃度以以始終終維持持在0.1%為為宜。。發(fā)酵工工藝控控制4.pH值值、溶溶氧：青霉素素在合合理的的Ph(6.8～7.2)和和溶氧氧(>30%)下，，生產(chǎn)產(chǎn)和發(fā)發(fā)酵才才會(huì)達(dá)達(dá)到最最高效效率??！在罐罐的夾夾層或或蛇管管中需需通冷冷卻水水以維維持一一定罐罐溫。。在整整個(gè)發(fā)發(fā)酵過(guò)過(guò)程中中，需需不斷斷通無(wú)無(wú)菌空空氣和和攪拌拌，以以維持持一定定罐壓壓或溶溶氧。。5.菌菌絲濃濃度等等：在葡萄萄糖限限制生生長(zhǎng)的的條件件下，，青霉霉素比比生產(chǎn)產(chǎn)速率率與產(chǎn)產(chǎn)生菌菌菌絲絲的比比生長(zhǎng)長(zhǎng)速率率之間間呈一一定關(guān)關(guān)系。。而其其它的的如：：菌菌絲形形態(tài)等等亦會(huì)會(huì)有所所影響響………發(fā)酵工工藝控控制6.泡泡沫的的控制制：在發(fā)酵酵過(guò)程程中產(chǎn)產(chǎn)生大大量泡泡沫,可可以用用天然然油脂脂,如如豆豆油、、玉米米油等等或用用化學(xué)學(xué)合成成消泡泡劑““泡泡敵敵””來(lái)來(lái)消泡泡,應(yīng)應(yīng)當(dāng)當(dāng)控制制其用用量并并要少少量多多次加加入,尤尤其在在發(fā)酵酵前期期不宜宜多用用,否否則則會(huì)影影響菌菌體的的呼吸吸代謝謝。。加消沫沫劑以以控制制泡沫沫，必必要時(shí)時(shí)還加加入酸酸、堿堿以調(diào)調(diào)節(jié)發(fā)發(fā)酵液液的pH。。發(fā)酵液液預(yù)處處理發(fā)酵液液中的的雜質(zhì)質(zhì)如高高價(jià)無(wú)無(wú)機(jī)離離子（（Fe2+、Ca2+、、Mg2+）和和蛋白白質(zhì)在在離子子交換換的過(guò)過(guò)程中中對(duì)提提煉影影響甚甚大，，不利利于樹(shù)樹(shù)脂對(duì)對(duì)抗生生素的的吸收收。如如用溶溶媒萃萃取法法提煉煉時(shí)，，蛋白白質(zhì)的的存在在會(huì)產(chǎn)產(chǎn)生乳乳化，，使溶溶媒合合水相相分離離困難難。對(duì)對(duì)高價(jià)價(jià)離子子的去去除，，可采采用草草酸或或磷酸酸。如如加草草酸則則它與與鈣離離子生生成的的草酸酸鈣還還能促促使蛋蛋白質(zhì)質(zhì)凝固固以提提高發(fā)發(fā)酵濾濾液的的質(zhì)量量。如如加磷磷酸（（或磷磷酸鹽鹽），，既能能降低低鈣離離子濃濃度，，也利利于去去除鎂鎂離子子。加加黃血血鹽及及硫酸酸鋅，，則前前者有有利于于去除除鐵離離子，，后者者有利利于凝凝固蛋蛋白質(zhì)質(zhì)。此此外，，兩者者還有有協(xié)同同作用用。他他們所所產(chǎn)生生的復(fù)復(fù)鹽對(duì)對(duì)蛋白白質(zhì)有有吸附附作用用。染菌菌處處理理染菌菌是是發(fā)發(fā)酵酵工工業(yè)業(yè)長(zhǎng)長(zhǎng)期期以以來(lái)來(lái)不不能能徹徹底底解解決決的的問(wèn)問(wèn)題題，，因因此此如如何何解解決決染染菌菌問(wèn)問(wèn)題題就就成成了了發(fā)發(fā)酵酵工工業(yè)業(yè)的的工工作作重重點(diǎn)點(diǎn)之之一一。。要要解解決決染染菌菌問(wèn)問(wèn)題題首首要要問(wèn)問(wèn)題題就就是是要要能能檢檢測(cè)測(cè)出出是是否否染染菌菌。。染染菌菌通通常常通通過(guò)過(guò)三三個(gè)個(gè)途途徑徑發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)：：無(wú)無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)，，發(fā)發(fā)酵酵液液直直接接鏡鏡檢檢，，發(fā)發(fā)酵酵液液的的生生化化分分析析。。其其中中無(wú)無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)是是判判斷斷染染菌菌的的主主要要依依據(jù)據(jù)。。染菌菌的的常常用用檢檢測(cè)測(cè)法法無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)的的方方法法有有雙碟碟培培養(yǎng)養(yǎng)斜斜面面培培養(yǎng)養(yǎng)肉肉湯湯培培養(yǎng)養(yǎng)鏡鏡檢檢等，，其其中中以以雙雙碟碟培培養(yǎng)養(yǎng)為為主主。。無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)的的方方法法--雙雙碟碟培培養(yǎng)養(yǎng)雙碟碟培培養(yǎng)養(yǎng)的操操作作要要點(diǎn)點(diǎn)是是：：種種子子罐罐在在培培養(yǎng)養(yǎng)過(guò)過(guò)程程中中每每8小小時(shí)時(shí)取取樣樣一一次次，，取取樣樣時(shí)時(shí)在在裝裝有有9毫毫升升肉肉湯湯的的試試管管內(nèi)內(nèi)加加入入2～～5毫毫升升試試樣樣，，然然后后在在無(wú)無(wú)菌菌室室內(nèi)內(nèi)通通過(guò)過(guò)無(wú)無(wú)菌菌操操作作在在事事先先鋪鋪好好瓊瓊脂脂培培養(yǎng)養(yǎng)基基的的雙雙碟碟內(nèi)內(nèi)畫(huà)畫(huà)線線。。剩剩下下的的肉肉湯湯培培養(yǎng)養(yǎng)物物，，在在37℃℃培培養(yǎng)養(yǎng)6小小時(shí)時(shí)后后復(fù)復(fù)畫(huà)畫(huà)一一次次，，及及另另畫(huà)畫(huà)一一雙雙碟碟作作比比較較，，發(fā)發(fā)酵酵罐罐在在發(fā)發(fā)酵酵過(guò)過(guò)程程中中每每隔隔8小小時(shí)時(shí)取取樣樣一一次次，，用用空空白白試試管管取取樣樣5～～15毫毫升升左左右右，，于于37℃℃培培養(yǎng)養(yǎng)6小小時(shí)時(shí)后后畫(huà)畫(huà)碟碟時(shí)時(shí)，，雙雙碟碟放放置置37℃℃培培養(yǎng)養(yǎng)．．24小小時(shí)時(shí)內(nèi)內(nèi)的的雙雙碟碟，，每每隔隔2～～3小小時(shí)時(shí)在在燈燈光光下下檢檢查查一一次次，，觀觀察察有有無(wú)無(wú)雜雜菌菌生生長(zhǎng)長(zhǎng)。。24～～48小小時(shí)時(shí)的的雙雙碟碟每每天天檢檢查查一一次次，，以以防防生生長(zhǎng)長(zhǎng)緩緩慢慢的的雜雜菌菌漏漏檢檢。。一一般般雜雜菌菌在在37℃℃，，24小小時(shí)時(shí)以以內(nèi)內(nèi)能能長(zhǎng)長(zhǎng)出出來(lái)來(lái)．．此此法法的的優(yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)是是比比較較準(zhǔn)準(zhǔn)確確，，但但反反應(yīng)應(yīng)較較慢慢（（因因雜雜菌菌在在雙雙碟碟上上繁繁殖殖成成菌菌落落要要有有一一定定的的時(shí)時(shí)間間）），，并并且且操操作作也也較較麻麻煩煩。。無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)的的方方法法--斜斜面面/肉肉湯湯培培養(yǎng)養(yǎng)斜面面或或肉肉湯湯培培養(yǎng)養(yǎng)法法，就是是直直接接用用酚酚紅紅肉肉湯湯取取樣樣培培養(yǎng)養(yǎng)，，或或直直接接用用斜斜面面取取樣樣培培養(yǎng)養(yǎng)，，但但也也有有先先用用空空白白無(wú)無(wú)菌菌試試管管取取樣樣，，再再接接種種于于肉肉湯湯或或斜斜面面培培養(yǎng)養(yǎng)基基的的。。也也有有在在中中小小罐罐接接種種前前，，無(wú)無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)樣樣品品先先進(jìn)進(jìn)行行鏡鏡檢檢。。直直接接取取樣樣進(jìn)進(jìn)行行無(wú)無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)的的方方法法比比較較方方便便。。無(wú)無(wú)菌菌試試驗(yàn)驗(yàn)的的結(jié)結(jié)果果，，一一般般要要8～～16小小時(shí)時(shí)才才能能做做出出判判斷斷。。為為了了加加速速雜雜菌菌的的生生長(zhǎng)長(zhǎng)，，特特別別是是對(duì)對(duì)中中小小罐罐無(wú)無(wú)菌菌情情況況的的及及時(shí)時(shí)判判斷斷，，可可以以加加入入對(duì)對(duì)氨氨基基苯苯甲甲酸酸等等生生長(zhǎng)長(zhǎng)促促進(jìn)進(jìn)劑劑，，以以促促進(jìn)進(jìn)雜雜菌菌的的生生長(zhǎng)長(zhǎng)。。染菌菌的的處處理理染菌菌后后一一般般是是絲絲狀狀菌菌絲絲對(duì)對(duì)過(guò)過(guò)濾濾有有影影響響，，以以及及發(fā)發(fā)酵酵雜雜菌菌產(chǎn)產(chǎn)物物對(duì)對(duì)提提取取有有影影響響。。因因此此應(yīng)應(yīng)對(duì)對(duì)污污染染過(guò)過(guò)的的發(fā)發(fā)酵酵液液作作加加熱熱預(yù)預(yù)處處理理，，加加助助濾濾劑劑等等有有利利于于過(guò)過(guò)濾濾，，對(duì)對(duì)發(fā)發(fā)酵酵產(chǎn)產(chǎn)物物中中的的雜雜質(zhì)質(zhì)如如蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)等等，，可可加加入入絮絮凝凝劑劑等等，，使使蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)凝凝聚聚.染菌菌在在發(fā)發(fā)酵酵過(guò)過(guò)程程的的每每個(gè)個(gè)階階段段都都可可能能發(fā)發(fā)生生，，下下面面就就各各個(gè)個(gè)不不同同的的階階段段的的染染菌菌情情況況和和處處理理辦辦法法一一一一說(shuō)說(shuō)明明。。⒈種種子子培培養(yǎng)養(yǎng)期期染染菌菌⒉發(fā)發(fā)酵酵前前期期染染菌菌⒊發(fā)發(fā)酵酵中中期期染染菌菌⒋發(fā)發(fā)酵酵后后期期染染菌菌染菌菌的的處處理理⒈種種子子培培養(yǎng)養(yǎng)期期染染菌菌種子培養(yǎng)主主要是生長(zhǎng)長(zhǎng)繁殖菌體體。此時(shí)菌菌體濃度低低，培養(yǎng)基基營(yíng)養(yǎng)豐富富，因此容容易染菌。。種子培養(yǎng)養(yǎng)期染菌，，帶進(jìn)發(fā)酵酵罐中的危危害極大，，應(yīng)嚴(yán)格控控制種子污污染。當(dāng)發(fā)發(fā)現(xiàn)種子受受污染后均均應(yīng)滅菌后后棄去，并并對(duì)種子罐罐、管道進(jìn)進(jìn)行檢查和和徹底滅菌菌。返回染菌的的處理理⒉發(fā)酵前期期染菌發(fā)酵前朗主主要是菌體體生長(zhǎng)繁殖殖，代謝產(chǎn)產(chǎn)物生成很很少，染菌菌后雜菌容容易繁殖，，與生產(chǎn)菌菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)成分和氧氧分，嚴(yán)重重干擾生產(chǎn)產(chǎn)菌的生長(zhǎng)長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)產(chǎn)物的生成成，因此要要特別注意意發(fā)酵前期期的染菌。。當(dāng)發(fā)酵前前期染菌時(shí)時(shí)，由于營(yíng)營(yíng)養(yǎng)成分消消耗不多，，能耗也不不大，從經(jīng)經(jīng)濟(jì)性的角角度考慮應(yīng)應(yīng)迅速重新新滅菌，補(bǔ)補(bǔ)充必要的的營(yíng)養(yǎng)成分分，重新接接種進(jìn)行發(fā)發(fā)酵。返回染菌的的處理理⒊發(fā)酵中期期染菌發(fā)酵中期染染菌將嚴(yán)重重干擾生產(chǎn)產(chǎn)菌的代謝謝，影響產(chǎn)產(chǎn)物的生成成。如產(chǎn)酸酸，產(chǎn)泡沫沫，使菌體體自溶，使使發(fā)酵液變變臭等。發(fā)發(fā)酵中期染染菌，由于于營(yíng)養(yǎng)成分分大量消耗耗，一般挽挽救處理困困難，危害害性大，發(fā)發(fā)酵中期染染菌應(yīng)做到到早發(fā)現(xiàn)，，早處理，，通常做法法是“倒罐罐”，即用用一罐沒(méi)有有染菌的發(fā)發(fā)酵液與染染菌的發(fā)酵酵液混合，，使有害菌菌濃度下降降，生產(chǎn)菌菌濃度提高高進(jìn)而重新新成為優(yōu)勢(shì)勢(shì)生長(zhǎng)菌群群。顯然，，倒罐必然然造成物料料消耗和操操作費(fèi)用的的增加。返回染菌的的處理理⒋發(fā)酵后期期染菌發(fā)酵后期產(chǎn)產(chǎn)物積累較較多，效價(jià)價(jià)已經(jīng)很高高，營(yíng)養(yǎng)物物質(zhì)接近耗耗盡，此時(shí)時(shí)如染菌量量不多，可可繼續(xù)進(jìn)行行發(fā)酵，如如嚴(yán)重污染染也可提前前放罐，停停止發(fā)酵，，這在經(jīng)濟(jì)濟(jì)上往往是是合算的。。青霉素素提取取化學(xué)提取和和精制的目目的:從發(fā)發(fā)酵液中制制取高純度度的、合乎乎藥典的抗抗生素成品品。由由于發(fā)酵酵液山洪青青霉素濃度度很低，僅僅0.1%~4.5%左右，，而雜質(zhì)濃濃度比青霉霉素的高幾幾十倍甚至至幾千倍，，并且某些些雜質(zhì)的性性質(zhì)與抗生生素的非常常相近，因因此提取精精制是一件件十分重要要的工作。。發(fā)發(fā)酵液中常常見(jiàn)的雜質(zhì)質(zhì)有：菌絲絲、未用完完的培養(yǎng)基基、易污染染雜菌、產(chǎn)產(chǎn)生菌的代代謝產(chǎn)物、、預(yù)處理理需要加入入的雜質(zhì)燈燈。青霉素素提取取青霉素的提提取遵循下下面四個(gè)原原則：⒈⒈時(shí)時(shí)間短⒉⒉溫度低低⒊⒊pH適中⒋⒋勤清清洗消毒常用的提取取方法有溶媒萃取法法離離子交換法法沉沉淀法等青霉素素提取取溶媒萃取法法這是利用抗抗生素在不不同的pH條件下一一不同的化化學(xué)狀態(tài)（（游離態(tài)、、堿或鹽））存在時(shí)，，在水及水水互不相溶溶的溶媒中中溶解度不不同的特性性，是抗生生素從一種種液相（如如發(fā)酵濾液液）轉(zhuǎn)移到到另一種液液相（如有有機(jī)溶媒））中去，以以達(dá)到濃縮縮和提純的的目的。利利用此原理理就可借助助于調(diào)節(jié)pH的方法法使抗生素素從一個(gè)液液相中被提提取到另一一液相中去去。所選用用的溶媒與與